组织DNA的提取及凝胶回收
DNA提取实验方案
一、脱腐1.10ml离心管中加入0.5g沉积物（干重）和5ml脱腐缓冲液[100mmol/LTris-HCl,PH10.0,50mmol/L Na2EDTA,200mmol/L NaCl,100mmol/L Na4P2O7,1%(质量浓度)PVP,0.05%（质量浓度） TritonX-100]，漩涡混合3min，60℃水浴5min，3000×g离心3min。
根据上清颜色与洗涤缓冲液颜色无明显差异。
（土壤与沉积环境样品腐殖酸脱除新方略，席峰）2.10ml离心管中加入0.5g沉积物（干重）和5ml PBS buffer(8g NaCl，0．2g KC1，1．44g Na2HPO4，0．24g KH2PO4，溶于1L水中，pH=7．4)旋涡混合3min, 60℃水浴5min, 3000×g离心3min。
根据上清颜色再重复洗涤与离心1-2次，至上清颜色与洗涤缓冲液颜色无明显差异。
（从颗粒污泥中提取DNA的几种不同方法比较，陈竹）二、裂解与提取1. 冻融+玻璃珠+溶菌酶+SDS法（可用于微生物群落分子生态学研究的活性污泥总DNA 提取方法研究，高平平）1) 置0.5g沉积物（干重）于10ml 的灭菌离心管中离心5m in( 8000×g, 4℃) , 弃上清, 沉淀(约100mg) 悬浮于5ml无菌水中。
向管内加入0.35g灭菌玻璃珠(直径2～3mm) , 将离心管管盖拧紧后置于旋涡混合器击打15min, 离心8min (8000×g, 4℃),弃上清,沉淀用于细胞裂解。
2）向沉淀中加入0.5ml灭菌的TENP缓冲液(50mmol/L Tris-base,20mmol/L EDTA ,100mmol/L NaCl, 0.01g/ml 聚乙烯吡咯烷酮, pH10) , 悬浮后将菌液在液氮中冷冻3min, 沸水煮2min, 重复3次后进行菌体离心(10min, 12000×g, 4℃)。
DNA回收试剂操作步骤
胶回收目的基因一、平衡柱子1.取一个新的Hibind DNA结合柱装在收集管中，吸取合适体积的Buffer GPS 平衡缓冲液（具体见下表）至柱子中；小量提取200ul中量提取1ml大量提取3ml2.室温放置3-5min。
3.室温下，12,000转离心2min或3,000转离心5min。
4.倒弃收集管中滤液，将Hibind DNA柱子重新装在收集管中；加入700ul（Minicolum），4ml（Midi column）或10ml（Maxicolumn）灭菌水至柱子中。
5.室温下，按上述条件离心；6.倒弃收集管中滤液，将Hibind DNA柱子重新装在收集管中；这就是已经平衡好的柱子，按试剂盒说明书进行操作。
该流程处理过的柱子，可室温放置1-2周。
二、胶回收目的基因1.琼脂凝胶电泳回收DNA目的片段时，使用新鲜的TBE电泳缓冲液，重复使用影响PH值和回收产量。
2.小心切除目的片段。
3.将目的片段称重后放入1.5ml离心管中，凝胶重为0.1g，其体积可视为100ul，添加与等体积的绑定缓冲区(XP2)。
孵化混合物在55 - 60摄氏度7分钟或直到凝胶完全融化。
混合摇动或倒置管每2 - 3分钟。
离心管收集所有液体到试管底部。
注意：pH值影响完全溶凝胶后的凝胶/绑定缓冲混合物。
DNA产量将明显降低pH值>8时。
如果混合物的颜色变成橙色或红色,加上5ul 5m的醋酸钠；pH值为5.2时,将pH值下降。
调整后, 凝胶/绑定缓冲区混合物的颜色是淡黄色。
4.将Hibind DNA结合柱装在合适的收集管中（2ml）；5.向HiBind®DNA结合柱加入700ul的DNA/agarose solution（DNA /琼脂糖溶液）,在室温10,000转离心1min；6.倒弃收集管中的废液，HiBind®DNA结合柱容量超过700ul，可以收集25ug左右的DNA,如量多可分开回收。
7.向HiBind®DNA结合柱中加入300ul Binding Buffer（XP2），在室温10,000转离心1min；8.向HiBind®DNA结合柱中加入700ulSPW,在室温放置1-2min，再10,000转离心1min；倒弃废液；注：spw使用前加入无水乙醇。
植物dna提取实验报告
植物dna提取实验报告植物基因组研究已经成为生物学的一个重要分支，特别是在农业生产和生态环境保护方面。
在这个研究领域中，植物DNA提取是基础且必不可少的一步。
本文将详细介绍植物DNA提取实验的过程、步骤和注意事项。
一、实验材料和仪器本实验所需材料和仪器如下：植物样品、溶解缓冲液、提取缓冲液、酒精、异丙醇、洗涤盐溶液、碱性蛋白酶、液氮、离心机、温水浴、电泳仪、比色皿等。
二、实验步骤1. 样品准备首先，选取新鲜植物样品，清洗并研磨成粉末。
为了提高DNA的纯度，应尽量避免样品中的杂质和污染。
