猪脑谷氨基酸脱羧酶的分离纯化以及生物学活性鉴
氨基酸的分离与提纯_secret
氨基酸的分离与提纯摘要：国内外氨基酸分离与提纯的发展研究现状及其在生产实践中的应用。
关键词：氨基酸，分离，提纯，应用1 前言氨基酸及其衍生物是组成蛋白质的基本单元，广泛用于医药、食品、饲料、化妆品工业等领域。
例如，在食品加工和饲料工业, L-谷氨酸一钠可作为增鲜剂，L-天冬氨酸、甘氨酸和DL-丙氨酸等也用作食品风味改良剂，另外，L-天冬酰苯丙氨酸甲酯作为低热量甜味剂(Aspartame)，在国外已广泛应用于饮料等食品。
L-赖氨酸和DL蛋氨酸广泛应用于改进饲料成份的营养价值。
L-赖氨酸还用于强化面粉和强化米的生产。
在医药卫生方面，除了大量应用结晶氨基酸输液外，某些氨基酸及其类似物也被用于治疗某些疾病。
例如L-多巴[L-3-(3，4-二轻基苯基)丙氨酸]是治疗帕金森氏病的重要药物，而α-甲基-多巴为有用的降压药物。
L-谷酰胺及衍生物用于治疗胃溃疡，L-色氨酸和5-羟基-L-色氨酸是有效的抗抑郁剂。
另外某些氨基酸衍生物具有抗肿瘤的作用。
一些肽类例如催产素，血管紧张肽和促胃液激素等，它们具有医疗效果的激素效应。
氨基酸聚合物，例如聚-γ-甲基-L-谷氨酸已被用作人造革的原料。
总之，氨基酸及其衍生物将会随着科学研究和工业生产的发展，而被更加广泛地应用[1]。
然而，国内氨基酸的生产远不能满足其需求。
2 氨基酸的性质氨基酸是一种具有两性官能团的物质。
氨基酸分子既含有氨基又含有羧基，在溶液中主要以—NH3+，—C00—形式存在。
氨基和羧基的电离取决于溶液的pH值和氨基酸的等电点Pl：在pH低于等电点P1时，羧基的电离被抑制，氨基酸带正电荷；在pH值高于等电点Pl时，氨基的电离被抑制而带负电荷。
在等电点时，氨基酸的溶解度最小，最易从溶液中析出。
按照侧链基团的不同，氨基酸可以分为3类：酸性氨基酸，中性氨基酸，和碱性氨基酸。
而各种氨基酸的等电点不同，酸性氨基酸＜中性氨基酸＜碱性氨基酸。
利用这个性质，可以把它们进行分离提纯[2]。
氨基酸分离提纯的主要方法及其应用
氨基酸分离提纯的主要方法及其应用姓名：陈福全，学号：1042032112关键字：氨基酸分离提纯应用氨基酸是蛋白质组成的基本单元，氨基酸在国民经济尤其是医药方面尤为重要，分离提纯氨基酸的技术就成了医药领域重要的技术。
氨基酸的分离提纯方法主要有沉淀法、离子交换法、萃取法、电渗析等。
其中，最常用的是离子交换法，最古老的是沉淀法。
主要的提纯方法：离子交换法，根据氨基酸是两性电解质这一特征,以及目的氨基酸与杂质氨基酸pK、pI值的差异,利用离子交换树脂对各种氨基酸吸附能力的不同对氨基酸进行分离纯化。
离子交换法的分离步骤主要包括树脂的处理、装柱、平衡、加样、洗脱等步骤。
离子交换法的示意图：离子交换法应用广泛，如味精厂采用强酸性阳离子交换树脂对L-谷氨酸阳离子进行选择性吸附,使发酵液中影响L-谷氨酸晶的杂质得以分离，日本味之素公司采用逆流多级交换,大大减少了树脂用量和洗涤树脂用水量；732阳离子交换树脂可用来分离纯化L-苯丙氨酸；分离纯化L - 谷氨酰胺基本上都采用阴阳双柱离子交换法；将胱氨酸发酵液通过732阳离子交换柱分离出精氨酸、组氨酸和赖氨酸；采用离子交换热参数泵从水解液和制革废水中浓缩分离氨基酸；采用Diaion SK1B 强酸性阳离子交换树脂从发酵液中吸附L-赖氨酸，等等的方法。
离子交换法也有自身的局限性，由于离子交换法是利用氨基酸等电点的不同，所以当两个或者多个氨基酸的等电点相近时，便无法分离，另外，氨基酸在树脂当中扩散速度较快，就要求料液的流速也相对较慢，这样自然造成了分离的缓慢，离子交换本身的生产原理也决定了反应难以连续还进行，这给工厂自动化生产带来影响，难以大规模地推广。
