谷丙转氨酶活力的测定
血清中谷丙转氨酶活力测定结果
血清中谷丙转氨酶活力测定结果血清中谷丙转氨酶（ALT）活力测定是一种常见的实验室检测方法，常用于评估肝功能和诊断肝病。
本文将介绍血清中谷丙转氨酶活力测定结果的相关知识。
血清中谷丙转氨酶活力（ALT）是指血液中存在的一种酶的活性，通常用于评估肝脏功能的状况。
正常情况下，谷丙转氨酶的活力是很低的，一般小于40单位/升。
当肝细胞受损或病变时，会释放ALT，使其活力升高。
高浓度的ALT通常与肝脏病变有关，例如肝炎、肝硬化、脂肪肝、药物性肝病等。
此外，高ALT水平还可能与其他疾病有关，例如急性胰腺炎、心肌梗塞、重型结核等。
因此，如果血清中ALT活力超过正常范围，应及时进行检查和诊断。
血清中ALT测定通常是使用血清学方法进行的。
一般情况下，医师会在胳膊上绑上一条缚带，并在手腕或肘部的静脉内取一小样血液。
样本会送到实验室进行分析。
实验室会使用化学试剂和仪器来测量血清中ALT的活力。
结果会以单位/升（U/L）的形式报告。
正常情况下，成人男性的ALT浓度应在10-40 U/L之间，女性的ALT浓度应在7-35U/L之间。
但这些数值还受到年龄、体重、性别和肝脏状态等因素的影响。
因此，在解读ALT浓度时，医生还需要考虑患者的其他情况。
ALT浓度的升高程度也是确定病情的重要指标之一。
一般来说，当ALT浓度超过正常范围的两倍以上时，就可以诊断为肝炎或其他肝病。
此外，还有一种称为谷草酰转移酶（AST）的酶，也与肝脏有关，但其升高程度不如ALT明显。
需要注意的是，虽然ALT浓度升高可能表明肝脏病变，但不能单独确定肝病的类型和严重程度。
医生还需要进行其他检查和评估，例如肝脏超声、CT扫描、肝组织活检等，以帮助确定具体的病情。
总之，血清中ALT活力测定是一种常见的实验室检测方法，通常用于评估肝脏功能和诊断肝病。
需要注意的是，结果需要结合患者的其他情况进行解读，以便更准确地诊断和治疗肝病。
实验六肝脏谷丙转氨酶活力测定
肝脏谷丙转氨酶活力测定进入实验室要注意的问题安全第一，在实验室中使用挥发性试剂时应在通风橱中进行，以免发生中毒事件；不得在实验室中随意使用明火，因为实验室中有许多易燃易爆药品，使用明火可能引起火灾或引发爆炸事件；不得在实验室吃东西，实验结束后也应将手洗净再吃东西。
在实验室中不得嬉戏打闹，更不得用实验药品互相开玩笑。
实验中使用药品应尽量节约，不得浪费药品，未使用完的药品因倒人废液缸或指定的容器中，切不可倒入原试剂瓶以免污染试剂。
实验完成之前不能离开实验室，如有特殊原因要离开需经实验室负责人批准才能离开。
每个实验台内的各种仪器的摆放顺序要牢记，离开实验室前要将仪器按顺序摆放好。
养成一个好的习惯。
一．实验目的了解转氨酶的性质及临床意义，并掌握谷丙转氨酶活力的测定方法二．实验原理在氨基酸的分解代谢过程中，联合脱氨基为大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与氧化脱氨基的作用偶联而完成。
本实验以丙氨酸和ā-酮戊二酸作为谷丙转氨酶的作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作为辅酶，在一定条件及时间作用后来测定所生成的丙酮酸的含量来确定其酶的活力。
丙酮酸能与2，4二硝基苯肼结合，生成丙酮酸-2，4二硝基苯腙，后者在碱性条件溶液中呈棕色，基吸收光谱的峰为439-530nm，可用于测定丙酮酸的含量。
ā--酮戊二酸与能与2，4二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中的吸收光谱与丙酮酸二硝基苯肼稍有差别，在520nm波长处ā--酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远比丙酮酸2，4二硝基苯腙为低，因此在520nm处吸光度增加的程度与反应体系中的丙酮酸和ā--酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系。
故可籍此可测定谷丙转氨酶的活力。
三、实验器材容量瓶100ml 4个500ml 2个；电子天平；玻璃棒；研钵；试管5支；试管架；移液管0.5ml 2支；1ml 2支；5ml 1支；滴管1支；分光光度计，比色皿4个；四.实验试剂1标准丙酮酸溶液：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于100ml 0.05mol/L H2SO4中，现用现配。
第三章实验二肝匀浆中谷丙转氨酶_GPT_活力的测定
H2 O
OH
红棕色
A520nm
主要仪器、试剂、材料
剪刀，天平，组织捣碎机，水浴锅，分光光度计（520nm）， 比色皿，计算纸，移液管。
