动物细胞培养和核移植技术(上课用)111
教学设计10：2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
动物细胞培养和核移植技术【学习目标】知识目标：1．简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
2．简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。
3．比较动物细胞培养与植物组织培养区别。
能力目标：1.通过对材料的观察，学会科学的观察方法，培养观察能力。
2.通过对基本概念、基本原理、科学方法的正确理解和掌握，逐步形成比较、判断、推理、分析、综合等思维能力，具备能运用学到的生物学知识评价和解决某些实际问题的能力。
【本节重点难点】重点：1.动物细胞培养的过程及条件。
2.用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。
难点：用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。
【教学方法】讲授法、归纳法、练习法。
【教学工具】多媒体教学课件【知识精讲】教材梳理知识点一动物细胞培养概念1、动物细胞培养概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
[分析]（1）需分散成单个细胞；（2）需要在培养基上培养；（3）动物细胞培养的实质是细胞增殖。
知识点二动物细胞培养的过程1、动物细胞培养的过程：2、原理：细胞增殖[问题]什么是细胞贴壁？什么是接触抑制？悬液中分散的细胞很快就贴附在有丝分裂，称为细胞贴壁。
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
[问题]如何打破接触抑制？需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分别继续培养，让细胞继续增殖。
[问题]细胞传代培养代数有什么特点？传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去了，一般来说，细胞在传至10～50代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能发生变化，当继续传代培养时，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性。
所以目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。
[问题]为什么大多选用动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织细胞进行培养？知识点三动物细胞培养的条件（1）无菌、无毒的环境（2）营养：合成培养基成分包括糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，通常还需加入血清、血浆等一些天然成分。
动物细胞培养和核移植技术课件
过程
脱分化、再分化
原代培养、传代培养
项目
植物组织培养
动物细胞培养
结果 获得新个体或细胞产物
大量产生细胞或细胞 产物
用途
①快速繁殖名贵花卉和果 树；②培养无病毒植株、 转基因植物；③大规模生 产细胞产物，如药物、食 品添加剂、香料、色素等
①生产蛋白质制品， 如病毒疫苗、干扰素、 单克隆抗体等；②检 测有毒物质；
(3)温度和
温度：哺乳动物多以 pHpH： 7.2～7.4
36.5±0.5℃
为宜
(4)气体环境COO2 ：2：细维胞持代培谢养所液必的需p的H
4．应用[连线]
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1．动物核移植的概念和类型 (1)概念： ①供体：动物一个细胞的细胞核； ②受体：去掉细胞核的 卵母细胞 ； ③结果：形成重组胚胎，发育成 动物个体 。 (2)类型：哺乳动物核移植可分为胚胎细胞核移植和体细 胞核移植。
2.如图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答： (1)容器 A 中放置的是动物器官或组织，它一般 取自________________。 (2)容器 A 中的动物器官或组织首先要进行的处 理是________，然后用__________酶处理，这 是为了使细胞分散开来，这样做的目的是 _________________________________________________。
胞质内的遗传物质来自受体卵母细胞，其次生物的性状还
受环境的影响，因此，克隆动物并不是对提供体细胞的动
物进行完全复制。
4.右图为哺乳动物(羊)的生殖过程，下列叙述
不．正确的是
(D )
A．个体 2 为克隆动物，c 为高度分化的
体细胞
B．个体 2 的遗传性状与提供 c 细胞的羊