2. DNA提取将研磨后的样品加入提取缓冲液中，并加入适量的洗涤盐和碱性蛋白酶，混匀后加入异丙醇，离心分离DNA。
将得到的上清液加入溶解缓冲液中，使用离心机将DNA沉淀至底部。
上清液中的DNA可以通过多次酒精沉淀提高回收率。
3. DNA纯化将得到的DNA溶于TE缓冲液中，使用电泳方法确定DNA含量和质量。
DNA的含量和质量可以通过紫外线吸收光谱测定和琼脂糖凝胶电泳检测。
4. DNA保存DNA保存有两种方式：一种是在-80℃低温下保存，这种方式比较适合需要长期保存的植物DNA；另一种是将DNA溶液保存在干燥的、无污染的环境中，这种方式比较适合短期保存的植物DNA。
三、注意事项1. 在样品制备和提取过程中，应尽量避免污染和杂质的混入，否则会影响DNA的纯度和质量。
2. 在DNA提取和纯化的过程中，应注意洗涤缓冲液、异丙醇等试剂的使用时间和浓度，以免影响DNA的回收率和纯度。
3. 在电泳检测中，应根据植物物种的不同选择适合的电泳参数，以确保DNA检测的准确性和可靠性。
四、结语DNA提取是植物基因组研究的基础，它是了解植物遗传信息和探究植物繁殖机制的必要步骤。
本实验详细介绍了植物DNA提取的方法和注意事项，希望可以为植物基因组研究者提供帮助。
DNA重组技术的原理及步骤
DNA重组技术的原理及步骤DNA重组技术是一种分子生物学技术，它通过重新组合DNA分子的特定部分，可以改变生物体的基因组成，从而实现对基因的操作和操控。
DNA重组技术的原理可以概括为：通过酶类作用在DNA链上剪切出特定的片段，再利用DNA连接酶将不同源的DNA片段连接在一起，形成新的DNA分子。
第一步：DNA提取DNA提取是DNA重组技术的前提和基础。
首先需要选择适当的生物样本，如细菌、植物、动物细胞等，利用细胞裂解方法将细胞溶解，释放出DNA。
然后经过蛋白质酶的消化，去除蛋白质、RNA等杂质，最终得到纯净的DNA溶液。
第二步：DNA切割DNA切割是指将DNA分子切割成特定的片段。
这一步骤可以利用限制性内切酶来实现。
限制性内切酶是一种酶类，能够识别DNA链上的特定序列，并在该序列的特定位点上切割DNA链。
通过选择不同的限制性内切酶，可以将DNA切割成不同长度的片段。
第三步：DNA纯化与回收切割后的DNA片段需要通过凝胶电泳分离和纯化。
凝胶电泳是利用DNA片段在电场中的移动速度差异，使不同长度的DNA片段在凝胶中分离的方法。
分离完成后，可以通过抽取单个的DNA片段进行纯化，获得所需的DNA溶液。
第四步：目标片段回收将目标片段从凝胶中回收需要先进行DNA片段的可视化。
一般可以采用亮蓝G染色剂着色和紫外线照射的方式进行可视化，然后使用刮片等方法将目标片段回收。
第五步：DNA连接DNA连接是将目标片段与载体DNA连接在一起，形成重组DNA。
载体DNA一般选择能够稳定复制的质粒或噬菌体基因组。
连接需要使用DNA连接酶，该酶能够识别DNA链的断裂末端，并将目标片段与载体DNA连接在一起。
第六步：转化连接完成后，可以将重组的DNA转移到宿主细胞内。
转移可以通过化学法转化细胞、电穿孔法或者基因枪等方法实现。
转化后的细胞会自主复制并表达被插入的重组DNA。
第七步：筛选与鉴定对转化后的细胞进行筛选与鉴定，以确定是否成功插入重组DNA。
凝胶dna回收实验报告
凝胶dna回收实验报告1. 理解DNA凝胶电泳的原理和方法；2. 学习DNA凝胶回收的方法和步骤。
实验材料：1. DNA凝胶电泳仪；2. DNA样品；3. DNA凝胶；4. DNA染料。
实验步骤：1. 准备DNA样品：从细菌或真核生物中提取DNA并纯化。
2. 制备DNA凝胶：根据DNA样品大小选择合适的琼脂糖浓度和电泳缓冲液，将琼脂糖溶解于电泳缓冲液中，加热溶解后，在凝固前加入DNA样品，并将其转移到电泳槽中。
3. 进行DNA凝胶电泳：将DNA凝胶置于电泳仪中，接通电源，设定适当的电流和电压，进行电泳分离。
根据不同的目的和需求，可以选择不同的电泳方法，如平行电泳或垂直电泳。
4. 理解DNA凝胶图谱：观察DNA在凝胶中的迁移情况，根据分离程度和片段大小推断DNA的特性和组成。
5. 染色：使用DNA染料将凝胶中的DNA染色，以便观察和记录。
6. 回收DNA：使用切割刀将感兴趣的DNA片段从凝胶中割下，转移到离心管中。
7. 纯化和测定：使用DNA纯化试剂盒或其他方法纯化回收的DNA，并通过测序或其他技术确认其准确性和纯度。
实验结果：1. DNA凝胶图谱：根据分离情况和染色结果，可以观察到DNA片段的迁移情况和大小分布。
2. 回收的DNA样品：经过回收和纯化后，获得从凝胶中割下的DNA片段。
实验讨论：1. 实验中电泳条件的选择对于DNA凝胶分离的效果和准确性至关重要。
2. 切割凝胶时需要注意避免外源性DNA污染和片段交叉污染。
3. 回收的DNA样品需要经过纯化和测定，以确保其准确性和纯度。
实验结论：1. 通过凝胶DNA回收实验，我们可以将感兴趣的DNA片段从凝胶中割下，并进行后续的纯化和分析。
