白色念珠菌与抑菌效力检查方法课件
抑菌剂效力幻灯系列课件
在农业领域,抑菌剂可用于防治 植物病害和虫害,提高农作物产
量和质量。
在工业领域,抑菌剂可用于抑制 微生物生长和繁殖,保障产品质
量和安全。
02 抑菌剂效力测试方法
CHAPTER
试管稀释法
总结词
一种常用的定量测试方法
详细描述
试管稀释法是一种常用的定量测试方法,用于测定抑菌剂的最小抑菌浓度(MIC )和最小杀菌浓度(MBC)。该方法涉及在试管中逐倍稀释抑菌剂样品,并与标 准菌株进行培养。根据培养结果,可以确定抑菌剂的效力。
能达到预期的抑菌效果。
作用时间
抑菌剂的作用时间越长,其抑菌效果通常也越好。
对于一些快速繁殖的细菌,需要连续多次使用抑菌剂才能达到预期的抑菌效果。
有些细菌可能在药物浓度高的情况下仍然可以快速繁殖,因此需要持续监测抑菌效 果并进行调整。
细菌种类
不同的细菌种类对不同的抑菌 剂敏感性不同。
对于一些特定的细菌,某些抑 菌剂可能完全无效。
02
抑菌剂可以是天然的或合成的, 可以是低毒或高毒的,取决于其 用途和浓度。
抑菌剂的分类
根据作用机制,抑菌剂可分为抗代谢 型、细胞膜破坏型、抗生物素型和抗 生长型等。
根据化学性质,抑菌剂可分为抗生素 类、合成类和其他类型等。
抑菌剂的重要性
在医疗领域,抑菌剂可用于治疗 细菌感染和真菌感染等疾病,保
详细描述
最小抑菌浓度是指能够抑制病原菌生长的最低药物浓度。这 个指标可以反映抑菌剂对不同病原菌的抑制效果。一般来说 ,最小抑菌浓度越低,说明抑菌剂对病原菌的抑制效果越好 。
最大抑制浓度
总结词
最大抑制浓度是衡量抑菌剂对病原菌生长抑制作用的另一个重要指标。
详细描述
白色念珠菌和新型隐球菌病ppt课件
肺新型隐球菌病所占的比例少于15%,远比中
枢神经系统新型隐球菌点 4.2临床症状及体征 4.3实验室依据
-
8
5.1对症治疗 5.2病原治疗
5.治疗
-
9
6.预防
6.1控制传染源 6.2切断传播途径 6.3保护易感人群
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10
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传染病学
主讲人:
-
1
白色念珠菌和新型隐球菌病
本节重难点: 一、白色念珠菌、型隐球菌 二、流行病学:传染源、传播途径、易感人群、
流行病特征 三、临床表现: 四、诊断: 五、治疗: 六、预防:
-
2
1.病原学
白色念珠菌病原体:念珠菌体呈圆形或卵圆
形,直径约4-6pm,革兰阳性,发芽繁殖, 又称芽生孢子。菌体能发育伸长成假菌丝,
-
12
增生性念珠菌病等。鹅口疮最为常见,
-
6
新型隐球菌病
潜伏期为数周至数年不等。
3.3中枢神经系统新型隐球菌病
以新型隐球繭脑膜炎最常见。患者起病缓
慢,病初症状不明显,常有头痛,可位于前
额、双侧颞部、枕后或眼眶后,多为胀痛或
钝痛,呈间歇性。伴低热或不发热。
3.4肺新型隐球菌病
新型隐球菌主要通过肺进入人体,但是,
-
5
3.临床表现
白色念珠菌
3.1皮肤念珠菌病
念珠菌感染皮肤皱褶处,如腋窝、腹股沟
下、会阴部、肛门周围,自觉瘙痒,表现为
界限淸晰的皮肤红斑及糜烂,周围敗在丘疹
、水疱和脓疱,呈卫星状分布。
3.2黏膜念珠菌病
口腔念珠菌病为最常见的浅表性念珠菌病。
包括急性假膜性念珠菌病(鹅口疮)、念珠
抑菌效力检查法
附录ⅩⅢJ抑菌效力检查法抑菌剂是指抑制微生物生长的化学物质,有时也称防腐剂。
抑菌效力检查法系用于测定灭菌及非灭菌制剂的抑菌活性,以评价最终产品的抑菌效力,同时也可用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂浓度的确定。
如果药物本身不具有充分的抗菌效力,那么应根据制剂特性(如水溶性制剂)添加适宜的抑菌剂,以防止制剂在正常贮藏或使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖使药物变质而对使用者造成危害,尤其是多剂量包装的制剂。
在药品生产过程中,抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP管理,不能作为非无菌制剂降低微生物污染的唯一途径,也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。