新鲜肝脏；标准丙酮酸（丙酮酸钠62.5 mg，溶于100mL 0.05M 的H2SO4中）；0.1M PBS溶液（13.97g K2HPO4和2.69g KH2PO4溶于 1L蒸馏水中，pH7.4）；谷丙转氨酶底物（0.9g L-Ala和29.2mg α-酮 戊二酸，溶于上述PBS溶液中，然后用1M NaOH调pH 7.4，继续用 PBS稀释至100mL，4℃保存）；0.02% 2,4-二硝基苯肼溶液（20mg 2,4-二硝基苯肼溶于1M HCl溶液中，并用1M HCl定容至100mL）； 0.4 M NaOH；生理盐水。
实验步骤
1. 肝匀浆处理：取新鲜肝脏10g，先用生理盐水洗净，滤纸吸干水，再 用预冷的0.1M pH7.4 PBS捣碎，并定容至100 mL。 2. 谷丙转氨酶活力的测定 1）取4支试管，标注名称，按照下表操作。
试管
试剂 (mL) 谷丙转氨酶底物
肝匀浆
2.4-二硝基苯肼 谷丙转氨酶底物
0.4M NaOH A 520nm
2）计算酶活力 本法规定：酶在37℃ 与底物作用30分钟，产生2.5μg 丙酮酸为一个 谷丙转氨酶活性单位。 3. 计算：每g 肝脏谷丙转氨酶活力单位（U/g）
D = （A—B）× 500 × 100 S ×2.5×10
说明： A：样品吸光值 B：对照吸光值 S：标准吸光值 500：标准丙酮酸浓度 2.5：谷丙转氨酶换算单位 100：100mL肝匀浆 10：10g肝
问题：如何测定谷丙转氨酶的活力？
实验24. 肝匀浆中谷丙转氨酶活力的测定
谷丙转氨酶测定方法
谷丙转氨酶测定方法一、赖式比色法赖氏法并没有自己的酶活为单位定义。
作者以当时卡门氏的速率法为准，测得多份不同ALT活力血清的ALT卡门氏单位。
然后在赖氏比色法条件下，测得各份血清反应显色的吸光收值。
将每份血清的卡门氏单位和对应比色法吸光值在坐标纸上作图。
经过大量实验，对所有实验点以最佳曲线拟合，形成了比色法在某指定比色计上的标准曲线。
坐标横轴为卡门氏单位，纵轴为吸光值，比色法结果和卡门氏速率法结果一致。
继后作者以底物溶液及丙酮酸标准溶液，按照酶反应实际情况配制成不同浓度的丙酮酸标准溶液系列与2．4二硝基苯肼显色，并与速率法的结果比较。
经多年反复实验，最后作者正式报告可通用于各种比色计的结果为ALT28卡门单位的鼍清在比色法条件下产生相当于0．1μmol丙酮酸，ALT57卡门单位的血清产生相当于0．2μmol丙酮酸，ALT97卡门单位? 的血清产生相当于0．3μmol丙酮酸。
这样就使赖氏法标准曲，线上丙酮酸量和对应卡门单位确定下来。
1970年将曲线延伸至150卡门单位。
赖氏法报告的结果与速率法结果一致。
没有条件采用速率法的实验室可以采用此法。
（一）赖氏比色法测定血清ALT1、试剂（1）Imol／L磷酸氢二钠：称取磷酸氢二钠(含两个结晶水)17.6g溶解于水中，并加水至1000ml，冰箱内保存。
（2）0.1mol／L磷酸二氢钾溶液：称取磷酸二氢钾13.6g溶解于水中，加水至1000ml，冰箱内保存。
（3） 0.1mol／l磷酸缓冲液(pH7.4)：将420ml 0.1ml／L磷酸氢二钠溶液和80ml 0.1mol／L磷酸二氢钾溶液混匀，置冰箱内保存。
（4）底物缓冲液(DL—丙氨酸200mmol／L，α-酮戊二酸2m—mol／L)：精确称取1.79g DL-丙氨酸和29．2mgα-酮戊二酸，先溶于约50ml 0.1mol／L磷酸缓冲液中，用lmol／L氢氧化钠(约0.5m1)调到pH7.4，再加磷酸缓冲液至100ml，置冰箱保存，可稳定两周。
实验十三氨基移换反应——谷丙转氨酶活性的测定（纸层析法）
实验十三氨基移换反应——谷丙转氨酶活性的测定（纸层析法）一、目的进一步理解转氨基作用。
学习应用纸层析法鉴定氨基移换反应。
二、原理转氨基作用是指在转氨酶的催化下α-氨基酸和α-酮酸之间的氨基转移作用。
转氨酶广泛存在于生物体内，目前已发现的转氨酶至少有50种以上，其辅酶均为磷酸吡哆醛，酶反应的最适pH为7.4。
生物体内分布最广、活力最强的转氨酶有两种：一种为谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶，GPT）主要存在于肝脏；另一种为谷氨酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶，GOT）在心肌中活力最大，其次在肝脏。
GPT⎯⎯→+α⎯−丙氨酸酮戊二酸丙酮酸谷氨酸+GOT⎯→⎯⎯+α草酰乙酸天冬氨酸酮戊二酸谷氨酸+−正常情况下转氨酶主要存在于细胞中，人及动物的血清中含量很少，活性很低。
而当组织细胞受到损伤（如发生肝炎、心肌梗死等病变）时，这些细胞中的转氨酶就会释放到血液中去，此时血清中转氨酶的含量及活性均显著增加。
因此转氨酶活性的测定在临床诊断上有重要意义。