沉淀法，沉淀法是历史最悠久的分离纯化方法，目前仍在工业上发挥着重大的作用。
氨基酸工业中常用沉淀法有等电点沉淀法，特殊试剂沉淀法和有机溶剂沉淀法。
沉淀法原理是根据某些氨基酸可以与某些有机或者无机化合物结合而形成沉淀，可以利用这种性质向溶液中加入特定的沉淀剂，使目标氨基酸沉淀，与其他氨基酸分离，在分离后再将氨基酸与沉淀剂分离即可。
猪血中超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及活力测定
实验三猪血中超氧化物歧化酶（SOD）的分离纯化及活力测定生物化学与分子生物学刘志坚S2*******一、超氧化物歧化酶（SOD）概述SOD是一种酸性蛋白，是唯一以自由基为底物的酶，具有清除自由基的功能酶，在酶分子上共价连接金属辅基，因此它对热、PH以及某些理化性质表现出异常的稳定性。
SOD根据所含金属辅基不同可分为三种：第一种是铜（Cu）锌（Zn）金属辅基称（Cu/Zn-SOD）最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于肌体细胞浆中。
它为同源二聚体酶，其中一个亚基结合一个Cu原子，另一个亚基结合一个Zn原子，两个亚基间的相互作用提高了酶的催化活性和稳定性，金属原子的氧化还原完成了酶的催化功能。
第二种是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内。
Mn—SOD是由203个氨基酸残基构成的四聚体，Mn3+处于三角双锥配位环境中，其中一轴向配位为水分子，另一轴向被蛋白质辅基的配位His-28占据，另3个配位His-83、His-170和Asp-166位于赤道平面。
第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。
其活性中心是3个His，1个Asp和1个H2O扭曲四面体配位而成。
其中，Mn—SOD 、Fe—SOD的结构特征是不含半胱氨酸，含有较多的色氨酸和酪氨酸，因此紫外吸收光谱类似一般蛋白质，在280nm附近有最大吸收峰，Mn—SOD的可见光谱在475nm处附近有最大吸收，Fe—SOD在350nm处有最大吸收，这都反映了所含金属离子的光学性质。
SOD为自由基清除剂，它广泛存在于生物体的各种组织中，能清除O2-（超氧阴离子）自由基，而超氧阴离子自由基具有细胞毒性，可使脂质过氧化，损伤细胞膜，引起炎症，肿瘤和自身免疫性疾病，并可能促使机体衰老。
它的功能为：（1）抑制心脑血管疾病：机体的衰老与体内氧自由基的产生与积累密切相关，SOD课清除人体内过多的有害的氧自由基，是对健康的有益的功效成分。
猪脑提取物对阿尔茨海默病大鼠学习记忆的保护作用
( M DA )、一氧化氮 ( NO )、一 氧化 氮合 酶 ( NOS )测 定试 剂盒 为南 2. 5 被动回避性跳台试验 各 组动物 给药 后 1 h 进行被 动回 避
京建成生物工程研究 所产品; 其余为国产分析纯。
性跳台 试验 [ 7]。将大鼠放入实 验箱内, 适应 5 m in 后, 通以 36 V
< 0. 01为组间有极显著差异。
收稿日期: 2009 07 18; 修订日期: 2010 01 28
3 结果
基金项目: 江苏大学高级人才启动基金项目 ( N o. 08 JDG 005 ) 作者简介: 李永金 ( 1968- ), 男 (汉族 ), 江 苏仪征 人, 现任 江苏大 学基础 医学与医学技术学院副教授、硕士生导师, 硕士学位, 主 要从事神经、肿瘤 药理研究工作.