所有抑菌剂都具有一定的毒性,制剂中抑菌剂的量应为最低有效量。
同时,为保证用药安全,成品制剂中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度。
抑菌剂的抗菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影响而变化,因此,应验证成品制剂中的抑菌剂效力在效期内不因贮藏条件而降低。
本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。
培养基培养基的制备1.胰酪大豆胨液体培养基胰酪胨17.0g 氯化钠 5.0g大豆木瓜蛋白酶消化物 3.0g 磷酸氢二钾 2.5g葡萄糖(一水合) 2.5g 水1000mL除葡萄糖外,取上述成分,混合,微温溶解,滤过,调节pH值使灭菌后在25℃的pH 值为7.3±0.2,加入葡萄糖,分装,灭菌。
胰酪大豆胨液体培养基置20~25℃培养。
2. 胰酪大豆胨琼脂培养基胰酪胨 15.0g 氯化钠 5.0g大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g 琼脂 15.0g水 1000ml除琼脂外,取上述成分,混合。
微温溶解,调节pH值使灭菌后在25℃的pH值为7.3±0.2,加入琼脂,加热溶化后,摇匀,分装,灭菌。
3.沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基照微生物限度检查法(附录ⅩⅢ C)制备。
培养基的适用性检查抑菌效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查,包括成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。
白色念珠菌与抑菌效力检查方法
表
类别
产品分类
药品
1 类 注射剂、其他非肠道制剂,包括乳剂、 注射剂、其他非肠道制剂,包括乳剂、 制剂、 耳用 制剂、无菌鼻用制剂及眼用制剂 2 类 局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于 局部给药制剂、 黏膜的乳剂 3类 口服非固体制剂(非抗酸制剂) 口服非固体制剂(非抗酸制剂) 4类 非固体抗酸制剂
抑菌剂效力测定 概述 1、抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、 、抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、 非灭菌制剂中抑菌剂的活性, 非灭菌制剂中抑菌剂的活性,以评价最终 产品的抑菌效力, 产品的抑菌效力,同时也可用于指导生产 企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。 企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。 2、如果药物本身不含有充分的抗菌活性, 、如果药物本身不含有充分的抗菌活性, 那么应根据制剂特性(如水溶液制剂) 那么应根据制剂特性(如水溶液制剂)添 加适宜的抑菌剂, 加适宜的抑菌剂,以防止制剂在正常储存 和使用过程中可能发生微生物污染和大量 繁殖尤其多剂量包装的制剂, 繁殖尤其多剂量包装的制剂,避免因药物 微生物污染及对患者造成伤害。 微生物污染及对患者造成伤害。
2、如平板上生长的菌落与上述菌落形态特 、 征相符或疑似,应挑选2~ 个菌落分别接 征相符或疑似,应挑选 ~3个菌落分别接 种至念珠菌显色培养基平板上,培养24~ 种至念珠菌显色培养基平板上,培养 ~ 48小时(必要时延长至 小时)。若平 小时( 小时)。 小时 必要时延长至72小时)。若平 板上无绿色或翠绿色的菌落生长, 板上无绿色或翠绿色的菌落生长,判供试 品未检出白色念珠菌。 品未检出白色念珠菌。 3、若平板上生长的菌落为绿色或翠绿色, 、若平板上生长的菌落为绿色或翠绿色, 挑取相符或疑似的菌落接种于1%吐温 吐温80 挑取相符或疑似的菌落接种于 吐温 玉米琼脂培养基上,培养24~ 小时 小时。 玉米琼脂培养基上,培养 ~48小时。 取培养物进行染色,镜检及芽管试验。 取培养物进行染色,镜检及芽管试验。
念珠菌病介绍演示培训课件
流行病学特点
01
02
03
分布广泛
念珠菌病在世界各地均有 分布,无明显的地域差异 。
