抑菌效力检查记录
《中国药典》2015版-抑菌效力检查法
匀，凝固，置 30～35℃培养不超过 3 天，计数；分别接种不大于 100cfu 的白色
念珠菌、黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿，
混匀，凝固，置 20～25℃培养不超过 5 天，计数；同时，用对应的对照培养基
替代被检培养基进行上述试验。
结果判定 若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上菌落平均数
的 70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查
符合规定。
抑菌效力测定
菌种 抑菌效力测定用菌种见表 1，若需要，制剂中常见的污染微生物也 可作为试验菌株。
菌液制备 新鲜菌体培养见表 1，铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠 埃希菌、白色念珠菌若为琼脂培养物，加入适量的 0.9%无菌氯化钠溶液将琼脂 表面的培养物洗脱，并将菌悬液移至无菌试管内， 然后用 0.9%无菌氯化钠溶液 冲洗并制成每 1ml 含菌数约为 108cfu 的菌悬液；若为液体培养物，离心收集菌 体，用 0.9%无菌氯化钠溶液冲洗并制成每 1ml 含菌数约为 108cfu 的菌悬液。取 黑曲霉的新鲜培养物加入 3～5ml 含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯 化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，加入适 量的含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含孢子 数 108cfu 的孢子悬液。测定 1ml 菌悬液中所含的菌数。
本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。 培养基
培养基的制备 胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、 沙氏葡萄糖琼脂培养基 照无菌检查法（通则 1101）制备。 培养基的适用性检查 抑菌效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查，包括成品培养基、由脱 水培养基或按处方配制的培养基均应检查。 菌种 试验所用的菌株传代次数不得超过 5 代（从菌种保藏中心获得的冷 冻干燥菌种为第 0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株 的生物学特性。培养基适用性检查的菌种及新鲜菌体培养见表 1。
抑菌效力检查记录
抑菌效力检查记录标准化工作室编码[XX968T-XX89628-XJ668-XT689N]
抑菌效力检查记录
检品名称：批号：来源：
规格：检验日期：报告日期：
检验依据：
1、培养基、试剂批号：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基：
0.9%无菌氯化钠溶液：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基：
0.9%无菌氯化钠溶液：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基：
0.9%无菌氯化钠溶液：
2、试验菌批号、有效期：
金黄色葡萄球菌批号：有效期：
铜绿假单胞菌批号：有效期：
大肠埃希菌批号：有效期：
白色念珠菌批号：有效期：
黑曲霉批号：有效期：
3、抑菌效力测定：
3.1、方法：取上述试验菌，制成每1ml含菌数约为108cfu的菌悬液；
实验组：取包装完整的供试品5份，直接接种试验菌；
菌液组：取同体积无菌0.9%无菌氯化钠溶液5份，直接接种试验菌；
测定1ml菌液组菌量（为第0 d含菌数）；
置20-25℃避光贮存，于第14天，第28天分别测定每1ml供试品中的含菌数。
（备注：测定细菌用胰酪大豆胨琼脂培养基，测定真菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基。
根据存活菌数测定结果，计算1ml供试品各试验菌所加的菌数及各间隔时间的菌数，并换算成lg值。
）
3.2、判断标准：
3.3、试验结果：
检验人/日期：复核人/日期：。
抑菌喷剂检验记录
生产日期/批号
检验项目
感观指标、PH、净含量、微生物
检验依据
企业标准
检验仪器
酸度计、电子天平、净化工作台
细菌培养箱
检验项目
标准规定
检验结果
单项判定
色泽
黄棕色至棕褐色
气味
有植物的清凉气香，无异臭
性状
液体，均匀一致，不分层
杂质
无肉眼可见外来杂质
密闭性
密闭性完好，不跑冒，不滴漏
PH值
净含量
细菌菌落总数(CFU/ml)
≤200(CFU/ml)
以下空白
结论：《企业标准》。
检验员
复核人
负责人
A――2块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数；
K――稀释度。
当菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。
检验员
成品检验原始记录
编号：
样品名称
规格
生产日期/批号
检验项目
感观指标、净含量、PH
检验日期
检验依据
企业标准
检验仪器
电子天平、酸度计
感
官
指
标
色泽
目测色泽为:
气味
鼻嗅气味为:
性状
检验仪器
超净工作台、培养箱
乳膏:取样品3瓶，混匀,准确称取10ml±1ml样品，加入到200 mL灭菌生理盐水中，充分混匀，得到一个生理盐水样液。
液体:液体产品用原液直接做样液。
菌落总数
（cuf/g）
培养时间48h
培养温度
36±2℃
20-1
20-2
20-3
空白
结果
按式计算结果：
X1＝
u/g或cfu/mL；
抑菌剂效力测定
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一、概述
抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以 评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在制剂研发阶 段抑菌剂的确定。
