5种提取三七基因组DNA方法的比较
不同物种的DNA提取方法
不同物种的DNA提取方法摘要DNA作为遗传微粒,为生物体的遗传信息复制和传递做出了巨大的贡献,而1953年J.Watson和F.Crick提出的双螺旋结构模型不仅解释了有关DNA 的性质,而且也清楚地解释了DNA的各种生物功能,进而使DNA的研究进入到了分子水平。
然而DNA是如何具体在生物体内发挥其作用的,到现在还是一个热门课题,为了研究其作用,就需要从各种物种中提取DNA,由于不同物种结构的复杂性不同,导致提取DNA的方法也是各不相同,为此,我整理了一些物种的DNA提取方法。
关键词:物种、DNA提取1、月季DNA的提取方法:之所以提取高质量的月季DNA有难度,是因为其体内富含多糖及多酚类的物质,在一般的DNA提取方法中,很难被分离,这就严重干扰了提取月季DNA的纯度以及完整性。
为了解决这个问题,北京市园林科学研究所采取五种提取方法,在其最后的实验结果表明:Draper法提取月季DNA的纯度最高,完整性最好。
2、大麦小孢子DNA的提取方法:要想分离提取小孢子的DNA,就需要降解小孢子壁,而小孢子壁由外壁和内壁组成,内壁主要由纤维素和果胶组成,这类物质能够被相应的酶所水解,而外壁的主要成分是类胡萝卜素和类胡萝卜酯的氧化多聚化的衍生物,化学物质非常稳定,到目前为止,还没有相应的酶可以水解。
因此外壁便成为提取高质量的大麦小孢子DNA的一个“拦路虎”。
对此,莱阳农学院展开了研究,他们通过“收集大麦的花药”、“分离小孢子”、“分离小孢子”。
最后“DNA的提取”等一系列的步骤,在最后的统计结果中,发现CTAB法和微量快速提取法取得不错的效果,而且DNA的得率和质量几乎一样。
这也证明了上述两种方法是有效而可行的,当然在这个研究过程,首次采用超声波法进行破壁,收到出乎意料的效果,也为CTAB法和微量快速提取法提供了必要的条件。
所谓的CTAB,其中文名是十六烷基三甲基溴化铵,是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。
快速提取植物基因组DNA
4 种快速植物基因组DNA 提取方法比较:DNA 是从2 周龄水稻幼苗中提取。
(1)煮沸法:取50 mg 新鲜水稻叶片,剪碎至一干净1.5 mL 离心管中;加入200 μLTE Buffer,用细玻璃棒捣碎混匀;在沸水上煮10 min,冰浴10 min;于室温下13000 r/min 离心5 min;将上清储存在-20 ℃中。
(2)微波炉法:取50 mg 水稻叶片,剪碎至一干净1.5 mL 离心管中;在700 W 家用微波炉中高热处理5 min,加入100 μL TE Buffer,振荡,13000 r/min离心 5 min;将上清液储存在-20℃。
(3)碱处理法:取50 mg 水稻叶片,剪碎至一干净1.5 mL 离心管中;加入配好的NaOH 提取液[(Tris-HCL) = 100 mmol/L (pH8.0),c(NaOH) =300 mmol/L(TritonX-100)=0.3 %]用玻璃棒捣碎混匀,室温静置片刻后13000 r/min 离心3min。
4)TritonX-100 提取法:取50 mg 嫩叶片,剪碎至一干净1.5 mL 离心管中;加入200 μL 提取缓冲液[c (Tris-HCl) = 20 mmol/L (pH8.0),c (EDTA) =2mmol/L,c (TritonX-100) = 1.2 %]用细玻璃棒捣碎混匀;65 ℃水浴15 min,13000r/min 离心5 min,将上清储存在-20 ℃。
每个方法做三次重复,分别用上清提取液进行电泳检测。
将提取所得的基因组DNA 用 1.5 %琼脂糖电泳分析,结果表明用试剂盒提取的基因组DNA 最完整,Triton X-100 提取法所得的基因组DNA 条带也较明亮,煮沸法、微波法和碱处理法没有基因组条带。
LAMP检测结果:碱处理法和微波处理法扩增出来的条带亮度低,可能是因为微波和碱破坏了基因组的完整性。
煮沸法和Triton X-100 提取法的检测效果最好,这与提取液的成分能很好的保护基因组的完整性有关,可用于现场LAMP 检测用模板DNA的快速制备。
大量提dna的方法(二)
大量提dna的方法(二)
大量提取DNA的方法
引言
DNA提取是分子生物学和遗传学研究的基础步骤之一。
随着科技
的发展,现在已经有多种方法可以大量提取DNA。
本文将详细介绍几种常用的DNA提取方法。
常见的DNA提取方法
1.酚/氯仿法
–使用酚和氯仿将DNA从细胞溶胶中分离出来。
–该方法适用于各种类型的样本,如细胞、组织和微生物。
–使用酚/氯仿法提取的DNA通常具有较高的纯度,适合后续的分子生物学实验。
2.碱裂解法
–通过加入碱性溶液,使DNA解除双链,从而将其提取出来。
–碱裂解法适用于微生物和某些植物样本。
–该方法操作简单,但提取的DNA纯度较低,可能需要额外的纯化步骤。
3.磁珠法
–使用表面带有亲和性的磁珠,将DNA与其他细胞成分分离。
–该方法通常结合特定的DNA结合试剂盒使用,可以自动化进行。
–磁珠法提取的DNA纯度较高,适合高通量实验,但设备和试剂成本较高。
4.玻璃纤维滤纸法
–利用玻璃纤维滤纸上的孔隙结构,将DNA分离并固定在滤纸上。
–该方法适用于小体积的样本,如血液和唾液。
–玻璃纤维滤纸法提取的DNA可以直接用于聚合酶链式反应(PCR)等实验。
结论
DNA提取是许多分子生物学和遗传学研究的基本步骤。
通过选择
适当的提取方法,可以获得高质量和高纯度的DNA样本。
以上介绍的
几种方法是常见的DNA提取方法,每种方法都有其适用的样本类型和
特点。
创作者应根据具体实验要求选择合适的提取方法,以确保实验
的成功进行。
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA是生物体中的遗传物质,它携带着生物体的遗传信息。
提取DNA是研究基因组学、遗传学等领域的重要基础工作。