易感人群
婴幼儿、老年人、免疫缺 陷者及长期使用广谱抗生 素或免疫抑制剂者等易感 。
传播方式
内源性感染为主,也可通 过直接接触或间接接触传 播。
临床表现及分型
皮肤念珠菌病
表现为红斑、丘疹、水疱等,可伴有 瘙痒或疼痛。
念珠菌病
汇报人:XXX
2024-01-12
• 疾病概述 • 诊断方法与标准 • 治疗原则与方案 • 并发症预防与处理 • 患者教育与心理支持 • 研究进展与未来展望
01
疾病概述
定义与发病原因
定义
念珠菌病是由念珠菌属(主要是 白色念珠菌)引起的真菌病,可 侵犯皮肤、黏膜及内脏器官。
发病原因
念珠菌广泛存在于自然界及人体 口腔、胃肠道、阴道等部位,当 机体免疫力下降或菌群失调时, 可引起内源性或外源性感染。
06
研究进展与未来展望
新型诊断技术发展趋势
分子生物学诊断技术
利用PCR、基因测序等方法,提高念珠菌病诊断的敏感性和特异 性。
免疫学诊断技术
开发新型抗原和抗体检测技术,实现念珠菌病的快速、准确诊断 。
代谢组学诊断技术
通过分析患者体液中代谢产物的变化,发现念珠菌病的特征性代 谢标志物。
创新药物研发动态
,观察念珠菌的形态和数量。
培养法
将标本接种于选择性培养基上,在 适宜条件下培养后观察菌落形态、 颜色等特征,进行念珠菌的鉴定。
免疫学方法
采用抗原抗体反应原理,检测患者 血清或体液中的念珠菌特异性抗体 或抗原。
影像学检查
X线检查
对于深部念珠菌病,如念珠菌肺炎, X线检查可发现肺部浸润影、空洞等 病变。
抑菌剂效力测定
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一、概述
抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性,以 评价最终产品的抑菌效力,同时也可用于指导生产企业在制剂研发阶 段抑菌剂的确定。
如果药物本身不含有充分的抗菌活性,那么应根据制剂特性(如水溶 液制剂)添加适宜的抑菌剂,以防止制剂在正常储存和使用过程中可 能发生微生物污染和大量繁殖尤其多剂量包装的制剂,避免因药物微 生物污染及对患者造成伤害。
抑菌剂效力测定
举例
1、氯化钠注射液、碳酸氢钠注射液不含抑菌剂加入菌从初始到 6h就开始无限增加,不具抑菌力,抗病毒口服液从初始到24 h对 数值无变化,72h后明显降低,具一定的抑菌力。
2、呋麻滴鼻液、硫糖铝混悬液、阿昔洛韦滴眼液、鲸脂滴耳液、 洁尔阴洗液从初始值到7天后计算值大于1.0 lg降低值,从初始值 到14天后计算值大于3.0 lg,具较强的抑菌效力。
取白色念珠菌、黑曲霉孢子各50~100cfu,分别注入无菌平皿中, 立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基,每株试验菌平行制备2个平皿, 混匀,凝固,置20~25℃培养72小时,计数;
同时,用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
结果判定
被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比大于70%,菌落 形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性 检查符合规定。
菌液的制备同控制菌培养基适用性检查
培养基的适用性检查
适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌各50~100cfu,分 别注入无菌平皿中,立即倾注胰酷胨大豆琼脂培养基,每株试验菌 平行制备2个平皿,混匀,凝固,置30~35℃培养48小时,计数;
我国药典抑菌效力检查法培训课件
手段。 • 所有抑菌剂都具有一定的毒性,制剂中抑菌剂的量
应为最低有效量。
2/26/2021
National Institutes for Food and Drug Control
我国药典抑菌效力检查法 3
我国药典抑菌效力检查法 13
原始记录
样品信息一致
细菌组原始数据、稀释级别
2/26/2021
National Institutes for Food and Drug Control
我国药典抑菌效力检查法 14
样品信息一致
真菌组原始数据 稀释级别
2/26/2021
National Institutes for Food and Drug Control