教学设计13：2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
动物细胞培养和核移植技术一、教材分析核移植技术又称为动物克隆技术，是在动物细胞培养技术的基础上发展起来的。
教材首先从全能性的角度指出目前通过动物细胞培养技术是无法获得动物体的，从而引出核移植技术的概念。
然后以高产奶牛为例详细讲述了体细胞核移植技术的操作流程，即本节的重点和难点部分，通过展示图片、动画等形式来学习。
最后介绍了核移植技术的应用前景和存在问题。
二、教学目标1．知识目标简述动物细胞核移植技术的流程。
2．过程与方法通过课前预习、查阅资料、课堂讨论和强化练习等活动，让学生了解动物细胞核移植技术的流程。
3．情感态度与价值观关注细胞工程研究的发展和应用前景。
三、教学重难点重点：了解动物体细胞核移植技术的流程。
难点：了解动物体细胞核移植技术的流程。
四、教学准备多媒体课件。
五、课时安排1课时。
六、教学过程回顾旧知，引入新课：我们知道，通过植物组织培养技术可以将植物细胞培养成完整的植物体，并且不改变其遗传特性，是一种无性繁殖技术，所以也被称为植物克隆技术。
其原理是植物细胞具有全能性。
照此推理，动物细胞如果也具有全能性，就应该可以通过动物细胞培养技术获得动物体，从而实现动物克隆。
而当我们学习了动物细胞培养技术之后，却只能报以遗憾。
那么动物细胞的全能性有什么特点，如何才能实现动物的克隆呢？下面我们一起来探讨。
（一）动物体细胞核移植技术和克隆动物探讨一：动物细胞全能性的特点学生阅读教材P47“动物体细胞核移植技术和克隆动物”第二段。
学生讨论交流后，教师总结得出：动物细胞的全能性随着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到抑制，全能性的表达很难，但动物的细胞核内仍含有该种动物的全部遗传基因，具有发育成完整个体的潜能，即动物的细胞核仍具有全能性。
需要的特殊技术：核移植。
探讨二：核移植技术的概念及分类让学生根据教材中核移植技术的概念，用简洁的图示描述出其大概过程：教师讲解：被移植的细胞核可以来自于哺乳动物的胚胎细胞和体细胞，从而该技术分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植两类。
动物细胞培养和核移植技术(上课用)
一、动物细胞培养过程 4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？
胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时 间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作 用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
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一、动物细胞培养过程
5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或 组织做动物细胞培养材料？
2.2 动物细胞工程
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学习目标：
1、简述动物细胞培养的过程、条件及 应用 2、对比说出动物细胞培养与植物组织 培养原理、条件、结果、培养目的
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复习：植物细胞工程常用的技术手段有哪些？
植物组织培养技术、 植物体细胞杂交技术
动物细胞工程常用的技术手段：
动物细胞培养技术、 动物细胞核移植技术、 动物细胞融合技术、 生产单克隆抗体技术
原理是细胞增殖 （有丝分裂） 。
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动物细胞生长特点：
细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，
称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、
易于贴附。 细胞的接触抑制：
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细 胞的接触抑制。
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不可以，因为高度分化的动物细胞的全能性受 到抑制。
不需要诱导其脱分化。
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原代培养
• 定义：把第1代细胞的培养与10代以内的细胞 培养统称为原代培养。
•过程：从动物机体中取出组织 剪碎 加胰蛋白酶 细胞游离 加培养液 将 细胞接种到培养瓶内 培养（1—2天换一 次培养液） 细胞贴壁生长 长成单层细 胞