如果药物本身不含有充分的抗菌活性，那么应根据制剂特性（如水溶 液制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常储存和使用过程中可 能发生微生物污染和大量繁殖尤其多剂量包装的制剂，避免因药物微 生物污染及对患者造成伤害。
抑菌剂效力测定
举例
1、氯化钠注射液、碳酸氢钠注射液不含抑菌剂加入菌从初始到 6h就开始无限增加，不具抑菌力，抗病毒口服液从初始到24 h对 数值无变化，72h后明显降低，具一定的抑菌力。
2、呋麻滴鼻液、硫糖铝混悬液、阿昔洛韦滴眼液、鲸脂滴耳液、 洁尔阴洗液从初始值到7天后计算值大于1.0 lg降低值，从初始值 到14天后计算值大于3.0 lg,具较强的抑菌效力。
取白色念珠菌、黑曲霉孢子各50～100cfu，分别注入无菌平皿中， 立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿， 混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计数；
同时，用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
结果判定
被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比大于70%，菌落 形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性 检查符合规定。
菌液的制备同控制菌培养基适用性检查
培养基的适用性检查
适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌各50～100cfu，分 别注入无菌平皿中，立即倾注胰酷胨大豆琼脂培养基，每株试验菌 平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数；
抑菌效力检查记录
抑菌效力检查记录
This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020
抑菌效力检查记录
检品名称：批号：来源：
规格：检验日期：报告日期：
检验依据：
1、培养基、试剂批号：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基：
0.9%无菌氯化钠溶液：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基：
0.9%无菌氯化钠溶液：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基：
0.9%无菌氯化钠溶液：
2、试验菌批号、有效期：
金黄色葡萄球菌批号：有效期：
铜绿假单胞菌批号：有效期：
大肠埃希菌批号：有效期：
白色念珠菌批号：有效期：
黑曲霉批号：有效期：
3、抑菌效力测定：
3.1、方法：取上述试验菌，制成每1ml含菌数约为108cfu的菌悬液；
实验组：取包装完整的供试品5份，直接接种试验菌；
菌液组：取同体积无菌0.9%无菌氯化钠溶液5份，直接接种试验菌；
测定1ml菌液组菌量（为第0 d含菌数）；
置20-25℃避光贮存，于第14天，第28天分别测定每1ml供试品中的含菌数。
（备注：测定细菌用胰酪大豆胨琼脂培养基，测定真菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基。
根据存活菌数测定结果，计算1ml供试品各试验菌所加的菌数及各间隔时间的菌数，并换算成lg值。
）
3.2、判断标准：
3.3、试验结果：
检验人/日期：复核人/日期：。
中国药典2015年版抑菌效力检查法解读
中国药典2015年版抑菌效力检查法解读我国药典2015年版抑菌效力检查法解读1. 引言我国药典是我国用于规范药品质量标准的重要法律文件，其中关于抑菌效力检查法的规定对药品抑菌效力的检测至关重要。
本文将深入解读我国药典2015年版关于抑菌效力检查法的相关内容，旨在帮助读者全面理解抑菌效力的检测方法和标准。
2. 抑菌效力检查法的概述抑菌效力是指药品在规定条件下对微生物的抑制或杀灭作用，是评价药品杀菌能力的重要指标之一。
我国药典2015年版包含了对于抑菌效力的检查方法和标准，主要涉及了试验菌种的选择、培养基的配制、药品浓度的确定等方面的内容。
3. 抑菌效力检查法的步骤我国药典2015年版对抑菌效力的检查方法包括了以下几个关键步骤：（1）试验菌种的选择：根据药品的适用范围和目的，选择合适的试验菌种进行检测。
（2）培养基的配制：按照规定的配方和方法制备含有试验菌种的培养基。
（3）药品浓度的确定：确定药品的最小抑菌浓度，即在不同浓度下对试验菌种的抑菌效果。
（4）培养时间和条件：根据试验需要，在规定的时间和条件下进行培养。
（5）结果的判定：根据试验的结果判定药品的抑菌效力符合标准要求。
4. 抑菌效力检查法的标准我国药典2015年版对抑菌效力检查的标准包括了对于不同药品的抑菌效力的具体要求，主要从抑菌率、抑菌效力等方面进行了详细的规定。
这些标准不仅明确了药品的抑菌效力要求，也为药品质量的检测提供了具体的操作指南。
5. 个人观点和理解抑菌效力检查法是保障药品质量安全的重要环节，有效的抑菌效力检测有助于保障患者用药安全。
我国药典2015年版对于抑菌效力的检查方法和标准的详细规定，为药品生产企业和药品监管部门提供了具体的操作指南。
在实际操作中，需要严格按照药典要求进行操作，确保检测结果的准确性和可靠性。
6. 总结我国药典2015年版关于抑菌效力检查法的相关内容对于药品抑菌效力的检测提供了明确的方法和标准，有助于规范药品质量标准，保障患者用药的安全。
复方克林霉素磷酸酯维A酸凝胶抑菌效力测试与评价
复方克林霉素磷酸酯维A酸凝胶抑菌效力测试与评价目的：考察复方克林霉素磷酸酯维A酸中所添加的抑菌剂是否合理。
方法：取样品适量接种5种代表微生物，分别在0h、24h、48h、7d、14d、28d测试微生物存活情况，评判所添加抑菌剂的抑菌效力。
结果：复方克林霉素磷酸酯维A 酸处方中所添加抑菌剂对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉等4种代表试验菌均无较好的抑制作用。