我国药典抑菌效力检查法 5
2/26/2021
菌液制备
若为琼脂培养物,加入适 量的0.9%无菌氯化钠溶液 将琼脂表面的培养物洗脱, 并将菌悬液移至无菌试管 内, 用 0.9%无菌氯化钠 溶液稀释并制成每1ml 含 菌数约为108cfu 的菌悬液
若为液体培养物,离心收 集菌体,用0.9%无菌氯化 钠溶液稀释并制成每1ml 含菌数约为108cfu 的菌 悬液。
我国药典抑菌效力检查法 9
供试品接种
细菌组
原位接种,接种菌液的体积 不得超过供试品体积的1%
108cfu/ml
106cfu/ml
Hale Waihona Puke 真菌组原位接种,接种菌液的体积 不得超过供试品体积的1%
6h or 24h 24h or 7D 28D
108cfu/ml 2/26/2021
106cfu/ml
白色念珠菌ppt课件
2018/11/15
结果判断
• 供试品检出控制菌或其他致病菌时,按一次检出结果为准, 不再复试。
2018/11/15
沙氏葡萄糖液体培养基
• • • • • 用途:用于药品抑菌剂效力检测中细菌检测、真菌的培养 葡萄糖 40g 水 1000ml 蛋白胨 10g 除葡萄糖外。取上述成分,混合,微温溶解,滤过。加入 葡萄糖,溶解,分装,灭菌。
2018/11/15
念珠菌在显色培养基上的菌落颜 色
2018/11/15
白色假丝酵母菌在显色培养基上 的颜色和菌落形态
2018/11/15
鉴定依据
• • • • • • 1、菌落特征 2、显色培养基反应 3、厚膜孢子形成 假菌丝末端或侧缘形成典型的厚膜孢子 4、芽管形成 有孢子长出短小芽管 5、生化试验 6、注意与其他常见念珠菌和酵母菌的鉴别。
白色念珠菌
• • • • • •
白色念珠菌的典型特征 显微镜下特征 白色念珠菌菌落形态 鉴定依据 检查步骤 白色念珠菌与酵母菌的鉴别
白色念珠菌的典型特征
• 白色念珠菌菌细胞呈圆形或卵圆形,直径为3~6µm,革兰 染色为阳性,但菌体着色不均匀,以出牙方式繁殖,在适 宜的培养基上出芽生孢子及假菌丝生长,在假菌丝间其末 端形成厚膜孢子。 • 白色念珠菌具有β-硝基半乳糖苷酶,可分解NGL,使对-硝 基苯酚游离,在碱性条件下显色。
2018/11/15
白色念珠菌与酵母菌的鉴别
• • • • 1、酵母菌在显色培养基上不显色,为乳白色。 2、酵母菌无假菌丝和厚膜孢子 3、酵母菌可发酵蔗糖不能发酵麦芽糖。 以上实验结果和特征可与念珠菌进行鉴别。
2018/11/15
酵母菌在显色培养基上的颜色和 菌落形态
抑菌效力检查法
151
1 1 2 1 抑菌效力检查法
中 国 药 典 2015年版
表 1 培 养 基 适 用 性 检 査 、方法适 用 性 试 验 、抑菌效力测定用的试验苗及新鲜培养物制备
试验菌株
金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus )
CCMCCCB)26 003〕
铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)
在 药 品 生 产 过 程 中 ,抑 菌 剂 不 能 用 于 替 代 药 品 生 产 的 G M P 管 理 ,不 能 作 为 非 无 菌 制 剂 降 低 微 生 物 污 染 的 唯 一 途 径 ,也 不 能 作 为 控 制 多 剂 量 包 装 制 剂 灭 菌 前 的 生 物 负 载 的 手 段 。所 有 抑 菌 剂 都 具 有 一 定 的 毒 性 ,制 剂 中 抑 菌 剂 的 量 应 为 最 低 有 效 量 。同 时 ,为 保 证 用 药 安 全 ,成 品 制 剂 中 的 抑 菌 剂 有效浓度应低于对人体有害的浓度。
培养时间 18〜 2 4 小时 18〜 2 4 小时 18〜 2 4 小时 24〜 4 8 小时 5〜7 天或直到获得丰富的孢子
菌 液 制 备 后 若 在 室 温 下 放 置 ,应 在 2 小 时 内 使 用 ;若保 存 在 2〜8 C ,可 在 2 4 小 时 内 使 用 。黑 曲 霉 孢 子 悬 液 可 保 存 在 2〜8 * C , 在 验 证 过 的 贮 存 期 内 使 用 。
如 果 药 物 本 身 不 具 有 充 分 的 抗 菌 效 力 ,那 么 应 根 据 制 剂 特 性 (如 水 溶 性 制 剂 )添 加 适 宜 的 抑 菌 剂 ,以 防 止 制 剂 在 正 常 贮 藏 或 使 用 过 程 中 由 于 微 生 物 污 染 和 繁 殖 ,使 药 物 变 质 而 对 使 用 者 造 成 危 害 ,尤 其 是 多 剂 量 包 装 的 制 剂 。