本文将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. CTAB法CTAB法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)与DNA结合形成离子对,然后通过盐溶液的浓度差异,使DNA从溶液中沉淀出来。
该方法适用于提取植物细胞中的DNA。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种常用的DNA提取方法。
其原理是利用DNA在酚相中溶解,而其他细胞组分则在氯仿相中溶解,通过酚/氯仿两相的分离,从而将DNA分离出来。
该方法适用于提取动物细胞和细菌等样品中的DNA。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高效、纯化度较高的DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性,将DNA吸附在硅胶颗粒上,然后通过洗涤、离心等步骤,将DNA从硅胶颗粒上洗脱下来。
该方法适用于提取各种样品中的DNA。
4. 磁珠法磁珠法是一种基于磁性颗粒的DNA提取方法。
其原理是将带有亲和基团的磁性颗粒与DNA结合,然后通过磁力的作用,将颗粒和DNA一起沉淀下来,最后通过洗涤等步骤,将DNA从颗粒上洗脱下来。
该方法具有快速、高效的特点,适用于高通量的DNA提取。
以上是几种常用的DNA提取方法及其原理。
不同的方法适用于不同类型的样品和实验需求。
在实际操作中,可以根据具体情况选择合适的方法进行DNA提取。
同时,为了保证提取到的DNA质量和纯度,还需要注意提取过程中的一些关键步骤,如细胞破碎、蛋白质酶处理、DNA沉淀等。
DNA的提取是基因研究和遗传学研究的重要步骤,通过合适的提取方法可以获取到高质量的DNA样品,为后续的实验和分析提供可靠的基础。
随着技术的不断进步,提取方法也在不断改进和优化,为科学研究提供更多的可能性。
提取dna的方法
提取dna的方法提取DNA的方法。
DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的一项基础工作,它是分析DNA序列、进行PCR扩增、测序等实验的前提。
本文将介绍几种常用的DNA提取方法,希望能为科研工作者提供一些参考。
首先,我们来介绍化学法提取DNA的方法。
化学法是最常用的DNA提取方法之一,其原理是利用蛋白酶K和盐酸胍等试剂破坏细胞膜和蛋白质,使DNA从细胞中释放出来。
具体操作步骤为,首先,将待提取的细胞样品加入含有蛋白酶K 的溶液中,经过一定时间的消化后,再加入盐酸胍等试剂,使DNA沉淀出来。
最后,用乙醇洗涤和溶解,即可得到纯净的DNA。
其次,机械法也是一种常用的DNA提取方法。
机械法主要利用机械力破碎细胞壁,释放DNA。
常用的机械法包括玻璃珠研磨法和超声波破碎法。
玻璃珠研磨法是将样品和玻璃珠一起加入管中,通过高速震荡使细胞破碎,释放DNA。
超声波破碎法则是利用超声波的高能量震荡作用,破坏细胞壁,释放DNA。
这两种方法操作简单,适用于大批量的样品提取。
另外,磁珠法也是一种高效的DNA提取方法。
磁珠法利用表面修饰的磁珠与DNA的亲和性,通过磁力场控制DNA的分离和纯化。
操作步骤为,首先,将待提取的细胞样品与表面修饰的磁珠混合,使DNA与磁珠结合;然后,通过磁力场的作用,将磁珠与结合的DNA沉淀到管底;最后,去除上清液,用洗涤缓冲液洗涤,即可得到纯净的DNA。
最后,有机溶剂法也是一种常用的DNA提取方法。
有机溶剂法利用有机溶剂与DNA的亲和性,将DNA从细胞溶液中提取出来。
操作步骤为,首先,将待提取的细胞样品加入有机溶剂中,使DNA与有机相结合;然后,通过离心将DNA沉淀到管底;最后,去除上清液,用洗涤缓冲液洗涤,即可得到纯净的DNA。
综上所述,化学法、机械法、磁珠法和有机溶剂法是常用的DNA提取方法,每种方法都有其适用的场合和特点。
在实际操作中,可以根据实验需要和样品性质选择合适的提取方法。
希望本文对DNA提取方法有所帮助,谢谢阅读!。
中药材景天三七DNA提取方法的比较分析
中药材景天三七DNA提取方法的比较分析作者:刘丽华 杜建梅 冯宝珍来源:《江苏农业科学》2014年第12期摘要:以景天三七药材为材料,分别采用改良CTAB法、SDS法、高盐低pH法对其DNA进行提取并检测,旨在建立一种适合中药材景天三七的DNA提取方法。
结果表明,改良CTAB法提取的DNA浓度为290 μg/mL,电泳条带最亮,无拖尾现象,在浓度和纯度方面均优于其他2种方法,并可用于ISSR-CR扩增,改良CTAB法是中药材景天三七DNA提取的最佳方法。
关键词:中药材;景天三七;DNA提取;改良CTAB法;SDS法;高盐低pH法中图分类号: S5672360文献标志码: A文章编号:002-302(204)2-0047-03目前,分子生物学技术在中药材研究中广泛应用,如药用植物的亲缘与进化关系、种质鉴定、分类和提取[-3]等,而DNA的分离纯化是中药材分子生物学研究的基础。
但商品药材经过干燥、加工、贮藏等过程,DNA会出现不同程度的降解;同时,由于中药材中的小分子次生物质,如有机酸、萜类、香豆素、鞣质、黄酮等含酚羟基化合物,氧化后容易与DNA结合,[2]引起DNA降解,而其中存在的多糖由于与DNA同属于大分子化合物,在一般提取过程中很难完全去除,因此,针对不同药材进行DNA 提取方法的探索是有必要的。
所以,本研究以市售景天三七(Sedum aizoon L)干品药材和新鲜嫩叶为材料,采用改良CTAB法、SDS法、高盐低pH法提取干品景天三七DNA,并对3种提取结果进行比较分析,选出适合中药材景天三七的简便、快速、高纯度的DNA提取方法,为中药材景天三七的遗传多样性、种质鉴定等分子水平的研究提供依据。
材料与方法材料中药材景天三七购自同仁堂药店,嫩叶取自运城学院栽种的中药材景天三七。