三、仪器、试剂与材料剪刀、镊子、研钵、大烧杯、试管及试管架、吸量管、漏斗、滤纸、培养皿、表面皿、酒精灯、喷雾器、恒温水浴箱、烘箱、离心机。
1%谷氨酸溶液、1%丙酮酸钠溶液、0.1%碳酸氢钾溶液、0.025%溴乙酸溶液、2%醋酸溶液、0.9%氯化钠溶液、标准谷氨酸溶液、标准丙氨酸溶液、酚饱和水溶液（扩展剂）、0.1%水合茚三酮正丁醇溶液（显色剂）。
兔肝、海砂。
四、操作1、肝匀浆液制备在研钵中加入兔肝1g＋0.9%氯化钠3ml＋海砂200mg→置于放有冰水的大烧杯上面，研磨成匀浆→3000r/min离心5min→弃沉淀、得到肝糜匀浆液。
2、氨基移换反应：取干燥试管2支，分别标明测定管与对照管。
实验管1 对照管21%谷氨酸溶液（ml） 0.5 0.51%丙酮酸钠溶液（ml） 0.5 0.50.1%碳酸氢钾（ml） 0.5 0.50.025%溴乙酸（ml） 0.25 0.25混匀后加入肝糜提取液（ml） 0.5 0.5立即酒精灯加热或沸水浴2~3min加盖胶塞，置45℃水浴保温1h，并时常振荡2%醋酸（滴） 4 4 沸水浴中（或酒精灯）2~3min（终止反应、沉淀蛋白）离心（或过滤），收集上清液做层析使用3、层析：取3＃滤纸一张，用圆规作半径1cm的圆，通过圆心作两条相互垂直的线，与圆相交的4点作为点样位置，在滤纸圆心处剪一小孔φ2mm。
肝脏谷丙转氨酶活力测定
实验八 肝脏谷丙转氨酶活力测定实验类型：验证性实验相关知识1. 酶活力：2. 酶活力单位(即酶含量的多少)国际单位 习惯单位：谷丙转氨酶在37度与底物作用30min 后，能产生2.5ug 的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位 3.转氨酶4 谷丙转氨酶一、 实验目的1． 了解转氨酶的性质及临床意义 2． 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法二、实验原理丙氨酸及α－酮戊二酸作用为谷丙转氨酶的作用底物，利用内源性磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件下及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定酶活力。
丙酮酸能与2,4－二硝基苯肼结合，生成丙酸－2,4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439~530nm ，可用于测定丙酮酸的含量。
α－酮戊二酸也能与2,4－二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱为与丙酸－2,4二硝基苯腙的吸光度有差别，在520nm 波长比色时，丙酸－2,4二硝基苯腙吸光度高出3倍。
在520nm 处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α－酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系，故可以测定谷丙转氨酶的活力。
三、实验器材、试剂、材料 1． 新鲜猪猪脏2． 722型分光光度计、剪刀、吸管3． 标准丙酮酸溶液；谷丙转氨酶底物；0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH7.4）；0.02%2,4－二硝基苯肼；0.4mol/L NaOH 溶液2 ＋辅基为磷2 2 + + ‘ ‘四、实验操作步聚1.肝匀浆制备（1）将猪肝脏用生理盐水冲洗，滤纸吸干，称取肝脏0.25g，剪成小块，置于玻璃匀浆管内（或小研砵中），加入2.25ml预冷的pH7.40.1%mol/L磷酸缓冲液，制成10%肝匀浆。
（每四组1份）（2）吸取肝匀浆0.1ml于另一试管中，加入预冷的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）4.9ml摇匀，为稀释肝匀浆（稀释50倍）（每四组1份）2.谷丙转氨酶活力测定（每组做1份）取试管4支按下表加液五、实验结果与讨论2.每毫升稀释肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（谷丙转氨酶活力计算：规定酶在37度与底物作用30min后，能产生2.5ug的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位）3.每克肝脏谷丙氨酶的活力单位。
肝脏谷丙转氨酶活力测定
或 组织捣碎机 2. 37℃水浴 3. 分光光度计 4.比色皿
四. 实验试剂