白色念珠菌
2019/7/10
19
沙氏葡萄糖琼脂培养基
用途:用于真菌的分离培养
葡萄糖 40g
琼脂 15~18g
蛋白胨 10g
水 1000ml
除琼脂和葡萄糖外。混合,微温溶解,滤 过。加入琼脂和葡萄糖,溶解,分装,灭
菌。
2019/7/10
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沙氏葡萄糖琼脂培养基
原理:
蛋白胨提供氮源,维生素,生长因子;葡
取玉米粉、吐温80 及蒸馏水500ml, 混合, 65℃加热30 分钟,混匀,用纱布滤过,补足 原水量。取琼脂,水500ml, 混合,加热溶
解。将以上两种溶液混合,摇匀,分装,
灭菌。 2019/7/10
24
白色念珠菌与酵母菌的鉴别
1、酵母菌在显色培养基上不显色,为乳白 色。
2、酵母菌无假菌丝和厚膜孢子 3、酵母菌可发酵蔗糖不能发酵麦芽糖。 以上实验结果和特征可与念珠菌进行鉴别。
呈灰色或奶油色,表面光滑有浓酵 母气味,培养时间稍久则菌落增大,
9
念珠菌在显色培养基上的菌落颜 色
念珠菌
菌落颜色
白色念珠菌
热带念珠菌
克柔念珠菌 光滑念珠菌 其他念珠菌
绿色,翠绿色(直径约 2nm)
蓝色,铁蓝色(直径约 1.5nm) 粉红色(直径约4.5nm) 紫色(直径约2nm) 白色(直径不定)
24~48h
培养物进行染色,镜检及芽管试验
无菌生长 与其菌落形态特征不符的
未检出
16
芽管试验
挑取1%吐温80-玉米琼脂培养基上的培养 物,接种于加有一滴血清的载玻片上,盖 上盖玻片,置湿润的平皿内,置35~37℃、 1~3 小时,置显微镜下观察,可见到由孢 子长出短小芽管。
白色念珠菌快速鉴定培养药敏试剂ppt课件
2019
-
7
2、泌尿科和男科:主要是霉菌性尿道炎和白色念珠 菌性包皮龟头炎。男性包皮内侧是白色念珠菌的增长 部位,其中包皮过长者更易出现白色念珠菌感染。白 念感染后寻常会发生以下的这些症状:初始时皮损为 红斑、丘疹,表面有白色鳞屑,有白色渗出液,境况
可发生小水疱、脓疱和表浅糜烂,伴搔痒及烧灼感。
3. 其他如呼吸科,皮肤科,肿瘤科,感染科,口腔 科等。
2019 2
概述
一)什么是白色念珠菌(以下简称白念)
白色念珠菌是念珠菌的一种,念珠 菌是一种腐物寄生菌,广泛存在于自 然界。是人体正常菌群之一,平时主 要生存于人体的口腔、皮肤、粘膜、 消化道、阴道及其他脏器中。正常人 群白色0%为白 色。且白色的致病性最强。
2019 8
四)常用诊断方法: 诊断生殖器白色念珠菌病除典型的症状、体征
外,实验室检查是必不可少的。
1、一般作分泌物的直接镜检就可以明确诊断, 直接镜检是非常简单的实验室方法。取少许分泌物置 于玻璃片上,加一滴氢氧化钾或等渗的氯化钠溶液, 覆盖上玻片,置于显微镜下,可见到白色念珠菌的孢
子和菌丝。这种方法诊断的准确率为60%--70%。
2019 23
三)标本采集 女性:采集宫颈分泌物,标本要、采集时应先擦去 宫颈口多余粘液,标本采集时用无菌棉拭子在阴道内 1~2cm处取宫管颈泌物。取材时,要在阴道内旋转12次,以便获得适量的样本;
男性:用无菌棉拭子在包皮内侧或阴茎沟部捻转34次取分泌物; 呼吸科、肿瘤科标本取深部痰;
其他标本采集在具体病变部位。
2019 3
近年来,真菌感染的发病率有逐年上升的趋势,美
国国家医院内感染监测中心(NNIS)1993年对美国115
家医院调查发现,20世纪90年代住院患者深部真菌感染 率为20世纪80年代的1.9倍 ,在所有的真菌感染中念珠
念珠菌感染诊断与治疗PPT
汇报人:
单击输入目录标题 念珠菌感染概述 念珠菌感染的诊断 念珠菌感染的治疗 念珠菌感染的预防与控制 念珠菌感染的预后与转归
护理人员:XX医院-XX科室 -XX
念珠菌感染概述
念珠菌感染的定义
念珠菌是一种真菌, 广泛存在于自然界 中
念珠菌感染是指念 珠菌侵入人体引起 的感染性疾病
念珠菌感染可发生 在皮肤、口腔、肠 道等多个部位
念珠菌感染可引起 皮肤瘙痒、口腔溃 疡、腹泻等症状
念珠菌感染的流行病学
念珠菌是一种常见的真菌,广泛存在于自然界中 念珠菌感染主要发生在皮肤、口腔、肠道等部位 念珠菌感染的发病率逐年上升,已成为全球性的公共卫生问题 念珠菌感染的易感人群包括老年人、免疫力低下者、糖尿病患者等
