酶解鹰嘴豆蛋白制备ACE抑制肽的研究

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超声辅助酶解鹰嘴豆蛋白制备抗氧化肽的研究

超声辅助酶解鹰嘴豆蛋白制备抗氧化肽的研究李芳;侯伟伟;任海波;张文;马欣;孔令明【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2015(000)013【摘要】本文利用超声波辅助酶解鹰嘴豆蛋白粉制备抗氧化多肽，采用响应面分析法考察了超声功率、超声温度和超声时间对酶解产物的超氧阴离子清除率、羟基自由基清除率和还原能力的影响。

结果表明，最优的超声酶解条件为：超声功率200 W、超声温度40℃、超声时间28 min，在此条件下，酶解产物对超氧阴离子的清除率、对羟基自由基的清除率和还原能力分别为80.4%、9.2%和71.8%，实际的清除率分别为81.6%、9.4%和72.9%。

在相同的浓度下，鹰嘴豆多肽对超氧阴离子的清除率、对羟基自由基清除率和还原能力占维生素C百分比较未经超声波处理的分别提高了4.0%、1.2%和7.8%。

【总页数】4页(P35-38)【作者】李芳;侯伟伟;任海波;张文;马欣;孔令明【作者单位】新疆轻工职业技术学院，新疆乌鲁木齐830021;新疆农业大学食品科学与药学学院，新疆乌鲁木齐830052;新疆轻工职业技术学院，新疆乌鲁木齐830021;新疆农业大学食品科学与药学学院，新疆乌鲁木齐830052;新疆农业大学食品科学与药学学院，新疆乌鲁木齐830052;新疆农业大学食品科学与药学学院，新疆乌鲁木齐830052【正文语种】中文【相关文献】1.复合风味蛋白酶酶解麦麸蛋白制备麦麸抗氧化肽的研究 [J], 张春红;郭维维;曹向宇;王雪2.碱性蛋白酶酶解红花籽蛋白制备抗氧化肽工艺的研究 [J], 孙立;毛晓英;陈计峦;李保山3.酶解鹰嘴豆蛋白制备抗氧化肽工艺优化研究 [J], 李艳红;刘坚;张涛;江波;沐万孟4.酶解制备苦荞蛋白抗氧化肽及其分离纯化研究 [J], 陈金玉; 曲金萍; 张坤生; 闫怡君; 任云霞5.响应面法优化复合酶酶解制备可口革囊星虫胶原蛋白抗氧化肽工艺研究 [J], 彭易鑫;陆旭丽;代亚萍;曹玉坡;李积华;龚霄;庞杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Alcalase2.4L酶解核桃分离蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ—Ｉｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅ（ＡＣＥ）ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ
ｐｅｐｔｉｄｅｓｆｒｏｍｗａｌｎｕｔｐｒｏｔｅｉｎｉｓｏｌａｔｅ、ｔｈＡｌｃａｌａｓｅ２．４Ｌ
（陕西科技大学生命科学与工程学院，西安７１００２１）
摘要：以核桃分离蛋白（ＷＰＩ）为原料，利用Ａｌｃａｌａｓｅ２．４Ｌ酶解制备高活性的ＡＣＥ抑制肽。以水解度和ＡＣＥ抑制率为指标，通过单因素和二次回归正交旋转组合试验，优化了Ａｌｃａｌａｓｅ２．４Ｌ酶解核桃分离蛋白制备ＡＣＥ抑制肽的工艺。得到的最佳酶解工艺条件为ｐＨ７．９４，酶解温度６Ｏ℃ ，底物质量浓度２０ｇ／Ｌ，酶与底物质量比３．６９：１００，酶解３ｈ后，酶解产物的水解度达到２４．７８％，ＡＣＥ抑制率达到７６．５８％，且在此条件下获得的ＡＣＥ抑制肽具有一定的抗体内消化酶特性。
ｓｉｓｔｉｍｅ３ｈ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｓｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｄｅｇｒｅｅｏｆｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｗａｓｕｐｔｏ２４．７８％，ＡＣＥｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅ

碱性蛋白酶Alcalase水解杏仁蛋白制备ACE抑制肽

碱性蛋白酶Alcalase水解杏仁蛋白制备ACE抑制肽
刘宁;仇农学
【期刊名称】《农产品加工·学刊》
【年(卷),期】2009(000)003
【摘要】采用Alcalase蛋白酶水解杏仁蛋白,以水解度(DH)及水解产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率为指标进行酶解工艺优化.结果表明,较大活性的ACE抑制肽的最佳水解条件为:pH值7.0,温度50℃,酶底比4%,底物质量分数为2%.该条件下经60 min水解,其水解度为12.23%,得到ACE抑制肽的IC50值为0.85 mg/mL.
【总页数】4页(P149-152)
【作者】刘宁;仇农学
【作者单位】陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西,西安,710062;陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西,西安,710062
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2
【相关文献】
1.大豆粕碱性蛋白酶水解肽及ACE抑制活性的研究 [J], 温雪琴;刘屾;黄弢;赵嘉希;冯欣;孙建华
2.Alcalase碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备小分子肽的工艺研究 [J], 屠春燕;袁艳娟;徐娟;唐美华
3.花生分离蛋白碱性蛋白酶Alcalase水解物具有血管紧张素转化酶抑制活性 [J],
黎观红;施用晖;乐国伟;刘焕
4.碱性蛋白酶水解豆粕制备ACE抑制肽水解条件的优化 [J], 田中原;王亚萍;刘屾;任毅;冯欣;孙建华
5.碱性蛋白酶水解鸡血清蛋白制备ACE抑制肽的研究 [J], 师小飞;李明生
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固定化碱性蛋白酶水解花生蛋白制备ACE抑制肽

(1.Institute of Agricultural Processing, Hennan Academy of Agricultural Sciences, Zhengzhou 450002; 2.Henan Engineering Research Centre of Bioactive Substances in Agricultural Products, Zhengzhou 450002)
花生是世界上广泛种植的油料作物，2009年全球花生产量为34.40×106 t。我国是花生的生产
大国和消费大国，花生产量居世界第一，年均消费花生在12.56×106 t[1]。目前，我国用于制油的花
*通讯作者收稿日期：2011-12-05 基金项目：河南省省院科技合作项目(102106000035)。作者简介：芦鑫(1981—)，男，江苏滨海人，博士研究生，助理研究员，研究方向为蛋白加工。
Preparation of antihypertensive peptide from hydrolyzing peanut protein by immobilized alkaline protease
LU Xin1,2 , SUN Qiang1,2 , SONG Guo-hui1,2 , ZHANG Li-xia1,2 , LI Jing1, HUANG Ji-nian1,2*
摘要：采用固定化碱性蛋白酶水解花生蛋白制备 ACE 抑制肽。以短肽生成率和 ACE 抑制率作为评价指标，通过响应面优化设计获得最佳的酶解条件为：加酶量 1767 μ /g 蛋白，酶解时间 143 min ，酶解 pH 为 10.00 ，酶解温度取 45 ℃，获得的短肽生成率和 ACE 抑制率为 82.67% 和 83.48% 。此外，适当增加水解度可以提高酶解产物的 ACE 抑制活性，但过度水解会导致 ACE 抑制率下降。关键词：降血压肽；花生蛋白；固定化中图分类号：TS 229 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2012)07-0166-06

酶解核桃粕制备降压肽工艺优化

碱性蛋白酶水解核桃粕制备降压肽工艺优化小组成员：席嘉佩刘淑霞程瑶瑶编号：SRP2015187降压肽作为一种ACE抑制剂可以预防、降低高血压疾病的威胁，而血管紧张素转化酶（ACE）是一种广泛存在于人体组织及血浆中的含锌二肽羧基肽酶。

通过对肾素-血管紧张素系统（RAS）和激肽释放酶-激肽系统（KKS）的控制，ACE可实现对人体血压的控制[1, 2]。

现已有众多人工合成药物（ACE抑制剂）如卡托普利、依那普利等用以治疗高血压[3]，但因长期服用后会丧失味觉、损害肾功能，甚至会影响神经方面的行为[4]故而从食源性蛋白中直接提取或酶法水解得到安全无毒的ACE抑制剂成为食品和医药学界最热门的课题之一[5]。

目前，国内外学者成功从鸡蛋蛋白[6]、牡蛎蛋白、大豆蛋白[8]、蚕蛹蛋白、海地瓜蛋白[10, 11]、花生蛋白[12]等蛋白水解液中分离得到高水解活性的ACE抑制肽。

从食源性植物蛋白中得到的ACE 抑制肽受到广泛关注，已被列为国家“九五”计划项目的生物活性肽研究[13]，利用现代生物技术对蛋白质进行深加工，在未来有良好发展前景。

核桃是一种营养和经济价值都很高的珍贵果木，2014年6月数据显示我国核桃年产50万吨，但由于对核桃的开发利用远远不够，产品附加值低，造成了资源严重浪费。

目前，核桃粕多用于动物饲料的制作，国内外对核桃粕深加工利用研究较少，对核桃蛋白进行的大量研究多集中在分离纯化、功能特性、营养价值上[14, 15]。

酶法水解核桃蛋白制备降血压肽[8, 16]操作条件温和容易控制，同时还可以提高核桃蛋白的利用率及营养价值。

脱脂核桃粕中蛋白含量高达86.67%，以其作为原料酶解制得ACE抑制肽，不但可以拓展食源性可辅助降压的蛋白原料提取来源，而且可以促进核桃粕深加工，实现资源综合利用，有良好现实意义及经济价值。