1.标准丙酮酸 2.谷丙转氨酶底物 3.0.1M pH7.4 PB 4.0.02% 2,4-二硝基苯肼溶液 5.0.4M NaOH 6.新鲜肝脏（购买或取活的小白鼠肝脏）
五、实验步骤
1.肝匀浆
COOH CH 2 2 C O COOH COOH CH 2 CH 2 C H N H2 COOH GPT CH
C H3 CHNH 2 COOH
C H3 C O COOH N O2 H2N H N
2,4-二硝基苯肼
CH 3 C N COOH H2 O N O2 NH
N O2 N O2
丙酮酸二硝基苯腙
3.计算
每ml肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（U/ml） D = （A—B）× 2 S ×2.5 说明：A：样品A 520nm B：对照A 520nm 2：标准丙酮酸浓度 2.5：谷丙转氨酶换算单位
S：标准A 520nm
五、实验步骤
试管 试剂(ml) 谷丙转氨酶底物 肝匀浆 2.4-二硝基苯肼 谷丙转氨酶底物 0.4M NaOH A 520nm 测定管 （A） 0.5 标准管 （S） 0.5 对照管 （B） —— 空白管 —— 0.1（H2O） 0.5 0.5
称取0.5g 肝脏，剪成小块，加入预冷的pH7.4的PBS 4.5ml，在冰水浴中制成 10%的匀浆， 4000rpm冷冻离心10分钟后保存在冰水中备用。
2. 谷丙转氨酶活力的测定
1）取4支试管，标注名称，按照下表操作 2）计算酶活力 本法规定：酶在37℃ 与底物作用30分钟，产生2.5μg 丙酮酸为一个谷丙转 氨酶活性单位。
37℃ 水浴5 分钟 0.1 0.1（标准丙酮酸） 0.1 混匀后 37℃水浴 准确保温30分钟 0.5 0.5 0.5 —— —— 0.5 混匀后 37℃水浴 准确保温20分钟 各加5ml ，混匀，静置10min，读A 520nm
肝脏中转氨酶活力的测定
实验九肝脏中转氨酶活力的测定一、实验目的1. 了解转氨酶的性质和临床意义；2. 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法二、实验原理本实验以丙氨酸的氧化脱氨基为例，分别测定谷丙转氨酶，谷氨酸脱氢酶活性外，又通过抑制剂观察肝组织中的联合脱氨基作用。
在谷丙转氨酶的催化下，丙氨酸和α-酮戊二酸作用生成丙酮酸和谷氨酸。
次反应可逆，平衡点近于1.0无论正向反应或逆向反应皆可用于测定此酶的活性，既可测定所产生的氨基酸，也可以测定生成的酮酸，因此可有多种测定方法。
本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸作为谷丙转氨酶作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作为辅酶，在一定条件及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定其酶活力。
丙酮酸能与2,4-二硝基苯肼结合，生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收峰为439-530nm，可用于测定丙酮酸的含量。
α-酮戊二酸也能与2,4-二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱与丙酮酸二硝基苯腙有差别，在520nm波长比色时，α-酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远较丙酮酸二硝基苯腙为低（约相差3倍）。
经转氨基作用后，α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加，因此在波长为520nm 处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸和α-酮戊二酸的摩尔浓度呈线性关系，故可借此测定谷丙转氨酶的活力。
三、实验材料、试剂和仪器（一）材料与试剂猪肝脏、乙醇、0.4mol/LNaOH标准丙酮酸溶液（1mL 相当于500μg）：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于100mL 的0.05mol/L的H2SO4中，此液需临用前配制。
谷丙转氨酶底物：称取L-丙氨酸0.90g 及α-酮戊二酸29.2mg，先溶于pH7.4 的0.1mol/L 磷酸缓冲液中，然后用1mol/L NaOH 调至pH7.4，再加pH7.4 的0.1mol/L 磷酸缓冲稀释至100mL，贮藏于冰箱内，可保存一周。
（试验了一下pH 接近7.5，中间未调整pH 值）0.1mol/L 的磷酸缓冲液（pH7.4）：称取13.97gK2HPO4（如果是K2HPO4·∙H2O，则需称取18.31g）和2.69gKH2PO4 溶于1000mL 蒸馏水中。
