外周血的NK细胞分离培养

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NK细胞培养技术之纯因子培养

NK细胞培养---纯因子培养NK细胞培养，特别是纯因子形式的NK细胞培养，普遍认为比较难。

不是细胞数上不去，就是阳性率上不去。

友康生物作为中国细胞治疗领域的无血清培养领先企业。

持续多年NK细胞培养的理论研究及实践应用。

在NK细胞的培养方面，有的成果已经完全达到了让人难以相信的程度。

第一，血液中提取的单个核细胞在接种入细胞培养瓶后的5分钟以内，我们就大致可以知道这个样本大致的细胞数的范围，大致的CD3-CD56+阳性率的范围。

听起来是在吹牛，实际并非如此。

不同的样本确实千差万别，但大致可以分为2类。

每一类都有其大致相同的生长特点与生长轨迹。

友康生物在长期的研究与实践中已经掌握了NK细胞培养的规律，所以可以达到“吾亦无他，唯手熟尔”。

第二，细胞数量可以稳定达到40-60亿/2L培养体系，阳性率在60%-85%的阳性率的区间。

有人讲，每个人体都是一个个体，每个细胞样本都是独一无二的。

这个判断非常正确。

如何让NK的培养体系能够适合至少90%以上的样本，确实是个很大的挑战。

我们非常自豪的讲，我们经受住了这个挑战。

在NK细胞培养时，能够把细胞数养到40-60亿/2L，不困难。

能够把阳性率控制在60%-85%之间，也不困难。

但要同时达到这两个目标，极度困难。

因为通常有一个认识，那就是NK 的细胞数与阳性率就好像一个跷跷板的两端。

一端上去了，一端就会下去。

问题的解决需要有理论的突破及创新方法的使用。

令人自豪的是，我们实现了理论的突破，进而实现了应用方法的创新。

第三，整个培养体系仅需消耗一瓶一袋，成本更低，无菌保障水平更高。

友康生物的培养体系，是面向生产级的培养体系。

因此，控制除了培养基本身以外的成本，是这个培养体系设计的重要考虑因素。

在整个培养过程中，用户只需消耗一个T175的培养瓶以及一个2L的培养袋。

是的，仅需要一个培养瓶与一个培养袋。

实际上，减少耗材消耗的目的一方面是为了降低生产成本，另一方面也是更重要的一个方面是，为了降低污染发生的概率。

软文-NK细胞制备方法

NK细胞的制备方法背景：NK细胞是一群较大的颗粒化的淋巴细胞，其细胞表面表达CD56且缺少CD3的表达，所以，通常用表面标志CD3‐CD56+来界定NK细胞。

NK细胞大约可以占到外周血淋巴细胞的5‐15%，同时分布在人体肝脏、骨髓和淋巴结等部位。

NK细胞是固有免疫系统重要的组成部分，可以通过多种方式对肿瘤细胞或受感染细胞造成杀伤：1、与靶细胞接触后，释放穿孔素和颗粒酶；2、通过自身表达的配体，刺激并活化靶细胞表面的死亡受体；3、通过抗体依赖的细胞毒作用对靶细胞造成杀伤。

由于NK细胞对肿瘤细胞或受感染细胞可以做出快速的免疫反应，所以在机体的免疫监视中发挥重要的作用。

有研究表明，NK细胞不足的患者更容易受到严重的系统性病毒感染。

外周血中NK细胞活性高的男性患肿瘤的几率要低10%，而在女性中这一数值是4%。

同时NK细胞不需要特异性的抗原刺激，即可对肿瘤细胞造成杀伤的特性，使其在临床上获得了广泛的应用，并取得了一定的疗效。

但是，无法在体外培养获得足够数量的高纯度NK细胞，成为了进一步提高临床治疗效果的瓶颈。

培养原理：本技术提供一种NK细胞的高效制备方法，即通过联合细胞因子和饲养细胞的刺激作用，提高NK细胞的增值速度和纯度。

将NCR3LG1基因转染到饲养细胞中后，可以刺激活化NK细胞，使其快速增殖，而且它与膜表达的m IL-15对NK细胞的刺激有协同作用，所以将IL-15和NCR3LG1同时转染到K562细胞中后，作为饲养细胞刺激活化NK细胞，同时添加IL-2和IL-21细胞因子，极大的提高了培养NK细胞的效率。

