硫磺菌的固体和液体培养研究
硫磺菌发酵液抗菌活性的初步研究
西北农业学报 2006,15(6):204～207A cta A g riculturaeB oreali2occi dentalis S inica硫磺菌发酵液抗菌活性的初步研究王 娟1,高锦明13,张鞍灵1,李晓明2(1.西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌 712100;2.西北农林科技大学资源与环境学院,陕西杨凌 712100)摘 要:对硫磺菌摇瓶发酵的乙酸乙酯和正丁醇萃取物进行了抗菌试验。
结果表明,硫磺菌发酵液乙酸乙酯萃取物对7种细菌、1种霉菌和8种植物病原菌均有较为显著的抗菌活性,正丁醇萃取物对3种细菌、3种霉菌和5种植物病原菌也具有较好的抗菌效果,且总体上抗菌活性随浓度的增大而增强。
结果还显示同一浓度萃取物对不同菌种的抗菌作用亦不同。
硫磺菌发酵液中具有抗菌活性物质。
关键词:硫磺菌;发酵液;萃取物;抗菌活性中图分类号:S481+.9 文献标识码:A 文章编号:100421389(2006)0620204204Preliminary Study on the Anti2microbial Activities of FermentationB roth of L aeti por us sul p hureum(Fr).MurrillWAN G J uan1,GAO Jin2ming13,ZHAN G An2ling1and L I Xiao2ming2(1.College of Life Science,Nort hwest A&F University,Yangling Shaanxi 712100,China;2.College of Resources andEnvironment,Nort hwest A&F University,Yangling Shaanxi 712100,China)Abstract:The brot h of L aeti porus s ul p hureum(Fr).Murrill fermentation in an oscillating manner were ext racted wit h et hyl acetate and n2butyl alcohol and t he anti2microbial activity of t he extract s were tested.The result s indicated t hat t he ext ract by et hyl acetate presented a significant effect on7 species of bacteria、1species of molds and8species of plant pat hogens,while t he antibiotic activities of t he ext ract by n2butyl alcohol on3species of bacteria、3species of molds and5species of plant pat hogens were also obvious,and t he higher t he concent ratio n,t he larger t he inhibition was.The re2 sult s also showed t hat t he inhibition on t he different tested bacteria and f ungi were different wit h t he same concent ration.As a result,t he brot h of L aeti porus sul p hureum contained anti2microbial active substances.K ey w ords:L aeti porus s ul p hureum(Fr).Murrill;Fermentation brot h;Ext ract s;Anti2microbial ac2 tivity 从微生物代谢产物中寻找控制有害生物的生物农药是新农药研究的一个重要方向[1,2]。
硫磺菌液体培养基及pH值条件的研究
Ｋｅ ｒ ｓ Ｌ ｅｐ ｒｓｓ ｌｈ ｒｕ ， ｉｕｄ ｃ ｌ ｒ ， ｃ ｌ ｍ ｉｍａ ｓ ｙ ｗｏ ｄ ： ａｔ ｏｕ ｕｐ ｕ ｅｓ Ｌｑ ｉ ｕｔ ｅ Ｍｙ ｅｉ ｂｏ ｓ ｉ ｕ ｕ
关键词 ： 硫磺 茵； 液体培 养； 茵丝生物量
中图分类号 ：６ ６２ ￥ ４ ． 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ：０ ３— ５ ８ ２ １ ） １ ０ ８— ４ １０ ５ ０ （００ ０ —０５ ０
Ａ ｔ ｄ ｆＦｅ ｍ ｅ ｔ ｔｏ ｅ ｉ ｍ ｎ Ｈ ｎ ｉｉｎ ｏ Ｓ ｕ ｙ ｏ ｒ ｎ ａ ｉ ｎ Ｍ ｄ ｕ ａ ｄ ｐ Ｃｏ ｄ ｔｏ ｆ Ｌａ ￣ ｒ ｓｓ ｌ ｒ ｕ ｅ ｐｏ ｕ ｕｐｈｕ ｅ ｓ
真菌。经常食用可增进身体健康 ， 其子实体含齿孑 Ｌ
酸（ｎｒ ｏ ｃ ） 可合 成甾体药物 肾上腺皮质激 ｅｕｉ ｉ ａｉ ， ｃｃ ｄ 素， 是预防和治疗多种疾病的重要药物 。前人 曾 Ｊ
报道硫磺菌发酵培养液可产 生有机酸， 可广泛用于
果表 明， 用液体菌种 ， 操作方便 ， 接种成活率高， 且出 菇早 ， 产量高 。作者在利用木腐菌处理松材线虫 Ｊ
ｄｃｔ ａ ｔｅｂｓ ｍ ｄｕ ｒｓｒ ｔｎｃｎｉｅ ｆ ｏ ｐｗ ｅ ３ ） ｐｐｏ １５ ） ＭｇＯ ｉ ｅ ｔ ｔ ｅｔ ｅｉｍ ｐｅｃｉ ｉ ｏｓｔ ｏ ｍ ｏ ｄｒ（ ％ ，ｅｔｎ（ ． ％ ， Ｓ ４・ ａ ｄｈ ｈ ｐｏ ｓｄ ｃ ７ ２ （．５ ）ａｄＫ ２０ （． ％ ） ｈ ｉｂｅｉｉａ Ｈｃｎｉｏ ａ ． ．ｈ ｑｉ ｄａ ｉ Ｈ Ｏ ００ ％ ｎ Ｈ Ｐ ４０２ ．Ｔ ｅｓ ｔ ｌ ｎｔｌ ｏｄｔｎｗ ｓ ０Ｔ ｅｉｕｄｍｅｉｗｔ ｕａ ｉ ｐ ｉ ５ ｌ ｈ
野生朱红硫磺菌驯化栽培研究
野生朱红硫磺菌驯化栽培研究曾先富1,廖志勇2,张 军1(1.成都市第一农业科学研究所,成都 610072;2.四川阿坝州科学技术研究院,马尔康 624000) 摘要:营养试验、菌丝体培养和出菇温度试验、培养基酸碱度试验、出菇条件试验结果表明:朱红硫磺菌菌丝体适宜生长的温度范围为15～32℃,最适温度范围为22～28℃;子实体发生的最适温度为16～25℃,气温低于16℃,子实体色泽为淡橙色,16℃以上,子实体呈鲜橙红色;培养料适宜营养C /N 为20～26/1;朱红硫磺菌菌丝体适宜酸碱度范围为pH3.0～8.0,最适酸碱度为pH4.0～6.5;朱红硫磺菌的产量与光照条件无关,但光照强度影响子实体的发生时间和色泽;朱红硫磺菌栽培原料广泛,凡栽培木腐菌的培养料均可用于栽培朱红硫磺菌。
关键词:野生;朱红硫磺菌;驯化中图分类号:S646.1+2 文献标识码:A 文章编号:1003-8310(2005)06-0018-03朱红硫磺菌(Laetiporus sulphureus ),也称硫色孔菌,树花菌,鸡冠菌,鲑鱼菇,属担子菌亚门,层菌纲,非褶菌目,多孔菌科,硫磺菌属。
该菌主要分布于我国南方海拔1200m 以上山区的针阔林中(以针叶林为多),属野生珍稀食、药菌。
子实体幼嫩至成熟时味道鲜美,似鲑鱼,老后呈干酪状,不宜食用,但可入药,具有调节机能,增进健康,提高人体抵抗力的作用。
在野生菌生长区,当地老百姓将该菌的干制品煎服,用于治疗感冒和其它疾病,效果非常好。
据分析,该菌含有丰富的齿孔酸(eburicoic acid ),这种物质是合成甾体类药物(类固醇化合物)的主要原料,是合成口服避孕药和治疗雄性器官功能衰退及某些妇科疾病药物的重要原料。
该菌对小白鼠肉瘤180及艾氏瘤的抑制率分别为80%和90%。
该菌子实体大型,初期瘤状或脑髓状,以后长出一层层覆瓦状的菌盖,菌盖直接着生长基质上,无菌柄,菌盖直径8～30cm ,厚1～6cm ,有放射状条棱和皱纹,菌盖表面为朱红色或鲜橙黄色,背面和菌盖边缘为白色或淡硫磺色,菌盖边缘波浪状至瓣裂,菌肉白色或肉色,管孔面硫磺色,干后退色,空口多角形,平均每m m3～4个,孢子无色,光滑,卵形或近球形,(4.5～7.4)μm ×(4～6)μm 。