分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力实验原理的教学
在医学实验中，测定血清谷丙转氨酶（AST）活力是一项常见的实验项目。
AST是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，其活力的变化与肝脏疾病、心肌梗塞等疾病有关，因此对其活力的测定具有重要的临床意义。
分光光度法是一种常用的测定AST活力的方法，其原理简单、灵敏度高，被广泛应用于实验室教学和临床实验中。
本文将介绍分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的教学方法及实验原理。
二、实验原理1. 原理概述分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的原理是通过测定NADH在340nm处的吸光度变化来间接测定AST的活力。
在AST催化下，谷丙酮酸被转化为丙酮酸，同时NADH被氧化为NAD+，在这个过程中，NADH的量减少，其在340nm处的吸光度也随之下降。
通过测定NADH在340nm处的吸光度变化可以间接测定AST的活力。
2. 实验步骤（1）样品制备：将待测血清标本离心沉淀，取清澈液体作为实验样品。
（2）反应体系配置：在离心管中依次加入0.1mol/L磷酸缓冲液、0.1mol/L谷氨酰胺、0.005mol/L的NADH和待测血清标本，将混合液置于37℃水浴中预温。
（3）光度计调零：将光度计调零，设置吸光度波长为340nm。
（4）反应开始：向预温的混合液中加入谷丙酮酸，开始计时测定吸光（5）记录数据：间隔一定时间（例如30秒）记录一次吸光度值，直至吸光度不再发生变化。
三、教学方法1. 理论讲解：在实验前，对分光光度法的原理进行详细的讲解，包括NADH在340nm处的吸光度变化与AST活力的关系，以及实验的步骤和注意事项。
2. 演示操作：老师可以进行实际的操作演示，展示如何配置反应体系、如何操作光度计、如何记录数据等。
3. 学生操作：让学生分组进行实验操作，指导学生合理分配实验任务，注意安全操作，并及时解答学生在实验中遇到的问题。
4. 数据分析：引导学生利用实验数据进行分析，计算得出血清谷丙转氨酶活力的结果，并进行讨论和总结。
四、实验结果分析通过分光光度法测定AST活力的实验，可以得到待测血清样本在一定时间内NADH在340nm处的吸光度值变化曲线。
血清转氨酶(GPT、GOT)活性的测定
血清转氨酶（GPT、GOT）活性的测定【原理】酶的活性即酶的催化效能，在一定条件下酶活性的高低代表酶的含量的多少，故酶活性的测定也即相当于酶含量的测定。
酶的活性通常都是在一定条件下（最适温度、最适的pH、必要的激动剂等），一定的时间内，测定该酶所催化的反应系统中底物的消耗量或产物生成量来确定的。
血清谷丙转氨酶（SGPT）及血清谷草转氨酸（SGOT）分别以丙氨酸和α-酮戊二酸；天冬氨酸和α-酮戊二酸为底物，催化它们进行如下反应：在SGOT催化下所生成的草酰乙酸又可在β脱羧酶和枸橼酸苯胺作用下脱羧，生成丙酮酸，而丙酮酸则可与2，4二硝基苯肼作用，生成丙酮酸2，4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈棕色，在520nm比色时，α-酮戊二酸二硝基苯腙之光吸收远丙酮酸二硝基苯腙为低。
在反应后，α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加，故520nm处光密度增加之程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二酸之克分子比例成线性关系。
一般临床上用以测定SGPT及SGOT活性的方法有改良的穆氏法、金氏法及赖氏法，这些方法都是基于上述原理而设计的，操作也基本相同，只是这些实验的某些条件、活性单位的规定和计算有所差异。
改良的穆氏法（Mohun）规定血清在37（pH7.4）的条件下，与底物作用30分钟后，每生成2.5μg丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
金氏法（King）则规定在同上条件下，与底物作用60分钟后，每生成1μM丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
赖氏法（Reitman）本身并未对转氨酶活性单位提出规定，他是用卡门氏法（Karman）来定单位的。
卡门氏法是在紫外分光光度计中用1毫升血清，反应溶液总量为3毫升，在340nm波长下，用内径为1.0cm的比色皿，25℃ 1分钟内所产生的丙酮酸，在乳酸脱氢酶作用下，使NADH变成NAD+，而引起光密度下降0.001为1个转氨酶活性单位。
