《中国药典》2020年版通则“有抑菌效力检查法”
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A
概述
B
2020年版公示稿与2015版比较与解读
C
案例分析
Page 2
A
概述
Page 3
概述-背景介绍：
国际背景：USP 、 EP 、BP 、JP及 ICH均有收载。
国内背景: CP 2010版附录：抑菌效力检查法指导 原则（同USP 体系）。 CP 2015版通则：抑菌效力检查法（同 EP 体系）。 CP 2020 版通则：对CP2015版进行进一 步完善。
B
A 真菌
B
2
3
-
-
-
-
-
-
-
NI
3
NI
2
NI
1
NI
注： NI：未增长，是指对前一个测定时间，试验菌增加的 数量不超过0.5lg
减少的lg值
14d
28d
细菌
3
NI
真菌
1
NI
注： NI： 未增长，是指对前一个测定时间，试验菌增加 的数量不超过0.5lg
讨论题
产品信息： 品名：***鼻喷剂 规格：23ml:23g
活 不得低于 50%。
低于 70%。
wk.baidu.com
菌
数
测
定
定义：
抑菌效力检查法：抑菌效力检查法系用于 测定无菌及非无菌制剂的抑菌活性。 目的：
检查制剂中防腐剂的量能否达到防止制剂 在正常贮藏或使用过程中由于微生物污染和繁 殖，使药物变质而对使用者造成危害。
用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌 剂种类和浓度的确定。
B
2020年版公示稿与2015版比较与解读
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2020版
2015版
试 大肠埃希菌* 验 * 大肠埃希菌仅用于口服制 菌 剂的抑菌效力测定。
大肠埃希菌
及 黑曲霉
黑曲霉
新 培养时间 6-10天或直到获得 培养时间 5-7天或直到获得丰
鲜 丰富的孢子
富的孢子
培
养
物
制
备
2020版
2015版
存 方法适用性试验菌的回收率 方法适用性试验菌的回收率不得
白色念珠菌
SDA或SDB 20～25℃ 24～48小时
黑曲霉
SDA或SDB 20～25℃ 5～7天(6～10天) 或直到获得丰富
的孢子
菌种
0代
1代 2代 3代
菌种
菌种
菌液制备
金葡、铜绿、大肠和白念： 用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无 菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液. 黑曲霉： 加入3-5ml含0.05％(ml/ml)聚山梨酯80的 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌 氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜 的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05％(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯 化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液 制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
验应无菌生长. 结果判断：试验菌的回收率不得低于70%（50%）
J
T
D
B
H
J
T
D
B
H
20ml 供试液
阴性 对照
应以稀释剂代替供试品进行阴性对照试验，阴性对 照试验应无菌生长.
适用性
试验菌的回收率不得低于70%（50%）
检查结果判断
确定存活菌计 数测定方法
取本品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 100ml，使供试品分散均匀，制成1:10的供试液，取1:10 的供试液1ml，置pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液9ml中， 即为1:100的供试液。
测定目标
金葡、铜绿、大 肠存活菌数测定
白念、黑曲 存活菌数测定
方法及培养基
平皿法、薄膜过滤法 胰酪大豆胨琼脂
平皿法、薄膜过滤法 沙氏葡萄糖琼脂
检查用菌及培养条件
金葡、铜绿、大肠 30-35℃ 不超过3天
白念、黑曲 20-25℃ 不超过5天
菌液制备：同培养基适用性检查 阴性对照：以稀释剂代替供试品进行阴性对照试验，阴性对照试
最低
有效
合理的处方
J
T
D
B
H
结果判断
抑菌效力测定法操作步骤
供试品接种、放置 存活菌数测定 结果判定
返回
试验菌株
试验培养基 培养温度 培养时间
金黄色葡萄球菌 TSA或TSB 30～35℃ 18～24小时
铜绿假单胞菌 TSA或TSB 30～35℃ 18～24小时
大肠埃希菌
TSA或TSB 30～35℃ 18～24小时
问题： 请给出该制品的抑菌效力检查试验方案或
思路。
培养基 胰酪大豆胨琼脂
沙氏葡萄糖琼脂
菌种
金葡、铜绿、 大肠
白念、黑曲
培养温度 30-35℃
20-25℃
培养时间 3天
5天
接种量：每皿不大于100cfu 每株试验菌平行制备2个平板 用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验 结果判定：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上 菌落平均数的70%（50%），且菌落形态大小与对照培养基上 的菌落一致。
抑菌剂的种类
尼泊金类：尼泊金甲酯、尼泊金乙酯（对羟基 苯甲酸乙酯）、尼泊金丙酯。
醇类：苯甲醇、乙醇、苯乙醇和三氯叔丁醇等。 有机酸类：苯甲酸、三梨酸和脱氢乙酸等。 酚类：苯酚、 麝香酚和氯甲酚等。 铵类：新吉尔灭（苯扎溴氨） 、吉尔灭（苯 扎氯氨） 等。 其他：洗必泰和硫柳汞等。
安全性
有效性
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌测定， 分别取1:10的供试液1ml，依法检查（中国药典2015年版 通则1105平皿法）；白念和黑曲霉存活菌数测定，取1:10 的供试液1ml，置pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml中， 经薄膜过滤法处理，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液分 次冲洗（每膜不少于300ml),取滤膜，依法检查（中国药 典2015年版通则1105平皿法）。
供试品接种
供试品接种
J
T
D
B
H
存活菌数测定
结果判定
减少的lg值
6h
24h
7d
14d
28d
A 细菌
B
A 真菌
B
2
3
-
-
NR
-
1
3
-
NI
-
-
2
-
NI
-
-
-
1
NI
注：NR：试验菌未恢复生长 NI：未增长，是指对前一个测定时间，试验菌增加的数
量不超过0.5lg
减少的lg值
2d
7d
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28d
A 细菌
概述
B
2020年版公示稿与2015版比较与解读
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案例分析
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概述