预防措施:保持个 人卫生,避免接触 感染源
患者教育:提高患 者对念珠菌感染的 认识和预防意识
对未来工作的启示
加强卫生意识:保持个人卫生,避免感染 及时治疗:发现感染后,及时进行治疗,避免病情恶化 预防措施:加强预防措施,如使用抗真菌药物等 提高医疗水平:提高医疗水平,提高诊断和治疗效果
THANK YOU
汇报人:
患者年龄、性 别、体质等个 体差异也会影
响预后
转归过程
念珠菌感染中期:症状加重, 可能出现皮肤瘙痒、红肿等 症状
念珠菌感染初期:症状轻微, 可能不易察觉
念珠菌感染后期:症状严重, 可能出现皮肤溃烂、感染扩 散等症状
治疗后:症状逐渐减轻,皮 肤恢复健康,但可能存在复
发风险
康复与随访
康复过程:根据病 情和治疗效果,制 定个性化的康复计 划
念珠菌感染的症状与体征
皮肤感染:红斑、丘疹、 水疱、脓疱等
口腔感染:口角炎、舌 炎、口腔溃疡等
[课件]白色念珠菌PPT
• • • • • •
白色念珠菌的典型特征 显微镜下特征 白色念珠菌菌落形态 鉴定依据 检查步骤 白色念珠菌与酵母菌的鉴别
白色念珠菌的典型特征
• 白色念珠菌菌细胞呈圆形或卵圆形,直径为3~6µm,革兰 染色为阳性,但菌体着色不均匀,以出牙方式繁殖,在适 宜的培养基上出芽生孢子及假菌丝生长,在假菌丝间其末 端形成厚膜孢子。 • 白色念珠菌具有β-硝基半乳糖苷酶,可分解NGL,使对-硝 基苯酚游离,在碱性条件下显色。
2018/12/12
念珠菌在显色培养基上的菌落颜 色
2018/12/12
白色假丝酵母菌在显色培养基上 的颜色和菌落形态
2018/12/12
鉴定依据
• • • • • • 1、菌落特征 2、显色培养基反应 3、厚膜孢子形成 假菌丝末端或侧缘形成典型的厚膜孢子 4、芽管形成 有孢子长出短小芽管 5、生化试验 6、注意与其他常见念珠菌和酵母菌的鉴别。
24~48h
培养物进行染色,镜检及芽管试验
无菌生长 与其菌落形态特征不符的
未检出
芽管试验
• 挑取1%吐温80-玉米琼脂培养基上的培养物,接种于加有 一滴血清的载玻片上,盖上盖玻片,置湿润的平皿内,置 35~37℃、1~3 小时,置显微镜下观察,可见到由孢子长 出短小芽管。 • 若上述疑似菌为非革兰阳性菌,显微镜未见厚膜孢子、假 菌丝、芽管,判供试品未检出白色念珠菌。
念珠菌显色培养基(CHROMagar)
• • • • • • 蛋白胨 10.2g 琼脂 15g 氯霉素 0.5g 灭菌水 1000ml 色素 22.0g 除琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH 值至 6.3±0.2。滤过,加入琼脂,加热煮沸,不断搅拌至琼脂完 全溶解,倾注平皿。
白念珠菌实验开题报告ppt课件
研究背景
1. 研究背景与意义
研究背景
白念的白菌细胞转换成灰菌细胞后能够稳定 welcome to use these PowerPoint templates, New 传代,相反亦然。白菌在系统感染中具有较强 的致病力,灰菌在表皮感染中具有较强的致病 Content design, 10 years experience 力。白菌-灰菌的转换受到基因的调控,转换的 频率受到温度的影响,高温和低温都影响白-灰 菌落的互相转换。 22-27℃:利于白菌细胞→灰菌细胞,灰菌细胞 保持稳定灰菌状态 >27℃:灰菌细胞则迅速转换为白菌细胞,转换 率达100%。
4.2、预期进展
*2015年11月—2016年2月:继续查阅文 献,学习实验方法 *2016年3月—8月:进行实验 *2016年9—2017年4月:数据整理、分 析、撰写论文,课题鉴定、论文答辩
5、参考文献
【1】现在真菌学 【2】Guanghua Huang,Huafeng Wang,song Chou,Xinyi Nie.Bistable expression of EAP2,a master regulator of white-opaque switching in Candida albicans.
2、国内外研究现状
*国外相关的文献报道对白-灰有 调控作用的基因有Efg1、TUP1、WOR1、 NRG1、EAP2、CZF2等【2】。 *调控的通路有RIM101和cAMP信 号通路【3】。 *国内仅有1篇文献提出白-灰转 换的关键基因是WOR1基因【4】。
3、实验设计