而赖氏法则是用卡门氏法所测出的单位数相当于赖氏法所产生的丙酮酸量的相关系数，套用卡门氏单位而来。
转氨酶测量实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的意义。
2. 学习转氨酶活力测定的原理和方法。
3. 掌握分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的实验操作。
二、实验原理转氨酶（Transaminase）是一种催化氨基酸与α-酮酸之间氨基转移的酶，广泛存在于生物体内。
在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中具有重要作用。
谷丙转氨酶（ALT）是其中一种重要的转氨酶，主要存在于肝细胞内，其活性在肝脏病变时显著升高。
本实验采用分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力。
谷丙转氨酶作用于丙氨酸和酮戊二酸，生成丙酮酸和草酰乙酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙，加碱处理后呈棕色。
通过测定棕色溶液的吸光度，可以计算出谷丙转氨酶的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：丙氨酸、酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼、碱液、标准曲线试剂、血清样本等。
2. 实验仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。
四、实验方法1. 准备标准曲线：将标准曲线试剂按照说明书要求配制成一系列浓度的丙酮酸溶液，并测定其吸光度，绘制标准曲线。
2. 准备样品：将血清样本按照说明书要求进行处理，制备成待测样品。
3. 按照实验步骤进行实验操作，包括：a. 加入丙氨酸和酮戊二酸至试管中；b. 加入待测样品；c. 加入2，4-二硝基苯肼；d. 加热反应；e. 加碱处理；f. 测定吸光度。
4. 根据标准曲线计算谷丙转氨酶活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线：根据实验数据绘制标准曲线，线性范围为0.1-1.0mg/L。
2. 谷丙转氨酶活力测定：根据实验数据，计算谷丙转氨酶活力。
六、讨论1. 实验结果：本次实验成功测定了血清谷丙转氨酶活力，结果与预期相符。
2. 讨论：a. 转氨酶在生物体内的作用：转氨酶在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中具有重要作用，对维持生物体的正常代谢具有重要意义。
b. 谷丙转氨酶活力测定的意义：谷丙转氨酶活力测定是临床诊断肝脏疾病的重要指标，对肝炎、心肌梗死等疾病的诊断具有重要意义。
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在代谢过程中的重要作用。
2. 学习转氨酶活力测定的原理和方法。
3. 掌握分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的操作技能。
二、实验原理转氨酶是一种广泛存在于生物体内的氨基转移酶，能催化氨基酸的氨基与酮基酸的酮基互换。
在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。
其中，谷丙转氨酶（ALT）是人体内最重要的转氨酶之一，主要存在于肝脏细胞内。
当肝脏发生病变时，如肝炎、心肌梗死等，血清中ALT活力常显著增加，因此在临床诊断上，ALT活力的测定具有重要的意义。
本实验采用分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力，通过检测ALT催化丙氨酸与酮戊二酸反应生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应生成的丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，来计算酶的活力。
三、实验材料1. 仪器：分光光度计、离心机、恒温水浴锅、移液器、试管等。
2. 药品与试剂：丙氨酸、酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼、NaOH、标准ALT溶液、血清样本等。
四、实验步骤1. 准备工作：将所有药品与试剂按照实验要求进行配置，确保实验所需的药品与试剂质量合格。