结论：建议重新考查处方中抑菌剂的种类及添加量。
标签：复方克林霉素磷酸酯维A酸；凝胶制剂；抑菌效力抑菌剂（也称防腐剂）是一类防止或限制微生物生长与繁殖的化学药品，其主要作用是保证药剂质量，防止药剂的微生物污染。
如果药物本身不具有充分的抗菌效力，那么应根据制剂特性（如水溶液制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏或使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖使药物变质而对使用者造成危害，尤其是多剂量包装的制剂[1，4]。
复方克林霉素磷酸酯维A酸凝胶为多剂量外用凝胶制剂，主要对革兰阳性球菌及厌氧菌有较强的抗菌活性，为窄谱抗生素[2]。
由于其在使用过程中存在多次打开包装有被污染的风险，其处方中需要添加一定量的抑菌剂，而所有的抑菌剂都有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低有效量[1]。
目前国内对凝胶制剂抑菌效力研究这方面的报道较少。
本文采用适宜的方法对该产品进行了抑菌效力测试，考察复方克林霉素磷酸酯维A酸处方中所添加的抑菌剂是否安全有效。
1仪器与材料1.1 仪器隔水式电热恒温培养箱（重庆四达实验仪器厂，WGP-600）；生化培养箱（上海一恒科技有限公司，LRH-250）；生物安全柜（上海力申科技仪器公司，HF Safe 760s）；比浊仪（美国生物梅里埃公司，Densi CHEK Plus）；封闭式集菌仪（杭州泰林生物技术设备有限公司，HTY-2000）；薄膜过滤器（杭州泰林生物技术设备有限公司，FC-752）。
1.2 培养基胰酪胨大豆琼脂（TSA）培养基（批号121209），胰酪胨大豆肉汤（TSB）培养基（批号120108），沙氏葡萄糖液体（SDB）培养基（批号110411），沙氏葡萄糖琼脂（SDA）培养基（批号110718），0.1%蛋白胨水溶液（批号110221），PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（批号110718），（以上培养基均由北京三药科技开发公司提供。
中国药典2015年版抑菌效力检查法解读
文章标题：深度解读我国药典2015年版抑菌效力检查法一、概述在医药领域，抑菌效力检查是一项至关重要的工作，它能够评估药品抑菌的能力，保障药品的安全有效性。
我国药典2015年版包含了丰富的抑菌效力检查方法，为药品检验提供了重要的参考依据。
本文将对我国药典2015年版抑菌效力检查法进行深度解读，帮助读者全面理解抑菌效力检查的相关内容。
二、抑菌效力检查概述1.1 抑菌效力检查的定义抑菌效力检查是指对药品中的抗菌成分的抑菌能力进行定量或半定量评价的检查过程，它旨在评估药品对细菌的抑制或杀灭作用。
1.2 抑菌效力检查的重要性抑菌效力检查是确保药品安全有效性的重要环节，通过科学的检查方法评估药品的抗菌能力，为药品的研发和生产提供了重要的参考依据。
三、我国药典2015年版抑菌效力检查法解读2.1 抑菌效力检查的基本原则根据我国药典2015年版，抑菌效力检查法应遵循以下基本原则：- 选择适当的试验菌株- 确定试验菌的合适培养基和生长条件- 使用适当的抑菌方法进行检查- 对试验结果进行准确可靠的评价2.2 抑菌效力检查的具体步骤按照我国药典2015年版的规定，抑菌效力检查应按照以下步骤进行：- 试验前的准备工作- 培养试验菌株- 进行抑菌试验- 试验结果的判定和评价2.3 抑菌效力检查方法的分类我国药典2015年版对抑菌效力检查方法进行了分类，主要包括物理法、化学法和生物学方法。
不同的方法适用于不同类型的药品，且各自具有特定的操作规范和技术要求。
四、个人观点和理解抑菌效力检查对于药品的研发和生产至关重要，它直接关系到药品的质量和安全性。
我国药典2015年版提供了丰富的抑菌效力检查方法，为医药行业提供了重要的技术支持和指导。
在未来的工作中，我们需要更加深入地理解和应用这些方法，不断提高我国药品的质量水平。
五、总结与回顾本文对我国药典2015年版抑菌效力检查法进行了全面解读，介绍了抑菌效力检查的基本原则、具体步骤和方法分类，并进行了个人观点和理解的共享。
中国药典2015版抑菌效力检查法
That’s All！ Thanks For Your Attention！
Question
National Institutes for Food and Drug Control
细菌组
原位接种，接种菌液的体积 不得超过供试品体积的1%
6h or 24h 108cfu/ml
106cfu/ml
24h or 7D 28D
真菌组
原位接种，接种菌液的体积 不得超过供试品体积的1%
106cfu/ml 108cfu/ml
7D or 14D 28D
National Institutes for Food and Drug Control
28days
细菌不生长； 真菌无增加； → lg 2.18 细菌菌数不 增加； 真菌菌数不 ②6h未显示较强抑菌效果 增加。 -1 -2 -3 细菌下降至 细菌下降至 细菌比14d不 2010 4 → lg 4.18 1.5 × 10 少 1.0log ； 少 3.0log ； 增加； / / 不可计 不可计 150 真菌不增加。 真菌不增加。 真菌不增加。 USP 细菌下降至 细菌下降至 细菌比14d不 少1.0log； 少3.0log； 增加； / / 真菌不增加。 真菌不增加。 真菌不增加。 JP 细菌≤0.1% 细菌比14d不 接种量； 增加； / / / National Institutes for Food and Drug Control 真菌不增加。 真菌不增加。
National Institutes for Food and Drug Control
方法适用性
National Institutes for Food and Drug Control
方法适用性
3类产品抑菌效力检查方法