本实验以脱脂核桃粕为原料，以水解度和ACE抑制率为指标，使用风味蛋白酶对核桃蛋白进行酶解，采用响应面法优化酶解工艺，以得到高水解活性的ACE抑制肽，为核桃综合利用和深加工技术发展提供理论支持及后期发展提供技术支持。

19酶法生产大豆蛋白ACE抑制肽的研究_韩飞

酶法生产大豆蛋白ACE 抑制肽的研究韩飞1，于婷婷1，周孟良2(1.国家粮食局科学研究院，北京 100037；2. 扬州大学，江苏扬州 225009)摘要：研究了Alcalase 碱性蛋白酶、Neutrase 中性蛋白酶、Protames 复合蛋白酶、Flavourzyme 风味蛋白酶对大豆分离蛋白的水解效果和ACE(血管紧张素转化酶)的抑制活性。

水解能力用pH-start 法检测，水解度大小依次为：Alcalase 碱性蛋白酶>Protames 复合蛋白酶>Neutrase 中性蛋白酶>Flavourzyme 风味蛋白酶；ACE 抑制活性用高效液相法检测，ACE 抑制率强弱依次为：Alcalase 碱性蛋白酶>Flavourzyme 风味蛋白酶>Protames 复合蛋白酶>Neutrase 中性蛋白酶。

综合考虑，选定Alcalase 碱性蛋白酶为生产大豆ACE 抑制肽的最适酶，并对其酶解条件进行了优化，确定生产大豆ACE 抑制肽的最佳条件为：温度60℃、pH8.0、[S]=4%、[E]/[S]=4%，这时的水解度为14.4%。

关键词：A C E 抑制肽；高效液相色谱；酶解；水解度Enzymatic Preparation of Angiotensin I-Converting Enzyme (ACE) Inhibitory Peptides Derived fromSoybean ProteinHAN Fei 1，YU Ting-ting 1， ZHOU Meng-liang 2(1.Academy of State Administration of Grain, Beijing 100037, China ；2.Yangzhou University,Yangzhou 225009, China)Abstract: Four type of enzymes, Alcalase, Neutrase, Protames, Flavourzyme, were used to hydrolyze the prepared soybean protein isolates in our laboratory and the degrees of hydrolysis (DH) were analyzed by using pH-start method, respectively. The ACE (angiotensin I-converting enzyme) inhibitory activities of the products were studied by HPLC. The results showed that hydrolysis abilities of these enzyme are in the following order: Alcalase > Protames > Neutrase > Flavourzyme; The ACE inhibitory activity of the product by Alcalase is the highest. The optimal conditions for producing ACE inhibitory peptides by using Alcalase are temperature 60 ℃, pH 8.0, [S]=4%, and [E]/[S]=4%. The degree of hydrolysis (DH) is 14.4% under the above conditions.Key words: angiotensin I-converting enzyme inhibition ； high performance liquid chromatograpy (HPLC) ；enzymatic hydrolysis ； degree of hydrolysis中图分类号：TS201.21 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2008)11-0369-06收稿日期：2008-07-26基金项目：“十一五”国家科技支撑计划项目(2006BAD05A01)作者简介：韩飞(1973-)，女，副研究员，博士，主要从事粮油(食品)营养与功能研究。

酶法制备乳源ACE抑制肽

ｓｐｒｓｉｅｓｙｔｅＣ０ａｅｏｉｗｓ．６ｇＬｕｐｅｓｇｎｉ（５ｌ）ｆｔａ２ｍ／．ｎｄｔｈＩｖｕ１０３ｍ
ＫｅｒｓＯＳｍｉｋｐｏｅｎ；ｂｏｄｖｓｅｅｓｌｍｅｔｎｅｔｙｗｏｄ：ＣＷｌｒｔｉｌｏｅｓｌｎｅｅｅｎｖｒｉｔｉｎ；ｈｄｏｉｉＡＣＥＩｙｒｌｓｓ；
ａｕｔｓｄ３％，ｈｄｏｉｉ．．Ｉｈｎｙｌｓｓｐｏｅｓｌｎｔｈｉｘｅｉｎ，ｔｅｄｇｅｆｍｏｎｓｕｅｙｒｌｓ９５ｈｎｔｅｅｚｍｏｙｉｒｃｓ，ａｏｇｗｉｔｅｔｍｅｅｔｎｓｏｓｈｈｅｒｅｏｈｄｏｙｉｓｉｈｌｈｓｎｒａｅｙｒｌｓｓｌｇｔｙａｉｃｅｓｄ，ｂｔｉｓｃａｉｎｍｉｏｃｄｏｔｎｉｃｅｓｄａｇｓａｅｕｄｓｏｉｔｏａｎａｉｃｎｅｔｎｒａｅｌｒｅｃｌ．Ｔｈｐｒｌｅａｔｙ
紧张素Ｉ一端裂解二肽形成血管紧张素Ｉ，同时钝从ＣＩ
化舒缓激肽，造成血压升高。ＡＥＣ抑制肽对ＡＥＣ的亲合
２１年９月０１
食品研究与开发
ＦｏｅａｃｎｅｅｐｅｔｏｄＲｓｒｈＡｄＤｖｌｍｎｅｏ应用技术
１４３
第３２卷第９期
酶法制备乳源ＡＥ抑制肽Ｃ
于晓庆王雄司佳。。
（．１内蒙古蒙牛乳业（团）份有限公司，集股内蒙古呼和浩特０１０；．北工业大学化学与环境工程学院，ｌ５０２湖湖北