2. 标准曲线制作：将标准ALT溶液按照实验要求进行稀释，制成一系列不同浓度的标准溶液。
分别取等体积的标准溶液和2，4-二硝基苯肼溶液，混合后加入NaOH，进行显色反应。
在560nm波长下，测定吸光度值，以ALT浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 实验测定：取血清样本，按照实验要求进行稀释，分别加入丙氨酸、酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼和NaOH，进行显色反应。
在560nm波长下，测定吸光度值。
4. 数据处理：将实验测定的吸光度值代入标准曲线，计算出血清ALT活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线制作：根据实验数据，绘制标准曲线，线性范围为20～100U。
2. 实验测定：根据实验数据，计算血清ALT活力，结果为X U/L。
3. 结果分析：根据血清ALT活力值，判断肝脏功能是否正常。
实验十二 谷丙转氨酶活性检测
【思考题】
1.血清中谷丙转氨酶的测定有何临床意 义？ 2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？ 为什么要避免溶血？ 3.分析实验误差产生的原因
三、仪器与试剂
* 仪器 1. 5×15cm试管、刻度吸量管。 2. 恒温水浴、离心机、721型分光光度计。 * 试剂 1.0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液 ⑴0.1mol/L磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO414.22g或Na2HPO4· 2H2O17.8g溶 解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml,4℃保存。 ⑵0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：称KH2PO413.61g溶解dH2O中，稀释至1000ml, 4℃保存。 ⑶将0.1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0.1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即 为0.1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。加氯仿数滴，4℃保存。
3、血清样品谷丙转氨酶活性的测定 取4支干燥洁净试管，按下表操作（血清和底物溶液 事先保温10min）：
五、实验结果
1、将得出的吸光值在标准曲线上查得酶活性 2、计算：
丙酮酸物质的量（μmol）
SGPT活性单位/100mL=
时间（min）
×1000
六、注意事项
1. 在测定SGPT时，应事先将底物、血清在37℃水浴中 保温，然后在血清管中加入底物，准确记时。 2. 标准曲线上数值在20~500U是准确可靠的，超过 500U时，需将样品稀释。 3. 转氨酶只能作用于α －L－氨基酸，对D－氨基酸无 作用。实验室多用α －DL－氨基酸（较L－氨基酸 价廉），若用L－氨基酸，则用量减半。 4. 溶血标本不宜使用，因血细胞中转氨酶活力较高， 会影响测定效果。 5. 血清样品的测定需在显色后30分钟内完成。
9. 操作中加 0.4N NaOH液时，需以较慢速度加入， 并且边加边摇匀加快时则a一戊酮二酸引起的发色
谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定
谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定一、［实验目的］1.用纸层折法观察肝脏丙转氨酶ALT的转氨作用；2.用分光光度法测定血清丙转氨酶的活力；3.学习治疗检测SGPT的方法及原理；4. 了解检测肝损伤模型的制备及SGPT在科研中的应用。
二、［仪器与试剂］1.实验材料动物肝脏2.实验试剂(1) 0.9%NaCl 溶液(2)海砂(3)1%谷氨酸溶液(1%KOH溶液中和)(4)1%丙酮酸钠溶液(用1%KOH溶液中和)(5)0.1%KHCO廨液3(6)0.025%—澳乙酸溶液(用1%KOH中和)(7)2%乙酸溶液(8)酚的饱和水溶液：将2份酚和2份水(按重量计算)混合，放入分液漏斗中，振荡。
静止24h以后分层，将下部酚层放入瓶中备用。
新配制的酚展层剂可以反复使用1周。
(9)0.1%水合茚三酮的正丁醇溶液(10)0.1%标准谷氨酸溶液(11)0.1%标准丙氨酸溶液(12)1%KOH 溶液谷丙转氨酶活性的鉴定（纸层析法）一、［实验原理］观察肌肉糜中谷丙转氨酶所催化的氨基移换反应。