1检查内容及步骤 1.1菌种确认确认人及日期： 复核人及日期:1.2培养基确认确认人及日期:6.3培养条件确认631本检查法中细菌、控制菌的培养温度为 ________________ C,真菌的培养温度为 _____________ C 6.3.2培养箱确认确认人及日期:复核人及日期:复核人及日期:确认人及日期：复核人及日期: 6.5操作环境确认为___________ 的洁净区域以内，局部（操作台）为____________ 级并单向流空气。
确认人及日期：复核人及日期:7培养基的适用性检查7.1抑菌剂效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查，包括成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。
7.2菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa )〔CMCC(B)10 104〕大肠埃布困(Escherichia coli ) 〔CMCC(B) 44 102〕金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )〔CMCC(B)26 003〕白色念珠菌(Candida albicans ) : CMCC(F) 98 001 〕黑曲霉(Aspergillus niger) : CMCC(F) 98 003〕7.3菌液制备7.3.1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪胨大豆肉汤培养基中，30〜35C培养18〜24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20〜25C培养24〜48小时。
上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50〜100cfu的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基中，20〜25C培养5〜7天，加入3〜5ml含0.05% （ml/ml ）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。
《中国药典》 版 抑菌效力检查法
白色念珠菌
(Candida albicans) 〔CMCC(F) 98 001〕
黑曲霉
(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98 003〕
胰酪大豆胨琼脂 培养基或胰酪大 豆胨液体培养基
胰酪大豆胨琼脂 培养基或胰酪大 豆胨液体培养基
胰酪大豆胨琼脂 培养基或胰酪大 豆胨液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂 培养基或沙氏葡 萄糖液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂 培养基或沙氏葡 萄糖液体培养基
30～35℃ 18～24小时
30～35℃ 18～24小时
30～35℃ 18～24小时
20～25℃
24-48小时
20～25℃
5～7天或直到 获得丰富的孢
子
菌液制备 取表 1 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培
的 70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查
符合规定。
抑菌效力测定
菌种 抑菌效力测定用菌种见表 1，若需要，制剂中常见的污染微生物也 可作为试验菌株。
菌液制备 新鲜菌体培养见表 1，铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠 埃希菌、白色念珠菌若为琼脂培养物，加入适量的 0.9%无菌氯化钠溶液将琼脂 表面的培养物洗脱，并将菌悬液移至无菌试管内， 然后用 0.9%无菌氯化钠溶液 冲洗并制成每 1ml 含菌数约为 108cfu 的菌悬液；若为液体培养物，离心收集菌 体，用 0.9%无菌氯化钠溶液冲洗并制成每 1ml 含菌数约为 108cfu 的菌悬液。取 黑曲霉的新鲜培养物加入 3～5ml 含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯 化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，加入适 量的含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含孢子 数 108cfu 的孢子悬液。测定 1ml 菌悬液中所含的菌数。
1121抑菌效力检查法
1121 抑菌效力检查法抑菌剂是指抑制微生物生长的化学物质，有时也称防腐剂。
抑菌效力检查法系用于测定无菌及非无菌制剂的抑菌活性，用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂种类和浓度的确定。
如果药物本身不具有充分的抗菌效力，那么应根据制剂特性（如水溶性制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏或使用过程中由于微生物污染和繁殖，使药物变质而对使用者造成危害，尤其是多剂量包装的制剂。
在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP管理，不能作为非无菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。
所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低有效量。
同时，为保证用药安全，成品制剂中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度。
抑菌剂的抑菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影响而变化，因此，应验证成品制剂的抑菌效力在效期内不因贮藏条件而降低。
本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。
培养基培养基的制备胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基照无菌检查法（通则1101）制备。