实验材料: (1)购买已知基因序列的白念珠菌白 菌细胞菌株及野生型菌株; (2)质粒DNA,剂; (5)缓冲液及其他溶液; (6)培养液和固体培养基; (7)其他试剂。
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结果判定
被检培养基的菌落数与对照培养基菌 落数相比大于70%,菌落形态大小应与 对照培养基上的菌落一致。判该培养基 的适用性检查符合规定。
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抑菌剂效力测定
供试品分类
为了达到试验目的,根据供试品的给药 途径和用途将供试品分为四类,以便标 准的制定和执行,但对于一些抗酸性制 剂和含活生物制剂应考虑会降低有益菌 的生物活性。见表
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表 产品分类
类别
药品
1 类 注射剂、其他非肠道制剂,包括乳剂、 耳用 制剂、无菌鼻用制剂及眼用制剂 2 类 局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于
黏膜的乳剂 3 类 口服非固体制剂(非抗酸制剂) 4 类 非固体抗酸制剂
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菌种和菌液的制备同培养基适用性检查
供试品接种
1、抑菌剂效力可能受试验用容器特征的影响,如 容器的材质、形状、体积及封口的方式等。因此, 只要供试品每个包装容器的装量足够试验用,同时 容器便于按无菌操作的接入试验菌液、混合及取样 等,一般应将试验菌直接接种于供试品原包装容器 中进行贮存。
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结果判断
白色念珠菌在沙氏葡萄糖琼脂培养 基上生长的菌落呈乳白色偶见淡黄色, 表面光滑有浓酵母气味,培养时间稍久 则菌落增大,颜色变深、质地变硬或有 皱摺。若平板上无菌落生长或生长的菌 落与上述菌落形态特征不符,判供试品 未检出白色念珠菌。
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2、如平板上生长的菌落与上述菌落形态特 征相符或疑似,应挑选2~3个菌落分别接 种至念珠菌显色培养基平板上,培养24~ 48小时(必要时延长至72小时)。若平板 上无绿色或翠绿色的菌落生长,判供试品 未检出白色念珠菌。
白色念珠菌检查方法
1、增菌培养 取供试液10ml(相当于供 试品1g、ml、10cm2)直接或处理后 接种至适量(不少于100ml)的沙氏葡 萄糖肉汤培养基中,培养48~72小时。
2、分离培养 取上述培养物划线接种于 沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上,培养 24~48小时(必要时延长至72小时)。
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3、若平板上生长的菌落为绿色或翠绿色, 挑取相符或疑似的菌落接种于1%吐温80玉 米琼脂培养基上,培养24~48小时。取培 养物进行染色,镜检及芽管试验。
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4、芽管试验 挑取1%吐温80玉米琼脂 培养基上的培养物,接种于加有一滴 血清的载玻片上,盖上盖玻片,置湿 润的平皿内,置35~37℃、1~3h, 置显微镜下观察,可见到由孢子长出 短小芽管。
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4、1、2、3类供试品1g或1ml接种菌量为 105~106cfu,4类供试品中1g或1ml接种 菌量为106~108cfu,接种菌液的体积不得 超过供试品体积的0.5%~1% ,充分混合, 使供试品中的试验菌均匀分布。
5、将接种的供试品在试验期间置20~25℃, 避光贮存,贮存温度的变化应尽可能控制 在最小范围,并防止被污染。
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3、所有抑菌剂都具有一定的毒性, 而且在贮存过程中其有效性有可能因药 物的活性成分提高或降低,为保证药品 的质量和用药安全,添加防腐剂的量应 根据制剂本身是否具抗菌活性,保持最 低有效量并在药品包装上注明添加抑菌 剂的名称和数量。