硫磺菌的固体和液体培养研究
食 用 菌 学 报 ＠ ２ ０ ． ４ ４ ：５ ～ ５ ０７１（） ５ ８
文 章 编 号 ：０ ５ ９ ７ （ ０ ７ ０ —０ ５ —０ １０ — ８３ ２０ ）４ ０５ ４
硫 磺 菌 的 固体 和 液 体 培 养 研 究
闫梅霞 ，胡 清秀
得到 子实体 ｌ 。王 娟 等 （ ０ ６ 报 道 硫 磺 菌 发 酵 ＿ ２ ］ ２０）
液 中具有 抗 菌 活 性 物 质 ， 细 菌 、 菌 和 植 物 病 对 霉
收 稿 日期 ：０ ７ １ — ２原 稿 ； ０ ７ １ － ２修 改 稿 ２ ０ — ００ ２０ — １ ０
麦粒 培养基 （ ） 麦粒 ｉ ０ ， Ａ１ ： ０ ０ｇ 石膏 １ ， ２ｇ 碳
１ １ １ 供 试 菌 株 ．．
硫 磺 菌 菌 株 为 本 实 验 室 自南 京 瓦 屋 山 野 外
采集 ， 离 、 化而来 。 分 纯
１ １２ 复合 Ｐ ．． ＤＡ 培 养 基
专 利产 品［ 专利 号 为 Ｃ ９ １ ８ １ Ｘ 硫 磺菌 制 剂 Ｎ９ １ ０ ７ ． ］ ［ 口服 液 、 （ ） 胶 束 、 丸剂 型 ］ 具 有迅 速 缓 粉 散 、 蜜 ，
（ 国农 业 科 学 院农 业 资 源 与农 业 区 划研 究 所 ， 京 １０ ８ ） 中 北 ０ ０ １
摘
要 ：从 野 外采 集 、 离 纯 化 得 到 硫 磺 菌 （ ａ ｔ ｏ ｕ ｕｐ ｕ ｅ ｓ） 分 Ｌ ｅｉ ｒ ｓ ｌ ｈ ｒ ｕ 菌株 ， 进 行 硫 磺 菌 的 固体 和液 体 培 养 试 ｐ ｓ 并
验 。试 验 表 明 ， 磺 菌 在 复 合 Ｐ Ａ 培 养 基 上 生 长 良好 ， 丝 生 长 速 度 为 ３ ２ ｍｍ／ ； 代 料 栽 培 中 以 麦 粒 或 栎 硫 Ｄ 菌 ． ｄ在 木 屑 培养 基 培 养 硫 磺 菌 菌 种 时 菌 丝 生 长 速 度 快 ， 丝 浓 密 ； ８种 液 体 培 养 基 配 方 中筛 选 出菌 丝 体 产 量 较 高 菌 从 的 配方 ， 方 为 ： 萄 糖 ３ ， 粉 ２ ， 米 粉 １ ， 配 葡 ０ｇ 豆 ０ｇ 玉 ０ｇ 酵母 提 取 物 ５ｇ ＫＨ２ Ｏ １ｇ Ｃ Ｃ ２ｇ Ｍｇ Ｏ ０ ５ｇ 水 ， ， ａ Ｏ。 ， Ｓ ． ， Ｐ １０ ０ ０ｍＬ， 丝 体 产 量 为 ２ ／ ０ 。 菌 ２ｇ １ ０ｍＬ
培养菌种的方法有几种
培养菌种的方法有几种培养菌种是微生物学研究中的基础技术之一，它是指将微生物在适宜的环境中得以生长和繁殖，以便进行相关的研究和应用。
根据不同的目的和需求，培养菌种的方法可以分为多种不同的类型。
下面将详细介绍一些常见的培养菌种的方法。
一、液体培养菌种的方法液体培养是利用液体培养基来培养微生物。
液体培养常用于大规模的菌种生产和实验室试验，它具有操作简便、易于扩展培养规模的优点。
液体培养可以分为摇瓶培养和搅拌罐培养两种。
1. 摇瓶培养摇瓶培养是将菌种接种到含有适宜营养物的培养基中的密封瓶内，通过摇动瓶子来提供充足的氧气和养分供给，促进微生物的生长繁殖。
在实验室中，常用的摇瓶培养器有搅拌培养器、震荡器等。
摇瓶培养可以适用于各类微生物的培养。
2. 搅拌罐培养搅拌罐培养是将液体培养基和菌种接种到搅拌罐中，通过搅拌罐内的搅拌装置来提供充足的氧气和均匀的营养物供给，促进微生物的生长和繁殖。
搅拌罐培养主要适用于培养需要大量氧气的菌种和生产过程中的大规模培养。
二、固体培养菌种的方法固体培养是指将微生物接种到固体培养基上，通过固体培养基提供的营养物来支持菌种的生长。
固体培养可以分为平板培养和斜面培养两种。
1. 平板培养平板培养是将液体培养基倒入培养皿中，使其凝固成为固体培养基，然后将菌液等接种于培养基表面，使菌落在培养基上生长。
平板培养常用于鉴定微生物种类和菌群分析。
2. 斜面培养斜面培养是将液体培养基倒入试管中，然后将试管斜放，在培养基凝固之前稍微晃动试管一下，使培养基凝固成为一层斜面上，然后将菌液等接种于斜面上，使菌落在斜面上生长。
斜面培养常用于长期保存和分离纯培养菌种。
三、溶液培养菌种的方法溶液培养是将微生物接种到液体溶液中，通过溶液中的养分物质来支持微生物的生长和繁殖。
溶液培养常用于病毒和酵母菌等微生物的培养。
1. 细胞培养细胞培养是通过将细胞接种到含有适宜营养物的液体培养基中，提供合适的生长条件来培养和繁殖细胞。
应用固体与液体两种培养基检测支原体结果的比较
应用固体与液体两种培养基检测支原体结果的比较目前实验室用于检测泌尿生殖道解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)的方法主要有PCR法、培养法(液体、固体培养基)。
二合一液体培养基因具有快速且培养与药敏结果同时进行等特点而在临床广泛应用。
近来，有学者对液体培养基检测支原体的可信度提出质疑。
为了验证液体培养基的特异性，本研究采用临床标本拭子平行接种选择性固体培养基和液体培养基的方式，对两种方法检测结果进行了对比分析。
1 材料和方法1.1 材料1.1.1 试剂与仪器液体培养基：Uu和Mh分离、鉴定、药敏试剂盒(珠海丽珠试剂有限公司生产)。
固体培养基：Uu和Mh的选择性鉴定固体培养基(二合一培养基)带有CO2发生片(上海恩康生物科技有限公司生产提供)。
生产批号：060410,显微镜：日本奥林帕斯。
1.1.2 标本来源2006年5月至7月108例我院妇科和皮肤科门诊患者的泌尿生殖道标本拭子。
采集方法：男性患者用无菌棉球擦干尿道口后，用无菌棉拭子插入尿道口2～3厘米，轻轻旋转后取出；女性患者清除阴道口分泌物后，用无菌棉拭子插入宫颈口1～2厘米，轻轻旋转后取出。
用拭子先接种固体培养基然后用于液体培养基接种。
2方法2.1 接种方法先用拭子的一面“N”型划线接种固体培养基，然后立即进行液体培养基的接种。
均严格按照说明书进行，36℃培养。
2.2 结果判定方法液体培养基：分别于24至48小时观察液体培养基颜色由黄色变红色，严格按照结果判读表读取结果。
固体培养基：24小时后逐日观察培养基颜色的变化(黄色变为红色)，同时在显微镜下观察典型支原体菌落：Mh：煎蛋样菌落(100～300μm)，Uu：棕褐色颗粒、棕褐色菌线或棕褐色团块样菌落。
2.3 统计学方法Kappa检验(一致性检验)。
3 结果以显微镜下见到典型支原体生长菌落(如图所示)，结合生化反应确认Uu、Mh为“金标准”。
两种培养基支原体检测结果见附表。
108份标本液体培养基报告支原体阳性标本4l例，阳性率为37．96%；固体培养基检测的阳性标本37例，阳性率为34．26%。
珍稀食药用真菌朱红硫磺菌多糖的分离纯化及其免疫调节活性的研究
珍稀食药用真菌朱红硫磺菌多糖的分离纯化及其免疫调节活性的研究丁祥【摘要】真菌多糖是指10个以上单糖通过糖苷键连接形成直链或支链的一类糖,具有提高免疫,抗氧化,抗辐射,抗肿瘤等多种生理活性.朱红硫磺菌(Laetiporus sulphureus (Fr.)Murrill var.miniatus(Jungh.)Imaz.)是珍贵的药膳兼用菌.本研究从朱红硫磺菌子实体中,经过除杂、粉碎、热水浸提、醇沉处理后,得到了朱红硫磺菌杂聚糖粗提物,并运用DEAE-cellulose column进行柱层析分离纯化,得到朱红硫磺菌多糖纯品(LSF-A).通过硫酸苯酚法检测,水解,单糖分析,扫描电镜(SEM),红外光谱技术(IR)和核磁共振技术(NMR)对朱红硫磺菌多糖LSF-A进行了初步的结构分析.结果显示,朱红硫磺菌多糖由两种单糖构成,其结构中含有葡萄糖成分.在体外研究了不同浓度的朱红硫磺菌多糖对巨噬细胞吞噬作用的影响.结果显示朱红硫磺菌多糖具有显著的刺激巨噬细胞吞噬的作用,并且呈剂量依赖关系.这些结果说明朱红硫磺菌多糖(LSF-A)具有显著的免疫调节活性,可以作为一种理想的天然免疫调节剂资源.