细胞制备1 外周血单个核细胞的采集1.1 用血细胞分离机采集患者自身的外周血单个核细胞50-100mL；1.2 淋巴细胞分离液密度梯度离心法进一步纯化单个核细胞(PBMC)；1.3 无血清培养液洗涤2次，获得纯度在90%以上的PBMC。

2 NK细胞的培养及鉴定将从外周血分离得到的PBMC用培养液重悬后，接种培养瓶中，同时添加IL ‐2和IL‐21因子进行刺激培养；第二天，添加NK-2，NK-3，NK-4三种因子（华奥生物根据饲养层细胞K562分泌的因子配制而成的，有效避免饲养层细胞回输安全隐患）培养4天后，将细胞转移到透气的细胞培养袋中继续扩大培养。

NK细胞培养技术之纯因子培养

NK细胞培养---纯因子培养NK细胞培养，特别是纯因子形式的NK细胞培养，普遍认为比较难。

不是细胞数上不去，就是阳性率上不去。

友康生物作为中国细胞治疗领域的无血清培养领先企业。

持续多年NK细胞培养的理论研究及实践应用。

在NK细胞的培养方面，有的成果已经完全达到了让人难以相信的程度。

第一，血液中提取的单个核细胞在接种入细胞培养瓶后的5分钟以内，我们就大致可以知道这个样本大致的细胞数的范围，大致的CD3-CD56+阳性率的范围。

听起来是在吹牛，实际并非如此。

不同的样本确实千差万别，但大致可以分为2类。

每一类都有其大致相同的生长特点与生长轨迹。

友康生物在长期的研究与实践中已经掌握了NK细胞培养的规律，所以可以达到“吾亦无他，唯手熟尔”。

第二，细胞数量可以稳定达到40-60亿/2L培养体系，阳性率在60%-85%的阳性率的区间。

有人讲，每个人体都是一个个体，每个细胞样本都是独一无二的。

这个判断非常正确。

如何让NK的培养体系能够适合至少90%以上的样本，确实是个很大的挑战。

我们非常自豪的讲，我们经受住了这个挑战。

在NK细胞培养时，能够把细胞数养到40-60亿/2L，不困难。

能够把阳性率控制在60%-85%之间，也不困难。

但要同时达到这两个目标，极度困难。

因为通常有一个认识，那就是NK 的细胞数与阳性率就好像一个跷跷板的两端。

一端上去了，一端就会下去。

问题的解决需要有理论的突破及创新方法的使用。

令人自豪的是，我们实现了理论的突破，进而实现了应用方法的创新。

第三，整个培养体系仅需消耗一瓶一袋，成本更低，无菌保障水平更高。

友康生物的培养体系，是面向生产级的培养体系。

因此，控制除了培养基本身以外的成本，是这个培养体系设计的重要考虑因素。

在整个培养过程中，用户只需消耗一个T175的培养瓶以及一个2L的培养袋。

是的，仅需要一个培养瓶与一个培养袋。

实际上，减少耗材消耗的目的一方面是为了降低生产成本，另一方面也是更重要的一个方面是，为了降低污染发生的概率。

NK细胞培养交流

北京同立海源生物科技有限公司
NK细胞培养试剂盒
NK cell culture kit
研究背景与目的：
采用自体外周血细胞中分离得到的单个核细胞，经体外操作使 NK 细胞活化扩增，通过激活体内特异性免疫反应达到杀灭肿瘤细胞目的。