4. 15 1. 46
1. 62 1. 26 4. 77 1. 48b 3. 00 1. 35d 3. 08 1. 50d 2. 31 1. 25d 1. 77 1. 36d 3. 23 1. 01d
与假损伤组比较, bP < 0. 01; 与模型对照组比较, cP < 0. 05 , dP < 0. 01; n= 13
分, 可用于治疗 AD 等一 些脑功 能性 疾病 [2~ 4] , 目前已 有众 多的
法 [ 5, 6], 对双侧海马 CA 1 区立体 定位后, 将用 0. 01 mo l L- 1 PBS 缓冲液溶解的 QA 2 l(含 150 nm o l) 缓慢注入海马 CA1 区, 假 损 伤组注 入同等体积 PBS。每侧 注入时 间为 5 m in, 留针 5 m in, 起
关键词: 猪脑提取物; 阿尔茨海默病; 学习记忆 DO I标识: do:i 10. 3969 / .j issn. 1008 0805. 2010. 07. 061 中图分类号: R285. 5 文献标识码: B 文章编号: 1008 0805( 2010) 07 1700 02
离子交换法分离纯化猪硫酸软骨素的研究
ｐ ｒ ｉ ａ ｔｌ ｇ ｄｒ ｙ ｉ ｏ ｃ ｓ ｉ ｖ ｌ ｐｅ ｎｄ ｏ ｐ ｒ ｄ ｏ ｃｎｅ ｃ ｒ ｉａ ｅ ｈｙ ｏｌ ｓｓ ｐｒ ｄｕ ｔ ｓ ｄｅ ｅ ｏ ｄ ａ ｃ ｍ ａ ｅ ｗｉｈ ｈｅ ｏ ｅ ｉ ａ ｅ ｚ ｔ ｔ ｃ ｎｖ ｎｔｏｎ ｌ ｎ ｙｍｅ —
脂 各 ５ｇ 置于 ２ ０ｍＩ 带 塞 三 角 锥 形 瓶 中 ， 别 加 ， ５ 分 入 蛋 白质量 浓 度 为 ２ ． ／ ０ ５ｍｇ ｍＬ的 酶解 液 ５ ＯｍＬ， 室温 振荡 吸附 ， 隔 ３ ｉ 每 ０ｒ ｎ取样 一 次 ， ａ 每次 １０ｍＩ， ．
测 定交 换 液 中的蛋 白质 量 浓 度． 下 式 计 算 树脂 对 按
Ｋ ｅ ｒ ｓ：ｃ ｙ ｗｏ ｄ ｈｏｎ ｏ ｔｎ ｓ ｌａ ｅ； ｐ ｃｎｅ ｃ ｒ ｉａ ｄｒ ｉｉ ｕ ｆ ｔ ｏｒ ｉ ａ ｔｌ ｇｅ；ｉ ｎ ｅ ｈａ ｇｅ；ｐｕ ｉｉａ ｉ ｎ ｏ ｘｃ ｎ ｒｆｃ ｔｏ
收 稿 日期 ： Ｏ ０ １ －８ ２ １ — ２２
基 金 项 目 ： 际科 技 合 作 与 交 流专 项 （０ ８ Ｒ ０ ８ ） 国 ２ ０ ＤＦ ４ ２ ０ 作者简 介： 谢 捷 （ ９ ８ ） 女 ， 江 杭 州 人 ， 师 ， 士 ， 要 从 事 天 然 产 物 研 究 ， － ｉ ｘｅｉ ７ ｓ ｈ ． ｏ ． 信 作 者 ： 平 教 授 １７ ， 浙 讲 硕 主 Ｅ ｍａｌ ｉ ｅ ＠ ｏ ｕ ｃｒ 通 ： ｊ９ ｎ 王
５ ，ｒｓ ｃｉ ｌ ．６ ｅ ｐｅ ｔｖｅ ｙ； ｐ ｏｔ ｉ ｏ ｅ ａ ｃ ｅ ｓ ｄ ｒ ｅｎ ｃ ｎｔ ｎｔ ｗ ｓ ｄｅ ｒ ａ ｅ ｂｙ ８ ． Ｃａ ｉ ｎ ｅ ｈａ ｇｅ ｅ ａ ａ ｉ ２ ．６ ｔｏ ｘｃ ｎ ｓ ｐ ｒ ｔｏｎ ｏｆ
猪脑水解液的制备及其生物学活性研究_林元藻
组别 血 Hb / 血乳酸 脑重 /
g / L ( OD)
g
对照组 12. 26± 0. 23± 1. 74± 1. 38 0. 06 0. 08
雌性大鼠 ( n= 10)
血 Hb / 血乳酸 脑重 /
g / L ( OD)
g
12. 46± 0. 23± 1. 72± 0. 80 0. 07 0. 04
高剂量组
50
20
15. 6*
* 与对照组比较 ; p < 0. 01
结果表明猪脑水解液能延长小鼠在台上停 留时间 ,降低 5 mi n内下台错误率。低剂量组和 高剂量组与对照组比较 ,差异有极显著性意义 ( p < 0. 01) ,提示本品能明显促进小鼠被动学习 记忆的巩固和强化 ,具有一定的增强智能作用。 2. 5 对幼龄大鼠 Hb、血乳酸及脑重的影响
结果表明猪脑水解液能延长小鼠被动学习 所获得的潜伏期 ,减少错误百分率 ,大剂量组效 果更为显著 ,提示其有明显增加小鼠获得学习 记忆能力的作用。