加培养液
细胞悬浮液
限增殖的不死的癌症细胞，
动物细胞培养和核移植技术 课件
(6)研究胚胎发育及衰老过程，追踪研究疾病的发展 过程和治疗疾病。
4．存在问题。 (1)成功率低。 (2)绝大多数克隆动物还存在健康问题。 (3)克隆动物食品的安全性存在争议。
要点一 动物细胞培养
1．动物细胞培养时需要将细胞分散开，其方法是什 么？
(4)继植物组织培养之后，克隆绵羊的培育成功，证 明动物细胞的细胞核也具有_________________________
________________________。 解析：(1)由图示可知①为核移植过程。(2)卵母细胞
体积大、易操作，并且还含有能诱发细胞核全能性表达的
物质及丰富的营养物质，比较适于做核移植的受体细胞。
(3)在核移植时，一般不选择生殖细胞作为供核细胞， 因为生殖细胞与正常体细胞相比，遗传物质减半。
(4)克隆动物的性状与核供体生物的性状基本相同， 而不是完全相同，因为：①克隆动物的细胞质遗传物质来 自于受体卵母细胞。②生物的性状不仅与遗传物质有关， 还受环境的影响。③突变。
(5)核移植过程中细胞核只来自于一个个体，因此核 遗传物质与供核个体的相同，属于无性繁殖，不会改变生 物体的基因型。
2．过程。
3．条件。 (1)无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进 行无菌处理。 (2)营养：合成培养基中要有糖、氨基酸、促生长因 子、无机盐、微量元素等，通常需加入血清、血浆等。 (3)温度和 pH。 ①适宜温度：36.5±0.5 ℃。 ②适宜 pH：7.2～7.4。
(4)气体环境：主要是 O2 和 CO2，O2 是细胞代谢所必 需的，CO2 主要维持培养液的 pH。
(3)培养首先在 B 瓶中进行，瓶中的培养基成分有 ________________________等。在此瓶中培养一段时间 后，有许多细胞衰老死亡，这时的培养称为__________。
动物细胞培养和核移植技术(上课用的)
是其他动物细胞工程技术的基础。
动 物 细 通常采用的 胞 技术手段 工 程
动物细胞培养
动物细胞核移植
动物细胞融合 单克隆抗体
一、动物细胞培养
1、概念： 动物细胞培养就是从动物机体 内取出相关的组织，将它分散成单 个细胞，然后，放在适宜的培养基 中，让这些细胞生长和增殖。 2、原理： 细胞增殖
一、动物细胞培养
动物细 胞培养 和核移 植技术
动物细胞培养 动物体 细胞核 移植技 术和克 隆动物
核移植技术和克隆动物的概念 体细胞核移植技术的过程 体细胞核移植技术的应用前景 体细胞核移植技术存在的问题
科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的 奶牛,如果要加速转基因奶牛的繁育速度,可以对此转基 因奶牛进行克隆(如下图),结合图示回答下列相关问题：
科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的 奶牛,如果要加速转基因奶牛的繁育速度,可以对此转基 因奶牛进行克隆(如下图),结合图示回答下列相关问题：
(4)重组细胞在培养液中培养成的重组胚胎移入受体母 牛体内就会生出与供体奶牛遗传物质相同的犊牛,但也 不是100%的复制,其原因可能是___________. ①．生物性状受细胞核和细胞质共同控制； ②．生物性状还受环境因素的影响
2、分类
胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易 体细胞核移植：细胞分化程度高，恢复全能性不容易
3、体细胞核移植的过程
1、受体细胞为什么选用 卵母细胞？
卵母细胞体积大，易操作， 而且含有促使细胞核表达全 能性所需的物质和营养条件。
2、为什么不是取供体细 胞核进行核移植操作， 而是直接将供体细胞整 个注入去核卵母细胞中？
保证供核不被破坏，使所得个体的性状更符合供体。
动物细胞培养和核移植技术 课件
(3)细胞株和细胞系 ①细胞株：传代培养的细胞能达到 10～50 代，这样的传代细 胞称为细胞株。 ②细胞系：传代培养的细胞在传到 50 代后，有部分细胞的遗 传物质发生了改变，获得不死性，这种具有癌变特点的细胞称 为细胞系。
2．植物组织培养与动物细胞培养的比较
项目
植物组织培养
动物细胞培养
原理 植物细胞的全能性
A．B 点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养 B．接触抑制现象主要发生在 AB 段和 DE 段 C．分瓶后的每个培养瓶中的细胞群称为一个克隆 D．E 点后的少数细胞获得不死性，向等同于癌细胞的方向发 展