本试剂盒采用纯因子法培养 NK 细胞，不含滋养细胞，仅限体外研究使用。

套装组成：
NK 细胞培养试剂盒套装（货号：AS-01）
其他所需耗材试剂：
0.4%苔盼蓝溶液、生理盐水、人淋巴细胞分离液（建议 GE）、175cm 2 培养瓶（康宁货号 431085）、GT-T610（A）培养袋、15mL/50mL/250mL 离心管、移液管、5mL 无菌注射器、50mL 无菌注射器
NK细胞培养流程：
包被——分离——培养——装袋——分袋——收获
NK细胞培养操作流程图：。

NK细胞培养SOP

NK 细胞培养sop日程：第0天：NK激活剂的处理，分血第2天：补液20ml第4天：补液第7天：装袋第9天：补液第11 天：分袋第13 天：检菌第14、15 天：收获1. 研究背景与目的采用从病人自体外周血细胞中分离得到的单个核细胞，经体外操作使其扩增活化，再静脉回输，将其输回病人体内，通过激活体内特异性免疫反应达到杀灭肿瘤细胞目的的一种体细胞治疗方法。

2. 定义和缩写2.1. NK 自然杀伤细胞2.2. rhIL-15 人源重组白细胞介素152.3. IL-2 白细胞介素3. 主要仪器、耗材3.1. 仪器3.1.1 生物安全柜3.1.2 流式细胞仪3.1.3 水平低速离心机3.1.4 灭菌锅3.1.5 CO 2 孵箱3.1.6 倒置显微镜3.1.7 血细胞记数器3.1.8 血细胞计数板3.1.9 移液器3.1.10 -20℃-4℃冰箱3.2. 耗材3.2.1 75cm2培养瓶3.2.2 225 cm2培养瓶3.2.3 移液管3.2.4 15ml、50ml离心管、250ml离心管3.2.5 医用塑胶手套3.2.6 一次性帽子、手套3.3. 试剂3.3.1 无血清培养液3.3.2 IL-2 (100万IU/瓶)3.3.3 IL-153.3.4 0.4%苔盼蓝溶液3.3.5 生理盐水3.3.6 人淋巴细胞分离液3.4 原材料3.4.1 外周血，脐血，骨髓等4 操作步骤分血：4.1 培养瓶的处理：吸取NK细胞激活剂500ul，用生理盐水稀释至6ml，加到75cm 2 的培养瓶中混匀后，放置于37°C。

1h后取出备用。

4.2 将不同来源的血样，用生理盐水稀释一倍；4.3 Ficoll密度梯度离心，2000rpm，25分钟；4.4 吸取血浆，置56°C，灭活20min；灭活血浆，3000rpm，15min；4.5 白膜层用移液管吸入到新的50ml离心管中，用生理盐水洗涤细胞两次，第一次为2100rpm，6min；第二次为1500rpm，6min；4.6 从培养箱中取出处理的培养瓶，吸除激活剂，加入生理盐水10ml，轻轻晃动培养瓶，吸除生理盐水；4.7 用10-15mlNK培养液重悬细胞悬液，同时补加10%血浆，1000U/ml的IL-2,50ng/ml IL-15；将细胞置于CO2培养箱中培养。