【期刊名称】《西华师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(034)004【总页数】7页(P311-317)【关键词】朱红硫磺菌;多糖;分离纯化;免疫调节【作者】丁祥【作者单位】西华师范大学生命科学学院,西南野生动植物资源保护教育部重点实验室,四川南充637009【正文语种】中文【中图分类】Q936食药用真菌多糖在国际上被称为“生物反应调节剂”，简称BRM，作为一种生物非特异性免疫促进剂，具有抗肿瘤、抗病毒、延缓衰老、降血脂、护肝排毒、促进核酸和蛋白质生物合成等多种生物功效［1-5］.朱红硫磺菌( Laetiporus sulphureus( Fr.) Murrill var.miniatus( Jungh.) Imaz.) ，又名朱红硫磺菌; 生于落叶松等针叶树干基部，有时也生在栎树等阔叶树干基部，引起干基块状褐色腐朽.菌盖肉质，扇形至半圆形，有放射状起伏丝，多数重叠生长，直径达30 -40cm，单个菌盖5 -20cm，厚1 -2cm，表面鲜朱红色，或带黄的朱红色，菌肉鳟肉色，幼时肉质有弹性，干后变白且酥脆. 属于中、低温型菌类，主要分布于我国河北、河南、四川、甘肃、陕西、云南、福建、浙江、香港、台湾、黑龙江、西藏、新疆等地区［6］.本研究以四川省小金县境内的朱红硫磺菌为对象，运用现代提取技术、柱层析技术分离纯化朱红硫磺菌子实体多糖，并对朱红硫磺菌多糖的结构及其免疫调节活性做初步研究，为进一步研究朱红硫磺菌多糖的药理作用、构效关系和更为广泛的应用奠定基础.1 材料从四川省阿坝州小金县海拔3700m 的松树与栎树混交林里采集朱红硫磺菌子实体( 编号为JG -1) ，其朱红硫磺菌子实体样本均于4℃条件下，保藏于西华师范大学生命科学学院西南野生动植物资源保护教育部重点实验室.乙醇;浓硫酸;苯酚;硫酸;丙酮;重水;吡啶;三氟乙酸;DEAE-cellulosecolumn;Sephadex G-100 column、氯化钠;氢氧化钠;盐酸;NH4Ac;氯化铜;D-葡萄糖;D-鼠李糖;D-果糖;D-甘露糖;D-半乳糖;D-葡萄糖;D-阿拉伯糖; 乙醇; 甘露聚糖肽; 脂多糖( LPS) ;1 640 细胞培养液; 胎牛血清; 青霉素; 链霉素; CCK -8试剂盒. 721 型分光光度计( 上海第三分析仪器厂) ;低速离心机( TDL-40B antrituge) ;真空冷冻干燥机( 北京博医康实验仪器有限公司) ;ZFO -85a 旋转蒸发器( 上海医械专机厂) ;BSZ -160 型自动部分收集器( 上海沪西分析仪器厂) ;粉碎机( PHILIPS HR 1375/A 巴西) ;电子天平( METTLER TOLEDO) ;CO2 细胞培养箱( 重庆捷伦科技贸易发展有限公司) ;酶标仪( Bio-RAD) ;超净台( 上海智城分析仪器制造有限公司) .2 方法2.1 朱红硫磺菌多糖的提取采自四川省小金县的新鲜朱红硫磺菌200g，洗净、烘干，粉碎机粉碎，用90℃蒸馏水提取3 次，每次6h离心收集上清液，减压浓缩、4℃预冷后加入4 倍体积无水乙醇沉淀，离心收集沉淀上清液减压浓缩，得粗多糖［7，8］.2.2 朱红硫磺菌多糖的分级纯化自然沉降法装DEAE cellulose-52 色谱柱(2 ×60cm) ，脱气后用ddH2O( 1 000mL) 平衡层析柱，流速为3d/min 称取上述除杂后的朱红硫磺菌粗糖5g，溶于5mL 蒸馏水中，上样于DEAE cellulose -52 色谱柱(2 ×60cm) ，分别以0mol/L、0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L、0.5mol/L NaCl 为流动洗脱相，流速为3d/min，用自动部分收集器以每管5mL 收集洗脱液，将收集到的样品溶液用苯酚-硫酸法在490nm 波长下比色检测多糖，以试管数为横坐标，以吸光度值为纵坐标，做DEAE cellulose-52 色谱柱层析洗脱曲图.然后合并各个主峰溶液，透析除去无机物及小分子量有机物，低压冷冻干燥，得到朱红硫磺菌多糖( LSF-A) .2.3 朱红硫磺菌寡聚糖扫描电镜检测朱红硫磺菌寡聚糖溶液，用2.5% -3%的戊二醛固定，再用无菌水冲洗数次，经乙醇(30%，50%，70%，90%，100%) 梯度脱水后，用醋酸乙戊二酯置换，用CO2 临界干燥箱干燥，镀金后，用扫描式电子显微镜观察，成相检测.2.4 朱红硫磺菌寡聚糖的水解朱红硫磺菌寡聚糖样品( LSF-A) 约5mg，分别溶于2mol/L，5mL 三氟乙酸，密封后110℃水解6h，离心除去残渣，减压浓缩干燥，用去离子水洗涤3 次，以去除三氟乙酸，然后在样品中加入数滴甲醇，再抽真空干燥，水溶解后得到朱红硫磺菌寡聚糖( LSF-A) 完全酸水解产物，保存备用.2.5 朱红硫磺菌寡聚糖的薄层层析水解液直接点样，以正丁醇∶冰乙酸∶乙醇∶水=(4∶1∶1∶2，V/V) 为展开剂进行薄层层析分离.展开后喷显色剂:苯胺-二苯胺溶液( 4mL 苯胺，4g 二苯胺，20mL 85%磷酸，200mL 丙酮) ，放入100℃烘箱，烘烤10min 显色.以各种单糖标准品配成水溶液做对照.2.6 朱红硫磺菌多糖红外谱分析称量LSF-A 样品2mg 左右，KBr 压片，红外分光光度计4 000cm-1 -400cm-1［9］.2.7 朱红硫磺菌多糖核磁共振分析取LSF-A 样品10mg 左右溶于0.5mL 重水( D2O) 中，在核磁共振仪上常温测定，600MHz 测1H NMR 谱.2.8 朱红硫磺菌多糖LSF-A 对巨噬细胞吞噬活性的检测小鼠腹腔注射不含FBS 的RPMI 1640 培养液5mL，72h 后颈椎脱臼处死，75%乙醇消毒后无菌操作注射器吸取腹腔液，1500rpm 离心10min 弃上清，RPMI 1640 培养液调整细胞密度至2 ×106/L，接种于96 孔细胞培养板中(200μL/孔) ，37℃、5%CO2 培养箱里培养24h，吸弃培养液，用RPMI 1640 细胞培养液洗去未贴壁细胞，继续培养备用［10，11］.取制备好的巨噬细胞(100μL/孔，细胞密度为2 ×106/L) ，设对照组( B1) :100μL细胞悬液+100μL RPMI 1640 细胞培养液;实验组:100μL 细胞悬液+80μL RPMI 1640 细胞培养液+20μL药物，使朱红硫磺菌多糖LSF-A 终浓度分别为1.25mg/mL、2.5mg/mL、5mg/mL、10mg/mL，均设立8 个重复孔.37℃、5%CO2 培养箱内培养4h，然后用PBS 洗涤3 次，之后加入中性红溶液100μL 使其终浓度为0.72mg/L，继续培养30min.吸弃中性红溶液，洗涤3 次，加入裂解液( 冰醋酸与无水乙醇=1∶1)200μL，静置过夜，待完全裂解细胞后，测定吸光度( A) 值［12，13］.2.9 统计与分析所得数据均用mean±SD 表示，差异的显著性用t-test 检验，* 为与对照组t 检验呈显著，P ＜0.05，＊＊为极显著，P ＜0.001.3 结果与分析3.1 朱红硫磺菌多糖的提取从四川省小金县朱红硫磺菌子实体多糖粗糖中( LSF) 分离纯化得到一种新型水溶性多糖( LSF-A) ，并以棕黄色晶体状态析出.3.2 硫酸-苯酚法检测朱红硫磺菌多糖用硫酸-苯酚法检测朱红硫磺菌多糖，并与对照组比较，呈明显的阳性显色反应，证明确实为多糖成分，其颜色的变化与含量呈正相关( 图1) .图1 朱红硫磺菌多糖的硫酸-苯酚法检测结果Fig.1 The results of polysaccharide chromogenic reaction by phenol sulfuric acid method从左自右的试管分别代表：1mol/L、0.3mol/L、0.2mol/L、0.1mol/L Nacl、纯水及空白对照洗脱分离液3.3 朱红硫磺菌多糖DEAE cellulose-52 色谱柱层析分级结果朱红硫磺菌多糖( LSF -A) 的DEAE cellulose -52 色谱柱层析洗脱曲线如图2 所示朱红硫磺菌多糖( LSF-A) DEAE cellulose -52 色谱柱层析以0mol/L、0. 1mol/L、0. 2mol/L、0. 3mol/L、0. 4mol/L、0. 5mol/L NaCl 为流动洗脱相，得到一个明显的洗脱峰( 即命名为LSF-A) ，经合并、浓缩、真空冷冻干燥后，得到了其固体样品.3.4 LSF-A 的电镜检测通过数码呈相和扫描电镜分析如图3 所示，朱红硫磺菌多糖( LSF-A) 为棕黄色晶体.