氨基酸和生物资源
· 7·
表 2 猪脑水解液对小鼠避暗试验的影响 Table 2 Effect of hydr olysate o f swine br ain
2 结果与讨论
2. 1 氨基酸组成
用 Wat ers-150氨基酸自动分析仪测定了
猪脑蛋白酶水解液游离氨基酸含量 ,并将样品 用酸水解后测定其总氨基酸含量。 另取样品用 对二甲基甲醛法测定色氨酸。 结果见表 1。
表 1 猪脑水解液的氨基酸含量
T able 1 Amino acids co mposition in the
关键词 猪脑 水解液 制备 生 物学活性
脑是哺乳动物的中枢神经器官 ,主要含脂 类和蛋白质 ,还含有神经递质、多种神经肽及粘 多糖等。 从 70年代起 ,国外已有将动物脑去脂 后的脑蛋白水解 物用于治疗一些脑功能性疾 病。德国、罗马尼亚生产的 Crcli zi n,奥地利生产 的 Crcbroli zi n及日本的 Co rcm on等都是脑水 解物的大脑营养补剂 ,近年我国也用胎猪脑成 功 研制和开发出脑活素 ( Cerebro lisi n)的类似 产品 ,如脑蛋白水解物注射液 ,并获得卫生部批 准为生化药物 [1～ 3 ]。目前 ,用于临床的脑蛋白水 解注射剂的原料严格限定为胎猪脑或胎牛脑 , 以减少其毒副作用。 本文观察了以屠宰猪脑为 原料制备的脑蛋白水解液对小鼠的被动学习能 力 及对 大鼠血 红蛋 白、 脑重 、游泳 后血 乳酸 含量 变化的影响 ,并测定了其氨基酸和某些金属元 素含量 ,以探讨其营养价值和生理功能 ,为开拓 猪脑的综合利用提供实验依据。
一种快速定量检测氨基酸脱羧酶活力的比色方法及其应用
试剂 Ｒｅａｇｅｎｔｓ
氨 基 酸 脱 羧 酶 （ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ） 是 催化脱去某种氨基酸的羧基生成对应胺的裂解酶 的总称［１－２］ ，主 要 通 过 消 耗 质 子 和 释 放 二 氧 化 碳 （ ＣＯ２） 催化某些氨基酸的脱羧。 氨基酸脱羧生成 的胺类物质在动物体内有重要作用，脱羧后形成 的胺类是某些维生素或激素的成分，具有特殊生 理作用。 氨基酸脱羧酶活力测定方法的建立对于 研究氨基酸代谢具有重要意义。 目前测定氨基酸 脱羧酶活力的方法主要有以下几种：高效液相色 谱（ ＨＰＬＣ） 、ｐＨ 指示 剂 和 放 射 性 标 记 法。 高 效 液 相色谱法精确性和重复性好，但是耗时长，并且需 要专门的设备［３］ 。 ｐＨ 指示剂法是利用 ｐＨ 变化对 氨基酸脱羧酶活力进行测定［４］ ，通过分光光 度 计
采用比 色 方 法 定 性 或 定 量 检 测 氨 基 酸 脱 羧 酶 活 力［５－７］ ，ｐＨ 指示剂法费时费力，仅可对几种特定的 氨基酸脱羧酶活力进行测定，并且在测定过程中 使用的有机溶剂毒性较大。 放射性标记法采用放 射性物质标记氨基酸底物［８］ ，通过监测 ＣＯ２ 的形 成量来对 氨 基 酸 脱 羧 酶 活 力 进 行 定 量 检 测［９－１０］ ， 该方法操作复杂，且必须在防放射性物质空间里 进行操作，对实验人员和环境污染大。 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶是固碳途径中活力 较高的羧化酶，利用羧化 酶 的 偶 联 反 应 固 定 ＣＯ２ 可检测氨基酸脱羧酶活力［１１］ 。 基于目前还没有快 速定量检测氨基酸脱羧酶活力的详细方法和商品 化的试剂盒。 为了替代测定成本高、耗费时间较
１期
陈庆菊等：一种快速定量检测氨基酸脱羧酶活力的比色方法及其应用
３９１
长、污染大的测定方法，本 试 验 采 用 酶 偶 联 固 定 ＣＯ２ 技术，旨在建立一种对仪器要求低、成本消耗 小、操作简 单 的 快 速 定 量 检 测 氨 基 酸 脱 羧 酶 活 力 的方法，为进一步开发商品化试剂盒做准备，并为 深入研究动物组织、微生物培养液等中氨基酸脱 羧酶活力提供一种简便的方法。
