第4章 蛋白质的共价结构
生物化学(第三版)课后习题详细解答

生物化学(第三版)课后习题详细解答第一章糖类提要糖类是四大类生物分子之一,广泛存在于生物界,特别是植物界。
糖类在生物体内不仅作为结构成分和主要能源,复合糖中的糖链作为细胞识别的信息分子参与许多生命过程,并因此出现一门新的学科,糖生物学。
多数糖类具有(CH2O)n的实验式,其化学本质是多羟醛、多羟酮及其衍生物。
糖类按其聚合度分为单糖,1个单体;寡糖,含2-20个单体;多糖,含20个以上单体。
同多糖是指仅含一种单糖或单糖衍生物的多糖,杂多糖指含一种以上单糖或加单糖衍生物的多糖。
糖类与蛋白质或脂质共价结合形成的结合物称复合糖或糖复合物。
单糖,除二羟丙酮外,都含有不对称碳原子(C*)或称手性碳原子,含C*的单糖都是不对称分子,当然也是手性分子,因而都具有旋光性,一个C*有两种构型D-和L-型或R-和S-型。
因此含n个C*的单糖有2n个旋光异构体,组成2n-1对不同的对映体。
任一旋光异构体只有一个对映体,其他旋光异构体是它的非对映体,仅有一个C*的构型不同的两个旋光异构体称为差向异构体。
单糖的构型是指离羧基碳最远的那个C*的构型,如果与D-甘油醛构型相同,则属D系糖,反之属L系糖,大多数天然糖是D系糖Fischer E论证了己醛糖旋光异构体的立体化学,并提出了在纸面上表示单糖链状立体结构的Fischer投影式。
许多单糖在水溶液中有变旋现象,这是因为开涟的单糖分子内醇基与醛基或酮基发生可逆亲核加成形成环状半缩醛或半缩酮的缘故。
这种反应经常发生在C5羟基和C1醛基之间,而形成六元环砒喃糖(如砒喃葡糖)或C5经基和C2酮基之间形成五元环呋喃糖(如呋喃果糖)。
成环时由于羰基碳成为新的不对称中心,出现两个异头差向异构体,称α和β异头物,它们通过开链形式发生互变并处于平衡中。
在标准定位的Hsworth式中D-单糖异头碳的羟基在氧环面下方的为α异头物,上方的为β异头物,实际上不像Haworth式所示的那样氧环面上的所有原子都处在同一个平面,吡喃糖环一般采取椅式构象,呋喃糖环采取信封式构象。
第四章蛋白质的共价结构

• 一级结构的全部内容包括: 多肽链数目、氨基酸组成、氨基酸顺序、连接方式、 二硫键的数目和位置、非氨基酸成分等
自1953年Sanger F.报道了牛胰岛素两条多肽链 的氨基酸序列以来,已有100,000多个不同蛋白质 的氨基酸序列被测定(简称蛋白质测序)。
蛋白质的一级结构研究
研究一级结构需要阐明的内容: • 1)蛋白质分子的多肽链数目。 • 2)每条肽链的末端残基种类。 • 3)每条肽链的氨基酸顺序。 • 4)链内或链间二硫键的配置等。
测定蛋白质的一级结构的主要意义: • 一级结构是研究高级结构的基础。 • 可以从分子水平阐明蛋白质的结构与功能的关系。 • 可以为生物进化理论提供依据。 • 可以为人工合成蛋白质提供参考顺序。
CH C
N
CH COO -
O
Peptide bond
* 两分子氨基酸缩合形成二肽,三分子氨基酸 缩合则形成三肽……
* 由二十个以内氨基酸相连而成的肽称为寡肽 (oligopeptide),由更多的氨基酸相连形成的 肽称多肽(polypeptide)。
* 肽链中的氨基酸分子因为脱水缩合而基团不全, 被称为氨基酸残基(residue)。
R2 O
R3 O
H2N CH C HN CH C HN CH C
N端
氨基酸残基 氨基酸残基
肽链书写方式:N端→C端 肽链有链状、环状和分支状。
Rn O HN CH COH
C端
命名:根据氨基酸组成,由N端→C端命名
O
O
H3C CH C HN CH2 C HN CH COOH
NH2
CH2
CH H3C CH3
蛋白质的一级结构是指蛋 白质多肽链中氨基酸的排 列顺序,包括二硫键的位 置。其中最重要的是多肽 链的氨基酸顺序,它是蛋 白质生物功能的基础。
蛋白质的共价结构

N-
基苯衍生物(DNP)。
末 • 在酸性条件下水解,得到黄色DNP-氨基酸,
端 其余为游离氨基酸。该产物能够用乙醚抽提
基 分离。不同的DNP-氨基酸可以用色谱法(层
氨 析法)进行鉴定。
基
酸
O2N
RO F + H2N CH C
O2N
RO HN CH C
测
NO2
NO2
定
DNFB
H+ H2O
O2N
N-端 氨 基 酸 RO
• 1,样品必需纯(>97%以上); • 2,知道蛋白质的相对分子量。
蛋白质一级结构测定的步骤