图3 LSF-A 的扫描电镜结果Fig.3 The Oligosaccharide LSF-A imaged by SEM.3.5 水解后LSF-A 薄层层析结果通过薄层层析对LSF-A 的糖基类型作粗略鉴定，发现LSF-A 的水解单糖的薄层Rf 值部分和D-葡萄糖相同，并且LSF-A 的水解单糖在薄层上喷显色剂时，反应生成的颜色也与D-葡萄糖相同，为蓝色，故可以初步断定LSF-A 结构中含有葡萄糖成分( 图4) .图4 LSF-A 水解成单糖后薄层层析结果（以标准单糖为对照）Fig.4 TLC of LSF-A hydrolyzed by TFA (sample) and standard monosaccharideLSF-A:样品，D-Man:D-甘露糖，D-Xyl:D-木糖，D-Ara:D-阿拉伯糖，D-Fru:D-果糖，D-Glu:D-葡萄糖，D-Raf:D-棉籽糖，D-Gal:D-半乳糖3.6 LSF-A 的FTIR 谱分析如图5 所示，在红外谱中显示3 416.67cm-1的宽吸收峰指定为O-H 的伸缩振动峰，1 640.03cm-1指定为C=O 的伸缩振动峰，同时提示存在着分子内和分子间的氢键.1 044.84cm-1在1 200 -1 000cm-1范围内指定为吡喃环中醚键C-O-C伸缩振动.720.00cm-1指示LSF-A 有α 型吡喃环.3.7 LSF-A 的NMR 谱分析氢谱显示该朱红硫磺菌多糖LSF-A 纯度高，杂质少( 图6) .在δ 4.93，δ 4.86 指示两个异头氢存在，提示LSF-A 由两种单糖组成.其中，δ 4.40 指示为葡萄糖羟甲基上两个氢的信号峰，而δ 4.00 则指示为葡萄糖3位碳原子上氢的信号峰.该氢谱数据与单糖分析数据相吻合.3.8 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响由图7 可见，LSF-A 在终浓度为1.25mg/mL 剂量即能够显著促进小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，在剂量终浓度为1.25 -20mg/mL 剂量范围内对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力的影响具有剂量依赖关系.4 讨论目前大型食、药用真菌多糖抗肿瘤作用机制还没有统一的定论，当今阶段我们一般认为大型食、药用真菌多糖的抗肿瘤活性主要是通过增强机体自身免疫细胞活性来实现的.大型食、药用真菌多糖不仅能够激活B 细胞、T 细胞、巨噬细胞、杀伤性T 细胞、自然杀伤细胞、淋巴因子激活的杀伤细胞( LAK) 等免疫细胞，而且还能促进肿瘤坏死因子( TNF-α) 、白细胞介素-1( IL-1) 、白细胞介素-2( IL-2) 、干扰素( IFN) 等细胞因子的生成，调节抗体和补体，从多个方面起作用抑制肿瘤形成生长［14，15］.部分大型食、药用真菌多糖能够提高巨噬细胞的吞噬能力，进而诱导肿瘤坏死因子( TNF-α) 和白细胞介素-1( IL -1) 的生成，发挥直接的细胞毒作用从而起到抑制肿瘤生长的作用.本研究从朱红硫磺菌子实体中，经过除杂、粉碎、热水浸提、醇沉处理后，得到了朱红硫磺菌杂聚糖粗提物，并运用DEAE-cellulose column 进行柱层析分离纯化，得到朱红硫磺菌多糖纯品( LSF-A) .通过硫酸苯酚法检测，水解，单糖分析，电镜扫描( SEM) ，红外光谱技术( IR) 和核磁共振技术( NMR) 对朱红硫磺菌多糖进行了初步的结构分析.结果显示，朱红硫磺菌多糖由两种单糖构成，其结构中含有葡萄糖成分.在体外化学模拟条件下，研究了不同浓度的朱红硫磺菌多糖对巨噬细胞吞噬作用的影响.结果显示朱红硫磺菌多糖具有显著的刺激巨噬细胞吞噬的作用，且呈剂量依赖关系.这些结果说明朱红硫磺菌多糖( LSF-A) 具有显著的免疫调节活性，可以作为一种理想的天然免疫调节剂资源.朱红硫磺菌多糖LSF-A 的精细结构及其构效关系还有待于进一步研究.参考文献：［1］田庚元，冯宇澄，林颖.植物多糖的研究进展［J］.中国中药杂志，1995.20，(7) :441 -444.［2］戴则林，懂昌武.灵芝多糖的生物活性研究进展［J］.安徽中医学院学报，2005，24(5) :60 -61.［3］ BRACA A，TOMMASI N D，DIBARIL L，et al. Antioxidant principles from Bauhinia terapotensis［J］，J. Natu. Prod. 2001，64，892 -895.［4］孙才华，谷新利，卢慧.免疫活性多糖作用机制的研究进展［J］.中兽医医药杂志，2006，25(4) :19 -21.［5］魏元臣，周革非，李树福，等.王长海.λ-卡拉胶降解组分的体外免疫活性［J］，食品科学，2009，11(30) :232 -236.［6］曾先富，廖志勇，张军.野生朱红硫磺菌驯化栽培研究［J］.中国食用菌，2005，24(6) :18 -20.［7］ CHEN Y，XIE M Y，NIE S P，et al. Purification，Composition Analysis and Antioxidant Activity of a Polysaccharide from the Fruiting Bodies of Ganoderma Atrum［J］.Food. Chem. 2008，107:231 -241.［8］ CAO W，LI X Q，LIU L，et al. Structural Analysis of Water-solubleGlucans from the Root of Angelica Sinensis( Oliv.) Diels［J］.Carbohydrate. Res. 2006，341:1870 -1877.［9］ KUMAR C G，JOO H S，CHOI J W，et al. Purification and Characterization of Extracellular Polysaccharide from Haloalkalophilic Bacillus sp. I-450［J］.Enzyme. 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细菌有哪些培养方法有哪些
细菌有哪些培养方法有哪些细菌的培养方法主要分为液体培养和固体培养两种。
液体培养方法：1. 液体培养基：液体培养基是一种含有营养物质和生长因子的液体，在细菌的生长过程中提供所需的营养物质和环境条件。
常用的液体培养基有大肠杆菌培养基、营养琼脂培养基、脱氧胆汁盐琼脂培养基等。
2. 悬浮培养：将细菌菌种接入到含有液体培养基的试管或培养瓶中，通过摇床或震荡培养器进行培养。
这种培养方法适用于大规模培养细菌，如生产菌种、细菌发酵等。
3. 连续培养：将已经培养的细菌液体培养基与新的液体培养基连接起来，使细菌不断地在新培养基中生长。
这种方法适用于需要连续通量的菌种大规模培养，如生产大量酶类制品等。
固体培养方法：1. 平板培养：将液体培养基加入琼脂或琼脂糖中，制成固体培养基后，在培养皿上均匀涂布，待凝固后接种细菌并进行培养。
这种方法适用于初次分离菌种、细菌培养纯化以及菌落形态观察等。
2. 斜板培养：与平板培养类似，区别在于涂布琼脂或琼脂糖后，倾斜培养皿放置，使培养基形成斜面，接种后细菌沿斜面生长。
这种方法可以避免菌落过度成长并促进菌落的分离。
3. 深层培养：将液体培养基加入琼脂或琼脂糖中，制成固体培养基后装入培养管中，形成固体培养基柱状，接种细菌后进行深层培养。
此方法可用于观察细菌的气体需求性、产气性等特性。
此外，还有一些特殊的培养方法用于特定细菌的培养，如以下几种常见的特殊培养方法。
1. 厌氧培养：通过在密闭容器中控制氧气浓度进行培养，供应细菌所需的气体条件。
常见的厌氧培养方法有无需氧培养和微需氧培养。
2. 选择性培养：通过在培养基中增加抑制其他细菌生长或促进目标菌种生长的物质，从而选择性地培养某种特定的细菌。
如大肠杆菌培养基中添加青霉素可选择性地培养革兰氏阴性细菌。