2试剂CTAB、SDS、V、NaCl、Tris-HCl(pH值80)、EDTA、KAc、Tris饱和酚、β-巯基乙醇、异戊醇、异丙醇购自北京拜尔迪生物技术有限公司,RNase、rimer UBC89、 Taq聚合酶等试剂均购自上海生工生物工程技术有限公司。
中药材景天三七 DNA 提取方法的比较分析
中药材景天三七 DNA 提取方法的比较分析
刘丽华;杜建梅;冯宝珍
【期刊名称】《江苏农业科学》
【年(卷),期】2014(000)012
【摘要】以景天三七药材为材料,分别采用改良CTAB法、SDS法、高盐低pH
法对其DNA进行提取并检测,旨在建立一种适合中药材景天三七的DNA提取方法。
结果表明,改良CTAB法提取的DNA浓度为290μg/mL,电泳条带最亮,无拖尾现象,在浓度和纯度方面均优于其他2种方法,并可用于ISSR-PCR扩增,改良CTAB法是中药材景天三七DNA提取的最佳方法。
【总页数】3页(P47-49)
【作者】刘丽华;杜建梅;冯宝珍
【作者单位】运城学院生命科学系,山西运城,044000;南京师范大学生命科学学院,江苏南京210023;运城学院生命科学系,山西运城,044000
【正文语种】中文
【中图分类】S567.23+6.01
【相关文献】
1.中药材地龙DNA提取方法的比较分析 [J], 吕国庆;姬可平;牛宪立;梅露露
2.四种中药材DNA提取方法的比较 [J], 张馨元;赵超越;侯和胜;佟少明Δ
3.中药材贝母DNA不同提取方法的比较 [J], 王淼;谭莹;张丽华
4.枳壳类中药材干燥果实DNA提取方法的优化实验设计 [J], 李明娟; 黄嬛; 金莉; 金佩芬; 黄越燕; 丁宝月
5.适合中药材DNA条形码分析的DNA提取方法的研究 [J], 段中岗;黄琼林;杨锦芬;刁玲武;詹若挺;何瑞;徐晖;严萍;陈蔚文
因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
法医实验室几种常用DNA提取方法及比较
法医实验室几种常用DNA提取方法及比较(一)Chelex100法原理:Chelex100是一种螯合树脂,由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成,含有成对的亚氨基二乙酸盐离子,起着螯合基团作用,对多价金属离子有极强亲和力。
在低离子强度、碱性及100℃煮沸条件下,可以使细胞膜裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离。
检材基质中一般含有大量金属离子,在低离子强度及加热条件下,金属离子可以辅助脱氧核糖核酸酶降解DNA,也可以抑制PCR反应,所以在提取DNA时,加入Chelex100,螯合了金属离子,防止了DNA降解,提高了PCR扩增成功率。
方法:剪取适量血斑、精斑、汗斑、鼻涕斑、指甲、毛根、软组织等等生物检材,置于0.5ml 离心管内,加入适量纯水,室温浸泡,13,000rpm离心5min,上清丢弃,管底留约20μl左右液体及检材基质,加入100-200μl 5%Chelex100(有时需加适量PK)56℃15min至数10小时不等,100℃8min,13,000rpm离心5mim,上清备用。
评述:Chelex100法已经成为DNA提取的基本方法,Chelex100法是万能的。
目前,我们一切纯化方法都在Chelex100法的基础上进行,Chelex100法又不是万能的。
Chelex100法提取前的检材清洗非常重要,因为现场检材往往均较脏,脏东西可以抑制PCR 反应,所以往往不止清洗一次,清洗检材时可能损失部分DNA。
所以应平衡清洗抑制剂与损失DNA之间的关系。
特别强调清洗时应“把根留住”,很多情况下已知样本DNA检验失败的原因是把根没有留住。
DNA检验时还有另外一句名言:“一个萝卜一个坑”,防止混乱检材。
肝素抑制PCR反应,血红素抑制PCR反应,所以长时的浸泡、多次清洗往往可能洗除肝素及血红素。
在已知样本多次无检验结果疑为肝素抗凝的情况下,多洗是检验成功所必须的。
血红素对普通Taq酶的抑制作用是明显的,而目前mtDNA扩增一般用普通Taq酶,所以同一样品除进行STR检验外尚需进行mtDNA检测时,尽量去除干净血红素,显得尤为重要。
5种提取三七基因组DNA方法的比较
恒温鼓风干燥箱,THERMO 冷冻高速离心机,BIO - RAD 核酸 0. 6% 琼脂 糖 凝 胶 液。待 胶 冷 却 到 60 ℃ 左 右,加 入 5 μL
蛋白仪,电热式压力蒸汽灭菌器,SANYO 制冰机,MILLIPORE DNA 染料 Goldview 混匀,倒入 14 cm × 6 cm 的胶板中,插入
其他试剂: 50 × TAE 缓冲液; 2. 5 mol / L KAc,7. 5 mol / L 1. 4. 3 琼脂糖凝胶电泳 称取 0. 6 g 琼脂糖于 100 mL 锥形
NH4 Ac,10% SDS,CHCl3 ∶ C5 H12 O( 24 ∶ 1 ) ,无 水 C2 H5 OH, ( CH3 ) 2 CHOH,70% C2 H5 OH,无菌水。 1. 3 试验仪器
高盐低 pH 值法提取缓冲液: 100 mmol / L NaAc,50 mmol / L EDTA( 乙二胺四乙酸) ,500 mmol / L NaCl,2. 5% PVP( 聚乙烯 吡咯烷酮) ,10 mmol / L β - ME( β - 巯基乙醇) ,调节 pH 值至 5. 5。
尿素法提取缓冲液: 8 mmol / L CO( NH2 ) 2 ( 脲) ,0. 5 mol / L NaCl,50 mmol / L Tris ( pH 值 8. 0 ) ,20 mmol / L EDTA, 10 mmol / L β - ME,2% PVP。
1. 4. 2 浓度、纯度及得率检测 取 50 μL 原液,加无菌水至 法、PVP 法、尿素法、高盐低 pH 值法,其中最低的 DNA 得率