试管外周血nk细胞比例正常标准

试管外周血NK细胞比例正常标准1. 什么是NK细胞？NK细胞是天然杀伤细胞（Natural Killer cell）的简称，是一类具有特殊免疫功能的淋巴细胞。

NK细胞具有杀伤肿瘤细胞和受感染细胞的能力，被认为是机体免疫防御系统中的重要组成部分。

2. 试管外周血NK细胞比例的测定意义通过测定试管外周血NK细胞的比例，可以帮助医生了解患者的免疫状态。

NK细胞的比例增高可能与某些病毒感染、肿瘤等疾病相关，而NK细胞比例过低则可能提示免疫功能低下。

试管外周血NK细胞比例的测定对于评估患者的免疫状态具有重要意义。

3. 试管外周血NK细胞比例的正常范围对于成年人来说，试管外周血NK细胞的比例通常在5-20之间被认为是正常范围。

这一范围的设定是基于大量的临床数据和研究结果，反映了健康人裙的免疫状态。

4. 影响试管外周血NK细胞比例的因素试管外周血NK细胞的比例受到多种因素的影响，包括芳龄、性莂、季节、环境、遗传因素、免疫调节等。

在测定试管外周血NK细胞比例时，需要综合考虑患者的个体差异及其他免疫指标。

5. 试管外周血NK细胞比例异常的临床意义当患者的试管外周血NK细胞比例超出正常范围时，可能提示患者存在某种免疫失衡或疾病状态。

NK细胞比例升高可能与病毒感染、自身免疫性疾病、急性或慢性炎症反应、肿瘤等疾病相关；而NK细胞比例降低则可能与免疫功能低下、感染风险增加等问题有关。

6. 如何维护正常的试管外周血NK细胞比例保持健康的生活方式，包括均衡饮食、充足睡眠、适量运动、减少压力等，有利于维持正常的试管外周血NK细胞比例。

对于存在特定疾病或免疫问题的患者，医生会根据具体情况制定相应的治疗方案，以维持或调节试管外周血NK细胞比例。

7. 结语试管外周血NK细胞比例的正常标准对于免疫状态的评估具有重要意义。

患者在获得检测结果后，应及时向医生交流，了解自身免疫情况，以便及时采取必要的干预措施。

医生在评估患者的免疫状态时，也应该结合其他相关指标，综合分析，以获得更准确的诊断和治疗方案。

nk细胞提取及培养方法

nk细胞提取及培养方法以nk细胞提取及培养方法为标题，本文将介绍NK细胞的提取和培养方法。

NK细胞（Natural Killer cell）是一种重要的免疫细胞，具有杀伤肿瘤细胞和感染病原体的能力。

NK细胞的提取和培养是进行相关研究和应用的前提，下面将详细介绍相关步骤。

一、NK细胞的提取方法1. 从外周血中提取：外周血中富含NK细胞，因此是提取NK细胞的常用来源。

首先，收集供体的外周血样本，并进行离心，分离出白细胞。

然后，使用比重梯度离心法，将白细胞层分离出来。

最后，使用磁珠或流式细胞术等方法，选择性地富集NK细胞。

2. 从脐带血中提取：脐带血中的NK细胞数量相对较多，因此也是提取NK细胞的常用来源。

提取方法与外周血类似，首先收集脐带血样本，并进行离心，分离出白细胞。

然后，使用比重梯度离心法，将白细胞层分离出来。

最后，使用磁珠或流式细胞术等方法，选择性地富集NK细胞。

二、NK细胞的培养方法1. 培养基的准备：选择适合NK细胞生长的培养基，如RPMI 1640培养基。

将培养基加热至37摄氏度，并加入适量的胎牛血清、抗生素和生长因子等。

2. 细胞的接种和培养：将提取到的NK细胞接种在含有培养基的培养皿中。

细胞密度一般为1-2×10^6个/ml。

将培养皿放入培养箱中，保持37摄氏度和5%二氧化碳的恒定环境。

每2-3天更换新的培养基，以保持细胞的正常生长。

3. 细胞的扩增：为了获得足够数量的NK细胞，可以进行细胞的扩增培养。

在细胞密度达到80%左右时，将细胞进行传代，即将细胞从原来的培养皿中移至新的培养皿中，继续进行培养。

每次传代时，可根据需要调整细胞的密度和培养时间。

4. 细胞的活化：为了增强NK细胞的杀伤能力，可以进行细胞的活化处理。