2. DNA凝胶电泳是一种常用的DNA分离和分析方法，可以用于研究DNA的大小、构成和数量。
3. 正确选择电泳条件，合理操作和纯化步骤，能够获得准确和高质量的回收DNA样品。
实验改进：1. 优化电泳条件，提高凝胶分离效果。
DNA凝胶回收方法及常见问题
DNA凝胶回收方法及常见问题琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。
聚丙烯酰胺凝胶电泳片段的回收将在以后的文章中介绍，在这里我先介绍一下琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法，方便大家学习交流。
从琼脂糖凝胶中回收DNA，是一种简单不过的常规实验操作。
但是由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验――比如酶切连接、转化筛选、测序或者PCR扩增、标记乃至显微注射等等，所以这一步的操作也显得非常重要。
胶回收的质量好否直接影响后继实验的成功与否。
现今除了手工回收方法外，许多公司都开发了方便的回收试剂盒系列，但是无论借助何种方式，最基本的评定标准均包括: 回收产物质量：主要指纯度。
常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。
对于大片断DNA回收，质量还包括产物的完整性；而对于较小片断回收，质量还包括回收产物的浓度；此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。
回收率：由于上电泳样品量通常都很少，电泳过程本身也会导致样品的分散和损失，因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的片断，提高产物得率，对于后继实验来说是非常重要的。
回收率的多少通常和回收产物的大小以及量的多少有关，比如DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；又如，DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。
因此，根据情况选择不同的方法是很重要的。
其他：操作方面，操作简单，快速，应用方便的方法或产品自然比较受欢迎。
如溶胶的缓冲液中添加指示剂，可以指示溶胶的溶液pH值就是很方便的设计；离心过柱就比离心沉淀要简单方便。
还有要注意载量问题，因为对于纯化柱或者一定量的纯化介质都有一定的吸附限度，过量的产物吸附不了即被损失掉。
以下是我总结的常见问题，希望对大家有所帮助。
Q1：利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段？A1: 可能有以下几个原因：1. 胶块未完全溶解，溶解凝胶时应置于55℃水浴，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数,确定胶块完全溶解后再进行下一步骤;2. 胶块体积太大,应使用枪头捣碎，还不能充分溶解，则应先将其切为小块，分多次回收或选用大量型回收试剂盒；3.紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内；4. 电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH值（pH≤7.5）时可结合DNA，在低盐及高pH 值（pH≥8）条件下洗脱。
PCR 或酶切产物凝胶回收试剂盒说明书
PCR或酶切产物凝胶回收试剂盒说明书
【试剂盒简介】
本试剂盒将可以特异结合DNA的高性能磁性复合微球与独特的溶液系统有机结合在一起，适合从各种电泳凝胶(TAE或TBE)中提取线性DNA（70 bp-10 Kb），回收率在60-90%以上，本试剂盒还可从凝胶中回收质粒。
纯化后的线性DNA保持完整的生物活性，适用于多种用途，如：连接、体外转录、PCR、测序、Southern 杂交、微注射等分子生物学研究。
本试剂盒结合自动化设备，可以实现DNA琼脂糖凝胶回收的高通量、自动化提取。
【试剂盒组成】
Cat. No. YR03009-01YR03009-02YR03009-03
制备次数 50次100次200次
Lysis-Binding Buffer 20mL40mL120mL
Wash Buffer W1 70mL140mL400mL
Magnetic beads 1mL2mL4mL
Elution Buffer 2.5mL5mL10mL
使用说明书1份1份1份
【贮藏与有效期】
所有试剂室温保存，有效期为一年。
【操作步骤】请与我公司联系。
【经销商】深圳市易瑞生物技术有限公司
Shenzhen Bioeasy Biotechnologies Co., Ltd.