3 mL 以 稀释 60 倍,混匀 后 用分 光光 度 计 在 波 长 230、260、 在 20 μg / g 左右。
提取dna的方法
提取dna的方法DNA提取是生物学和遗传学研究中的一项重要技术,它可以帮助科学家们获取生物体内的DNA样本,为后续的实验和分析提供基础。
在实验室中,有多种方法可以用来提取DNA,每种方法都有其特定的优势和局限性。
下面将介绍几种常用的DNA提取方法。
首先,我们来介绍化学法提取DNA的方法。
这种方法利用化学试剂来破坏细胞膜和核膜,释放出DNA分子。
通常,这种方法需要用到蛋白酶来分解蛋白质,破坏细胞壁。
接着,利用酚/氯仿提取法来分离DNA和其他细胞组分。
最后,通过酒精沉淀法将DNA沉淀出来。
这种方法操作简单,适用于大多数细胞类型,但是可能会导致DNA的质量和纯度较低。
其次,机械法提取DNA的方法也是一种常用的技术。
这种方法利用机械力来破碎细胞膜,释放出DNA。
常见的机械法包括玻璃珠破碎法和超声波破碎法。
玻璃珠破碎法通过在样品中加入玻璃珠,利用高速旋转来破碎细胞膜。
而超声波破碎法则是利用超声波的机械振动作用,破坏细胞结构。
这种方法操作简单,适用于大多数样品,但需要注意的是,过度的机械力可能会导致DNA断裂,影响后续实验的结果。
另外,离心法提取DNA的方法也是一种常用的技术。
这种方法利用离心机来分离DNA和其他细胞组分。
首先,将样品进行离心,使得细胞被分离出来。
然后,利用蛋白酶和盐溶液来消化蛋白质和细胞壁。
最后,通过酒精沉淀法将DNA沉淀出来。
这种方法可以得到较高质量和纯度的DNA,适用于需要高质量DNA的实验。
最后,磁珠法提取DNA的方法也是一种高效的技术。
这种方法利用表面修饰的磁珠来结合DNA,然后利用磁场将DNA磁珠复合物分离出来。
这种方法操作简便,可以自动化进行,适用于高通量的DNA提取。
综上所述,DNA提取是生物学和遗传学研究中不可或缺的一环,而选择合适的提取方法对后续实验结果具有重要影响。
不同的提取方法各有优劣,需要根据实验需求和样品特性来选择合适的方法。
希望本文介绍的几种常用的DNA提取方法能够为科研工作者提供一些参考,帮助他们顺利进行实验和研究。
提取基因组dna的方法
提取基因组dna的方法
提取基因组DNA的方法通常分为以下几个步骤:
1. 细胞破碎(Cell lysis):将待提取的细胞或组织样本进行破碎,使细胞膜失去完整性,释放出细胞内的DNA。
破碎可以通过机械方法(如研磨、切割、振荡等)或化学方法(如洗涤、酸碱处理等)进行。
2. DNA除去蛋白质(Protein removal):将细胞破碎产物中的蛋白质进行去除,以防止其干扰后续的DNA提取和分析步骤。
通常使用酶处理(如蛋白酶K)或蛋白质沉淀剂(如酚/氯仿)来除去蛋白质。
3. DNA纯化(DNA purification):通过使用某种纯化方法,将破碎产物中的DNA与其他杂质(如RNA、酶、盐等)进行分离和纯化。
常用的纯化方法包括酚/氯仿提取法、硅胶膜柱法、离心柱纯化法等。
4. DNA沉淀和洗涤(DNA precipitation and washing):通过加入适当的盐类和酒精,使DNA以沉淀的形式析出。
沉淀后,通过洗涤来去除残留的盐和酒精。
5. DNA溶解(DNA resuspension):将沉淀的DNA用适当的缓冲液进行溶解和复溶,使其恢复到溶液中,并得到可用于后续实验分析的DNA溶液。
这些步骤只是提取基因组DNA的一般流程,具体方法可能因实验目的和待提取样本的特性而有所差异。
基因组dna提取方法
基因组dna提取方法一、基因组DNA提取的重要性1.1 这基因组DNA啊,那可就像是生物的密码本一样。
不管是研究生物的遗传特性,还是探寻疾病的根源,都离不开它。
就好比我们要了解一个宝藏的秘密,这基因组DNA就是那把关键的钥匙。
没有它,很多生物研究就像是在黑暗中摸索,找不到方向。
1.2 从微生物到高等动植物,基因组DNA提取都是基础中的基础。
就像盖房子打地基,要是地基没打好,这房子怎么能稳稳当当盖起来呢?在生物学这个大厦里,基因组DNA提取就是那坚实的地基。
二、常见的基因组DNA提取方法2.1 酚氯仿抽提法这酚氯仿抽提法啊,算是经典的老办法了。
它就像一个经验丰富的老工匠的手艺,虽然有点老派,但很可靠。
这个方法呢,是利用酚和氯仿对蛋白质和DNA不同的溶解性。
蛋白质在酚和氯仿里溶解度大,DNA呢,在水相里。
就像是油和水不相溶一样,把它们分开。
不过这方法也有点麻烦,就像走一条弯弯绕绕的小路,要小心操作,不然很容易把DNA搞坏了。
而且酚和氯仿那味道可不好闻,就像走进了一个化学药剂仓库,刺鼻得很。
2.2 离心柱法离心柱法就像是一个高效的小助手。
它有专门的离心柱,就像一个个小筛子。
DNA能被吸附在柱子上,而杂质就被过滤掉了。
这方法简单快捷,就像坐直达电梯一样,能很快得到比较纯净的DNA。
但是呢,这离心柱可不便宜,就像买一件高档的衣服,成本有点高。
对于一些经费紧张的实验室来说,就有点捉襟见肘了。
2.3 磁珠法磁珠法那可是比较新颖的方法。
磁珠就像一个个小磁铁,能特异性地吸附DNA。
操作的时候,就像变魔术一样,通过磁场把磁珠和DNA复合物分离出来。
这个方法自动化程度比较高,就像开着自动驾驶汽车一样轻松。
不过这磁珠的质量参差不齐,要是买到不好的磁珠,那就像买到了假冒伪劣产品,提取的效果就大打折扣了。
三、提取过程中的注意事项3.1 样本的选择与处理样本就像原材料,要是原材料不好,那成品肯定也好不到哪里去。
在选择样本的时候,一定要新鲜、完整。
基因组dna提取的常用方法及原理
基因组dna提取的常用方法及原理嘿,咱今儿就来唠唠基因组 DNA 提取的那些常用法子和原理呀!你想想看,这 DNA 就像是生命的密码本,要想解开生命的奥秘,就得先把它给弄出来呀。
那咋弄呢?先来说说酚氯仿提取法吧。
这就好比是一场精细的筛选过程,酚和氯仿就像两个厉害的卫士,能把蛋白质啊啥的杂质给赶跑,只留下纯净的 DNA。