培养基的适用性检查抑菌效力测定用培养基包括成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基的适用性检查检查。
菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
培养基适用性检查的菌种及新鲜培养物的制备见表1。
表1 培养基适用性检查、方法适用性检查、抑菌效力测定用的试验菌及新鲜培养物制备试验菌株试验培养基 培养温度 培养时间 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26003 〕胰酪大豆胨琼脂培养基或 胰酪大豆胨液体培养基 30～35℃ 18～24小时 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)胰酪大豆胨琼脂培养基或 胰酪大豆胨液体培养基 30～35℃ 18～24小时 适用性检查 分别接种不大于100cfu 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌的菌液至胰酪胨大豆琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平板，混匀，凝固，置30～35℃培养不超过3天，计数；分别接种不大于100cfu 的白色念珠菌、黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平板，混匀，凝固，置20～25℃培养不超过 5 天，计数；同时，用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
消毒剂抑菌效力验证方案
消毒剂抑菌效力及有效期验证方案评估日期：页次：第 页 共 页目录1 目的: (4)2 使用范围 .............................................................................................................................. 2 3责任者 (2)质量检验部经理、主管、检验员 ................................................................................................. 2 验证小组成员 .............................................................................................................................. 2 4正文 ..................................................................................................................................... 2 4.1 概述: ........................................................................................................................ 2 4.2 验证用试剂与材料 ................................................................................................... 3 4.3 消毒剂消毒效力实验 ............................................................................................... 5 4.4 消毒剂有效期确认试验 .......................................................................................... 12 4.5 注意事项 (12)5 相关文件 ............................................................................................................................136 附件 ...................................................................................................................................137 文件变更历史.....................................................................................................................13 8参考文献 (13)1 目的：2 确认各洁净级别的操作间及设备外表面按照规定的消毒程序消毒能够达到消毒、防止污染的目的, 并在消毒剂有效期内能确保其消毒效力能符合要求。
抑菌剂效力检查法_整理ok
【51】Antimicrobial Effectiveness Testing抑菌劑效力檢查法1. 抑菌劑效力檢查：①用於測定無菌、非無菌製劑中抑菌劑的活性，用以評價最終產品的抑菌效力；②用於指導製造廠在製劑研發階段抑菌劑的選用確定。
2. 如果藥物本身不具有充分的抗菌活性，則應根據製劑特性（如：水溶液製劑）添加適宜的抑菌劑，以防止製劑在正常貯藏和使用過程中可能發生的微生物污染和繁殖，尤其是多劑量包裝的製劑，避免因藥物微生物污染及變質而對患者造成傷害。
3. 在藥品生產過程中，抑菌劑不能用於替代藥品生產的GMP 管理，不能作為非滅菌製劑降低微生物污染的唯一途徑，也不能作為控制多劑量包裝製劑滅菌前的生物負載的手段。
4. 所有抑菌劑都具有一定的毒性，製劑中抑菌劑的量應為最低有效量。
同時，為保證用藥安全，最終包裝容器中的抑菌劑有效濃度應低於對人體有害的濃度。
5. 要求具有抗菌活性的製劑，不管是添加的抑菌劑，還是藥物本身具有抗菌活性，在藥物研發階段，均應確認其抗菌效力。