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培养基
1、胰酪胨大豆肉汤培养基 2、胰酪胨大豆肉汤培养基 3、 沙氏葡萄糖肉汤培养基
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2、若因供试品的性状或每个容器装量 等因素需将供试品转移至无菌容器时, 该容器的材质不得影响供试品的特性 (如吸附作用),特别应注意不得影响 供试品的PH,PH对抑菌剂的活性影响 很大,同时容器的口径大小应便于供试 品的进出及混匀。
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3、 取包装完整的供试品至少5份,直接接 种试验菌,或取适量供试品分别转移至5个 适宜的无菌容器中(若试验菌侏数超过5株, 应增加相应的供试品份数),每一容器接 种一个试验菌。
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培养基的适用性检查 菌种
铜绿假单胞菌pseudomonasaeruginosa) 金黄色葡萄球菌(staphycococcus) 白色念球菌(Candida albicans)] 黑曲霉(Aspergillus niger) 大肠埃希菌(Escherichia Coli) 菌液的制备同控制菌培养基适用性检查
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结果判断
1、抑菌剂效力根据各间隔时间测定的菌数 1.0 lg值相对于初始值(0时菌数1.0 lg值)减 少程度进行评价(见表),试验结果按有效 数字的修约规则进舍,保留一位小数点。结 果符合表,要求可判断该产品抑菌效力符合 规定。
Байду номын сангаас
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存活菌数测定
由于供试品中含有抑菌活性,所以菌数 测定方法应进行验证。根据菌数测定结果, 计算1ml(g)供试品各试验菌所加的菌数及 各间隔时间的菌数,并换算成lg值。
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测定细菌用胰酷胨大豆琼脂培养基,测定真菌 用沙氏葡萄糖琼脂培养基
根据产品类型,在规定的接种时间,分别从上述 每个容器中取供试ml(g),用pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液稀释成1:10、1:102、1:103等 稀释级。
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适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 各50~100cfu,分别注入无菌平皿中,立即倾注 胰酷胨大豆琼脂培养基,每株试验菌平行制备2 个平皿,混匀,凝固,置30~35℃培养48小时, 计数;取白色念珠菌、黑曲霉各50~100cfu,分 别注入无菌平皿中,立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培 养基,每株试验菌平行制备2个平皿,混匀,凝 固,置20~25℃培养72小时,计数;同时,用 对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
5、若上述疑似菌为非革兰阳性菌,显 微镜未见厚膜孢子、假菌丝、芽管, 判供试品未检出白色念珠菌。
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抑菌剂效力测定
概述
1、抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非 灭菌制剂中抑菌剂的活性,以评价最终产品 的抑菌效力,同时也可用于指导生产企业在 制剂研发阶段抑菌剂的确定。
2、如果药物本身不含有充分的抗菌活性, 那么应根据制剂特性(如水溶液制剂)添加 适宜的抑菌剂,以防止制剂在正常储存和使 用过程中可能发生微生物污染和大量繁殖尤 其多剂量包装的制剂,避免因药物微生物污 染及对患者造成伤害。