解析：选 C。人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代 培养，分瓶后的培养称为传代培养，B 点之后细胞继续生长， 可见 B 点之后进行了传代培养，A 正确；当贴壁细胞分裂生长 到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，即会发生接触抑 制现象，在 AB 段和 DE 段细胞几乎生长停滞，可能发生了接 触抑制，B 正确；细胞克隆的最基本要求是必须保证分离出来 的是一个细胞而不是多个细胞，C 错误；E 点后细胞已获无限 繁殖能力且持续生存，具有了癌细胞的性质，D 正确。
5.应用 (1)生产生物制品：如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 (2) 应 用 于 基 因 工 程 ： 动 物 细 胞 是 基 因 工 程 技 术 中 常 用 的 __受__体__细__胞______，离不开动物细胞培养。 (3)检测___有__毒__物__质_____，判断某种物质的毒性。 (4)用于生理、病理、药理等方面的研究，如筛选抗癌药物等。
结果品Biblioteka 胞产物项目植物组织培养
动物细胞培养
①快速繁殖名贵花卉和果 ①生产蛋白质制品，如
树；②培养无病毒植株、转 病毒疫苗、干扰素、单
动物细胞培养和核移植技术上课
乳腺细胞
核移植 卵裂 早期胚胎
融合后的卵细胞 胚胎移植
C母绵羊子宫 妊娠 分娩 多莉羊
2.结合P48图2-21，叙述克隆高产奶牛的培育过程。
减数第二次分裂中期 供体细胞培养
（ MⅡ卵母细胞）
将供体细胞注入去核卵母细胞
核移植 胚胎移植
供体细胞 （供核）
卵巢卵母细胞
细胞培养 去核 胚胎 代孕 移植 母体
体细胞
注入
（MⅡ中期：供质）
无核卵 母细胞
细胞 重 融合 组 细 胞
归纳:
构建重 组胚胎
生出与供体奶 牛遗传基础相 同的犊牛
1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植
2.取卵细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作,它发育可直接表达性状 3.严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状
思考与讨论：
指一个单一的细胞分裂所形成的细胞群体。
c.个体水平上：
指基因型完全相同的两个或一个群体。
2、克隆动物能否用类似植物组织培 养的方法获得？为什么？
目前不能。
因为动物细胞的全能性随着分化程度 的提高逐渐受到限制。目前，用动物体细胞 克隆的动物，实际上是通过核移植来实现的。
动物体细胞核移植技术
1.回忆克隆羊“多莉”的培育过 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 程
Ａ母绵羊
Ｂ母绵羊
细胞拆合技术 乳腺细胞
多 莉 羊 的 培 育 过 程
卵细胞
细胞质 细胞核移植
细胞核 融合后的卵细胞 卵裂 早期胚胎
胚胎移植
C母绵羊子宫 妊娠 分娩 多莉羊
2.体细胞核移植技术的应用前景
克隆动物的研究意义
1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 2.加速改良动物品种 3.治疗人类疾病，提供供体（器官、细胞、组织） 4.保护濒危动物
教学设计12：2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
动物细胞培养和核移植技术一、教材分析动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。
在动物细胞培养技术之后介绍的核移植技术、动物细胞融合技术、生产单克隆抗体以及胚胎工程都要用到动物细胞培养技术。
掌握好这项技术才能为其他技术奠定好基础。
在动物细胞培养的教学中，可把这部分内容归纳成三个问题：（1）为什么要进行动物细胞的培养（2）什么是动物细胞的培养（3）怎样进行动物细胞的培养其中，第三个问题是本节课的重点。
二、教学目标1．知识目标简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
2．过程与方法采用问题教学法，设置环环相扣的问题，激发学生的思维，帮助他们深刻理解该内容。
3．情感态度与价值观关注细胞工程研究的发展和应用前景。
三、教学重难点重点：动物细胞培养的过程及条件。
难点：动物细胞培养的过程及条件。
四、教学准备多媒体课件、导学案。
五、课时安排1课时。
六、教学过程回顾旧知，引入新课：（多媒体展示植物组织培养图片和过程）利用植物细胞可以培育成植物体，那么，利用动物细胞能不能大量繁殖动物体，以提高繁殖率呢？这节课，我们就来学习动物细胞工程。
（一）动物细胞培养（多媒体展示烧伤病人的图片）同学们，动物细胞不能培养成动物体，那么能不能通过培养得到大量的某种细胞呢？如果可以的话，这无疑是烧伤病人的福音。
因为自体皮肤是不会产生免疫排斥的。
展示人造皮肤图片，引出动物细胞培养技术概念——从动物体中取出相关的组织，将它分散单个细胞，然后，放在适宜培养基中，让这些细胞生长和增殖。
教师简介动物细胞培养的基本流程：取出组织→单个细胞→培养基中培养→细胞增殖→大量同样的细胞。