1、测定蛋白质多肽链数目 2、拆分蛋白质分子多肽链 3、断开链内二硫键 4、分析每一多肽链氨基酸组成 5、鉴定多肽链N-末端和C-末端 6、多种方法的部分水解,分离水解后得到的小片段
多肽 7、测定上述小片段多肽的序列 8、利用交叉重叠法拼出一条完整多肽链 9、确定二硫键位置
细胞核中的核糖核蛋白等。
按功能的蛋白质分类
按功能的蛋白质分类法
1. 酶类,
占细胞内蛋白质种类的绝大部分
2. 运输蛋白, 如albumin, hemoglobin, transferrin等
3. 收缩运动蛋白, 如actin, myosin, tubolin等
4. 激素蛋白,
如insulin, growth hormone等
N-端 CH2
H CH
H CH2
H CH2
H CH2 C-端
OH
CH3 CH3
CO2H
CH2
肽键 OH
CONH2
• 在多肽链中,氨基酸残基按一定的顺序排列,这种排 列顺序称为氨基酸顺序
蛋白质的共价结构

WORK IN BIOCHEMISTRY
原理:首先实现蛋白质降解成多肽,通过电离源将蛋白质分 子转化为气相离子,然后利用质谱没分析仪的电场、 磁场将具有特定质谱与电荷比值(m/z值)的多肽离 子分离开来,经过离子检测器收集分离的离子,确 定的m/z值,分析鉴定未知蛋白质。
WORK IN BIOCHEMISTRY
每种蛋白质都有独特 的三维结构,形成独特的 功能,每种蛋白质也各有 特殊的氨基酸序列。通过 对不同蛋白质的氨基酸序 列测定,对人类遗传疾病 的跟踪研究,并且在比对 了不同物种间功能相似的 蛋白质之后,我们可以大 致得出结论——氨基酸序 列决定蛋白质的功能。
氨基酸序列决定蛋白质功能
对于一个特定蛋白质,其氨基酸序列也不是绝对固定 不变的。大约20%~30%的人类蛋白质是多态的。这些变动 大多数对蛋白质功能没有影响或影响很小。而且关系较远 的物种间执行相似功能的蛋白质在大小和氨基酸序列上可 能差异很大。 在蛋白质的氨基酸序列中常常有关键区域,直接影响 其功能,而其他区域的氨基酸序列可以有很大变动,且不 影响其功能。关键区域在不同蛋白质间互不相同,使得联 系序列与三维结构、机构与功能之间关系的任务变得复杂。
WORK IN BIOCHEMISTRY
ESI-MS测量法
ESI-MS测量法是在液态下完成的,多肽离子带有多个电 荷,由高效液相层析等分离方法分离的液体多肽混合物, 去除这些杂质成分后,多肽离子进入连续质量分析仪 (Tandem mass analyzer),连续质量分析仪选取某 一特定m/z值的多肽离子,并以碰撞解离的方式将多肽离 子碎裂成不同电离或非电离片段。随后,依据m/z值对电 离片段进行分析并汇集成离子谱,通过数据库检索,得到 相应的蛋白。
3.4 蛋白质的共价结构
第四章 蛋白质的共价结构

第四章蛋白质的共价结构一、是非题1 珠蛋白也是球蛋白()2 用羧肽酶A水解一个肽,发现从量上看释放最快的是Leu,其次是Gly,据此可断定,此肽的C端序列是――gly-leu ( )3 等电点不是蛋白质的特征参数()4 催产素和加压素只有三个氨基酸地残基不同()5 胰蛋白酶专一地切在多肽链中碱基氨基酸的N端位置上()6 溴化氰能作用于多肽链中的甲硫氨酸键()7 在蛋白质和多肽分子中,连接氨基酸残基的共价键除肽键外,还有就是二硫键()8 在蛋白质和多肽分子中,只存在一种共价键——肽键()二、填空题1 胰凝乳蛋白酶专一性的切断和的羧基端肽键2 胰岛素的分子量大约是3 一条肽链;Asn-His-Lys-Asp-Phe-Glu-Ile-Arg-Glu-Tyr-Gly-Arg经胰蛋白酶水解,可得到个肽4 肽经溴化氰(CNBr)处理后,在残基右侧的肽键被裂解,裂解后该残基变成5 继Sanger之后,与二人共同建立了蛋白质一级结构的测定技术获得了诺贝尔奖6 胰蛋白酶的专一性就是在残基右侧的肽键上水解7 胰岛素是分泌的多肽激素,是由前胰岛素原经专一性蛋白水解,失去N端的成为。
再经肽酶激活失去)肽,最后形成具有生物活性的胰岛素8 一个球状蛋白质,含100个氨基酸,估计它的分子量是09 胰岛素是A,B两条肽链通过正确匹配的连接而成的蛋白质,在体内从一条肽链的前体经过的加工剪裁而成10 肽链的末端可以用,,和法测定,而和法则是测定C末端氨基酸最常用的方法11 羧肽酶B专一地从蛋白质的羧端切下残基三、选择题1.有一多肽经酸水解后产生等摩尔的Lys,Gly和A1a.如用胰蛋白酶水解该肽,仅发现有游离的Gly和一种二肽。