地址：深圳市宝安区西乡街道桃花源科技创新园11号研发中心邮编：518102
电话：**************************传真：*************
电子邮件:********************公司主页：。
pcr产物回收原理
pcr产物回收原理PCR产物回收原理。
PCR（聚合酶链式反应）是一种用于扩增DNA片段的技术，它是分子生物学领域中非常重要的工具。
在PCR过程中，产生了大量的PCR产物，而回收这些产物对于后续的实验和分析非常重要。
本文将介绍PCR产物回收的原理及方法。
PCR产物回收的原理主要包括DNA片段的寡聚物纯化和DNA片段的凝胶回收两个方面。
首先，DNA片段的寡聚物纯化是指通过将PCR产物与寡聚物结合，然后利用寡聚物的亲和性将DNA片段纯化出来。
这种方法可以有效地去除PCR反应体系中的盐离子、引物和聚合酶等杂质，从而得到纯净的DNA片段。
其次，DNA片段的凝胶回收是指将PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳分离出来，然后通过切割凝胶并使用凝胶回收试剂盒将DNA片段从凝胶中提取出来。
这种方法可以根据DNA片段的大小选择性地回收目标片段，从而得到所需的DNA片段。
在实际操作中，可以根据实验需求选择合适的回收方法。
下面将介绍两种常用的PCR产物回收方法。
首先是寡聚物纯化法。
这种方法通常使用商业化的DNA寡聚物纯化试剂盒，通过将PCR产物与寡聚物结合，然后通过洗涤步骤将DNA片段从其他杂质中分离出来。
这种方法操作简单，纯化效果好，适用于小规模的PCR产物回收。
其次是凝胶回收法。
这种方法通常需要进行琼脂糖凝胶电泳，将PCR产物按照大小分离出来，然后通过切割凝胶并使用凝胶回收试剂盒将DNA片段从凝胶中提取出来。
这种方法适用于需要回收多个目标片段或者需要大量PCR产物的情况。
总的来说，PCR产物回收是PCR技术中非常重要的一步，它直接影响到后续实验的结果和分析。
选择合适的回收方法并严格按照操作步骤进行操作，可以有效地得到纯净的DNA片段，为后续的实验和分析奠定基础。
在实际操作中，需要注意操作规范，避免污染和损失，保证回收的PCR产物质量和数量。
同时，根据实验需求选择合适的回收方法，并结合实际情况进行操作，可以提高PCR产物回收的效率和质量。
dna 琼脂糖凝胶回收
dna 琼脂糖凝胶回收琼脂糖凝胶回收是分子生物学领域中常见的实验技术，它能够有效地提取DNA，是DNA分析的重要一步。
在本文中，我们将详细介绍琼脂糖凝胶回收的整个过程，并提供一些实用的指导。
琼脂糖凝胶回收是一种通过电泳将DNA从琼脂糖凝胶上分离并回收的方法。
首先，在实验开始之前，我们需要制备琼脂糖凝胶，并在其中加入DNA样品。
随后，我们将琼脂糖凝胶与电泳缓冲液一同放置在电泳槽中并施加合适的电压，使DNA样品在琼脂糖凝胶中垂直迁移。
为了使得琼脂糖凝胶回收更加高效，我们需要根据DNA片段的大小调整电泳条件。
一般来说，小分子量的DNA片段迁移速度较快，而大分子量的DNA片段迁移速度较慢。
因此，为了避免DNA片段过度迁移或者导致DNA片段过度聚集，我们需要根据实验需要选择合适的电泳时间和电压。
在DNA片段迁移至所需位置后，我们可以将琼脂糖凝胶从电泳槽中取出。
此时，我们需要注意避免暴露琼脂糖凝胶于紫外线，以免对DNA造成伤害。
在取出琼脂糖凝胶之后，我们需要使用刮胶刀或者专用工具将 DNA 片段从琼脂糖凝胶上切割或刮下。
琼脂糖凝胶回收后的 DNA 片段可以用于各种实验，比如 PCR 扩增、限制性酶切等。
在进行后续实验之前，我们需要将 DNA 片段从琼脂糖凝胶中纯化出来，并去除琼脂糖残留物、电泳缓冲液等杂质。
其中，琼脂糖凝胶纯化技术有多种方法可以选择，例如利用商用纯化试剂盒、硅胶凝胶纯化法等。
总结起来，琼脂糖凝胶回收是一项关键的实验技术，能够高效地提取 DNA 片段。
通过合适的电泳条件和仔细的实验操作，我们可以获得高质量的 DNA样品。
这些 DNA 片段可以被广泛应用于基因克隆、基因组测序等实验中，为我们深入了解生命机制提供了重要的工具。
希望通过本文的介绍，读者们能够更加全面地了解琼脂糖凝胶回收的过程和原理，并在实验操作中获得更好的结果。
琼脂糖凝胶回收纯化DNA标准操作规程
琼脂糖凝胶回收纯化DNA标准操作规程（编号：013）
1、目的及适用范围
该SOP用于分离纯化目的DNA片段。
2、主要仪器及试剂
台式离心机、微量移液器、binding buffer、wash buffer、elution buffer，各试剂均来自胶回收提取试剂盒。
3、实验步骤
3.1 琼脂糖电泳，将特异电泳带用刀切下放入到离心管中，称琼脂糖带的重量；
3.2 按照每100mg加400µL的量加入binding buffer，放入到离心管振荡器中，45℃～55℃温育振荡，直到所有的琼脂糖都溶解（大概要5min）；