3. 拉丁方格法：通过将不同菌种分别接种到琼脂平板上，然后以正交试验的方式进行操作，观察菌落的生长情况，以便评估不同因素对细菌的影响。
总之，细菌的培养方法多种多样，通过选择合适的培养方法和培养条件，可以满足不同目的的细菌培养需求，用于研究、生产和临床应用等领域。
浅谈硫磺多孔菌的研究
Vol.5 No.6Dec. 2019生物化工Biological Chemical Engineering第 5 卷 第 6 期2019 年 12 月浅谈硫磺多孔菌的研究李金平1，何美静1，李梦雪1，王升厚2*（1.沈阳师范大学生命科学学院，辽宁沈阳 110034；2.沈阳师范大学实验教学中心，辽宁沈阳 110034）摘 要：通过对以往发表的有关硫磺菌的论文进行计量可视化分析，从1994开始至今已有很多关于硫磺菌的研究，其中大部分是关于硫磺菌子实体和培养条件方面的研究，但随着研究的深入，对硫磺菌化学成分的分析及功效的研究越来越受到重视。
本文对当前硫磺多孔菌的研究进展做了初步的探究，并在前人的研究基础上进行总结，以利于日后设计并进行实验。
关键词：硫磺多孔菌；研究进展；发展前景中图分类号：S646 文献标志码：ADiscussion on the Research Progress of Sulfur Porous BacteriaLi Jin-ping 1, He Mei-jing 1, Li Meng-xue 1, Wang Sheng-hou 2*(1.College of Life Science, Shenyang Normal University, Liaoning Shenyang 110034;2.Experimental Teaching Centere, Shenyang Normal University, Liaoning Shenyang 110034)Abstract:Through the quantitative analysis of the previously published papers on sulphur bacteria, there have been many studies on sulphur bacteria since 1994, most of which are related to sulphur bacteria fruiting bodies and culture conditions, but with the deepening of research, The analysis of the chemical constituents of sulphur bacteria and the study of their efficacy have received increasing attention.A preliminary study on the current research progress of sulphurous sulphur bacteria. Summarize on the basis of the predecessors, in order to facilitate the design and experimentation in the future.Key words : Laetiporus sulphureum; Research progress; Development prospects1 硫磺菌概述硫磺菌（Laetiporus sulphureum）又称硫色多孔菌，菌盖肉质，呈扇形至半圆形，有放射状起伏丝且多数重叠生长，直径达30～40 cm，单个菌盖5～30 cm， 厚1～2 cm，表面鲜朱红色或硫磺色；菌肉淡肉色或淡黄褐色，幼时肉质有弹性，干后变白且轻脆；管孔长约10 mm，管口圆形至多角形，是一种药食兼用的大型真菌。
液体培养技术的操作步骤和关键技巧
液体培养技术的操作步骤和关键技巧液体培养技术是现代微生物学研究的重要方法之一，它可以用于细胞生长、代谢产物分析、酶活性研究等领域。
液体培养技术的操作步骤和关键技巧对于实验结果的可靠性和科学性至关重要。
本文将对液体培养技术的操作步骤和关键技巧进行论述，以帮助读者更好地掌握这一技术。
一、准备工作在进行液体培养实验前，必须进行准备工作。
首先，要准备好所需的培养基和试剂。
培养基的配制需要按照实验的需要进行，使用无菌技术操作，防止细菌的污染。
其次，要准备好培养容器，如培养皿、培养瓶等。
这些容器也需要在使用前进行无菌处理。
最后，要准备好待培养的菌种或细胞。
菌种的选择要根据实验的目的和要求来确定。
二、操作步骤1. 准备液体培养基首先，将所需的培养基配制好，按照配方将试剂加入到无菌水中，并进行搅拌混匀。
然后，将配制好的培养基进行高温高压灭菌，以杀灭其中的细菌和真菌等微生物。
2. 培养容器的无菌处理将培养容器（如培养瓶）放入高温高压灭菌器中进行高温高压处理，以确保容器内的细菌和真菌等微生物被杀灭。
处理完毕后，使用无菌操作将培养容器取出。
3. 菌种接种将待培养的菌种从冷冻保存物中取出，用无菌移液器将菌种接种到培养容器中的培养基中。
注意，在接种菌种的过程中要保持无菌操作，避免细菌的污染。
4. 培养条件设定根据待培养菌种的特性，设置适当的培养条件。
包括培养温度、培养时间、培养基的pH值、培养基的营养成分等。
这些条件需要根据具体的实验要求进行设定，以提供合适的生长环境给菌种。
5. 培养过程的观察在培养过程中，需要对菌种的生长情况进行定期观察。
可以通过目测或使用显微镜对菌种进行观察，并记录其生长速度、形态特征等。
此外，也可以对培养基中的各种代谢产物进行分析，以研究菌种的代谢活性。
6. 培养液的采集与分析在培养结束后，需要采集培养液进行进一步的分析。
可以使用无菌提取方法将培养液中的代谢产物提取出来，然后进行色谱、质谱等分析方法进行定性和定量分析。
硫磺菌 化学式-概述说明以及解释
硫磺菌化学式-概述说明以及解释1.引言1.1 概述硫磺菌是一类微生物，属于真菌门硫磺菌科。
它们以硫和磷为主要代谢产物，在自然界中广泛存在。
硫磺菌具有较高的适应能力，能够在各种极端环境下生存和繁殖，包括火山口、温泉、矿山等硫磺含量较高的地方。
硫磺菌的化学式主要包括硫和磷元素。
其中，硫元素是硫磺菌最重要的成分之一，它参与了硫磺菌的代谢过程和生物合成反应。
而磷元素则是构成硫磺菌DNA和RNA等核酸的重要组成部分。
硫磺菌的组成主要由细胞壁、细胞质、细胞膜、核酸和蛋白质等构成。
细胞壁是硫磺菌细胞的外层保护结构，由多种多糖和蛋白质组成。
细胞质则是细胞内液体的基质，其中包含了多种有机物质和无机离子。
细胞膜则是细胞的质量保持及物质交换的关键部位，它由磷脂双分子层和蛋白质组成。
核酸是硫磺菌的遗传物质，通过DNA和RNA的复制和转录来传递基因信息。
蛋白质则是构成硫磺菌细胞的主要结构材料，它参与了细胞的代谢活动和信号传导等重要功能。
总之，硫磺菌是一类具有重要生物学功能和广泛应用价值的微生物。
了解硫磺菌的化学式和组成有助于我们更深入地了解其生物特性和在工业、农业等领域中的应用潜力。
在接下来的文章中，我们将进一步讨论硫磺菌的分类、重要性以及其未来的研究方向。
文章结构部分的内容可以包括以下几个方面：1.2 文章结构本文将按照以下几个方面来展开对硫磺菌的讨论：1. 硫磺菌的定义和分类：首先介绍硫磺菌的概念和基本特征，包括其生长环境、形态特征、生物学特性等方面的内容。
同时，对硫磺菌的分类进行介绍，包括主要的分类方法和代表性的硫磺菌种类。
2. 硫磺菌的化学式和组成：在本部分中，将详细阐述硫磺菌的化学式和组成。
首先介绍硫磺菌的化学式，包括硫磺菌所含元素和原子比例等方面的内容。
然后，进一步介绍硫磺菌的组成，包括有机物和无机物等组成成分的详细描述。
3. 硫磺菌的重要性和应用：本节将探讨硫磺菌在生态系统、工业生产和医学等领域的重要性和应用。
硫磺菌_精品文档
硫磺菌硫磺菌是一类具有独特形态和生理特征的原生生物。
它们属于真菌界中的一个小分支，是一类能够在极端环境下存活和繁殖的微生物。
硫磺菌在科学研究和工业应用中具有广泛的应用前景，以下将从其分类、生活特征、生物学意义以及应用领域等方面进行介绍。
硫磺菌的分类可追溯到最早的地质时期，大约在4亿年前的始新世。