常用的活化方法包括使用细胞因子（如IL-2、IL-15等）刺激细胞，或使用特定的抗体与细胞表面的激活受体结合。

活化后的NK细胞可以更好地发挥其免疫功能。

三、NK细胞的质量控制1. 细胞形态观察：在培养过程中，定期观察NK细胞的形态变化，如细胞的形状、大小、颜色等。

外周血制备nk细胞的原理

外周血制备nk细胞的原理
外周血制备NK细胞是通过以下步骤进行的：
1. 外周血采集：从供体的外周血中采集血液样本。

2. 密度梯度离心：将采集的外周血样本离心，将其中的淋巴细胞和单核细胞分离出来。

这可以通过梯度离心的方法，利用密度差异将白细胞分离出来。

3. 中性红细胞溶解：将分离出的白细胞进行中性红细胞溶解，去除血液中的红细胞。

4. NK细胞富集：利用单克隆抗体或磁珠技术，选择性地富集NK细胞。

这可以通过将NK细胞特异性抗体结合到细胞表面上，然后通过磁性珠子或细胞排序技术将NK细胞筛选出来。

5. NK细胞培养和扩增：富集的NK细胞被放入培养基中，并添加适当的生长因子和激活因子来促进其生长和扩增。

6. 洗涤和纯化：经过一定时间的培养，NK细胞会扩增为较大的细胞群，需要进行洗涤和纯化，去除培养基中的杂质和死亡细胞。

7. 质控和冷冻保存：经过纯化的NK细胞需要进行质控测试，确保其纯度和功
能活性。

然后，将其分装并冷冻保存，以备后续的临床应用。

总之，外周血制备NK细胞的原理是通过血液采集、细胞分离、抗体富集、培养扩增、洗涤纯化等步骤，将外周血中的NK细胞分离、培养、扩增、纯化，最终得到高活性和纯度的NK细胞制品。

人外周血NK细胞3种纯化方法的比较

人外周血N K细胞3种纯化方法的比较张彩　田志刚　王郡甫　刘金生　张建华　许晓群　孙江内 N K细胞是机体抵抗肿瘤生长和病毒感染的重要的免疫监视细胞。

近年来,关于N K细胞本质及其功能和机制的研究已成为免疫学研究的热点内容之一。

但国内N K细胞的研究大多是检测N K细胞毒活性和N K细胞数量,很少直接观察N K细胞的特征及其功能特点,N K细胞分离纯化,是进行N K细胞基础与临床研究的基础和基本手段。

我们分别采用Percoll不连续密度梯度离心法、单抗铺皿法(Panning)及补体依赖的细胞毒法对人外周血N K细胞进行了初步分离纯化,现将结果报告如下。

材料与方法外周血非粘附单个核细胞的制备:用淋巴细胞分离液常规分离单个核细胞,经塑料粘附和尼龙毛柱去除B细胞和单核巨噬细胞,即为以T细胞和N K细胞为主的细胞群。

Percoll不连续密度梯度离心法分离人NK细胞〔1,2〕:先用10×PBS将Percoll原液渗透压调至285mOs/kg H2O(1mOs/kg H2O=1mmol/L),用p H 712的PBS将Percoll配成3715%～50%6个梯度或4215%～6617%7个梯度,每梯度相差215%。

将上述Percoll液按密度由高至低依此缓缓加于20ml分血管,将尼龙毛非粘附细胞轻轻铺于上层。

1800～2000r/min离心30～40min,吸取各梯度细胞计数,并用流式细胞仪鉴定CD3、CD56细胞表型。

单抗铺皿(P anning)法:无菌平皿用羊抗小鼠Ig G011mg/ml包被8h以上或过夜,用PBS/NCS 洗3次后,加入用CD3、CD4、CD8单抗标记的细胞悬液,室温或4℃平放40min,轻悬,使细胞重新分布,再放置40min。

分别收集非粘附细胞和粘附细胞,流式细胞仪检测CD56+N K细胞所占比例。

补体依赖的细胞毒(CCDC)法:CD3、CD4、CD8单抗标记的细胞悬液用PBS洗3次,加新鲜正常兔基金项目:国家自然科学基金资助项目(39870729)作者单位:山东省医学科学院基础医学研究所山东肿瘤生物治疗研究中心通信作者:田志刚,250062(E2mail:TZG@)血清(1∶2稀释)100μl,37℃孵育1h,用淋巴细胞分离液分离活细胞,流式细胞仪检测CD56+N K细胞所占比例。