阅读教材“动物细胞培养的过程”，小组合作探究以下几个问题：1.幼龄与老龄动物的组织细胞比较哪一种更易于培养？为什么？（细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。
所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞较易于培养。
动物细胞培养和核移植技术(上课用)
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（1）肝脏切成小薄片，这有利于肝脏细
胞 吸收氧气和营养物质、排出代谢废物 。
（2）气室中充入5％C02：气体的主要作用
是 维持培养液适宜的pH
。
（3）培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生
长，但要注意选择抗生素的 种类和剂量 ，以
保证抗生素对肝脏无害。
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08年宁夏卷回答下列有关动物细胞培养的问题：
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原代培养
• 定义：把第1代细胞的培养与10代以内的细胞 培养统称为原代培养。
•过程：从动物机体中取出组织 剪碎 加胰蛋白酶 细胞游离 加培养液 将 细胞接种到培养瓶内 培养（1—2天换一次 培养液） 细胞贴壁生长 长成单层细胞
取材（动物组织） →细胞分散→初次培养 精品文档
传代培养
接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分 裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细 胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再 增部分加细。胞突变，获
得不死性，向癌细 胞方向发展，糖蛋 白减少。
50代以后
接触抑制
失去接触抑制
精品文档
一、动物细胞培养过程 2、为什么要对取出的动物组织进行处理，
使细胞分散？ 分散的单个细胞容易摄取所需的营养，排
精品文档
一、动物细胞培养过程 4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？
胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外， 长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤 作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
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一、动物细胞培养过程
5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器 官或组织做动物细胞培养材料？
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们 的细胞分化程度低，增殖能力强，分裂旺 盛，容易培养。
动物细胞培养和核移植技术课件
(3)如何区分原代培养与传代培养？ 答案 ①原代培养：通常将动物组织消化后的初次培养称 为原代培养。 ②传代培养：贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处 理，然后分瓶继续培养，让细胞增殖，即为传代培养。
2．条件 (1)无菌、无毒的环境：培养液应进行_无__菌___处理。 (2)营养：合成培养基的成分为糖、__氨__基__酸___、促生长 因子、无机盐、微量元素、_血__清___、血浆等。 (3)温度和 pH：适宜的温度为__3_6_._5_±_0_.5__℃_____；pH 为 _7_._2_～__7_._4___。 (4)气体环境：_空__气___ 95%和 CO25%的混合气体。
【归纳提炼】 1．不同层次的克隆
(1)分子水平：如DNA复制。 (2)细胞水平：动物细胞培养。 (3)个体水平：“多利”羊的诞生。 2．动物细胞核移植的条件及结果 (1)核移植一般选择去核的卵母细胞，因为卵母细胞体 积大，易操作，含有促使细胞核全能性表达的物质和营 养条件。一般不选择生殖细胞作为供核细胞，因为生殖 细胞与正常体细胞相比，遗传物质减半。
【归纳提炼】 动物细胞培养与动物组织培养的比较
【活学活用】
1．判断下面关于动物细胞培养的叙述的正误。
(1)动物细胞培养的原理是动物细胞的全能性
()
(2)需要对细胞进行一次脱分化处理和两次蛋白酶处理 ( )
(3)原代培养的细胞是指从贴壁生长到发生接触抑制的细胞
()
(4)恒温条件下，细胞周期持续时间长短不随细胞培养进程而