6. 抑菌劑的抗菌效力在貯存過程中有可能因藥物的成分或包裝容器等因素影響而提高或降低。
因此，應驗證最終容器中的抑菌劑效力在效期內不因貯藏條件而降低。
7. 本試驗方法和抑菌劑抑菌效力判斷標準用於包裝未啟開的成品製劑。
8. 需要進行本試驗的藥品分為四類（表1）。
表1 Compendial Product Categories9.1 菌株活化後使用，繼代培養以不超過5代為原則。
（冷凍乾燥菌種為第0代）9.2 以液體培養基培養的菌種：保存前，先將菌種活化培養18~24H →離心（一般使用4000rpm）→用1/20 體積的無菌TSB，將沉降的細胞懸浮分散於其中→加入等體積的sterile glycerol （20% v/v in water），混勻後冷凍保存。
10. All media used in the test must be tested for growth promotion.growth promotion test：⇩取Escherichia coli ATCC No.8739、Pseudomonas aeruginosa ATCC No.9027、Staphylococcus aureus ATCC No.6538各50～100cfu，分別注入sterile Petri dish中，立即傾注TSA培養基(每株試驗菌做2重覆) ，混勻，待凝固，放置於30～35℃，培養48 小時，計數菌落數；⇩取Candida albicans ATCC No.10231、Aspergillus niger ATCC No.16404各50～100cfu，分別注入sterile Petri dish中，立即傾注SDA培養基(每株試驗菌做2重覆)，混勻，待凝固，放置於20～25℃培養72 小時，計數菌落數。
1121抑菌效力检查法
1121 抑菌效力检查法用于测定无菌及非无菌制剂的抑菌活性，用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂种类和浓度的确定。
如果药物本身不具有充分的抗菌效力，那么应根据制剂特性（如水溶性制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏或使用过程中由于微生物污染和繁殖，使药物变质而对使用者造成危害，尤其是多剂量包装的制剂。
在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP管理，不能作为非无菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。
所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低有效量。
同时，为保证用药安全，成品制剂中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度。
抑菌剂的抑菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影响而变化，因此，应验证成品制剂的抑菌效力在效期内不因贮藏条件而降低。
本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。
培养基培养基的制备胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基照无菌检查法（通则1101）制备。
培养基的适用性检查抑菌效力测定用培养基包括成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基的适用性检查检查。
菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
培养基适用性检查的菌种及新鲜培养物的制备见表1。
表1 培养基适用性检查、方法适用性检查、抑菌效力测定用的试验菌及新鲜培养物制备试验菌株试验培养基培养温度培养时间金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 〔CMCC(B)26003〕胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基30～35℃18～24小时铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B)10104〕胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基30～35℃18～24小时大肠埃希菌*埃希菌的菌液至胰酪胨大豆琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平板，混匀，凝固，置30～35℃培养不超过3天，计数；分别接种不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平板，混匀，凝固，置20～25℃培养不超过5 天，计数；同时，用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
抑菌效力检查记录
抑菌效力检查记录
检品名称：批号：来源：规格：检验日期：报告日期：
检验依据：
1、培养基、试剂批号：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基：
0.9%无菌氯化钠溶液：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基：
0.9%无菌氯化钠溶液：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基： 0.9%无菌氯化钠溶液：
2、试验菌批号、有效期：
金黄色葡萄球菌批号：有效期：
铜绿假单胞菌批号：有效期：
大肠埃希菌批号：有效期：
白色念珠菌批号：有效期：
黑曲霉批号：有效期：3、抑菌效力测定：
3.1、方法：取上述试验菌,制成每1ml含菌数约为108cfu的菌悬液；
实验组：取包装完整的供试品5份,直接接种试验菌；
菌液组：取同体积无菌0.9%无菌氯化钠溶液5份,直接接种试验菌；
测定1ml菌液组菌量为第0 d含菌数；