下列多肽的一级结构中,哪一个符合该肽的结构?A.Gly-Lys-Ala-Lys-Gly-AlaB.Ala-Lys-GlyC.Lys-Gly-AlaD.Gly-Lys-AlaE.Ala-Gly-Lys2.测定小肽氨基酸顺序的最好方法是A.2,4-二硝基氟苯法(FDNB法)B.二甲氨基萘磺酰氯法(DNS-Cl法)C.氨肽酶法D.苯异硫氰酸法(PITC法)E.羧肽酶法3.用下列方法测定蛋白质含量,哪一种方法需要完整的肽键?A.双缩脲反应B.克氏定氮C.紫外吸收D.茚三酮反应E.奈氏试剂4.下列关于蛋白质中L-氨基酸之间形成的肽键的叙述,哪些是正确的?(1).具有部分双键的性质(2).比通常的C-N单键短(3).通常有一个反式构型(4).能自由旋转A.1,2,3B.1,3C.2,4D.4E.1,2,3,4答案一.是非题1错2错3对4错5错6对7对8错二.填空题1 (苯丙氨酸)(亮氨酸)2 (5600)3 (3)4 (甲硫氨酸)(高丝氨酸)5 (Moore)(Stein)6 (赖氨酸和精氨酸)7(胰岛β细胞)(信号肽/前肽)(胰岛素原)(C)8(11000)9(二硫键)(蛋白水解酶)10(2.4-二硝基氟苯/FDNB)(丹磺酰氯/DNS-CL)(异硫氰酸苯脂/PITC)(氨肽酶)(肼解)(羧肽酶)11(碱性氨基酸)三.选择题1.B2.D 2.A 4.A。
生物化学笔记

生物化学笔记一蛋白质的共价结构1.氨基酸amino acid-20个,18个常见,1个脯氨酸,1个硒代胱氨酸由终止密码字编码-20种氨基酸的性质,排列顺序决定蛋白质的性质-人类中L型出现较多,D型较少,但是牙齿中的天冬氨酸便是;而在微生物中,D型出现较多,一般出现于翻译后修饰,可通过恢复又形成L型1.1氨基酸结构●每个氨基酸除pro都含有:-COOH-羧基,-NH2-氨基,—RR集团羧基和氨基的主要作用:提供氢键形成二级结构●暴露在外的主要是R基,又侧链的排列组合决定蛋白质的结构●侧链提供不同的功能集团能够使蛋白具有独特性:✓独特的折叠结构✓溶解状态:与引起生命过程有强烈关系,侧链起决定作用✓聚集状态:单体,二聚体等✓与大分子物质形成复合物或大分子,提高酶活性✓修饰●蛋白质形成的氨基酸规律并不明显,但是结构蛋白有一定的规律,其中有点肯定的是,氨基酸的选择不是随意的●决定蛋白质结构的因素有:氨基酸数量,排列组合,侧链修饰例如电荷改变与其他分子,自身内部作用而发生改变1.2氨基酸分类根据极性分类在普通条件下,根据极性差别,可分为以下几类:✓非极性氨基酸Gly-G, Ala-A, Val-V, Leu-L, Ile-I, Phe-F, Trp-w, Met-M.Pro-P性质:1.具有疏水性2.结合或放出质子Met,Phe,Try易放出质子3.酶反应中,蛋白质折叠堆积在一起时,酸性强,从而形成极端环境,因此极性变强,某些基团具有极端性质易完成特定反应;4.在水相球蛋白中,非极性氨基酸贝排在蛋白质疏水中心,犹如蛋白质骨架,维持蛋白质结构,起稳定作用,蛋白质结构对功能非常重要,因此可在疏水区域对蛋白质骨架与功能有十分重要作用5.在跨膜蛋白中,非疏水侧链能与膜易结合1st甘氨酸Gly:a)缺少对称结构,不能形成立体化学结构b)缺少β碳原子,因此组成肽链时,使肽链更柔软,因为原子相互之间摆动的角度大,受到阻力比复杂侧链要简单c)提供更多的结构空间d)甘氨酸常位于蛋白质拐角处,并在胶原蛋白中甘氨酸含量大,提供空间与柔软性,抗击能力强;e)甘氨酸对邻位氨基酸也有影响;由于空间小,提供邻位氨基酸化学活性;比如Asn-Gly的组合比Asn-xaa更易形成环状的酰胺结构f)甘氨酸常作为免疫识别和酶催化的位点2nd丙氨酸Ala:a)是20种氨基酸种最没特性的氨基酸,没有特别的构想性质,因此可出现在任何部位b)最普通的氨基酸,弱疏水性,化学稳定性低,发生化学修饰机率低c)为左提花位点可用于研究某个氨基酸在蛋白质的功能3rd缬氨酸Ala:a)体积变大,降低整体结构软柔性,旋转空间不大b)阻碍邻位的化学活性c)属于国都太氨基酸,中度疏水性4th异亮氨酸ile:a)疏水性增强b)含有β分支链,对邻位氨基酸有空间阻碍,降低化学活性c)出现在蛋白质内部,倾向于形成β折叠结构而不是α-螺旋因为空间阻碍变大d)有第二个非对称中心,碰到强酸时,立体结构改变,形成别异亮氨酸,功能随之改变在体外和体内环境有差异时,蛋白质稳定结构对蛋白质功能具有重要作用5th亮氨酸Leu:a)疏水性比异亮氨酸b)在球蛋白中最常见氨基酸,处于疏水中心c)形成跨膜螺旋结构中的主要成分d)亮氨酸拉链结构亮氨酸拉链l