3.3 取出纯化柱，将上述溶解液转移至柱中，室温下放置2min，8000rpm 离心1min，弃离心管中的液体，将纯化柱放回离心管中；
3.4 加500µL的wash buffer至柱中，8000rpm 离心1min，弃管中的溶液；
3.5 重复操作4步的操作1次，最后将纯化柱放入EP管中10000rpm离心30s，除去残余的wash buffer；
3.6 将纯化柱放入一个新的离心管。
加30~40µL H2O或者elution buffer至纯化柱膜的中央，在37℃或50℃下放置2min，10000rpm离心1min洗脱DNA，将离心管中的DNA溶液放在-20℃保存。
4、注意事项
若想要不电泳而直接纯化DNA，只需要在第2步中按100µL液量加400µL的binding buffer,其余的步骤不变。
30。
一般正常胶回收dna浓度_概述及解释说明
一般正常胶回收dna浓度概述及解释说明1. 引言1.1 概述胶回收DNA浓度是分子生物学实验中一项重要的操作步骤，其涉及到从凝胶中提取DNA分子并测量其浓度。
胶回收DNA浓度的正确评估对于实验结果的准确性和后续数据分析的可靠性至关重要。
因此，深入了解胶回收DNA浓度的定义、意义以及相关方法和步骤是非常必要的。
1.2 文章结构本文将围绕着一般正常胶回收DNA浓度展开讨论。
首先，我们将介绍胶回收DNA浓度的定义和意义，以说明其在分子生物学实验中的重要性。
接下来，我们将详细探讨胶回收DNA的方法和步骤，包括凝胶切割、脱色、提取等关键操作。
然后，我们将列举并解释影响胶回收DNA浓度的因素，例如凝胶厚度、电泳时间等。
在第三部分中，我们将提供一些实验结果与数据分析，通过实验设计和样本处理来验证并证明一般正常胶回收DNA浓度所具备的特点。
同时，我们还会介绍用于检测和计量DNA的常用方法，以及技术统计和数据分析的过程。
在第四部分中，我们将对胶回收DNA浓度过高或过低的原因进行解释说明。
我们会详细分析可能导致DNA丢失的原因，在胶回收操作中可能存在的误差和影响因素上加以解释。
此外，我们还将讨论其他可能导致DNA浓度异常变化的因素，例如样本质量、实验环境等。
最后，在结论与展望部分，我们将总结一般正常胶回收DNA浓度概览并强调重要发现和推论点。
同时，我们将提出对未来研究方向和改进方法的展望和建议，以促进胶回收DNA浓度相关技术的发展和应用。
通过本文的阅读，读者将更全面地了解一般正常胶回收DNA浓度所涉及到的各个方面，并能够正确理解其定义、意义以及实验操作步骤。
同时，读者还可以通过文章中所提供的结果与数据分析来验证和参考其在实际应用中的可靠性和有效性。
最后，读者还可以从文章中获取到关于影响胶回收DNA浓度的因素、误差以及其他相关因素的知识，并为今后实验设计和数据处理提供重要参考依据。
这将有助于进一步推动胶回收DNA浓度领域的研究发展和技术改进。
甲基化注意事项
热甲基化是目前的研究热点，就我所做的一点工作并其中一点心得，与大家分享。
希望能够对大家有所帮助。
第一部分基因组DNA的提取。
这一步没有悬念，完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒，如果实验室条件成熟，自己配试剂提取完全可以。
DNA比较稳定，只要在操作中不要使用暴力，提出因组DNA应该是完整的。
此步重点在于DNA的纯度，即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。
因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者。
使用两者的细节：1：蛋白酶K可以使用灭菌双蒸水配制成20mg/ml；2：RNA酶必须要配制成不含DNA酶的RNA酶，即在购买市售RNA酶后进行再处理，配制成10mg/ml。
否则可能的后果是不仅没有RNA，连DNA也被消化了。
两者均于-保存。
验证提取DNA的纯度的方法有二：1：紫外分光光度计计算OD比值；2：1%-1.5%的琼脂糖凝胶电泳。
我倾向于第二种方法，这种方法完全可以明确所提基因组DNA的纯度，并根据Marker的上样量估计其浓度，以用于下一步的修饰。
第二部分亚硫酸氢钠修饰基因组DNA如不特别指出，所用双蒸水（DDW）均经高压蒸汽灭菌。
1：将约2ugDNA于1.5mlEP管中使用DDW稀释至50ul；2：加5.5ul新鲜配制的3M NaOH；3：42℃水浴30min；水浴期间配制：4：10mM对苯二酚（氢醌），加30ul至上述水浴后混合液中；（溶液变成淡黄色）5： 3.6M亚硫酸氢钠（Sigma，S9000），配制方法：1.88g亚硫酸氢钠使用DDW稀释，并以3M NaOH滴定溶液至PH 5.0，最终体积为5ml。
这么大浓度的亚硫酸氢钠很难溶加入NaOH后会慢慢溶解，需要有耐心。
PH一定要准确为5.0。