就好像在一堆杂物里,精准地挑出我们想要的宝贝一样。
这个方法虽然经典,但操作起来可得小心点,毕竟酚和氯仿可不是好惹的主儿呢!还有盐析法,这就像是用魔法盐把 DNA 给召唤出来。
通过调节盐的浓度,让 DNA 乖乖现身。
就好像是给 DNA 施了个魔法咒语,让它不得不现身一样。
简单又实用,是不是挺有意思的?再讲讲试剂盒法呀。
这就像是有了一个专门的工具包,里面啥都准备好了,你只要按照步骤来操作就行。
多方便呀,不用自己去操心各种试剂的调配啥的,就跟搭积木似的,一块一块往上垒,最后就能得到我们想要的 DNA 啦。
那这些方法的原理到底是啥呢?其实就是利用 DNA 和其他物质的不同性质呀。
DNA 有它独特的特点,咱就根据这些特点来想办法把它弄出来。
就好像是知道了一个人的喜好,然后根据这个喜好去接近他一样。
提取基因组 DNA 可不是件容易的事儿啊,得有耐心,还得细心。
就跟绣花似的,一针一线都不能马虎。
要是不小心出了差错,那可就前功尽弃啦!你说,这小小的 DNA 里藏着多少秘密呀?我们提取它,就是为了能更好地了解生命的奥秘。
这就像是打开了一扇通往未知世界的大门,里面充满了惊喜和挑战。
在这个过程中,我们不断探索,不断尝试。
每一次的成功提取,都像是攻克了一座小山峰,那种成就感,真的是没法形容。
所以啊,好好了解这些常用方法和原理,才能在提取 DNA 的道路上越走越远,才能解开更多生命的谜团呀!咱可不能小瞧了这基因组DNA 提取,它可是科学研究的重要基石呢!你说是不是这个理儿?。
一种基于二代测序的三七鉴定
一种基于二代测序的三七鉴定
基于二代测序的三七鉴定是一种利用高通量测序技术对三七样品进行遗传分析和DNA指纹鉴定的方法。
三七是一种中国传统草药,具有重要的药用价值。
然而,随着市场需求的增加,三七的质量问题也日益突出。
传统的三七鉴定方法通常依赖于形态学、化学成分分析等手段,但存在复杂、耗时、易受操作者主观因素等问题。
基于二代测序的三七鉴定方法可以通过分析三七样品的DNA序列来确定其遗传特征,
实现对三七的快速、准确鉴定。
基于二代测序的三七鉴定方法主要包括以下几个步骤:
1. 样品采集和DNA提取:从三七样品中采集组织或细胞样品,并提取样品中的DNA。
2. DNA文库构建:将提取的DNA样品进行文库构建,即将DNA片段连接到测序适配体上。
3. 测序:将构建好的DNA文库进行高通量测序,通常采用Illumina公司的测序平台。
4. 数据分析:对测序得到的数据进行质控、数据清洗和序列比对等分析。
5. 鉴定和验证:根据数据分析的结果,比对样品的DNA序列
和已知的三七遗传信息进行比较,确定样品的品种和真实性。
基于二代测序的三七鉴定方法具有高通量、高灵敏度、高分辨率等优点,可以快速准确地鉴定三七样品的真实性和品种,对于保证三七质量和市场秩序具有重要的意义。
然而,该方法也存在着测序数据处理和解读的挑战,需要进一步的研究和优化。
三七根部总 RNA 不同提取方法的比较
三七根部总 RNA 不同提取方法的比较郑锐东;姚啟聪;廖鹏;吴漫晔【摘要】In order to obtain efficient extraction method and high quality RNA from P .pseudoginseng root,Comparison of Trizol method,CTAB method,modified Trizol method and isolation kit method for total RNA extraction from root of P .pseudoginseng was conducted.Results:The four methods were of various extraction effects,of which,the modified Trizol method with 2.00 OD260/OD280 ,1.90 OD260/OD230 ,1.9 28S∶ 18S,7.4 RIN,386 μg/μL mass concentration was the best.The other three m ethods easily lead to sample degradation or saltion residues.Conclusion:The modified Trizol method is an efficient extraction method of RNA fromP .pseudoginseng root.%为探明三七根部总 RNA 的最佳提取方法,获取高质量RNA,选取三七根部为材料,比较 Tr-izol 试剂法、CTAB 法、改良 Trizol 法和试剂盒法提取三七根部总 RNA 的质量。
结果表明:4种方法提取三七根部 RNA 效果不同,其中以改良 Trizol 法提取 RNA 的质量最高,其 RNA 的 OD260/OD280为2.00, OD260/OD230为1.90,28S∶18S 为1.9,RIN 值为7.4,质量浓度为386μg/μL。
dna提取的各种方法介绍
3.DNA提取的几种方法 (1).浓盐法 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常 用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少 量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质 凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍 体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
1.为什么在低温下进行?
2.分别加柠檬酸钠和EDTA的作用 ?
3.加SDS的作用?
4.加NaCL的作用,为什么要加到1mol/L?
5.加入异戊醇有什么作用?