根据其生理特征和基因序列等方面的相似性，硫磺菌被分为十字花菌门（Sulfolobales）、细胞壁硫磺菌门（Thermoproteales）和硫杆菌门（Thermoplasmales）等几个目。
每个目下又包括了若干科、属和种。
硫磺菌的独特之处在于其生活环境对于大多数其他生物来说是极端的，如高温、强酸、高浓度硫磺等，这使得硫磺菌在其生态学和生理学上具有独特之处。
硫磺菌通常生活在硫磺矿床附近的酸性环境中，其主要来源是由地下热水所提供的能量。
在这样的环境下，硫磺菌能够利用化学能转化为生物能，并进行光合作用。
硫磺菌的光合作用可以通过细胞色素和其他辅助色素来完成，这种作用方式与其他真菌和植物截然不同。
硫磺菌的生命周期一般包括分裂繁殖和有性生殖两种方式，其中有性生殖主要通过配子体的形成和融合来实现。
硫磺菌在生物学研究中具有重要的意义。
首先，由于硫磺菌能够在极端环境下生存，研究硫磺菌可以帮助我们了解生命是如何适应和适应极端环境的。
其次，硫磺菌在化学物质的转化和环境修复等方面具有潜在应用价值。
硫磺菌能够利用硫磺和氨气等物质进行代谢，并产生一些有用的化合物，如硫酸、氨酸以及酶等。
此外，硫磺菌还可以通过降解有机物和吸附重金属等方式，对环境中的污染物进行清除和修复。
在工业应用领域，硫磺菌具有潜力。
由于硫磺菌能够生产出一些重要的化学物质，如酶和抗生素等，可以应用于食品工业、制药工业和农业等领域。
此外，硫磺菌的生物催化性质也使其成为一种重要的发酵工具，可以用于生产酒精、有机酸和生物质能等。
在环境工程领域，硫磺菌的能力可以被利用来清除污水中的有机物和重金属离子等污染物。
硫磺菌鉴定及人工驯化栽培研究
图2硫磺菌菌株系统发育树硫磺菌（）又名硫磺多孔菌[1-2]，具有基内菌丝和气生菌丝[3]，子实体在药用方面有较大作用[4]，内含齿孔酸，可合成甾体药物肾上腺皮质激素，在很多疾病上有很好治疗作用[5]，多糖[6]以其它成分含量也较丰富[7]，具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤作用[8]。
本研究对野生硫磺菌鉴定，活性成分测定，培养基优化，驯化栽培进行研究，旨在为药用真菌资源的驯化和利用提供理论和实验基础。
1材料与方法1.1菌株：菌株于2021年6月21日采自吉林省延边朝鲜族自治州延吉市园艺农场四队苹果梨园（东经129°27′33″，北纬42°54′56″，海拔218m ），其余试验材料（LH 、Li 、Dai ）均来自延边大学农学院食药用真菌研究所。
1.2方法1.2.1ITS 鉴定：菌丝体DNA 提取利用试剂盒，鉴定利用ITS 通用引物ITS1和ITS4对DNA 样本序列进行PCR 扩增，产物进行测序。
将获得的ITS 序列利用NCBI 进行比对，采用MEGA 11.0软件构建系统发育树。
1.2.2营养成分测定：分别对4个菌株进行多糖、黄酮、三萜、多酚的测定，进行超声提取后紫外分光光度计在相应波长下测定吸光值，并带入标准曲线计算含量。
1.2.3硫磺菌菌丝体培养基优化1.2.3.1单因素试验：基础培养基：葡萄糖20g ·L -1、蛋白胨2.0g ·L -1、硫酸镁0.5g ·L -1、琼脂20g ·L -1，水1L 。
碳源：添加等量葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖；氮源：添加蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、硝酸铵、黄豆粉；无机盐：添加硫酸镁、氯化钠、硫酸锌、硫酸锰、磷酸二氢钾，以基础培养基不加相应物质为对照；设置3个重复，置于25℃避光培养7~10d ，用十字交叉法测定菌落直径。
1.2.3.2正交试验：对碳源、氮源、无机盐三个单因素进行正交设计选出最优组合，以确定硫磺菌的最佳培养基配方。
硫磺菌的固体和液体培养研究
硫磺菌的固体和液体培养研究摘要：从野外采集、分离纯化得到硫磺菌（Laetiporus sulphureus ）菌株，并进行硫磺菌的固体和液体培养试验。
试验表明，硫磺菌在复合PDA培养基上生长良好，菌丝生长速度为3.2 mm/d；在代料栽培中以麦粒或栎木屑培养基培养硫磺菌菌种时菌丝生长速度快，菌丝浓密；从8种液体培养基配方中筛选出菌丝体产量较高的配方，配方为：葡萄糖30 g，豆粉20 g，玉米粉10 g，酵母提取物5 g，KH 2PO 4 1 g，CaCO 3 2 g，MgSO 4 0.5 g，水1000 mL，菌丝体产量为22 g/100 mL。
关键词：硫磺菌；固体培养；液体培养硫磺菌［Laetiporus sulphureus (Fr.) Murrill］别名硫磺多孔菌、硫色多孔菌、黄芝，属非褶菌目（Aphyllophorales），多孔菌科（Polyporaceae），硫磺菌属（Laetiporus），是一种食药兼用大型真菌。
硫磺菌多发生于夏季，生于栗、柳、云杉、栎、落叶松等活立木树干、树桩或枯立木上，生长部位可引起木材褐色块状腐朽；栽培香菇的段木上有时也有该菌生长，被视为“杂菌”。
野生硫磺菌分布范围广，在全国大部分地区均有分布。
卯晓岚（2000）在《中国大型真菌》中记载：“硫磺菌幼时可食用，味道好。
药用，性温、味甘，能调节机体、增进健康、抵抗疾病，对人体可起重要调节作用。
有抗癌作用，对小白鼠肉瘤180及艾氏癌抑制率分别为80％和90％”［1］。
专利产品[专利号为CN99110871.X]硫磺菌制剂[口服液、粉（散）、胶束、蜜丸剂型]，具有迅速缓解病情，可产生即时药效应；对“气胀”病、结肠炎等疾病治愈率可达90%以上。
可见，硫磺菌食用、药用价值高，有一定开发前景。
硫磺菌目前主要靠野生采集得到，液体培养或固体培养的研究均少有报道。
驯化培养研究方面，吴锡鹏（1993）报道以木屑作机质培养可以得到子实体［2］。
硫磺菌菌丝液体发酵适宜培养基配方研究
硫磺菌菌丝液体发酵适宜培养基配方研究包水明;李荣同;徐琼【期刊名称】《广东化工》【年(卷),期】2012(039)011【摘要】The experiment used Laetiporus sulphureus as material,where is in appropriate,external training conditions(culture temperature is 25 ℃,the volume of liquid 75 mL/250 mL,shake-flask culture 150 r/min cultivate 120 h),by selecting different nitrogen sources(including the yellowmilk,urea,beef extract,peptone,(NH4)2SO4),different carbonsources(glucose,sucrose,starch,lactose),pH control of some single factors and orthogonal experiment,using liquid fermentation technology cultivate mycelia to mycelium wet weight for the index to determine the Laetiporus sulphureus of the appropriate liquid culture medium.The results showed that: In the conditions of 17.5 g/L as nitrogen source of the yellow soybean milk,20 g/L glucose as carbon source,initial pH value of 5.5,the formula is more convenient access to high-yield and economic.%实验以硫磺菌为材料,在适宜的外部培养条件（培养温度为25℃、装液量75 mL/250 mL、摇瓶转速为150 r/min培养120 h）下,通过选取不同氮源（包括黄豆浆、尿素、牛肉膏、蛋白胨、（NH4）2SO4）、不同碳源（葡萄糖、蔗糖、淀粉、乳糖）、酸碱度几个单因素的控制以及正交实验,采用液体发酵技术培养菌丝体,以菌丝体湿重为指标,确定了硫磺菌的液体培养的适宜培养基配方。
