细胞分离培养与保存技巧

140.0 477.0 441.0 122.0 206.0 376.0 337.0 180.0
147.0 404.0
246.0
75.0 84.0 58.0
156.0
4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 0.4 4.0 7.2
264.0 0.1
200.0
400.0 3700.0 6400.0
141.0
LFA-1[19] Mac-1, CR3[19] Fibrinogen receptor; gpIIbIIIa [20]
0.028571429 0.008385744 0.009070295 0.032786883 0.019417476 0.0010638298 0.011869436 0.04
1.7959183 2.4752476E-4
0.8130081
5.3333335 44.04762 110.344826
0.90384614
细胞分离培养与保存技巧
复旦大学基础医学院
细胞微环境（cell niches）
细胞微环境（cell niches）
细胞的所有功能包括形成、增殖、存活、
动员、归巢、分化、功能展现均与微环境
有关
体液
细胞-细胞 相互作用
体液
细胞-细胞 相互作用
旁分泌 细胞间质
理化因素
旁分泌
细胞间质
神经
理化因素 神经
细胞培养 --控制和调节细胞微环境使之适合细胞生存
Name α1β1 α2β1 α3β1 α4β1 α5β1 α6β1 α7β1 αLβ2 αMβ2 αIIbβ3 αVβ1 αVβ3 αVβ5 αVβ6 αVβ8
Synonyms
整合素
Distribution
Ligands
VLA-1 VLA-2 VLA-3 VLA-4[19] VLA-5; fibronectin receptor VLA-6; laminin receptor
• 培养条件：O2、N2、CO2、温度、湿度、 培养皿（瓶）、细胞外基质
• 培养液组份：离子、糖、血清、pH等 • 周围细胞：单一细胞、混合细胞 • 避免污染：细菌、真菌等
低糖DMEM成份
Components
Amino Acids Glycine L-Alanyl-Glutamine L-Arginine hydrochloride L-Cystine L-Histidine hydrochloride-H2O L-Isoleucine L-Leucine L-Lysine hydrochloride L-Methionine L-Phenylalanine L-Serine L-Threonine L-Tryptophan L-Tyrosine
iPS cultured with LIF eNOS
iPS cultured without LIF
iPS + 内皮细胞培养液 Mouse Leukemia Inhibitory Factor (LIF)
Fetal bovine serum
• 非蛋白组分与细胞外液（组织间液）类似 • 生长因子等活性物质 • 白蛋白（活性物质载体）
CO2 (5%) O2
细胞分离
细胞分离
• 机械力 • 密度梯度离心 • 酶消化：各种蛋白酶 • 培养条件选择：pH（如成纤维细胞喜酸、
内皮细胞喜碱）、贴壁等 • 动物和器械的消毒: 酒精、碘酒、高压蒸汽
细胞消化
• 胰蛋白酶：浓度 • EDTA • 蛋白酶抑制剂：血清等
胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25%) 液体： 2.5g 猪胰蛋白酶和0.2g EDTA溶于1升PBS 需等量血清中和
medium are: • fetal bovine serum (4.9% v/v final concentration) • hydrocortisone (1 µg/ml) • human fibroblast growth factor (3 ng/ml) • heparin (10 µg/ml) • human epidermal growth factor (1 ng/ml) • dibutyryl cyclic AMP (0.08 mM)
Other Components D-Glucose (Dextrose) Phenol Red Sodium Pyruvate
180.0
1000.0
5.5555553
376.4
15.0
0.039851222
110.0
110.0
1.0
Microvascular Growth Supplement (MVGS) (Gibco®)
0.4 3.9723501 0.39810428 0.15335463 0.2 0.8015267 0.8015267 0.7978142 0.20134228 0.4 0.4 0.79831934 0.078431375 0.39779004
Vitamins Choline chloride D-Calcium pantothenate Folic Acid Niacinamide Pyridoxine hydrochloride Riboflavin Thiamine hydrochloride i-Inositol Inorganic Salts Calcium Chloride (CaCl2-2H2O) Ferric Nitrate (Fe(NO3)3"9H2O) Magnesium Sulfate (MgSO47H2O) Potassium Chloride (KCl) Sodium Bicarbonate (NaHCO3) Sodium Chloride (NaCl) Sodium Phosphate monobasic (NaH2PO4-2H2O)
Molecular Weight
Concentration (mg/L)
mM
75.0 217.0 211.0 313.0 210.0 131.0 131.0 183.0 149.0 165.0百度文库105.0 119.0 204.0 181.0
30.0 862.0 84.0 48.0 42.0 105.0 105.0 146.0 30.0 66.0 42.0 95.0 16.0 72.0