5．应用 (1)加速家畜_遗__传___改良进程，促进优良畜群繁育。 (2)增加濒危动物数量，保护_濒__危___物种。 (3)生产医用蛋白。 (4)作为_异__种__移植的供体。 (5)用于组织器官的移植。
动物细胞培养和核移植技术(上课用)111_PPT幻灯片
动物细胞培养技术 ----基础 动物细胞核移植技术 动物细胞融合技术 生产单克隆抗体技术
一、动物细胞培养
（一）概念P44： 从动物机体中取出相关的组织，将它分散成 单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这 些细胞生长和增殖。
（二）原理： 细胞增殖
（三）动物细胞培养过程：
胰蛋白酶
单个细胞
加培养液
细胞悬浮液ຫໍສະໝຸດ 从原代培养细胞群中筛选出 进行传代培养的细胞，能传 到50代左右，其遗传物质没 有发生变化,这种传代细胞称
原代培养
胰蛋白酶
为细胞株。 细胞株 遗传物质未变
传代培养 50代细胞
动物胚胎或幼龄动 7、细胞系：
物的组织、器官
胰蛋白酶
传到50代左右后有部分细胞遗 传物质发生了变化，带有癌变
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官
剪碎，再用胰蛋白酶/胶
单个细胞原蛋白酶处理
加培养液
细胞悬浮液
原代培养
胰蛋白酶
传代培养
动物胚胎或幼龄动 3、动物细胞生长特点： 物的组织、器官 ①细胞贴壁：
胰蛋白酶
单个细胞
要求： 培养瓶或培养皿的内表
加培养液 面光滑、无毒、易于贴附。
细胞悬浮液 ②接触抑制：
原代培养
4、气体环境： （95%空气和5% CO2 ） O2：细胞代谢所必需的 CO2：维持培养液的PH
三、动物细胞培养的应用(P47)
1、生产生物制品（细胞产物），如蛋白质生物制 品－病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等
2、应用于基因工程，动物细胞是基因工程技术中 常见的受体细胞 3、获得细胞用于检测有毒物质 4、用于生理、病理、药理等方面的研究，如筛选 抗癌药物等
动物细胞培养和核移植技术 课件
[答案] (1)细胞核 (2)核移植技术 转基因技术(或基因工程、DNA 重组技 术、基因拼接技术) (3)含有促进细胞核全能性表达的物质 (4)这些细胞分化程度极低，具有全能性，可以定向地诱 导分化为各类细胞 (5)没有免疫排斥反应 体外基因治疗
(1)细胞核移植技术中，注入去核卵母细胞中的也 可以是整个细胞。
[思路点拨]
[解析] (1)动物细胞培养一般取材于动物胚胎或幼龄 动物的器官或组织，因为这部分细胞的分裂能力强。(2)在 进行培养时应尽量使细胞分散，便于与培养液充分接触，进 行物质交换；使其分散需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。 (3)动物细胞培养过程中应尽量使培养基成分与体内的环境 基本相同，所以需要添加糖、氨基酸、无机盐、动物血清等。 培养的过程分为原代培养和传代培养两个大阶段，分瓶之前 的培养称为原代培养。(4)当细胞数目较多时，需要用胰蛋 白酶处理，使细胞分散，从玻璃瓶壁上脱离下来，配制成细 胞悬液继续培养。
(2)该技术形成重组细胞发育成一个新个体，体现 了细胞核的全能性而非动物细胞的全能性。
(3)克隆属于无性繁殖，产生新个体的性别、绝大 多数性状与供核亲本一致。
[思路点拨]
[解析] (1)①是从供体(患者)体细胞分离出的细胞核。(2)③ 表示核移植技术，④表示转基因技术。(3)核移植的受体细胞一 般是卵母细胞，原因是它体积大、易操作，含有供胚胎发育的 营养物质，它还含有促进细胞核全能性表达的物质。(4)早期胚 胎中的细胞分化程度低，全能性高，可诱导分化成各种组织器 官。(5)图示培育出的细胞(胰岛 B 细胞)核遗传物质来自患者本 人，所以移植后不发生免疫排斥反应；图中所示基因治疗是体 外转基因，故所属类型为体外基因治疗。
动物细胞培养和核移植技术
动物细胞培养
动物细胞培养和核移植技术课件
■选动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做 动物细胞培养材料的原因：
因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强， 分化程度低。
■用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理的原因：
解除由于接触抑制对细胞生长和繁殖的抑制。
■目前使用的或冷冻保存的正常细胞 通常在10代以内的原因：
以保持正常二倍体核型 （或10代以内的细胞遗传物质不改变）。
（5）若把体细胞的细胞核注入到无核卵 母细胞，则称之为 核移植 。
（6）用卵母细胞做受体细胞原因： a．卵母细胞体积 大 ，便于 操作 ； b．卵黄 多 ， 营养物质 丰富； c．易激发 细胞核 全能性的表达。
（7）克隆属于 无性 繁殖，产生新个体的 性别、绝大多数性状与供核亲本 一致 。
（8）诱导融合方法：
妊娠、出生
4、若黑面绵羊的基因型为AA，白面绵羊 克隆羊多利