1、二苯胺试剂:使用前称取 0.8g 二苯胺(需在70% 乙醇试 剂中重结晶 2 次 ) ,溶于 180 ml 冰乙酸中,再加入 8ml 过氯酸 (60%以上),混匀待用,临用前加入0.8ml 1.6%乙醛溶液,所 配试剂应为无色。 每组需56ml 共需2800ml 2、DNA标准溶液:(须经定磷法确定其浓度)取标准DNA 以0.01N NAOH配成200微克/毫升的标准液。 每组需12ml 共需600ml 3、1.6% 乙醛:取 47% 乙醛 3.4ml,加重蒸水定容至 100ml (放于冰箱中,一周之内可以使用)。 共需70ml 4、 ( 测样品液:准确称取猪脾 DNA 或用紫外分光法中剩下 的DNA液配成10微克/毫升的溶液。 每组需4ml 共需200ml
DNA的提取方法简介
为了研究DNA分子在生命代谢中的作用,常常 需要从不同的生物材料中提取DNA.由于DNA 分子在生物体内的分布及含量不同,要选择适 当的材料提取DNA。 动植物中,小牛胸腺۰动物肝脏۰鱼类精子,植 物种子的胚中都含有丰富的DNA。 微生物中,谷氨酸菌体含7%~10%,面包酵母 含4%,啤酒酵母含6%,大肠肝菌含9%~10%。
dna提取方法的种类
dna提取方法的种类嘿,你知道吗?DNA 提取的方法那可真是五花八门啊!就好像我们生活中有各种各样的美食做法一样。
有一种方法呢,就像是细心的挖掘工人,一点点地把 DNA 从细胞这个“宝库”里慢慢挖出来,这就是酚氯仿提取法。
它虽然步骤稍微繁琐了点,但是就像老工匠的手艺,能很靠谱地把 DNA 给弄出来哟!还有一种方法呀,就像是个聪明的小助手,利用一些特殊的试剂和条件,让 DNA 乖乖地现身,这就是磁珠法。
它操作起来相对简单,就像我们走捷径一样,能快速地得到我们想要的 DNA 呢!再来看看硅胶膜法,这就好比是一个有魔力的滤网,能把 DNA 给筛选留下来。
它就像是个神奇的小工具,能把杂质都给挡在外面,只留下纯净的 DNA 呢。
另外啊,盐析法也挺有意思的。
它就像是在细胞的世界里制造一场“盐分风暴”,让 DNA 在这场风暴中沉淀下来。
是不是感觉很奇妙呀?那碱裂解法呢,就像是给细胞来一场特别的“洗礼”,让 DNA 从中解脱出来。
这种方法有时候就像是一场冒险,充满了未知和惊喜呢!不同的 DNA 提取方法都有各自的特点和适用场景呢,就像我们不同的人有不同的性格和擅长的事情一样。
有的方法适合大规模提取,有的适合少量珍贵样本,有的简单快捷,有的则更加精确。
你想想看,如果我们要研究一个很重要的生物课题,那选择合适的DNA 提取方法不就像是给这个课题找到了一把合适的钥匙吗?要是选错了方法,那不就像拿着一把不合适的钥匙去开锁,怎么都打不开呀!而且哦,在实际操作中,可不能马虎大意呢。
就像做饭一样,调料放多了或者放少了,味道可能就不对啦。
提取 DNA 也是,每个步骤都要认真对待,不然可能就得不到好的结果哦。
总之呢,DNA 提取方法的种类丰富多样,它们就像是我们探索生命奥秘的得力工具。
我们要根据不同的需求和情况,选择最适合的那一种,这样才能更好地解开生命的密码呀!所以呀,可别小瞧了这些方法哦,它们可是有着大作用呢!。
dna提取方法
dna提取方法
dna提取主要是CTAB方法,其它的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。
化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。
生物方式:酶法。
一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速离心后取上清,所得DNA大小为100-150kb。
二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。
生成DNA约80kb。
四.异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)。
五.表面活性剂快速制备法:用TritonX-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
六.加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。
七.碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。
dna的提取方法
dna的提取方法DNA(脱氧核糖核酸)的提取方法是分子生物学研究中的重要步骤之一。
DNA提取是指从生物样品中分离纯净的DNA分子,以便进行后续的实验操作。
本文将介绍几种常用的DNA提取方法,包括传统的酚-氯仿法、盐法和商业化DNA提取试剂盒法。
一、酚-氯仿法酚-氯仿法是最早被广泛应用的DNA提取方法之一。
其原理是利用酚和氯仿两种溶剂的密度差异,将DNA从其他细胞成分中分离出来。
具体步骤如下:1. 取样品,如血液、组织或细胞。
2. 加入细胞裂解缓冲液,使细胞破裂释放DNA。
3. 加入酚-氯仿混合液,混合均匀。
4. 离心分离混合液,得到上清液和有机相。
5. 通过酚-氯仿提取法分离DNA。
二、盐法盐法是一种简单且经济的DNA提取方法,适用于提取小样本量的DNA。
其原理是利用DNA在高浓度盐溶液中的溶解特性,将DNA 分离出来。
具体步骤如下:1. 取样品,如口腔拭子、唾液或头发。
2. 加入盐溶液,使DNA溶解。
3. 加入冷酒精,使DNA沉淀。
4. 离心分离上清液和DNA沉淀。
5. 通过盐法提取DNA。
三、商业化DNA提取试剂盒法商业化DNA提取试剂盒是现代科研实验室常用的DNA提取方法。
这种方法利用了特定试剂盒中的缓冲液、酶和离心管等配套设备,实现了高效、快速和稳定的DNA提取。
具体步骤如下:1. 根据试剂盒说明书,准备样本和试剂。
2. 加入细胞裂解缓冲液,使细胞破裂释放DNA。
3. 加入消化酶,去除蛋白质和RNA。
4. 加入洗涤缓冲液,洗涤DNA沉淀。
5. 加入洗涤缓冲液,洗涤DNA沉淀。
6. 加入洗涤缓冲液,洗涤DNA沉淀。