eucine zipper:出现在DNA结合蛋白质和其它蛋白质中的一种结构基元motif;当来自同一个或不同多肽链的两个两用性的α-螺旋的疏水面常常含有亮氨酸残基相互作用形成一个圈对圈的二聚体结构时就形成了亮氨酸拉链;在生物化学的研究中,发现某些DNA结合蛋白的一级结构C末端区段,亮氨酸总是有规律地每隔7个氨基酸就出现一次;蛋白质α-螺旋每绕一圈为个氨基酸残基;这种一级结构形成α-螺旋时,亮氨酸必与螺旋轴平行而在外侧同一线上排布,每绕两圈出现一次,如图中的1,8,15,22位;而且,亮氨酸R-基因上的分支侧链也露于螺旋之外成规律地相间;所谓拉链,就是两组平行走向,带亮氨酸的α-螺旋形成的对称二聚体;每条肽链上的亮氨酸残基,侧链上R-基因的分支碳链,又刚好互相交错排列,故名;亮氨酸拉链结构常出现于真核生物DNA结合蛋白的C-端,它们往往是和癌基因表达调控功能有关,故受到研究者的重视;这类蛋白质的主要代表为酵母的转录激活因子GCN4,癌蛋白Jun,Fos,Myc,增强子结合蛋白C/EBP等;这类基元结构是解决基因转录调控的途径之一,并将会在生命科学研究中继续成为主导领域的研究课题;l eucine zipper是由伸展的氨基酸组成,每7个氨基酸中的第7个氨基酸是亮氨酸,亮氨酸是疏水性氨基酸,排列在;螺旋的一侧,所有带电荷的氨基酸残基排在另一侧;当2个蛋白质分子平行排列时,亮氨酸之间相互作用形成二聚体,形成“拉链”;在“拉链”式的蛋白质分子中,亮氨酸以外带电荷的氨基酸形式同DNA结合;原癌基因c—fos 的蛋白产物是磷酸化蛋白,有一个亮氨酸“拉链”区,却不能形成同源二聚体;可是,它可以同c-jun的蛋白产物中的“拉链”区形成异源二聚体;c—fos 的蛋白质产物本身不能同DNA结合,可是一旦同c-jun的蛋白质产物形成“拉链”式的异源二聚体后,却能与jun-jun同源二聚体一样具有DNA结合能力,且表现出更高的亲和力;6th苯丙氨酸Phe:a)体积大的疏水性结构b)具有弱极性苯环作用,易与其他芳香环或极性基团发生作用c)作为球蛋白或跨膜蛋白的主要成分,起稳定蛋白质结构d)可作为A280吸收位点,进行定量试验7th甲硫氨酸Met:a)含有硫醚结构b)疏水性和基团大小与Leu相似c)硫原子易与金属离子Zn,Cu,Hg等结合,赋予蛋白质新功能d)在体外易形成亚砜结构,氧化时形成亚砜结构,易变形,因此需要加抗氧化剂;e)在体内,可由酶进行反应形成特定结构完成特定功能f)易发生烷基化反应,在酸性条件下,能使硫醚链断裂8th色氨酸Trp:a)含有吲哚基团,由最大的侧链基团b)具有强的空间阻碍,常用于窜则稳定结构c)含有疏水性,但由于吲哚基存在,减弱疏水性;提供附加氢键主链,有时与其他物质相互作用时,吲哚基团易与配基相互作用,如抗体,亲和素,溶解酵素;d)易受轻电攻击,卤素易与之反应,发生共价键作用,使肽链易断裂e)吲哚基团易被光氧化降解f)最强的紫外吸收峰,具有荧光性质A2809th脯氨酸Pro:a)含有脯氨酰基,形成亚氨结构b)具有结构限制,出现在蛋白质表面或转角处c)能出现在α-螺旋的边边上,不能与主链上形成氢键,在β-折叠出现时,会形成凸起结构d)在肽链中能以顺式结构存在,它能进行反式转化,这是一个限时步骤,由酶参与完成,是可调控的,在体外自发完成e)化学活性低,当邻位是D-天冬氨酸时,脯氨酸活性增强,在弱酸条件下,易断裂✓极性氨基酸:Ser-S, Thr-T,Cys-C,Asn-N,Gln-Q,Tyr-Y性质:1.普通条件下,净电荷为零,ph=7;2.翻译后修饰易发生在极性氨基酸;10th丝氨酸Ser:a)含有脂肪羟基,在不同环境下,即可作为氢键供受体b)常出现在球蛋白表面c)氧原子在生理条件下,具有弱亲和性;在特定条件下,氧原子亲和力强,如丝氨酸激酶,化学活性增强;这种特定条件下可能是由蛋白质自身通过结构改变形成d)在体内中,易发生共价修饰,如糖基化修饰e)磷酸化:两种形式:一为稳定磷酸化,另为可逆磷酸化f)碱性条件下,易发生消除反应,-OH消失,形成双键11th苏氨酸Thr:a)与丝氨酸相似,但与之相比,空间阻碍变大,化学活性弱一些b)含有第二个手性结构,遇上强酸强碱,结构会改变12th半胱氨酸Cys:a)硫基