一株野生硫黄鳞伞的分离纯化及菌丝培养条件优化
一株野生硫黄鳞伞的分离纯化及菌丝培养条件优化
高恋恋;王新童;张浩;涂镜;曾粮斌;魏宝阳
【期刊名称】《食用菌》
【年(卷),期】2024(46)1
【摘要】对采自湖南省沅江市天下第一芦苇荡的一株野生鳞伞进行组织分离纯化并鉴定。
采用单因素试验研究其固体培养条件,探究液体培养基中0.3%附加基质对液体菌丝生长情况的影响。
结果表明:该菌株鉴定为硫黄鳞伞(Pholiota conissans),菌丝最适固体培养条件为25℃,pH 6,无光照,最适碳源为蔗糖,最适氮源为蛋白胨,无机盐为磷酸二氢钾、硫酸镁。
液体培养基中添加0.3%的麸皮,可显著提高液体菌丝生物量和菌丝球密度。
结果将为硫黄鳞伞的开发利用提供数据支撑。
【总页数】6页(P18-23)
【作者】高恋恋;王新童;张浩;涂镜;曾粮斌;魏宝阳
【作者单位】湖南农业大学生物科学技术学院;沅江市芦小妹食品有限公司;中国农业科学院麻类研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S646.9
【相关文献】
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5.一株野生硫磺菌的分类鉴定及其菌丝培养条件优化
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泰山硫磺菌硫磺原变种的生物学特性研究
泰山硫磺菌硫磺原变种的生物学特性研究兰玉菲;安秀荣;唐丽娜;薛会丽【期刊名称】《山东农业科学》【年(卷),期】2012(044)008【摘要】对泰山硫磺菌硫磺原变种ts菌株生物学特性研究结果表明,以葡萄糖为碳源和以蛋白胨为氮源的培养基最有利于菌丝生长,最佳培养基配方为200 g马铃薯+2.5％葡萄糖+0.2％蛋白胨+0.2％磷酸二氢钾+0.1％硫酸镁+20 g琼脂+1000ml水,菌丝生长适宜温度为25 ～30℃,适宜pH为4～6.%The study on the biological characteristics of the ts strain of Laetiporiis sulphureus var. sulphureus revealed that the optimum carbon and nitrogen sources were glucose and peptone, respectively. The myce-lia grew best in the medium which contained 200 g potato, 2.5% glucose, 0.2% peptone, 0.2% KH2PO4, 0. 1% MgSO4, 20 g agar and 1000 ml distilled water. The optimum temperature and pH for mycelia growth were 25 ~ 30℃ and 4 ~ 6 respectively.【总页数】3页(P46-48)【作者】兰玉菲;安秀荣;唐丽娜;薛会丽【作者单位】泰安市农业科学研究院食用菌研究所,山东泰安271000;泰安市农业科学研究院食用菌研究所,山东泰安271000;泰安市农业科学研究院食用菌研究所,山东泰安271000;泰安市农业科学研究院食用菌研究所,山东泰安271000【正文语种】中文【中图分类】Q949.329+.706【相关文献】1.硫磺菌原变种与淡红变种培养特性的研究 [J], 池玉杰;潘学仁;康海燕;王柏2.珍稀食药用真菌朱红硫磺菌多糖的分离纯化及其免疫调节活性的研究 [J], 丁祥3.硫磺菌原变种液体培养代谢物生物活性分析 [J], 汪国轮;郭学武;龚建华4.硫磺菌生物学特性研究 [J], 卢东升;贾晓;罗春芳5.奶油硫磺菌的生物学特性研究 [J], 陆珠;李玉;于延申;王欢;任梓铭;王月因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
硫磺菌栽培技术
硫磺菌栽培技术硫磺菌东北俗称梨树鸡或树鸡蘑，是较为珍稀的野生食用菌，属担子菌亚门层菌纲非褶菌目多孔菌种硫磺菌属。
硫磺菌子实体菌盖肉质、下沿渐细着生在基质上呈覆瓦状，边缘波浪状，颜色由浅黄到朱红色。
其子实体色彩鲜艳，幼嫩时味道鲜美，营养丰富。
经测定，每100g干品中多种氨基酸的含量显着高于香菇、双孢菇、平菇和木耳等常见菇类，特别是丙氨酸的含量比香菇高489mg、比双孢菇高133mg、比木耳高302mg，老熟后子实体提取物有一定的抗癌作用。
野生硫磺菌在我国分布较广，尤其以辽宁、吉林、黑龙江、四川、云南、广东、广西等省分布最多，大都发生在夏末秋初活的或腐朽的柞木上。
目前野生资源越来越少，仅靠采集野生菇已不能满足消费市场的需求。
所以硫磺菌已经成为一种亟待开发的食用、药用真菌。
辽宁省鞍山市鲜菇价格已经达到80元/kg，但是仍然供不应求。
辽宁省抚顺市农业利学研究院食用菌研究所科技人员于2002年起经过3年的驯化试验，已经基本掌握了该菌的生物学特性，总结了人工栽培技术。
现将技术要点简述如下。
1 生物学特性1.1 营养硫磺菌菌丝体对木质和纤维素具有极强的分解能力，在活的柞木上和腐朽的柞木上都能生长。
在人工栽培时采用大颗粒的硬杂木屑为主料，再添加一定量的辅料。
1.2 温度辽宁地区野生硫磺菌多发生在夏末秋初。
菌丝体最适宜生长温度为25～28℃，子实体发生期最适宜温度为18～22℃。
25℃以上或12℃以下难以形成原基。
1.3 水分菌丝体阶段，要求培养基内含水量在60%左右，空间湿度为60%～70%，子实体阶段，培养基内最适宜含水量为60%～70%，空间相对湿度为80%～90%。
1.4 光照菌丝体阶段不需要光照，子实体阶段需要一定的散射光照，光照越强子实体颜色越鲜艳。
但光照强度大小不影响产量。
1.5 空气菌丝体阶段和子实体阶段都需要足够的氧气，环境中二氧化碳浓度过高，子实体生长受抑制，甚至出现畸形。
1.6 pH菌丝培养阶段pH为6～7。
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生长势弱 ,菌丝稀疏
2. 7
60
Sparse and weak mycelium
生长势很弱 ,菌丝有少量生长后即停止
-
-
Negligible mycelium
2. 2 液体培养 2. 2. 1 菌球大小与均匀度
培养 15 d 的结果表明 ,硫磺菌在 8 种配方的 培养液中均可生长 ,但菌丝球大小和均匀度差异较 大 (表 2) 。B1 、B4 、B8 培 养 液 中 菌 丝 球 直 径 小 (2 mm) ,菌液粘稠 ;B2 培养液中形成的菌丝球直 径最大 ,约有 7 mm ,但菌丝球数量稀少 ;B3 、B6 、B7 培养液中形成的菌丝球直径为 3 mm ,比较适宜 ;菌 球的均匀度是液体发酵技术的检验标准之一 ,均匀 度好说明营养利用充分 ,发酵条件适宜 ,在该试验 中 B5 配方形成的菌丝球大小差异显著 (在 2 -
杂木 屑 培 养 料 ( A3) : 杂 木 屑 88 % , 麸 皮 10 % , 石 膏 1 % , 石 灰 1 % , MgSO4 0. 05 % , KH2 PO4 0. 1 % ,料水比 ( W/ W) 为 1 ∶1. 2 。
棉籽 壳 培 养 料 ( A4) : 棉 籽 壳 78 % , 麦 麸 20 % ,石膏 2 % ,料水比 ( W/ W) 为 1 ∶1. 2 。 1. 1. 5 液体培养
7 mm之间) ,说明该配方不太适宜于硫磺菌生长。 2. 2. 2 菌丝体生物量
在生物量方面 ,从表 2 (培养 15 d) 可以看出 , 硫磺菌菌丝在不同配方中菌丝生物量有较大差 异 ,B3 、B5 配方生物量超过 20 g/ 100 mL ,其中 B3 最高为 22 g/ 100 mL ;B6 ,B7 生物量在 10～ 20 g/ 100 mL之间 ;B1 、B2 、B4 、B8 的生物量均在 10 g/ 100 mL 以下 。试验以菌丝体生物量 、菌丝 球大小和均匀度为主要指标 ,选取生物量最高且 与其余各组差异显著的 B3 为硫磺菌液体培养的 优异配方 。