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概述-背景介绍：
国际背景：USP 、 EP 、BP 、JP及 ICH均有收载。
国内背景: CP 2010版附录：抑菌效力检查法指导 原则（同USP 体系）。 CP 2015版通则：抑菌效力检查法（同 EP 体系）。 CP 2020 版通则：对CP2015版进行进一 步完善。
B
A 真菌
B
2
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NI
注： NI：未增长，是指对前一个测定时间，试验菌增加的 数量不超过0.5lg
减少的lg值
14d
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细菌
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真菌
1
NI
注： NI： 未增长，是指对前一个测定时间，试验菌增加 的数量不超过0.5lg
讨论题
产品信息： 品名：***鼻喷剂 规格：23ml:23g
活 不得低于 50%。
低于 70%。
wk.baidu.com
菌
数
测
定
定义：
抑菌效力检查法：抑菌效力检查法系用于 测定无菌及非无菌制剂的抑菌活性。 目的：
检查制剂中防腐剂的量能否达到防止制剂 在正常贮藏或使用过程中由于微生物污染和繁 殖，使药物变质而对使用者造成危害。
用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌 剂种类和浓度的确定。
B
2020年版公示稿与2015版比较与解读
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2020版
2015版
试 大肠埃希菌* 验 * 大肠埃希菌仅用于口服制 菌 剂的抑菌效力测定。
大肠埃希菌
及 黑曲霉
黑曲霉
新 培养时间 6-10天或直到获得 培养时间 5-7天或直到获得丰
鲜 丰富的孢子
富的孢子
培
养
物
制
备
2020版
2015版
存 方法适用性试验菌的回收率 方法适用性试验菌的回收率不得
白色念珠菌
SDA或SDB 20～25℃ 24～48小时
黑曲霉
SDA或SDB 20～25℃ 5～7天(6～10天) 或直到获得丰富
的孢子
菌种
0代
1代 2代 3代
菌种
菌种
菌液制备
金葡、铜绿、大肠和白念： 用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无 菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液. 黑曲霉： 加入3-5ml含0.05％(ml/ml)聚山梨酯80的 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌 氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜 的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05％(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯 化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液 制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
验应无菌生长. 结果判断：试验菌的回收率不得低于70%（50%）
J
T
D
B
H
J
T
D
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H
20ml 供试液
阴性 对照
应以稀释剂代替供试品进行阴性对照试验，阴性对 照试验应无菌生长.
适用性
试验菌的回收率不得低于70%（50%）
检查结果判断
确定存活菌计 数测定方法
取本品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 100ml，使供试品分散均匀，制成1:10的供试液，取1:10 的供试液1ml，置pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液9ml中， 即为1:100的供试液。
测定目标
金葡、铜绿、大 肠存活菌数测定
白念、黑曲 存活菌数测定
方法及培养基
平皿法、薄膜过滤法 胰酪大豆胨琼脂
平皿法、薄膜过滤法 沙氏葡萄糖琼脂
检查用菌及培养条件
金葡、铜绿、大肠 30-35℃ 不超过3天
白念、黑曲 20-25℃ 不超过5天
菌液制备：同培养基适用性检查 阴性对照：以稀释剂代替供试品进行阴性对照试验，阴性对照试
最低
有效
合理的处方
J
T
D
B
H
结果判断
抑菌效力测定法操作步骤
供试品接种、放置 存活菌数测定 结果判定
返回
试验菌株
试验培养基 培养温度 培养时间
金黄色葡萄球菌 TSA或TSB 30～35℃ 18～24小时
铜绿假单胞菌 TSA或TSB 30～35℃ 18～24小时
大肠埃希菌
TSA或TSB 30～35℃ 18～24小时
问题： 请给出该制品的抑菌效力检查试验方案或
思路。
培养基 胰酪大豆胨琼脂
沙氏葡萄糖琼脂
菌种
金葡、铜绿、 大肠
白念、黑曲
培养温度 30-35℃
20-25℃
培养时间 3天
5天
接种量：每皿不大于100cfu 每株试验菌平行制备2个平板 用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验 结果判定：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上 菌落平均数的70%（50%），且菌落形态大小与对照培养基上 的菌落一致。
抑菌剂的种类
尼泊金类：尼泊金甲酯、尼泊金乙酯（对羟基 苯甲酸乙酯）、尼泊金丙酯。
醇类：苯甲醇、乙醇、苯乙醇和三氯叔丁醇等。 有机酸类：苯甲酸、三梨酸和脱氢乙酸等。 酚类：苯酚、 麝香酚和氯甲酚等。 铵类：新吉尔灭（苯扎溴氨） 、吉尔灭（苯 扎氯氨） 等。 其他：洗必泰和硫柳汞等。
安全性
有效性
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌测定， 分别取1:10的供试液1ml，依法检查（中国药典2015年版 通则1105平皿法）；白念和黑曲霉存活菌数测定，取1:10 的供试液1ml，置pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml中， 经薄膜过滤法处理，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液分 次冲洗（每膜不少于300ml),取滤膜，依法检查（中国药 典2015年版通则1105平皿法）。
供试品接种
供试品接种
J
T
D
B
H
存活菌数测定
结果判定
减少的lg值
6h
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A 细菌
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注：NR：试验菌未恢复生长 NI：未增长，是指对前一个测定时间，试验菌增加的数
量不超过0.5lg
减少的lg值
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