加520ul至上述水浴后溶液中。
6：EP管外裹以铝箔纸，避光，轻柔颠倒混匀溶液。
7：加200 ul 石蜡油，防止水分蒸发，限制氧化。
8：50℃避光水浴16h。
一般此步在4pm开始做，熟练的话不到5pm即可完成，水浴16h正好至次日8am以后收，时间上很合适。
DNA分离方法
一、分离与纯化的方法双链DNA因固有的结构特点，是一种惰性很强的化学分子，可用于重现犯罪现场和进行古生物学分析。
但由于是很长的线性分子（如人的染色体DNA平均长度为100～150Mb）而且缺乏横向的稳定性，因此很容易断裂。
在溶液中，由于碱基堆砌力的相互作用与磷酸基团的静电排斥作用，DNA分子非常粘稠，沉淀后很难溶解，而且也增加了它对剪切力的敏感性。
即便是最轻柔的方式，高分子量的DNA也很容易因剪切力发生横向的断裂。
常规方法分离基因组DNA时，大于150kb的DNA分子很容易发生断裂。
（一）酚抽提法本法最初于1976年由Stafford及其同事提出，通过改进，以含EDTA、SDS及无DNA酶的RNA酶的裂解缓冲液裂解细胞，经蛋白酶K处理后，用pH8.0的Tris饱和酚抽提DNA，重复抽提至一定纯度后，根据不同需要行透析或沉淀处理，获得所需的DNA 样品。
其中，EDTA为二价金属离子螯合剂，可以抑制DN A酶的活性，同时降低细胞膜的稳定性；SDS为生物阴离子去垢剂，主要引起细胞膜的降解并能乳化脂质和蛋白质，与这些脂质和蛋白质的结合可以使它们沉淀，其非极性端与膜磷脂结合，极性端使蛋白质变性、解聚，所以SDS同时还有降解DNA酶的作用；无DN A酶的RNA酶可以有效水解RNA，而避免DNA的消化；蛋白酶K则有水解蛋白质的作用，可以消化DNA酶、DNA上的蛋白质，也有裂解细胞的作用；酚可以使蛋白质变性沉淀，也抑制DNA酶的活性；pH8.0的Tris溶液能保证抽提后DNA进入水相，而避免滞留于蛋白质层。
多次抽提可提高DNA的纯度。
一般在第三次抽提后，移出含DNA的水相，作透析或沉淀处理。
透析处理能减少对DNA的剪切效应，因此可以得到200kb的高分子量DNA。
沉淀处理常以醋酸铵为盐类，用2倍体积的无水乙醇沉淀，并用70%的乙醇洗涤，最后得到的DNA大小在100kb～150kb。
运用该法可以从单层或悬浮培养细胞、新鲜组织及血液标本中制备少于10mg至大到数百mg的DNA样品。
dna凝胶回收原理
dna凝胶回收原理
DNA凝胶回收是一种将DNA物质从凝胶中提取出来的技术，其原理主要涉及DNA凝胶的消化、电泳分离和提取等步骤。
首先，需要将含有DNA样品的凝胶切割成小片或小块。
这可以通过将凝胶放在紫外线灯下照射，使其出现亮蓝色荧光，并用刀、剪刀或专用切割工具进行切割。
然后，将DNA凝胶片放入一个离心管或离心管盒中，并加入几倍体积的溶剂（例如Tris-HCl缓冲液）。
随后，将离心管置于37°C的温水浴中，使凝胶片中的DNA溶解。
接下来，通过离心将溶解后的DNA凝胶物质与溶剂分离。
在离心过程中，DNA分子被推到溶剂中，而凝胶片被离心力推到离心管的底部。
最后，将上清液转移到一个新的离心管中，这个上清液即为含有DNA物质的溶液。
这样，DNA物质就从凝胶中回收提取出来了。
需要注意的是，在DNA凝胶回收的过程中，凝胶溶解液的选取和温度控制非常关键。
溶解液的成分和浓度应该适合DNA 的溶解，同时温度的控制也要符合DNA的稳定性，以避免DNA的降解或损伤。
【精品】从琼脂糖凝胶中回收DNA
【精品】从琼脂糖凝胶中回收DNA琼脂糖凝胶是一种常用的生物分子分离纯化技术，它适用于分离分子大小差异较大的DNA、RNA、蛋白质等生物大分子。
在实验过程中，我们通常需要在琼脂糖凝胶中回收目标分子，接下来将以从琼脂糖凝胶中回收DNA为例，介绍琼脂糖凝胶分离和回收DNA的步骤。
I.琼脂糖凝胶电泳分离DNA1.制备琼脂糖凝胶：准备好琼脂糖粉末、TBE缓冲液或者TAE缓冲液、牛奶桶或者其他可用的模具等材料。
将适量的琼脂粉末与缓冲液混合均匀，然后煮沸并搅拌至完全溶解，待温度降至约60℃时，倒入模具内并加入DNA样品。
注意，样品需与样品量较大的样品间留有一定距离，以便于分离。
2.测量DNA迁移距离：在琼脂糖凝胶分离之后，需要用紫外线紫外检测器对每个DNA带进行测量，以确定其迁移距离。
3.切割琼脂糖凝胶：在确定每个DNA条带的位置之后，需要用刀子或切割器从琼脂糖凝胶上切下每个DNA条带，并收集在小管中备用。
切割时需要注意避免污染、损坏DNA。
1.准备回收DNA的缓冲液：一般来说，在回收琼脂糖凝胶中的DNA时，使用的缓冲液类型包括TE缓冲液、纯水、无菌去离子水等。
2.加入缓冲液并恢复DNA：将切下的琼脂糖凝胶条带投入含有缓冲液的离心管中，并在室温下静置10-15分钟，使得DNA从琼脂糖凝胶带上释放出来。
3.离心：恢复DNA的琼脂糖混合物取出后，需要进行离心处理，以使得DNA沉淀到离心管底部。
离心速度一般为12000ppm，离心时间15min。