7. 通过商业化DNA提取试剂盒法提取DNA。
在实际应用中,选择何种DNA提取方法应根据实验目的、样本类型、样本数量和实验预算等因素进行合理选择。
以上介绍的酚-氯仿法、盐法和商业化DNA提取试剂盒法都是常用的DNA提取方法,具有各自的优缺点。
研究人员可以根据实际需求选择最适合的方法。
三七几种后熟处理方式和DNA提取方式比较
三七几种后熟处理方式和DNA提取方式比较孙正海;唐军荣;辛培尧;黎林梅【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2011(039)006【摘要】为建立三七种子后熟处理和DNA提取技术体系,分别以种子活性、DNA 纯度、浓度和提取时间为指标,比较了三七3种后熟处理方式(昆明冬季常温处理、4℃冰箱内低温处理和昆明冬季沙埋处理)和4种DNA提取方式(改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ和改良SDS法)的效果.结果发现,3种后熟处理方式中昆明冬季沙埋处理效果最好,处理后具有活力种子占90%;4种DNA提取方式都可以提取三七基因组DNA,其中,改良CTAB法Ⅰ提取三七DNA纯度较好,浓度较高,所需时间最短,在4种方式中综合效果最好.【总页数】3页(P57-59)【作者】孙正海;唐军荣;辛培尧;黎林梅【作者单位】西南林业大学西南山地森林资源保育与利用省部共建教育部重点实验室,云南昆明650224;西南林业大学国家林业局西南地区生物多样性保育重点实验室,云南昆明650224;西南林业大学国家林业局西南地区生物多样性保育重点实验室,云南昆明650224;西南林业大学西南山地森林资源保育与利用省部共建教育部重点实验室,云南昆明650224;西南林业大学国家林业局西南地区生物多样性保育重点实验室,云南昆明650224;西南林业大学西南山地森林资源保育与利用省部共建教育部重点实验室,云南昆明650224【正文语种】中文【中图分类】Q781【相关文献】1.几种常见的湿陷性黄土地基处理方式的比较 [J], 郭盛2.几种软基处理方式的比较 [J], 郭侠3.放射免疫分析中几种数据处理方式的比较 [J], 李滨4.非平行坐标系统图形的几种处理方式比较 [J], 邱全富5.茶多酚几种不同提取方式的比较 [J], 喻祖文因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
作为孑遗植物,三七中含有大量的酚类和黄酮类物质,因 此提取三七的基因组 DNA 具有一定难度,然而在三七的生理 生化、分子生物学研究中均需要提取基因组 DNA,因此开展 三七基因组 DNA 的提取研究具有重要意义。目前,尚无三七 基因组 DNA 提取方法的研究报道,本试验研究了 5 种提取三 七基因组 DNA 的方法,以期为三七的科学贮藏及其基因组 DNA 的快速、有效提取提供技术支持。
1. 4. 2 浓度、纯度及得率检测 取 50 μL 原液,加无菌水至 法、PVP 法、尿素法、高盐低 pH 值法,其中最低的 DNA 得率
3 mL 以 稀释 60 倍,混匀 后 用分 光光 度 计 在 波 长 230、260、 在 20 μg / g 左右。
表 1 紫外分光光度法检测提取三七基因组 DNA 纯度比较
— 54 —
江苏农业科学 2014 年第 42 卷第 5 期
白雪嵩,赵昶灵,陈中坚,等. 5 种提取三七基因组 DNA 方法的比较[J]. 江苏农业科学,2014,42( 5) : 54 - 56.
5 种提取三七基因组 DNA 方法的比较
白雪嵩1 ,赵昶灵1 ,陈中坚2 ,翁 晨1 ,王文亚1
( 1. 云南农业大学农学与生物技术学院,云南昆明 650201; 2. 云南省文山市苗乡三七实业有限公司,云南文山 663000)
CTAB 法 提 取 缓 冲 液: 50 mmol / LTris ( pH 值 8. 0 ) ,
江苏农业科学 2014 年第 42 卷第 5 期
— 55 —
0. 7 mol / L NaCl,10 mmol / L EDTA ( pH 值 8. 0 ) ,20 mmol / L 280 nm 处测定 DNA 的吸光度,计算 DNA 浓度:
PVP 法提取缓冲液: 250 mmol / L NaCl,25 mmol / L EDTA,
DNA 得率( μg / g) = DNA 浓度 ( μg / mL) × 提取的 DNA
0. 5% SDS,20 mmol / L Tris ( pH 值 8. 0) 。
体积( mL) / 材料质量( g) 。 [11]
恒温鼓风干燥箱,THERMO 冷冻高速离心机,BIO - RAD 核酸 0. 6% 琼脂 糖 凝 胶 液。待 胶 冷 却 到 60 ℃ 左 右,加 入 5 μL
蛋白仪,电热式压力蒸汽灭菌器,SANYO 制冰机,MILLIPORE DNA 染料 Goldview 混匀,倒入 14 cm × 6 cm 的胶板中,插入
高盐低 pH 值法提取缓冲液: 100 mmol / L NaAc,50 mmol / L EDTA( 乙二胺四乙酸) ,500 mmol / L NaCl,2. 5% PVP( 聚乙烯 吡咯烷酮) ,10 mmol / L β - ME( β - 巯基乙醇) ,调节 pH 值至 5. 5。
尿素法提取缓冲液: 8 mmol / L CO( NH2 ) 2 ( 脲) ,0. 5 mol / L NaCl,50 mmol / L Tris ( pH 值 8. 0 ) ,20 mmol / L EDTA, 10 mmol / L β - ME,2% PVP。
1 材料与方法
1. 1 试验材料 试验所用的三七叶均采自云南省砚山县苗乡三七实业有
限公司科技园的苗圃( 104. 322 5°E,23. 530 2°N) 。于 2013 年 7 月 13 日 16: 35 从株高( 10. 475 ± 2. 008) cm、株间距( 5. 670 ± 1. 382) cm、种植密度( 423. 200 ± 15. 296) m2 的三七试验地中 按“1 株 1 叶”的原则均匀采集一年生的三七叶,小心装入纱 布采样袋中直至装满。系好标签牌并标注采集的编号、样品 名称和时间,然后小心放入液氮中保存。