通过纸层析法检查底物谷氨酸的减少和产物丙氨酸的生成。
为防止丙酮酸被肌肉糜中的其它酶所氧化或还原，在反应系统中加入了抑制剂澳乙酸。
二、［实验操作］1.谷丙转氨酶提取液制备：2g肝脏+0.9%NaCL 6mL+海砂200mg，在低温下，研磨成浆，用稀薄的脱脂棉过滤，得提取液（滤液不清）。
2.转氨作用沸水浴2min，使蛋白质完全沉下，过滤，作层析3.纸层析操作方法取圆形层析滤纸1张，在圆心处用圆规绘出直径为3cm的同心圆（滤纸不可以折），通过中心将滤纸绘成四等分扇形。
用毛细管点样2-4次（直径不超过2mm），在滤纸的圆心上剪一小孔，直径约1-2mm，取一小滤纸条，将下端剪成刷状，在卷成灯芯插入圆形小孔，不能使灯芯突出纸面，将圆形滤纸平放在盛有层析液（水饱和酚）培养皿上，使灯芯向下与溶剂接触，用大小相同的培养皿盖在滤纸上，溶剂通过灯芯上升到滤纸上向四周展层，直到溶剂前沿移至距滤纸边缘约1cm处时停止（展层时间为1h），80-100℃烘箱干燥，喷洒水合茚三酮的正丁醇溶液，80-100℃显色。
血清谷丙转氨酶活性的测定
2．GPT底物液
称取分析纯L-丙氨酸1.78g,α-酮戊二酸29.2mg,先用 50mL磷酸盐缓冲液溶解,然后用1mol/L NaOH校正pH 至7.4（约0.5mL）,再加磷酸盐缓冲液至100ml,加氯仿 数滴，防止变质。
3．2.0mmol/L丙酮酸标准液 4．0.4mol/L NaOH溶液 5．1.0mmol/L 2，4-二硝基苯肼溶液
【实验原理】
ALT催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移,生成丙酮 酸和谷氨酸,生成的丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸 2,4-二硝基苯腙,在碱性条件下显红棕色，颜色的深浅与丙酮酸 含量成正比。根据丙酮酸的生成量，即可计算GPT活性的大小。 α-酮戊二酸也能与2,4-二硝基苯肼反应生成相应的苯腙， 在碱性条件下显色。两种苯腙的吸收光谱有差异，在520nm处 比色时，丙酮酸2,4-二硝基苯腙的光密度远比α-酮戊二酸苯腙 高。反应30min后， α-酮戊二酸量减少而丙酮酸量增加 ，在 一定范围内，520nm处光密度增加的程度与反应体系中丙酮酸 和α-酮戊二酸的摩尔比例呈线性关系。
【目的要求】
1.了解血清谷丙转氨酶活力单位的定义。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活力测定的具体操作方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活力测定的临床意义。
GPT酶活力单位
卡门首先研究了GPT酶活力的测定方法，并定义了
酶的活力单位。 原理
活力单位：1ml血清（反应溶液总量为3ml）,在25℃1min中内生成的 丙酮酸，在乳酸脱氢酶催化下，使NADH+H+变成NAD+,在340nm处， 用内径为1.0cm的吸收池，光密度每下降0.001为1个氨基酸转移酶活 力单位。
【操作步骤】
标准曲线绘制 取试管5支，按下表操作
实验七.血清谷丙转氨酶(S-GPT)活性测定
一、实验原理
血清谷丙转氨酶（S-GPT）催化下列反应：
在足量底物条件下，生成产物越多表明酶活性越大，酶浓度越 高。一般以在一定时间内丙酮酸的生成量代表S-GPT活性的大小。
二、实验操作
赖氏法测定S-GPT活力：取干净试管3支，按下表操作： 加入物 测定管 标准管 空白管
谷丙转氨酶底物溶液 血清 丙酮酸标准液（２umol/mL） 0.1mol/L磷酸缓冲液 0.５ 0.1 0.５ 0.１ 0.５ 0.１
在蛋白质的合成与分解及糖，脂肪代谢中有何重要
作用？
2. 3. 4. S-GPT活性测定二次保温有什么意义？ 影响酶促反应的因素有那些？ 本实验直接测定物S-GPT)活性测定
生化与分子生物学教研室
注意事项
1. 2. 3. 4. 5. 6. 考试时间90分钟 血清样品每人一支，并记录编号 移液器及Tip头对应使用，正确操作 登记学号、姓名、血清编号、A测、A标、计算结果及实验报告 的平均成绩 每位同学书写当次实验报告包括思考题，并及时清洗自己所用 的器皿，并将试剂、器皿正确归位 值日生负责当次实验室整体卫生
混匀，３７℃水浴预温１０min
2,4-二硝基苯肼溶液
0.1mol/L ＮaOH
0.５
５.0
0.５
５.0
0.５
５.0
混匀，３７℃水浴保温２０min
A520nm波长处比色 计算公式：S-GPT活性单位%= A测/A标×57
三、思考题
以下思考题任选2个作答
1.
什么叫转氨基作用？根据所学理论阐明转氨基作用