4.去除上清：离心完毕之后，将上清取出，只保留离心管底部的沉淀。
上清可以用于其他实验。
5.重悬：加入恰当的缓冲液重悬DNA沉淀，例如TE缓冲液、纯水等。
如果需要，可以用比较温和的方法来提取DNA。
6.测量DNA浓度：用分光光度计或者其他光谱仪器，测量DNA的吸收光谱，从而确定DNA的浓度，以便于后续实验的操作。
以上就是从琼脂糖凝胶中回收DNA的步骤。
整个操作需要尽可能在无菌操作室中进行，以避免污染影响结果。
从琼脂糖电泳凝胶中回收dna的几种简便方法
从琼脂糖电泳凝胶中回收dna的几种简便方法1、离心法：琼脂糖电泳回收 DNA 的最常用方法是使用离心法。
使用离心法可以有效地将终端的 DNA 从被琼脂糖共析的蛋白质中取出。
离心法能有效地将含有 DNA 的细胞和细胞渣分离开来。
使用离心机将DNA 扣离出来时，要确保转速足够慢，以免 DNA 粘在管壁上造成损失。
2、萃取法：萃取法通常应用于对密集的 DNA 示踪膜，这是因为此时DNA 的分析效果较好。
此外，萃取法还能够有效地将 DNA 从培养液中取出，并将浓缩液回收到原始膜中，以简化磁珠清洗和萃取物的溶解程序。
此外，也可以使用此方法进行 DNA 的脱除。
3、滴管抽提法：滴管抽提法是一种有效的自动化方法，用于回收从示踪膜中抽提出的 DNA。
此方法可以以有效的速度抽提出溶液中的 DNA，而且每次抽提都可以精确控制浓度，以避免 DNA 丢失。
使用滴管抽提法可以将 DNA 加入到 T-tubes 中，再将其冲洗，并将 DNA 从 T-tube中取出来。
4、超声消解：使用超声波可以将 DNA 从细胞渣中有效地冲解出来。
使用超声技术可以快速准确地提取细胞渣样品中的 DNA，而无需消耗大量的时间和钱。
此外，超声波提取技术具有成本低、时间短、提取收率高和简便操作等优点，特别适用于大批量和连续提取的技术。
5、四环素：四环素是一种能够定向处理 DNA 的有机化合物，其能有效地将DNA 从琼脂糖电泳凝胶上取出来，是DNA 的一种有效抽提剂。
四环素可以通过在 DNA 上形成“饼干层”，以形成介质层从而形成稳定的 DNA 呈平稳状态，从而彻底沉淀 DNA 杂质物质。
四环素可以将DNA 与蛋白质、酶、胆固醇等混合物清除，paramers，DNA 核苷酸和其他损害手性的添加剂；此外，它还可以去除其他 DNA 杂质，被证明是一种有效的 DNA 抽提剂。
酶切回收的方法
酶切回收的方法酶切回收是分子生物学中常用的实验技术，用于从DNA或RNA样品中特异性地切割目标序列，并将其纯化和回收。
本文将介绍几种常用的酶切回收方法，包括凝胶电泳回收法、PCR回收法和柱式纯化回收法。
一、凝胶电泳回收法凝胶电泳回收法是一种简单有效的酶切回收方法。
具体步骤如下：1. 将酶切反应产物与DNA分子量标准品一同进行凝胶电泳。
2. 观察凝胶中目标序列的迁移距离，并用紫外灯照射，使目标序列在凝胶上发亮。
3. 使用无菌刮取器或吸管，将目标序列切割下来。
4. 将切割下来的凝胶片放入离心管中，使用无菌锥形管尖碾碎凝胶，释放出目标序列。
5. 使用DNA提取试剂盒进行目标序列的纯化。
二、PCR回收法PCR回收法是在酶切反应后，通过PCR扩增将目标序列放大，然后进行纯化的方法。
具体步骤如下：1. 将酶切反应产物与适当的引物一起进行PCR扩增，使目标序列放大。
2. 使用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR扩增产物，确保目标序列已经扩增成功。
3. 使用PCR产物纯化试剂盒，根据试剂盒的说明书进行目标序列的纯化。
三、柱式纯化回收法柱式纯化回收法是一种基于多肽核酸层析技术的酶切回收方法。
具体步骤如下：1. 将酶切反应产物与柱式纯化试剂盒提供的载体混合，使目标序列与载体结合。
2. 将混合物通过柱式纯化柱，在特定的洗涤缓冲液和洗脱缓冲液条件下，将非特异性DNA或RNA分子洗脱。
3. 最后，使用洗脱缓冲液洗脱目标序列，得到纯净的目标DNA或RNA。
以上是几种常用的酶切回收方法。
根据实验需求和条件的不同，科研人员可以选择适合自己实验的酶切回收方法。
同时，在进行酶切回收实验时，应注意实验材料的质量和处理的严谨性，以保证实验结果的可靠性。
希望本文对您的酶切回收实验有所帮助。
酶切操作流程
酶切操作流程酶切是分子生物学领域中常用的一种技术，它可以通过切割DNA 分子中的限制性内切酶切位点来获得所需的DNA片段。
本文将介绍酶切的操作流程，包括DNA制备、酶切反应、凝胶电泳和回收纯化等步骤。
一、DNA制备首先需要从细胞或组织中提取DNA，常用的方法包括CTAB法、盐法、商用DNA提取试剂盒等。
在DNA提取过程中需要注意以下几点： 1. 样品的选择：样品的选择应根据实验需要进行，如想要提取植物DNA，则需要选择新鲜的植物材料。