分离纯化谷氨酸脱羧酶的方法[发明专利]
![分离纯化谷氨酸脱羧酶的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/aacc108958fafab068dc02bc.png)
专利名称：分离纯化谷氨酸脱羧酶的方法专利类型：发明专利
发明人：黄增才
申请号：CN201610661029.3
申请日：20160813
公开号：CN107723283A
公开日：
20180223
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种利用层析技术从微生物中分离纯化谷氨酸脱羧酶的方法，包括以下步骤：1）低温反复冻融、溶菌酶破碎菌体；（2）盐析：饱和硫酸铵溶液沉淀；（3）离子交换层析样品制备：用阳离子交换层析柱结合缓冲液重悬沉淀，制得上样样品；（4）阳离子交换层析柱纯化：所得上样样品经阳离子交换层析柱纯化，收集上样穿透液体；（5）阴离子交换层析柱纯化：NaCl分段洗脱，收集洗脱液，得到谷氨酸脱羧酶酶液。
本发明公布的纯化工艺中将阳离子交换柱层析柱与阴离子交换柱层析柱串联，大大缩短纯化时间，简化样品处理过程。
利用本发明公布的方法所得谷氨酸脱羧酶回收率约为60%，纯化倍数为20左右。
申请人：黄增才
地址：528100 广东省佛山市三水区大塘镇大塘圩东风街50号
国籍：CN
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氨基酸脱羧作用
氨基酸脱羧作用“同学们，今天咱们来聊聊氨基酸脱羧作用。
”我站在讲台上对着下面的学生们说道。
氨基酸脱羧作用啊，这可是个很重要的知识点呢。
简单来说，就是氨基酸在脱羧酶的催化下，脱去羧基生成胺类化合物的过程。
就拿谷氨酸来说吧，它可以通过脱羧作用生成γ-氨基丁酸。
γ-氨基丁酸在咱们人体里可是有着重要作用的呢，它是一种重要的抑制性神经递质。
同学们想想，如果没有氨基酸脱羧作用，那我们身体里的这些重要物质不就没办法产生了嘛。
再比如说组氨酸，它脱羧后会生成组胺。
组胺大家应该也不陌生，它和我们的过敏反应等都有关系。
如果组胺异常增多，就可能导致一些不适症状。
在实际生活中也有很多和氨基酸脱羧作用相关的例子。
比如说在一些食品的加工过程中，就利用了氨基酸脱羧作用。
像奶酪的制作，在发酵过程中，一些氨基酸就会发生脱羧反应，产生一些独特的风味物质，让奶酪有了特别的味道。
而且啊，氨基酸脱羧作用在生物体内的调节过程中也发挥着重要作用。
它可以影响神经信号的传递、血压的调节等等。
同学们，可别小瞧了这个氨基酸脱羧作用。
它虽然看似只是一个小小的化学反应，但对我们生物体的正常运转可是有着大大的影响呢。
大家要知道，生物体内的各种反应都是相互关联、相互作用的。
氨基酸脱羧作用产生的这些胺类物质，又会参与到其他的代谢途径中，形成一个复杂而又精妙的网络。
就像我们人体一样，各个器官、各个系统之间也是紧密配合的。
一个小小的变化可能就会引起一系列的连锁反应。
所以啊，我们学习这些知识，不仅是为了应付考试，更是为了了解我们自己的身体，了解这个神奇的生物世界。
我希望同学们以后遇到相关的问题，都能想起今天咱们讲的氨基酸脱羧作用，能够运用这些知识去分析和解决问题。
好了，今天关于氨基酸脱羧作用就先讲到这里，大家有什么问题随时提问。
猪胎盘功能性肽的分离纯化及其活性的初步研究
猪胎盘功能性肽的分离纯化及其活性的初步研究胎盘肽是人类功能性食品研究和开发的重要资源，猪胎盘是未被充分开发利用的资源，它含有人体所必需的多种氨基酸，像缬氨酸、亮氨酸、赖氨酸等，它还具有调节内分泌、增强免疫、补血美容、增强记忆、抗应激等功效。
充分探索其生物活性功能，开发具有特殊生物活性，如抗氧化性、降血压性等的功能性食品或生物制品，具有重要的理论和实践意义。