CH-SH,可参与酶反应的中间反应物b)与金属反应重金属,吸附,解毒c)胞外蛋白与cys中硫基结合成二硫键,起稳定蛋白作用,还原形成谷胱甘肽GST抗氧化剂;在普通环境下研究蛋白质体外,使cys处于还原状态,重组蛋白含有cys时,与在体外相比,形成的二硫键还是有所差别,如白蛋白★为含585个的单链多肽,分子量为66458,分子中含17个,不含有糖的组分;在的环境中,白蛋白为负离子,每分子可以带有200个以上;它是血浆中很主要的,许多水溶性差的物质可以通过与白蛋白的结合而被运输;这些物质包括、长链每分子可以结合4-6个分子、胆汁酸盐、、、如Cu2+、Ni2+、Ca2+如、等;d)在胞外,蛋白质的cys易形成二硫键,以稳定自身蛋白质的结构,二硫键会在氧化的环境下形成谷胱甘肽在体内以二硫键状态存在,cys在胞内大多数以游离的状态存在,因此在体外研究蛋白质的二硫键时,要注意环境;e)主要有酰基化,烷基化修饰结合脂肪链,结合到侧链使其具有疏水性质脂肪链可接近脂膜,血红蛋白辅基血红素等共价结合蛋白f)β消除反应★β-消去指分子内两个相邻的原子上各失去一个基团,形成新的双键或叄键的反应;这也是最为普遍认识的消去反应;反应条件:醇类和能发生消去反应;分子中,连有-OH的碳原子必须有相邻的碳原子且与此相邻的碳原子上,并且还必须连有氢原子时,才可发生消去反应;:利用碱性处理,加入羟基,然后产生β消除,此方法利用在羊毛处理上,使羊毛更有强度;13th天冬酰胺Asn:a)β碳上有酰胺,易形成氢键,使氢键的供体和受体b)一般位于折叠蛋白转角位置,附加氢键,比较灵活,所以容易破坏正常氢键,使其形成多样性氢键c)环亚胺结构,消旋反应形成D-氨基酸残基★消旋反应是一种使分子产生同样多的两种构象的反应,只有手性结构的分子才能发生,会产生L-和R-即左旋和右旋两种结构的分子,这两种分子虽然分子式相同,但旋光性不同;,当Asn与Gly或Ser等空间阻碍小的氨基酸相连时Asn-Gly,亚胺结构易被水解;当空间位阻没有或小时,会形成环亚胺结构,环亚胺结构不稳定,易被羟胺化,导致肽键断裂;d)在胞外的显露的天冬氨酸氨侧链基N端,是糖蛋白的连接位点,当-asn-xaa-serthr三个氨基酸排列在一起时,asn被糖基化修饰后,会变得很稳定;xaa不能为pro;14th谷氨酰胺Glna)化学性质与asn相似,多一个亚甲基,蛋白质内部比asn稳定,在蛋白质末端会自动发生焦谷氨酰反应;b)有些谷氨酰胺得侧链是谷氨酰胺转移酶得作用底物,经催化与赖氨酰交联15th络氨酸Tyra)含有酚羟基,过渡态极性;在球蛋白结构时,通常它的侧链部分暴露与溶剂当中,部分与内部分子结合;b)在生理环境下,基团是中性的,容易结合金属离子,如Fe2+;有一定的电性,可以做H+的供受体c)体内修饰包括磷酸化,硝基化常发生于血管,引起粥样硬化,胞外蛋白酚羟基容易于其他蛋白发生交联反应;d)络氨酸区域也是甲状腺的前体物质✓酸性氨基酸Asp,Glu性质:在生理环境下带有负电荷16th天冬氨酸Aspa)生理条件下以负电荷形式存在,Pka=,酸性强b)羧基与供体基团如胍盐能形成氢键,极性侧链位于蛋白质表面,内部与碱性氨基酸结合形成盐桥,带负电荷能与Ca2+等离子发生反应;c)β-COOH能够直接参与酶催化反应,例如天门冬酰蛋白酶胃蛋白酶,高血压蛋白原酶,逆转录酶能够在Na+,K+—ATP酶,细胞膜上的Ca2+—ATP酶和肌浆网作用的过程中催化形成酰基磷酸酯;d)羧基易引起变性,因此体外研究需要加入试剂保持它的原始状态;在酸性环境下,肽链容易水解,若邻位是pro特易水解-asp-pro——e)当β-羧基与α-羧基肽键接近时会发生邻位效应,并且在酸溶液中,天门冬酰肽键比其他氨酰键更容易被水解;f)化学性质活页,能够参与化学反应;例如在活跃试剂,强酸条件,碳化二亚氨,酒精,亲核物质下能够酯化和氨化g)天冬氨酸在体内能够被羟基修饰,形成β-羟基天冬氨酸17th