置20-25℃避光贮存,于第14天,第28天分别测定每1ml供试品中的含菌数;
备注：测定细菌用胰酪大豆胨琼脂培养基,测定真菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基;根据存活菌数测定结果,计算1ml供试品各试验菌所加的菌数及各间隔时间的菌数,并换算成lg值;
3.2、判断标准：
3.3、试验结果：
检验人/日期：复核人/日期：。
药品抑菌效力测定操作规程
1 目的： (2)2 使用范围： (2)3 责任者： (2)4 正文 (2)4.1 概述: (2)4.2 产品分类 (2)4.3 抑菌效力判断标准 (2)4.4 实验仪器及器具： (3)4.5 实验材料 (3)4.6 菌种 (3)4.7 菌液制备： (3)4.8 供试品接种 (4)4.9 存活菌数测定 (4)4.10 结果判断 (4)4.11 记录及报告的书写 (5)4.12 注意事项 (5)5 相应文件 (5)6 附件 (5)7 文件变更历史 (5)8 参考文献 (5)文件颁发部门质量检验部复印件分发单位质量保证部、质量检验部、研发部1 目的：规范产品抑菌效力测定正确操作，确保实验结果准确可靠。
2 使用范围：适用于需要测定抑菌效力的各类产品。
3 责任者：质量检验部经理、主管、检验员4 正文4.1 概述:抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。
4.2 产品分类4.3 抑菌效力判断标准注：表中“不增加”是指对前一个测定时间，试验菌增加的数量不超过0.5 lg。
4.4 实验仪器及器具：净化工作台、生化培养箱、霉菌培养箱、高压蒸汽灭菌器、恒温干燥箱、恒温水浴锅、电冰箱、接种环、酒精灯、培养皿（9cm）、天平、锥形瓶、量筒、试管、硅胶塞、刻度吸管、钢锥、消毒缸、试管架、记号笔、酒精棉球、乳胶手套、薄膜过滤器、滤膜4.5 实验材料酪蛋白大豆消化琼脂培养基、沙氏--葡萄糖琼脂培养基、酪蛋白大豆消化肉汤培养基、沙氏--葡萄糖肉汤培养基、pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%氯化钠溶液、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌4.6 菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
若需要，制剂中常见的污染微生物也可作为试验菌株。
1121抑菌效力检查法
1121抑菌效力检查法抑菌剂是指抑制微生物生长的化学物质，有时也称防腐剂。
抑菌效力检查法系用于测定无菌及非无菌制剂的抑菌活性，用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂浓度的确定。
如果药物本身不具有充分的抗菌效力，那么应根据制剂特性（如水溶性制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏或使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖使药物变质而对使用者造成危害，尤其是多剂量包装的制剂。
在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP管理，不能作为非无菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。
所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低有效量。
同时，为保证用药安全，成品制剂中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度。
抑菌剂的抗菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影响而变化，因此，应验证成品制剂中的抑菌剂效力在效期内不因贮藏条件而降低。
本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。
培养基培养基的制备胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基照无菌检查法（通则1101）制备。
培养基的适用性检查抑菌效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查，包括成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。
菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
培养基适用性检查的菌种及新鲜培养物的制备见表1。
表1 培养基适用性检查、方法适用性试验、抑菌效力测定用的试验菌制备试验菌株试验培养基培养温度培养时间金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 〔CMCC(B)26 003〕胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基30～35℃ 18～24小时铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC(B)10 104〕胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基30～35℃ 18～24小时大肠埃希菌(Escherichia coli) 〔CMCC(B)44 102〕胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基30～35℃ 18～24小时白色念珠菌(Candida albicans) 〔CMCC(F) 98 001〕沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基20～25℃ 24-48小时黑曲霉(Aspergillusniger) 〔CMCC(F) 98 003〕沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基20～25℃5～7天或直到获得丰富的孢子菌液制备 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、白色念珠菌的新鲜培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。