本文以猪胎盘作为原料，采用胃蛋白酶水解制备猪胎盘功能性短肽，研究其生物活性，旨在为猪胎盘功能性肽的充分利用提供科学依据。
主要研究结果如下：（1）采用正交试验，在单因素试验的基础上，得到最佳工艺酶为胃蛋白酶，最佳工艺条件为酶与底物比13%、pH2.5、温度30℃，在最佳工艺条件下制得的猪胎盘酶解液粗提物的还原力为1.3257，水解度为41.38%。
（2）利用紫外可见分光光度计，测得猪胎盘酶解液的胎盘肽含量为17.37mg/mL；紫外扫描猪胎盘酶解液，得到其最大吸收峰为205nm。
（3）采用SDS-PAGE验证不同分子量酶解液的正确性，对不同分子量的猪胎盘酶解液的DPPH自由基清除活性这一主要指标的测定，得知<3KD的猪胎盘酶解液的活性最好，其DPPH自由基清除活性的IC50值为9.97mg/mL。
将其经过SephadexG-25和Sephadex G-10的分离纯化，得到了活性较高的峰B组分，其DPPH自由基清除活性和ACE抑制活性的IC50值分别为7.89mg/mL 和12.69mg/mL。
（4）以DPPH作为主要指标，对分离纯化后的猪胎盘酶解液经高温、低温、酸和碱处理，得到处理后的酶解液的DPPH自由基清除活性的IC50值分别为9.89mg/mL、9.5mg/mL、8.94mg/mL、9.63mg/mL，与未处理的猪胎盘酶解液的IC50值7.89mg/mL相比，经过高温、低温和酸碱处理后的猪胎盘酶解液的DPPH自由基清除活性均有小幅度降低，但变化幅度不大，说明酶解得到的猪胎盘肽的稳定性较好。
猪脑钙调素的分离,纯化及鉴定
猪脑钙调素的分离,纯化及鉴定
鄢佳程;吴兆锋
【期刊名称】《华西医科大学学报》
【年(卷),期】1989(020)003
【摘要】作者用苯-琼脂糖(Phenyl-Sepharose)亲和层析等方法从猪大脑组织中分离纯化出钙调素。
经鉴定,PAGE板电泳呈现一条带;产率:4.2mg/100g大脑;分子量,经SDS-PAGE测定为14.1±1.0kd(含1mmol/L CaCl_2)和164.9±1.2kd(含
1mmol/L EGTA),pI=4.35;对猪脑依赖钙调素磷酸二酯酶激活6.5倍,其激活作用被三氟拉嗪抑制。
【总页数】4页(P235-238)
【作者】鄢佳程;吴兆锋
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】TQ464.51
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氨基酸脱羧酶对照生化鉴定管
氨基酸脱羧酶对照生化鉴定管是一种用于检测样品中氨基酸脱羧酶活性的试剂盒，由不同种类的氨基酸和相关酶组成。
该试剂盒可用于各种样品中氨基酸脱羧酶的检测和鉴定，如食品、饲料、药品等。
使用氨基酸脱羧酶对照生化鉴定管时，需要将待测样品与试剂盒中的试剂混合，并在适宜的温度下培养一定时间。
然后根据样品的颜色变化和对照管的比较，判断待测样品中是否存在氨基酸脱羧酶活性。
需要注意的是，在使用氨基酸脱羧酶对照生化鉴定管时，应严格按照说明书上的操作步骤进行，以免影响检测结果的准确性。
同时，对于不同的样品和实验条件，可能需要进行适当的调整和优化。
没食子酸脱羧酶的分离与纯化
没食子酸脱羧酶的分离与纯化李文君;王成章【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2016(028)007【摘要】本实验研究了没食子酸脱羧酶(Gallic acid decarboxylase,GAD)的提取、分离、分析及结构表征.建立了考马斯亮蓝法(Y=4.8748X-0.0255,R2=0.9922)和双缩脲法(Y=0.2476X+ 0.0003,R2=0.9993)测定GAD蛋白含量的线性方程.