Glu谷氨酸a)邻位效应较弱,酸性比asp弱b)血凝蛋白中,发生修饰,形成γ-glu,与Ca2+结合更紧密✓碱性氨基酸Arg,Lys,His,硒代半胱氨酸性质:生理条件下,得质子18th精氨酸Arga)带有胍基团,酸性碱性下都带正电荷,碱性强,得质子b)出现在蛋白质内部,与酸性氨基酸形成盐桥或强氢键,能够形成多重氢键c)出现在表面,与带有负电的配基结合,如磷酸基团,核酸d)与lys结合能够形成正电荷信号,提供信号,完成相应功能,如膜蛋白信号,前蛋白剪切,核酸和核仁定位e)能够进行甲基化和糖基化修饰,非常重要;如病毒,病原体通过发生糖基化调节进入宿主细胞19th赖氨酸Lysa)被排除在球蛋白非极性内部中心以外,在生理条件下,侧链的丁基削弱氨基NH极性,但是整体极性占主导地位,因此整体极性较强;2b)很多蛋白质的交联结构主要由lys形成如羊毛,为负电荷提供结合位点,也可以连接氢键c)体内连接辅基,侧链测性交联结构,侧链也可进行修饰20th组氨酸Hisa)含有咪唑基团,几乎为中性;得质子后,呈碱性,在酶催化中,质子转移b)依赖ph值的酶催化反应,当需要中性条件时,常常会以his为质子供体,以提高催化效率c)分子内,接近ph,离域作用咪唑集团内,形成酸碱效应,对酶作用非常作用d)与其他酰基,金属离子结合金属螯合亲和层析,如his-nie柱子e)体内,得质子,磁共振21st硒代半胱氨酸a)天然蛋白组成成分,由UGA翻译而成b)酶反应位点,发生氧化还原反应c)还原性比半胱氨酸要强,粗略来说,对细胞具有积极作用d)性质与半胱氨酸相似,与之反应的类型也相同2. 翻译后修饰——末端修饰把构成蛋白质的二十种氨基酸再进行化学反应共价修饰而使功能得以发挥a)。
蛋白质的结构

蛋白质的结构层次
• 一级结构 (1º) : 独特的氨基酸序列,由遗传物质决定。 • 二级结构 (2º) :多肽链的主链骨架本身(不包括R基团) 在空间上有规律的折叠和盘绕,它是由氨基酸残基非侧链 基团之间的氢键决定的。 • 三级结构 (3º) :是指多肽链在二级结构的基础上,进一步 盘绕、卷曲和折叠,形成主要通过氨基酸侧链以次级键以 及二硫键维系的完整的三维结构。 • 四级结构 (4º)具有两条和两条以上多肽链的寡聚蛋白质或 多聚蛋白质才会有四级结构。其内容包括亚基的种类、数 目、空间排布以及亚基之间的相互作用。
寡肽的理化性质
(1)解离性质 • 肽也有等电点,其中小肽的pI的计算方法与氨基酸 相似,但复杂的寡肽只能与多肽和蛋白质一样不能 计算,只能测定(如使用等电聚焦的手段)。 (2)双缩脲反应 • 双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应生成紫红色络 合物,此反应称为双缩脲反应。凡大于二肽的肽含 有与双缩脲结构相似的肽键(至少含有两个肽键, 所以二肽不行),都能发生此反应。
四种螺旋的氢键形成
螺旋的手性
蛋白质中的α-螺旋几乎都是右手的,右手比左手 的稳定。氨基酸都是L-型氨基酸,右手α-螺旋空间位 阻较小,比较符合立体化学的要求。 螺旋是手性结构,具有旋光性。但螺旋的比旋 并不等于构成自身的氨基酸比旋的简单加和,而无规 卷曲的比旋与这种加和相等。 螺旋是有规则的构象,在折叠中具有协同性。一 旦形成一圈螺旋,随后逐个残基的加入变得容易而快 速。
要点: 肽链伸展,形成链间氢键(成为片层),R-基处于片层上下
β-折叠的片层结构和β-股之间的氢键
平行β-折叠和反平行β-折叠的结构比较
蛋白质的三级结构
• 三级结构是指多肽链在二级结构的基础上,进一步盘 绕、卷曲和折叠,形成主要通过氨基酸侧链以次级键 以及二硫键维系的完整的三维结构。 • 三级结构通常由模体(motif)和结构域(domain) 组成。 • 稳定三级结构主要是次级键,其包括氢键、疏水键、 离子键、范德华力和金属配位键。此外,属于共价键 的二硫键也参与许多蛋白质三维结构的形成。
生化第四章

5、糜蛋白酶断裂Phe、Trp和Tyr等疏水氨基酸残基的羧基端肽键。由题,得到的一条肽(Asp、Ala、Tyr)结合(3)、(4)可得该肽的氨基酸序列为:Asn-Ala-Tyr-Glu-Lys-His-Gln-Val
第四章 蛋白质的共价结构
习题
1.如果一个相对分子质量为12000的蛋白质,含10种氨基酸,并假设每种氨基酸在该蛋白质分子中的数目相等,问这种蛋白质有多少种可能的排列顺序?[10100]
解:1012000/120=10100
2、有一个A肽,经酸解分析得知为Lys、His、Asp、Glu2、Ala以及Val、Tyr忽然两个NH3分子组成。当A肽与FDNB试剂反应后得DNP-Asp;当用羧肽酶处理后得游离缬氨酸。如果我们在实验中将A肽用胰蛋白酶降解时,得到两种肽,其中一种(Lys、Asp、Glu、Ala、Tyr)在pH6.4时,净电荷为零,另一种(His、Glu以及Val)可给除DNP-His,在pH6.4时,带正电荷。此外,A肽用糜蛋白酶降解时,也得到两种肽,其中一种(Asp、Ala、Tyr)在pH6.4时全中性,另一种(Lys、His、Glu2以及Val)在pH6.4时带正电荷。问A肽的氨基酸序列如何?[Asn-Ala-Tyr-Glu-Lys-His-Gln-Val]