从表著 。当采用麦粒种培养 ( A1) 时 ,接 种后菌丝吃料快 ,生长速度较快 ,菌丝最前端生 长势旺盛 ,长满菌袋所需时间短 ,平均为 19 d ;其 次是栎木屑培养基 ( A2) ,菌丝生长势较强 ,菌丝 长满袋的时间为 43 d ;杂木屑培养基 ( A3) ,菌丝 生长势较弱 ,菌丝长满代料的时间为 60 d ; 硫磺 菌在棉籽壳培养基 (A4) 中生长最差 ,接种初期菌 丝有少量生长后停止 。试验表明 ,常规棉籽壳配 方不适合作为培养硫磺菌的基质 ,杂木屑培养料 虽然可以生长 ,但菌丝生长势较弱 ,菌丝稀疏 ,因 此 ,生产中最好采用麦粒或栎木屑培养料培养硫 磺菌菌种 。
将复壮后培养的母种 ,用直径 5 mm 打孔器打 孔 ,接于供试培养基中 ,每个平板接种一块 ,接于平 板中心位置 ,27 ℃培养箱中培养。接种后第二天开 始用电子游标卡尺测量菌落直径 ,观察菌落长势。
1. 2. 2. 2 代料培养 按 1. 1. 4 配方进行拌料 ,装袋 (栽培袋的规
格 17 cm ×35 cm) ,每袋装料量干料约为 375 g , 高压灭菌 ,接种 PDA 菌种后 ,置于 27 ℃培养箱 中培养 ,在培养过程中 ,记录菌丝生长速度 、菌丝 长势 、菌丝长满袋料所用时间 。每一配方设 10 个重复 ,数据取平均值 。 1. 2. 3 液体培养
2 试验结果与分析
2. 1 固体培养 2. 1. 1 平板培养
硫磺菌菌丝在复合 PDA 平板培养基上生长 良好 ,菌丝较浓密 ,生长旺盛 ,培养 8 d 时菌落直 径 5. 3 cm ,生长速度为 3. 2 mm/ d 。培养 5 d 开 始硫磺菌气生菌丝大量生长 ,并产生黄色色素 , 菌落颜色也转变为黄白相间 。 2. 1. 2 代料培养
菌种复壮后 ,用直径为 5 mm 的打孔器制备接 种块 ,接入装有培养液的 250 mL 三角瓶中 ,装液 量为每瓶 100 mL ,接种量 3 块/ 瓶 ,接种后静止培 养 24 h 后 ,上摇床培养 ,培养温度为 27 ℃,摇床转 速为 130 r/ min。8 种 培 养 基 同 时 进 行 培 养 , 液 体培养 15 d , 培 养 结 束 后 培 养 物 经 离 心 ( 转 速 4000 r/ min ,离心 10 min) 后 ,得到沉淀即为硫磺菌 的菌丝体 ,称量菌丝体湿重 。以菌丝体产量为主要 指标 ,进行配方的筛选。每个处理各设 3 个重复 。 1. 3 数据分析 实验数据采用 SPSS11. 0 统计软件进行统计 分析 ,P = 0. 05 。
B4 :淀粉浆 40 g ,蔗糖 10 g ,葡萄糖 10 g , 蛋 白胨 1. 0 g , 酵 母 膏 1. 0 g , KH2 PO4 1. 0 g , MgSO4 0. 5 g ,水 1000 mL 。
B5 :土 豆 200 g , 蛋 白 胨 2. 0 g , K2 H PO4 1. 5 g , KH2 PO4 1. 5 g ,MgSO4 2. 0 g ,葡萄糖20 g , 水 1000 mL 。
长满料袋时间 Colonization time (d)
生长势 Mycelial vigo r
生长势旺 ,菌丝浓密 ,生长整齐
6. 0
19
Dense , regular and vigoro us mycelium
生长势良好 ,菌丝密
4. 3
43
Dense and vigo rous mycelium
硫 磺 菌 [ L aeti porus sul p hureus ( Fr . ) Murrill ]别名硫磺多孔菌 、硫色多孔菌 、黄芝 ,属 非 褶 菌 目 ( Ap hyllop horales ) , 多 孔 菌 科 ( Polypo raceae) ,硫磺菌属 ( L aeti porus) ,是一种 食药兼用大型真菌 。硫磺菌多发生于夏季 ,生于 栗 、柳 、云杉 、栎 、落叶松等活立木树干 、树桩或枯 立木上 ,生长部位可引起木材褐色块状腐朽 ; 栽 培香菇的段木上有时也有该菌生长 ,被视为“杂 菌”。野生硫磺菌分布范围广 ,在全国大部分地 区均有分布 。卯晓岚 (2000) 在《中国大型真菌》 中记载 “: 硫磺菌幼时可食用 ,味道好 。药用 ,性 温 、味甘 ,能调节机体 、增进健康 、抵抗疾病 ,对人 体可起重要调节作用 。有抗癌作用 ,对小白鼠肉 瘤 180 及艾氏癌抑制率分别为 80 %和 90 %”[1] 。 专利产品[ 专利号为 CN99110871. X]硫磺菌制剂 [ 口服液 、粉 (散) 、胶束 、蜜丸剂型 ] ,具有迅速缓 解病情 ,可产生即时药效应 ;对“气胀”病 、结肠炎 等疾病治愈率可达 90 %以上 。可见 , 硫磺菌食 用 、药用价值高 ,有一定开发前景 。
配制 8 种液体培养基进行液体培养实验 ,各 培养基配方如下 :
B1 :苹果 200 g ,土豆 200 g ,蛋白胨 2. 0 g , K2 H PO4 1. 5 g , KH2 PO4 1. 5 g , MgSO4 2. 0 g ,葡 萄糖 20 g ,VB1 10 mg ,水 1000 mL 。
1. 1 材料 1. 1. 1 供试菌株
硫磺菌菌株为本实验室自南京瓦屋山野外 采集 ,分离 、纯化而来 。 1. 1. 2 复合 PDA 培养基
马铃 薯 200 g , 葡 萄 糖 20 g , 蛋 白 胨 2 g ,
MgSO4 2 g , K2 H PO4 1. 5 g , KH2 PO4 1. 5 g , VB1 10 mg ,琼脂 18 g ,水 1000 mL 。用作母种分离及 复壮培养基 。 1. 1. 3 平板培养基
第4期
闫梅霞 ,等 :硫磺菌的固体和液体培养研究
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培养基 Subst ract
A1
A2
A3
A4
表 1 栽培种培养料配方试验 Table 1 Effect of substract composition on the growth of L. sul p hureus mycelium
菌丝生长速度 Mycelial growt h rate (mm/ d)
B6 :葡萄 糖 10 g , 玉 米 粉 10 g , KH2 PO4 1. 0 g , MgSO4 0. 5 g , 水 1000 mL 。
B7 : 玉 米 粉 30 g , 葡 萄 糖 20 g , KH2 PO4 1. 0 g ,MgSO4 0. 5 g ,蛋白胨 2. 0 g ,水 1000 mL 。
季节的限制 ,产量全年分布不均 。而采用液体培养 获得菌丝体的方式不受季节限制 ,生产周期短 ,易 于人工控制 ,菌丝体产量稳定 ,近年来逐渐受到重 视 。本实验室就野生硫磺菌进行分离 、纯化 ,通过 多种培养基配方进行固体和液体培养方法的研究 , 为今后进一步开发利用硫磺菌提供依据 。
1 材料与方法
食用菌学报 λ 2007. 14 (4) : 55～58
文章编号 :1005 - 9873 (2007) 04 - 0055 - 04
硫磺菌的固体和液体培养研究
闫梅霞 , 胡清秀 3
(中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 , 北京 100081)
摘 要 : 从野外采集 、分离纯化得到硫磺菌 ( L aeti porus sul p hureus ) 菌株 ,并进行硫磺菌的固体和液体培养试 验 。试验表明 ,硫磺菌在复合 PDA 培养基上生长良好 ,菌丝生长速度为 3. 2 mm/ d ;在代料栽培中以麦粒或栎 木屑培养基培养硫磺菌菌种时菌丝生长速度快 ,菌丝浓密 ;从 8 种液体培养基配方中筛选出菌丝体产量较高 的配方 ,配方为 :葡萄糖 30 g ,豆粉 20 g ,玉米粉 10 g ,酵母提取物 5 g , KH2 PO4 1 g ,CaCO3 2 g ,MgSO4 0. 5 g ,水 1000 mL ,菌丝体产量为 22 g/ 100 mL 。 关键词 : 硫磺菌 ; 固体培养 ; 液体培养 中图分类号 : S646. 01 ;S567. 301 文献标识码 : A