抑菌剂效力测定
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一、概述
抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以 评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在制剂研发阶 段抑菌剂的确定。
如果药物本身不含有充分的抗菌活性，那么应根据制剂特性（如水溶 液制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常储存和使用过程中可 能发生微生物污染和大量繁殖尤其多剂量包装的制剂，避免因药物微 生物污染及对患者造成伤害。
3、所有抑菌剂都具有一定的毒性，而且在贮存过程中其有效性有可能 因药物的活性成分提高或降低，为保证药品的质量和用药安全，添加 防腐剂的量应根据制剂本身是否具抗菌活性，保持最低有效量并在药 品包装上注明添加抑菌剂的名称和数量。
培养基
1、胰酪胨大豆肉汤培养基 2、胰酪胨大豆肉汤培养基 3、沙氏葡萄糖肉汤培养基
抑菌剂效力测定
表防腐剂抗菌效力标准 3 类供试品 • 细菌14天菌数下降不少于1.0 lg，14天到28天菌数均不增加。 • 真菌与初始值比，14、28天菌数均不增加。 4 类供试品 • 细菌，真菌与初始值比，14、28天菌数均不增长。 注： • 1、表中“不增加”是指对前一个测定时间，试验菌增加的数量不超 过0.5 lg。 • 2、0时菌数(初试值)： 供试品加入试验菌，摇匀，立即取样检查， 培养，计数，为0时
2类
局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于黏膜的乳剂
3类
口服非固体制剂（非抗酸制剂）
4类
非固体抗酸制剂
抑菌剂效力测定
菌种和菌液的制备 同培养基适用性检查 供试品接种
1、抑菌剂效力可能受试验用容器特征的影响，如容器的材 质、形状、体积及封口的方式等。因此，只要供试品每个包 装容器的装量足够试验用，同时容器便于按无菌操作的接入 试验菌液、混合及取样等，一般应将试验菌直接接种于供试 品原包装容器中进行贮存。
产品抑菌效力稳定性考察方案
葆肤安留样稳定性考察方案1.考察目的主要考察产品在贮存阶段其抑菌效力是否因贮存时间、贮存条件等因素发生变化而产生变化，用来指导产品的贮存条件、有效期的确认。
2.考察指标2.1外观：溶液颜色、澄清度、气味。
2.2 PH值2.2 抑菌效力：验证产品的抑菌剂效力在效期内不因贮藏条件而降低。
3.考察方法3.1室温考察此项实验在常规室温（随季节变化）下进行，目的是通过模拟一般正常实际使用环境下产品的稳定性。
3.1.1供试品要求不同时期生产的3批，按市售包装，在室温条件放置24个月。
在试验期间第3个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月末取样一次，按考察指标检测。
3.2加速试验考察加速试验是在相对恶劣环境下（如恒定35℃环境）进行，目的考察产品在可能短期恶劣环境下的稳定性。
3.2.1供试品要求1批，市售包装，在温度35℃±2℃、相对湿度75％±10％的条件下放置6个月，分别于0个月、1个月、2个月、3个月、6个月取样，按考察指标检测。
将结果与0月比较。
4.考察记录考察报告及记录按产品批号归档长期保存。
附件一考察结果汇总表附件二考察指标检测方法一、抑菌效力的测定1. 原理采用微生物法计数与阳性对照组比对，来快速便捷测得抑菌效力的变化情况。
1.1 菌种分别以金黄葡萄球菌和白色念珠菌分别为细菌抑制和真菌抑制的代表菌种进行抑菌效力的评价。
1.2试验步骤1.2.1 适用性检查（选择合适的样品溶液浓度和菌液浓度，保证适当的抑菌灵敏性，便于考察抑菌性的变化）1.2.2 取外购菌株按照使用方法逐级稀释至规定浓度，供试品溶液按照原液、稀释10倍、稀释100倍备用。
分别取稀释后的菌液和不同稀释级的供试品溶液各1ml采用直接接种培养进行试验，对照组用无菌缓冲液替代供试品溶液。
说明：1、根据计数结果选择试验组刚好有菌落计数的对应供试品溶液浓度作为抑菌效力稳定性考察的供试品溶液的标准浓度。
2、每次检测同步做对照组试验，以试验组的菌落计数与同步对照组的菌落计数的比值来来评判抑菌效力的变化。
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抑菌效力检查记录
检品名称：批号：来源：
规格：检验日期：报告日期：
检验依据：
1、培养基、试剂批号：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基：
0.9%无菌氯化钠溶液：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基：
0.9%无菌氯化钠溶液：
胰酪大豆胨琼脂培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基：0.9%无菌氯化钠溶液：
2、试验菌批号、有效期：
金黄色葡萄球菌批号：有效期：
铜绿假单胞菌批号：有效期：
大肠埃希菌批号：有效期：
白色念珠菌批号：有效期：
黑曲霉批号：有效期：
3、抑菌效力测定：
3.1、方法：取上述试验菌，制成每1ml含菌数约为108cfu的菌悬液；
实验组：取包装完整的供试品5份，直接接种试验菌；
菌液组：取同体积无菌0.9%无菌氯化钠溶液5份，直接接种试验菌；
测定1ml菌液组菌量（为第0 d含菌数）；
置20-25℃避光贮存，于第14天，第28天分别测定每1ml供试品中的含菌数。
（备注：测定细菌用胰酪大豆胨琼脂培养基，测定真菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基。
根据存活菌数测定结果，计算1ml供试品各试验菌所加的菌数及各间隔时间的菌数，并换算成lg值。
）
3.2、判断标准：
3.3、试验结果：
检验人/日期：复核人/日期：。