(4)嗜热菌蛋白酶能水解Tyr、Phe等疏水氨基酸残基,故此肽(Cys2、Phe)来自链2,结合(3)中含Tyr,可知(3)中形成的二硫键为链1 8位Cys与链2中3位Cys与链2中3位Cys之间;(4)中(Cys2、Phe)说明链2中1位Cys与5位Cys中有二硫键。
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the right).
Ser-Gly-Tyr-Ala-Leu
The structure of peptide and Peptide bond
The peptide chain consist of a regularly repeating main chain (or backbone) and the variable side chains of the residues. -N-C-C , N is the amide nitrogen,C is the carbon of amino acid residues,C is carbonyl carbon
4.1 蛋白质通论 Overview of protein
蛋白质( protein )是一类最重要的生 物大分子,在生物体中占有特殊的地位, 与核酸构成细胞内原生质的主要成分。 原生质是生命现象的物质基础。
4.1.1 蛋白质的化学组成和分类
The chemical component and classification of protein
Conformation and configuration
Configuration defines the spatial (空间的)arrangement of the groups attached to an asymmetric(不对称的) carbon or two double-bonded carbon atoms. Configurational isomers can not be interconverted without breaking one or more covalent bonds. Conformation refers to the numerous possible spatial arrangement of atoms due to free rotations around single bonds. Conformational isomers can be interconverted without breaking covalent bonds.
The structure of peptide and Peptide bond
Peptide bond
Peptide bond is the main way for linkage between
amino acids in peptides and proteins
Peptide bond is a kind of amide bond, usually denoted (表示) by a single bond between carboxyl carbon and amide nitrogen.
8)防御和进攻 --- 免疫球蛋白(抗体)、血液凝固
蛋白、抗冻蛋白、蛇毒和蜂毒的溶血蛋白、植物毒 素、细菌毒素。
9)异常功能蛋白---甜蛋白、节肢弹性蛋白等。
4.2 肽
Peptide
肽是氨基酸的线型聚合物,也称肽链 (peptide chain)
Amino acids covalently(共价地) join one another to form peptides
The structure of peptide and Peptide bond
The structure of peptide and Peptide bond
The peptide chain is directional. An amino acid unit in a peptide chain is called a residue.