NK细胞制备操作规程

NK细胞制备操作规程NK（自然杀伤）细胞是一类重要的免疫细胞，可以直接杀伤各种癌细胞和感染的细胞。

在临床研究中，NK细胞被广泛应用于抗癌治疗和抗病毒感染。

本文将介绍NK细胞的制备操作规程，详细说明从外周血中提取、分离、培养和激活NK细胞的步骤。

1.材料准备1.1外周血采集工具：注射器、针头、采血管、反应管、离心管等。

1.2离心机和离心管：用于离心血液和细胞。

1.3细胞培养耗材：组织培养皿、细胞培养瓶、离心管、移液管等。

1.4细胞培养基和添加物：RPMI-1640、人血清、IL-2、IL-15等。

2.外周血采集和分离2.1按照操作规程，用消毒酒精清洁采血部位，并采用无菌技术采集外周血。

2.2将采集的外周血分装到无菌反应管中，离心600g，20分钟，将上清液转移至新的离心管中。

2.3离心上步骤得到的上清液，1600g，10分钟，将上清液抽取转移至新离心管中。

2.4离心得到的细胞沉淀，残余红细胞和血浆抽取掉，加入一定浓度的NH4Cl试剂裂解红细胞，然后用预冷RPMI-1640溶解，离心600g，10分钟，去除上清液。

2.5加入等体积的RPMI-1640，悬浮均匀，根据需要进行细胞浓度计算。

3.NK细胞培养3.1将分离后的NK细胞悬浮液加入细胞培养瓶或组织培养皿中，加入适量的RPMI-1640培养基，含有10%人血清。

3.2 加入适量的IL-2和IL-15，浓度为100 U/mL和10 ng/mL。

3.3转移至细胞培养箱，37°C，5%CO2培养约48小时。

3.4在培养过程中，观察细胞形态和数量的变化，及时进行培养液的更换和补充添加物。

4.NK细胞激活4.1在培养的第48小时，用适量的IL-2和IL-15进行细胞激活。

4.2继续培养48小时，直到细胞数量充足。

5.细胞收获和分装5.1用预冷的离心液洗涤NK细胞，离心速度600g，5分钟。

5.2转移细胞沉淀至新的组织培养皿中，加入适量的RPMI-1640培养基。

人外周血NK细胞在使用中需要注意的事项

人外周血NK细胞在使用中需要注意的事项本细胞采用免疫磁珠法从外周血单个核细胞（PBMC）中分离人CD3+ T细胞，样品来源经供试者同意并签署知情同意书，且排除了乙肝、丙肝、HIV、梅毒等血液传染病的风险。