2. 细胞破碎：细胞破碎是DNA提取的关键步骤，可以采用机械破碎、化学破碎、超声波破碎等方法。
3. DNA纯化：提取的DNA需要经过纯化处理，如使用酚/氯仿法、硅胶柱等方法。
二、酶切反应在DNA制备完成后，需要将DNA加入限制性内切酶反应体系中进行酶切。
酶切反应需要注意以下几点：1. 选用合适的酶：根据实验需要选择合适的酶，如EcoRI、BamHI、HindIII等。
2. 反应体系的配制：反应体系包括酶、DNA、缓冲液和水，需要按照酶的使用说明书进行配制。
3. 反应条件的控制：酶切反应需要控制反应时间、反应温度和反应缓冲液pH值等条件，以保证反应的效果。
三、凝胶电泳酶切反应完成后，需要进行凝胶电泳检测，以确定所得DNA片段的大小和纯度。
凝胶电泳需要注意以下几点：1. 凝胶的选择：凝胶的选择应根据所需检测的DNA片段大小进行，如需要检测100bp以下的DNA片段，则需要选择1%琼脂糖凝胶。
2. 电泳条件的控制：电泳条件包括电场强度、电泳时间和电泳缓冲液pH值等，需要根据凝胶的选择和实验需要进行调整。
3. 显色染色：电泳结束后需要进行显色染色，如使用乙溴酸溶液染色，以显示DNA片段的大小和数量。
四、回收纯化通过凝胶电泳可以确定所需的DNA片段，需要将其从凝胶中回收并进行纯化处理。
回收纯化需要注意以下几点：1. 切割凝胶：可以使用切割刀或针头将所需的DNA片段从凝胶中切割出来。
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回收的DNA片段
DNA分子的体外连接
pUC18 和 pUC19质粒图谱
• pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是最常用的质粒 载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的 DNA 片段， GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。 由 pBR322 改造而来，其中 lacZ (MSC)来自 M13 。
• 这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的 排列方向相反。这些质粒缺乏控制拷贝数的 rop 基因，因 此其拷贝数达 500-700 。 pUC 系列载体含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分编码序列，在特定的受体细胞中可表 现 alpha-互补作用。因此在多克隆位点中插入了外源片 段后，可通过alpha -互补作用形成的蓝色和白色菌落筛 选重组 质粒。
• pMD19- T Vector与pMD18- T Vector相比，pMD19- T Vector的β半乳糖 苷酶的表达活性更高，菌落显示蓝色的时间缩短，菌落显示的蓝色更深。因 此，克隆后更容易进行克隆体的蓝白斑筛选。
质粒DNA限制性酶切 图谱分析
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• 由于这两种载体是分别以pUC18、pUC19载体为基础构建而成，所以它具有 同pUC18、pUc19载体相同的功能。此外，这两种制品中的高效连接液 Ligation Mix可以在极短时间内（-5min）完成连接反应，且此连接液可以直 接用于细菌转化，大大方便了实验操作。制品中的 Control Insert 500bp） 还可以用于 Control示发布的 良好效果，请言简意赅的阐述您的观点。点击此处添 加正文，请言简意赅的阐述您的观点。
• pMD18- T Vector、pMD19-T Vector是一种高效克隆PCR产物的专用載体。 这两种载体分别由pUc18、pUc19載体改建而成，在pUC18、pUC19载体的 多克隆位点处的Xba和Sal识别位点之间插入了 ECOR V识别位点，用 ECOR V进行酶切反应后，再在两侧的3‘端加T而成。因大部分耐热性DNA民合的 进行PCR反应时都有在PCR产物的3’末端加一个“A＂的特性，所以使用这 两种制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。
分子生物学实验技术
动物组织DNA的提取
实验目的
了解动物组织DNA的成分 掌握DNA提取的原理和操作过程
从琼脂糖凝胶中回收DNA片段
一、实验的目的 1.了解DNA片段回收的原理； 2.掌握用DNA纯化回收试剂盒回收DNA的方 法。
实验原理：
1、在高盐和促溶剂的作用下，琼脂糖聚合物中糖之 间的氢键断裂而迅速溶解，DNA就从胶基质中释放 出来并选择性地吸附到球状的硅胶颗料或特定的柱 子上； 2、用高盐缓冲液洗涤除去残余的琼脂糖，再用含乙 醇的缓冲液洗去盐和染料。 3、用TE缓冲液或水将球状硅胶颗粒或柱子上的 DNA洗脱下来。