Peptide
N-C-Cmain chain or back bone
4.2.1 肽和肽键的结构
The structure of peptide and Peptide bond
蛋白质中氨基酸的连接方式是肽键,实验证据: 蛋白质分子中游离α-氨基和α-羧基是很少的。 某些人工合成的多肽能被水解蛋白质的蛋白酶 所水解。 双缩脲颜色反应 X射线衍射图案
The structure of peptide and Peptide bond
由于酰胺氮上的孤电子对离域与羰基轨道重 叠,因此在酰胺氮和羰基氧之间发生共振相 互作用(resonance interaction)
Ca C O
..
H
N Ca
肽键共振产生几个重要结果: ①限制绕肽键的自由旋转 ②组成肽基的 4个原子和 2个相邻的C形成多肽 主链的酰胺平面 (amide plane) ,也称肽基平 面或肽平面 ③ C==N 键具有约 40%双键性质。由于C—N具有 部分双键性质,绕键旋转的能障比较高 ,保持 酰胺基处于平面 ④肽键具有永久偶极
构象和构型 Conformation and configuration 共同点和区别?
Conformation and configuration
构象:指具有相同结构式和相同构型的分子 在空间里可能的多种形态。 构象的改变不涉及共价键的断裂。
Conformation and configuration
构型:在具有相同结构式的立体异构体中, 取代基团在空间的相对取向。 不同的构型如果没有共价键的破裂时不n and conformation define the different aspects of the three dimensional structure of biomolecules.
The structure of peptide and Peptide bond
酰胺平面(amide plane),
限制绕肽键的自由旋转,肽主链的每一氨基酸残基 只保留两个自由度:绕N-C键的旋转和绕C-C键的 旋转
4.2.2 肽的物理和化学性质
The physical and chemical properties of Peptide 短肽的晶体是离子晶格,在水溶液中以 偶极离子存在 在pH0—14范围内,肽键中的酰胺氢不解 离
5)运动---引起肌肉收缩的肌动蛋白,引起细胞运动 的肌动蛋白、肌球蛋白等。
Protein functions
6)结构成分 --- 结构蛋白的单体一般聚合成纤维状 如胶原蛋白。 7)支架作用 --- 含有多个不同的组件,在它上面可 将多种不同蛋白质组装成一个多蛋白复合体,参与
对激素和其它信号分子的胞内应答的协调和通讯。 在细胞应答激素和生长因子的复杂途径中起作用。
The shape and size of protein Fibrous protein
简单有规律的线性结 构、形状呈细棒或纤 维状。结构作用。 胶原蛋白、弹性蛋白、 角蛋白、丝蛋白等, 不溶于稀盐溶液和水。
The shape and size of protein
globular proteins :形状接近球形或椭圆球
The structure of peptide and Peptide bond
By convention, the N-terminal is taken as the beginning of the peptide chain, and put at the left (C-terminal at
4.2.3 天然存在的活性肽
第4章 蛋白质的 共价结构
Peptides and Primary Structure of Proteins
OUTLINE
Overview of protein Peptide Determination of the amino acid sequences of proteins The amino acid sequence and the function of a protein
蛋白质浓度测定:凯氏定氮法的基础: 氮 = 16% 蛋白质含量 = 蛋白氮 ×6.25
三聚氰胺
The chemical component and classification of protein 蛋白质的分类:
单纯蛋白质: 仅由氨基酸组成,如核糖核酸 酶,肌动蛋白。 缀合蛋白质: 除氨基酸外还有其他化学成分 作为结构的一部分。 (辅基或配体)
The chemical component and classification of protein
单纯蛋白还可根据溶解性及其他物理性质进 行分类 缀合蛋白可根据辅基分类
The chemical component and classification of protein
按生物功能分类,如:
4.1.4 蛋白质功能的多样性
Protein functions
蛋白质的种类估计在1010 ~1012数量级。 由 20 种氨基酸组成的 20 肽,有 2×1018 种序 列异构体。 蛋白质的生物功能:
Protein functions
1)催化---酶的作用。 2)调节 --- 调节蛋白,如胰岛素(激素),调节遗传 信息转录的控制因子。 3)转运 --- 转运蛋白,如血红蛋白、血清清蛋白(将 脂肪酸从脂肪组织转运到各器官)是通过血流转运物 质的。 4)贮存 --- 如卵清蛋白、乳中的酪蛋白、植物种子中 的贮存蛋白等。
酶 调节蛋白 转运蛋白 贮存蛋白 结构蛋白等
4.1.2 蛋白质的形状和大小
The shape and size of protein
根据形状和溶解度可分为三大类:
1)纤维状蛋白质(Fibrous protein) 2)球状蛋白质(Globular proteins) 3)膜蛋白 (Membrane proteins)
The end having a free -amino group is called aminoterminal or N-terminal.