植物基因组 DNA 的提取方法具有特殊性,提取难易程度 各不相同,主要影响因素有以下几点: ( 1) 取材种类。不同植 物 DNA 的最 佳 提 取 方 法 不 同,如 棉 花 的 最 佳 提 取 方 法 是 CTAB( 十六烷基三甲基溴化铵) 法[4],茴香的最佳提取方法 是 SDS( 十二烷基磺酸钠) 法[5]。( 2) 取材部位。已有研究表 明,果树基因组 DNA 提取所需的材料可以是嫩叶、成熟叶、幼 嫩果实、韧 皮 部 及 形 成 层 组 织 等[6]; 郭 金 英 等 对 桃 基 因 组 DNA 的提取方法及部位进行比较研究发现,从嫩叶和幼嫩果 实中提取的 DNA 产率较高[7],因此用一般植物的嫩叶可以提 取出较高含量的基因组 DNA。( 3) 取材时间。吴少华等在对 木奈基因组 DNA 的提取研究中发现,老叶提取的 DNA 含量 和质量都不如幼叶[8]; 沈向等认为,3 月采集的植物幼叶中提 取的 DNA 质量比 9 月的高[9]; 彭建营等提出,取样时间对所 提基因组 DNA 的质量无影响[10],但与产量有关,以旺盛生长 期的幼叶或嫩梢尖最佳[6]。
反渗透纯水系统,DYY - 12 型电泳仪,SYNGENE 凝胶成像分 梳子,凝固成胶( 胶厚度不超过 0. 5 cm) ,将制好的胶放入电
析系统,电子天平,微波炉,多头磁力加热搅拌器,数显恒温水 泳槽中点样。
浴锅,中科美菱 - 80 ℃ 冰箱,伊莱克斯 - 20 ℃ 冰箱。
分别取 6 μL DNA 样品、4 μL 6 × Loading Buffer 混匀,在
摘要: 用高盐低 pH 值法、尿素法、CTAB( 十六烷基三甲基溴化铵) 法、SDS( 十二烷基磺酸钠) 法、PVP( 聚乙烯吡咯 烷酮) 法提取一年生三七叶的基因组 DNA,用紫外分光光度法测定提取的 DNA 浓度,用琼脂糖凝胶电泳法测定提取 的 DNA 质量。结 果 表 明: 用 CTAB 法 提 取 的 基 因 组 DNA 含 量、得 率 最 高,分 别 为 41. 434 3 ~ 43. 233 6 μg / mL、 114. 829 5 ~ 127. 282 4 μg / g,且 D260 nm / D280 nm 均在标准值范围内,D260 nm / D230 nm 小于 1. 9,有 RNA 污染; SDS 法、PVP 法、 尿素法也可以提取基因组 DNA,但含量较低; 高盐低 pH 值法提取的 DNA 浓度最低,电泳图基本看不到明显条带。将 这 5 种方法进行对比,最终确定 CTAB 法为三七基因组 DNA 的最佳提取方法。
将液氮中保存的三七叶样品于实验室中进行后续处理。 以“后放入先取出”的顺序取出纱布采样袋,先将采样袋拉至 液氮罐口,等采样袋不再往下滴落大量液氮时迅速转移至试 验台上,在台上垫上 1 层厚纸板,用硬物将袋中的三七幼叶迅 速趁脆打碎至粉状,然后将采样袋中的碎样转移入 50 mL 离 心管中,标记好样品名称和时间,置于 - 80 ℃ 超低温冰箱保 存备用。重复上述步骤,处理全部样品。试验时所需的叶片 再用液氮进行更细致的研磨。 1. 2 试验试剂
β - ME,1% CTAB。 SDS 法提 取 缓 冲 液: 500 mmol / L NaCl,500 mmol / L Tris
( pH 值 8. 0 ) ,50 mmol / L EDTA ( pH 值 8 0 ) ,10 mmol / L β - ME。
DNA 浓 度 ( μg / mL) = D260 nm /0. 02 × L × 稀 释 倍 数 = D260 nm × 50 μg / mL × 稀释倍数。 式中: L 为比色皿光径,1 cm; D260 nm 为 260 nm 波长处的吸光 度; 0. 02 为 1 mL 溶液内含 1 μg DNA 钠盐时的吸光度,
方法 高盐低 pH 值法 尿素法
CTAB 法
SDS 法
PVP 法
重复
1 2 3 x±s 1 2 3 x±s 1 2 3 x±s 1 2 3 x±s 1 2 3 x±s
叶粉鲜质量 ( g)
0. 218 8 0. 203 9 0. 217 2
0. 200 9 0. 215 3 0. 220 2
0. 216 5 0. 203 8 0. 209 4
2 结果与分析 2. 1 浓度、纯度及得率
入 900 μL 相 应 的 提 取 缓 冲 液; 抽 提 用 CHCl3 ∶ C5 H12 O ( 24 ∶ 1) ; 省去了 RNase。
由表 1 可以看出,CTAB 法提取的 DNA 浓度、得率最高, DNA 得率在 114. 829 5 ~ 127. 282 4 μg / g; 其次依次是 SDS
其他试剂: 50 × TAE 缓冲液; 2. 5 mol / L KAc,7. 5 mol / L 1. 4. 3 琼脂糖凝胶电泳 形
NH4 Ac,10% SDS,CHCl3 ∶ C5 H12 O( 24 ∶ 1 ) ,无 水 C2 H5 OH, ( CH3 ) 2 CHOH,70% C2 H5 OH,无菌水。 1. 3 试验仪器
收稿日期: 2013 - 09 - 16 基金项目: 国家自然科学基金( 编号: 31060045、31260091) 。 作者简介: 白雪嵩( 1989—) ,女,黑龙江鸡西人,硕士研究生,从事植物
生理生化和分子生物学研究。E - mail: baobeiyiyi1225@ 126. com。 通信作者: 赵昶灵,男,博士,教授,从事植物生理生化和分子生物学
1. 4 试验方法
0. 6% 琼脂糖凝胶上上样,在 1 × TAE 电泳缓冲液中、8 V / cm
1. 4. 1 基因组 DNA 的提取 在进行试验前,先将试验用的 电压下电泳 1 h,电泳结束后,在凝胶成像系统上观察并拍照。
研钵、烧杯、玻璃棒、溶液进行高压灭菌。用高盐低 pH 值法、 尿素 法、CTAB 法、SDS 法 和 PVP 法 提 取 三 七 叶 基 因 组 DNA[5]: 取 0. 2 g 样品,加入液氮并将样品研磨成粉末,再加