对GAD粗酶液,先采用pH为6,60％/70％的(NH4)2SO4盐沉淀32 h;然后,利用35 kD透析膜处理料液12 ～16 h;再将透析液经二乙氨基乙基(Diethyl Aminoethanol,DEAE)纤维素树脂,在pH为6.5时饱和吸附量可达2.838 mg/g,采用0.4 mol/L NaCl溶液进行洗脱的洗脱液经过G-100葡聚糖凝胶纯化.采用SDS-PAGE聚丙烯酰胺电泳分离得到蛋白样品条带,MALDI-TOF-MS进行结构表征,得到的蛋白分子质量45.62kD,等电点5.19,与已知蛋白质gi/334732950匹配度为53,说明两者具有相似性,但匹配到的序列组仅占蛋白全序列的3％,初步推测GAD可能是一种新的酶.【总页数】8页(P1109-1115,1059)【作者】李文君;王成章【作者单位】中国林业科学研究院林产化学工业研究所生物质化学利用国家工程实验室国家林业局林产化学工程重点开放性实验室江苏省生物质能源与材料重点实验室,南京210042;中国林业科学研究院林产化学工业研究所生物质化学利用国家工程实验室国家林业局林产化学工程重点开放性实验室江苏省生物质能源与材料重点实验室,南京210042【正文语种】中文【中图分类】Q814.1【相关文献】ctococcus lactis ctis IL1403谷氨酸脱羧酶的克隆表达、分离纯化及活性研究 [J], 张天萌;沐万孟;江波;张涛;倪靓霞2.大豆谷氨酸脱羧酶分离纯化及酶学性质研究 [J], 姚琪;张永忠3.猪脑谷氨酸脱羧酶的分离纯化以及生物学活性鉴定 [J], 蔡燕惠;黄义德;陈爱萍;焦鹏;刘超4.绿豆谷氨酸脱羧酶的分离纯化工艺 [J], 王宪青; 魏彤; 石彦国5.绿豆钙调素的分离纯化及其对谷氨酸脱羧酶的调节作用 [J], 王宪青;魏彤;石彦国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
谷氨酰胺的分离纯化研究_吕立获
中图分类号：Q5；文献标识码：A；文章篇号:1007-2764(2005)02-0210-073谷氨酰胺的分离纯化研究吕立获，周晓云，姚婷婷，朱巍，曹太先（浙江工业大学，浙江杭州310032）摘要：Ｌ-谷氨酰胺是人体内最重要的游离氨基酸，它既是一种重要的生化制剂，也是一种极有前途新药,目前已作为一种新型的饲料添加剂备受关注。
发酵法生产谷氨酰胺也正成为国内外的研究热点。
本文综述了从发酵液中提取纯化Ｌ-谷氨酰胺的多种工艺方法，为开展Ｌ-谷氨酰胺的工业化生产提供了一定的依据。
关键词：谷氨酰胺；离子交换法；钠滤膜法；冰析法Improvement of Extracting Glutamine from BrothLv Li-huo, Zhou Xiao-yun, Y ao Ting-ting, Zhu Wei, Cao Tai-xian(Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310032, China)Abstract: L-glutamine is the most important amino acid of the human body，it is an important chemical and biological reagent，as it is also a new medicine. Producing L-glutamine through fermentation has become the focus of domestic and foreign studies. The article mainly discussed several methods of extracted glutamine from broth. To some extent, it may live some help to industrialized production of glutamine.Keywords: Glutamine；Ion-exchange；Nanofiltration membrane separationＬ-谷氨酰胺(Gln)是Ｌ-谷氨酸ｒ-羧基酰胺化的一种氨基酸，是构成蛋白质的氨基酸之一。