使用人外周血NK细胞时，需要注意以下几点：
细胞来源：人外周血NK细胞可以从健康个体的外周血中分离得到。

确保细胞来源的健康和纯度是非常重要的。

细胞培养：人外周血NK细胞需要在适当的培养基中进行培养。

培养基的选择应根据实验目的和细胞类型进行优化。

细胞质量控制：在使用前，应对细胞进行质量控制，包括细胞活力、纯度和功能等方面的检测。

细胞处理：在使用过程中，需要注意细胞的处理方式，避免对细胞造成损伤或死亡。

避免使用对细胞有毒性的试剂或操作条件。

细胞保存：如果需要长期保存细胞，应采取适当的保存方法，如低温冻存或液氮保存。

实验设计：在进行实验时，应根据实验目的和需求进行合理的实验设计，包括细胞处理方式、时间点选择、剂量选择等。

安全操作：在使用人外周血NK细胞时，应遵守实验室的安全操作规范，包括佩戴个人防护装备、避免交叉污染等。

使用人外周血NK细胞需要注意细胞来源、培养条件、质量控制、细胞处理、保存方法、实验设计和安全操作等方面的注意事项，以确保实验的准确性和可靠性。

"。

外周血的NK细胞分离培养

外周血的NK细胞分离培养1.样本采集常规操作采集患者外周血，避免样本污染。

2.细胞分离超净工作台中，分装血样于50mL离心管中，取全血样1mL计数（3mL全血留样）。

2000rpm离心10min，取上层血浆于50mL离心管（未灭活血浆留样）。

56℃灭活30min，3000rpm离心10min，去沉淀后4℃保存上清。

生理盐水1:1稀释混匀血细胞，缓慢加到装有Ficill的离心管内（界面清晰，血样：Ficoll不超过2:1），1600rpm离心20min。

吸弃上清，吸取白膜层到离心管，加生理盐水至45mL，混匀后1500rpm离心10min。

吸弃上清，生理盐水重悬后合并一管，加生理盐水至45mL。

混匀，取样计数计算细胞总量，1800rpm离心10min。

参照试剂盒说明书配置培养液、滋养细胞液。

3.细胞培养（山东齐鲁细胞治疗NK细胞培养试剂盒）0d，T75培养瓶接种：30mL细胞悬液+NK-1试剂[2]+5%自体血浆，37℃，%CO2培养箱培养。

（接种密度）3d，离心换液：T75培养瓶中细胞转移至50ml离心管1600 rpm/min升6降4离心10min去除上清。

细胞沉淀+NK细胞培养液（30mL）+5%自体血浆于新T75培养瓶。

5d，转移到T175培养瓶，细胞状态好，加培养液到50mL（5%自体血浆）。

6d，观察细胞，细胞状态好，加培养液到120mL（5%自体血浆）。

7d，观察细胞长势，装袋并添加1支NK-2试剂[2]，加培养液到220mL（1%自体血浆），菌检。

8d，加培养液到500mL（1%自体血浆）。

9d，加培养液到1000mL（1%自体血浆）。

10d，加培养液到1400mL（1%自体血浆）。

11d，加培养液到1600mL（1%自体血浆）。

12d，加培养液到1800mL（1%自体血浆）。

13/15d，根据细胞长势及临床安排收获细胞。

计数计活及流式检测。

[1]:NK细胞培养液：1支D试剂、1支E试剂溶解到1瓶C试剂中。

一种体外扩增NK细胞的新方法

一种体外扩增NK细胞的新方法
于明晓;胡田田;张颢;陶艳玲
【期刊名称】《临床医学进展》
【年(卷),期】2022(12)10
【摘要】目的:验证一种新型、尚未报道的体外扩增原代NK细胞的方法,同时检测其杀伤活性。

方法:采集6位健康志愿者的静脉血共6份,分离外周血单个核细胞。

自然杀伤(NK)细胞诱导培养试剂培养14天。

利用流式细胞术检测NK细胞所占比例,将K562、THP-1细胞作为靶细胞并用CFSE标记,以效靶比2:1加入扩增后的NK细胞,利用流式细胞术检测靶细胞凋亡。

结果:通过14天的细胞培养,利用自然杀伤(NK)细胞诱导培养试剂培养的NK细胞扩增约300倍。

NK细胞纯度达50%左右。

体外杀伤实验结果显示,扩增后的NK细胞与靶细胞共培养4 h杀伤能力可达40%以上。

结论:此种方法扩增的NK细胞其纯度较高,但是因为缺乏其余免疫细胞提供的支撑作用,所以最终NK细胞的扩增倍数并不理想,但其操作简单,花费低,安全性高,可靠性强。

【总页数】6页(P9059-9064)
【作者】于明晓;胡田田;张颢;陶艳玲
【作者单位】济宁医学院济宁;济宁医学院附属医院儿科血液科济宁;济宁医学院附属医院血液科济宁
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.一种体外扩增γδT细胞的新方法
2.大黄素通过调节体外扩增NK细胞杀伤肺癌A549细胞的实验研究
3.PD-1阻断增强体外扩增的NK细胞对人非小细胞肺癌杀伤作用的研究
4.脐血来源NK细胞的体外扩增及其抗肿瘤细胞活性的研究
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