的基因型为aa，则克隆羊的基因型为：
aa
3.体细胞核移植技术的应用前景
（1）加速家畜遗传改良的进程 （2）保护濒危物种
（3）生产医用蛋白质
（4）转基因克隆动物作为 异种移植的供体
（5）人核移植胚胎干细胞诱导分 化后提供组织、器官用于移植。 （6）研究克隆动物和克隆细胞，可使人 类更深入了解胚胎发育及衰老过程。 （7）用克隆动物做疾病模型。
强调一：细胞贴壁过程
■细胞贴壁：
■培养瓶或培养皿壁要求：
■ 强调二：接触抑制
瓶壁上的细 胞层数是：
一层 （或单层）！
■原代培养：
■传代培养：
■细胞株：原代细胞一般传至10代左 右细胞生长停 滞，大部分细胞衰 老死亡，少数细胞存活到50代这种 传代细胞为细胞株。 ■细胞系：50代以后大部分死亡， 部分细胞细胞核型（遗传物质）发 生变化，获得不死性，朝着等同于 癌细胞的方向发展，无限繁殖。
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四、植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 原理 植物组织培养 细胞的全能性 固体培养基 动物细胞培养
细胞增殖
液体培养基
培养基状态
培养基特有 蔗糖 植物激素 成分 植物体或 培胞株、细胞系 或细胞产品 获得细胞或细胞 分泌蛋白
培养目的
快速繁殖、培育 无病毒植株
剪碎，再用胰蛋白酶/胶 原蛋白酶处理
加培养液
细胞悬浮液 原代培养
胰蛋白酶
传代培养
1、选材：
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官
优点：细胞分化程度低，分裂能力强， 容易培养。
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官
胰蛋白酶/胶原蛋白酶
单个细胞 2、分散的单个细胞的原因： 与培养也充分接触，易摄取养分，排出 代谢废物；
再见
动物细胞工程常用的技术手段：
动物细胞培养技术 ----基础 动物细胞核移植技术 动物细胞融合技术 生产单克隆抗体技术
一、动物细胞培养
（一）概念P44： 从动物机体中取出相关的组织，将它分散成 单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这 些细胞生长和增殖。 （二）原理： 细胞增殖
（三）动物细胞培养过程： 动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官 单个细胞
单个细胞
加培养液
细胞悬浮液 原代培养
胰蛋白酶
传代培养
动物胚胎或幼龄动 6、细胞株：10-50代 物的组织、器官
胰蛋白酶
单个细胞
加培养液
细胞悬浮液 原代培养
胰蛋白酶
从原代培养细胞群中筛选出 进行传代培养的细胞，能传 到50代左右，其遗传物质没 有发生变化,这种传代细胞称 为细胞株。 遗传物质未变
细胞株
传代培养 50代细胞
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官
胰蛋白酶
7、细胞系：
单个细胞
加培养液
细胞悬浮液
传到50代左右后有部分细胞遗 传物质发生了变化，带有癌变 的特点，可无限制的传代下去， 称为细胞系。
胰蛋白酶
原代培养 细胞株 遗传物质未变
传代培养 50代细胞
遗传物质已变，细胞发生癌变， 细胞系 获得不死性，失去接触抑制
动物胚胎或幼龄动 3、动物细胞生长特点： 物的组织、器官 ①细胞贴壁：
胰蛋白酶
单个细胞
要求： 培养瓶或培养皿的内表 加培养液 面光滑、无毒、易于贴附。 ②接触抑制：
细胞悬浮液 原代培养
胰蛋白酶
传代培养
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官
胰蛋白酶
4、原代培养：
消化后的初次培养（分瓶 前）或10代以前的培养。 5、传代培养： 分瓶后的培养。 传代培养的细胞一般传至 10代就不易传下去
二、动物细胞培养条件
3、温度和PH
36.5±0.5℃
7.2~7.4
4、气体环境： （95%空气和5% CO2 ） O2：细胞代谢所必需的 CO2：维持培养液的PH
三、动物细胞培养的应用(P47)
1、生产生物制品（细胞产物），如蛋白质生物制 品－病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 2、应用于基因工程，动物细胞是基因工程技术中 常见的受体细胞 3、获得细胞用于检测有毒物质 4、用于生理、病理、药理等方面的研究，如筛选 抗癌药物等
注：动物细胞培养不能最终培养成生物体
目前使用的或冷冻保存 的正常细胞通常为10 代以内，以保持细胞正 常的二倍体核型。
原代培养
传代培养
二、动物细胞培养条件
1、无菌、无毒的环境 对培养液和培养用具进行无菌处理 在培养液中添加一定量的抗生素 定期更换培养液 2、营养（液体培养基） 无机物：无机盐、微量元素 有机物：葡萄糖、氨基酸、促生长因子 天然成分：血清、血浆。