甲硫氨酸脱氢酶在大肠杆菌中高效表达、分离纯化与酶活性分析的开题报告
甲硫氨酸脱氢酶在大肠杆菌中高效表达、分离纯化与酶活
性分析的开题报告
一、选题背景
甲硫氨酸脱氢酶（MADH）是一种能氧化甲硫氨酸（Met）生成甲硫醇（CH3SH）的酶，在微生物、植物和动物中普遍存在，是硫代谷氨酸（Cys）和甲硫氨酸代谢途径中的一个关键酶。
MADH在细胞内能够通过将Met转化为CH3SH来缓解细胞内Met含量过高而引发的毒性反应，从而影响S-腺苷甲硫氨酸（SAM）代谢途径。
同时，在若
干微生物中MADH还有利于维持细胞内电子供应网络、调节氧气气相压力和参与胶原
合成等多种重要生理过程。
鉴于MADH的重要生物学功能，对其结构、功能和代谢途径的深入研究可为生物技术领域中的甲硫氨酸代谢和受体蛋白的开发提供有益信息和思路。
因此，高效表达、分离纯化和酶活性分析甲硫氨酸脱氢酶在生物技术领域中具有重要的研究意义。
二、研究目的
本研究旨在建立高效表达、分离纯化和酶活性分析甲硫氨酸脱氢酶的方法，为该酶的进一步研究提供有力支持。
三、研究内容与方法
本研究首先构建目标蛋白的表达载体，并在大肠杆菌中进行高效表达。
接下来，通过亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析等多步骤分离纯化目标蛋白。
最后，采
用比色法和高效液相色谱法对酶活性进行分析。
四、研究意义
本研究的意义在于建立高效表达、分离纯化和酶活性分析甲硫氨酸脱氢酶的方法，为进一步探究该酶在代谢途径中的作用和机制提供有力支持，同时也有利于开发甲硫
氨酸代谢和受体蛋白的新型生物技术。
猪胰蛋白酶的分离纯化与鉴定
猪胰蛋白酶的分离纯化与鉴定一、实验目的1、掌握等电点沉淀、盐析及离子交换层析原理及操作。
2、熟悉胰蛋白酶分离纯化的一般过程。
3、掌握胰蛋白酶活力测定方法及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术。
二、实验原理胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中，在Ca2+的存在下，被肠激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活，从肽链N端赖氨酸和异亮氨酸残基之间的肽键断开，失去一段六肽，分子构象发生一定改变后转变为有活性的胰蛋白酶。
猪胰蛋白酶的分子量约为23400，其等电点约为pH10.8，最适pH7.6～8.0，胰蛋白酶在pH3条件下较稳定，在pH5以上易自溶，Ca2+离子对胰蛋白酶有稳定作用，在低温条件下贮存数周内酶的活性不发生明显的改变。
本实验以猪胰脏为材料，首先用酸性水溶液抽提组织，在Ca2+离子存在条件下，以少量胰蛋白酶结晶激活所得的酶原，再以硫酸铵盐析获得粗胰蛋白酶。
经过透析除盐，以羧甲基纤维素柱阳离子交换层析进行纯化，即可获得较纯的胰蛋白酶。
胰蛋白酶能催化蛋白质的水解，对于由碱性氨基酸（精氨酸、赖氨酸）的羧基与其他氨基酸的氨基所形成的键具有高度的专一性。
此外还能催化由碱性氨基酸和羧基形成的酰胺键或酯键，其高度专一性仍表现为对碱性氨基酸一端的选择。
胰蛋白酶对这些键的敏感性次序为：酯键> 酰胺键> 肽键。
因此可利用含有这些键的酰胺或酯类化合物作为底物来测定胰蛋白酶的活力。
本实验以酪蛋白为底物的方法来测定胰蛋白酶活力，其主要用于测定胰蛋白酶粗制品的活力。
胰蛋白酶催化水解底物酪蛋白生成不被三氯乙酸沉淀的小分子肽以及氨基酸。
在一定浓度范围内酶的水解滤液在波长280nm处光吸收的增值与胰蛋白酶的活力单位成正比。
测定中以标准酪氨酸溶液的光吸收值做对照，根据酶活力蛋白的定义，确定样品中胰蛋白酶的活性。
活力单位的定义：在一定条件下每分钟酶水解滤液光吸收的增值与1μmol酪氨酸在280nm处光吸收值相同时的酶量为一个蛋白酶活力单位（U）。