酶解豆类蛋白制备活性肽研究进展

酶解豆类蛋白制备活性肽研究进展
常畅;闫巧娟;江正强
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2022(43)11
【摘要】豆类蛋白源活性肽具有抗氧化、血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制、二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ)抑制和抗炎等活性,在防治高血压和糖尿病等慢性疾病中起积极作用,对维护人体健康具有重要意义。

该文就目前国内外豆类蛋白源活性肽的酶法制备及其活性予以综述,并对其发展趋势进行展望,旨在为健康功能性食品的研究与开发提供参考。

【总页数】8页(P10-17)
【作者】常畅;闫巧娟;江正强
【作者单位】中国农业大学食品科学与营养工程学院中国轻工业食品生物工程重点实验室;中国农业大学工学院
【正文语种】中文
【中图分类】R54
【相关文献】
1.控制酶解黄粉蛋白制备富含“条件必需氨基酸”rn—谷氨酰胺(Gln)活性肽营养液的研究rn(Ⅱ)Gln活性肽的制备工艺和最佳工艺条件的确定
2.酶解海洋生物源蛋白制备活性肽研究进展
3.海洋蛋白酶解制备生物活性肽的研究进展
4.胰蛋白酶酶解制备卵转铁蛋白源抗菌活性肽条件的研究
5.碱性蛋白酶酶解酱油渣蛋白制备免疫活性肽
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磁性壳聚糖微球固定化酶酶解芝麻饼粕蛋白制备ACE抑制肽的研究的开题报告

磁性壳聚糖微球固定化酶酶解芝麻饼粕蛋白制备ACE抑制肽的研究的开题报告一、背景与研究意义ACE（血管紧张素转换酶）是调节血管紧张素的关键酶，其在体内还参与调节血压、水盐代谢等生理过程。

ACE抑制肽具有降血压、抗氧化、抗炎等多种生物活性，因此成为研究热点之一。

芝麻饼粕蛋白中含有丰富的ACE抑制肽，因此利用芝麻饼粕蛋白进行ACE抑制肽的制备具有较高的应用价值传统的制备ACE抑制肽工艺一般采用化学方法或酶法，但这些方法都存在一些问题，如副产物多、易受污染、工艺复杂等。

近年来，微生物发酵、酵素法和固定化酶法等非化学方法逐渐引起人们的重视。

磁性壳聚糖微球固定化酶酶解是一种新型的酶解方法，具有酶活稳定、易分离、重复使用等优点，能够有效提高ACE抑制肽的产率和纯度。

本研究旨在利用磁性壳聚糖微球固定化酶酶解芝麻饼粕蛋白，制备高活性的ACE抑制肽，并对其进行生物活性评价，为芝麻饼粕蛋白的利用和ACE抑制肽的开发提供新思路。

二、研究内容和方法1.磁性壳聚糖微球的制备：采用反相乳液聚合法制备磁性壳聚糖微球，并通过透射电镜、红外光谱等手段对其进行表征。

2.优选酶解条件：根据单因素试验结果，选择酶解温度、酶解时间、酶用量、底物浓度等参数进行正交试验，以最大化ACE抑制肽产率为目标，寻找最佳酶解条件。

3.制备ACE抑制肽：在最佳酶解条件下进行酶解反应，收集产物溶液进行超滤和透析，得到ACE抑制肽。

4.生物活性评价：采用体外测定法对ACE抑制肽的抑制活性进行评价，包括IC50值、抑制率等参数。

三、研究预期结果1.成功制备出磁性壳聚糖微球，并对其进行了表征。

2.确定最佳酶解条件，获得产率高、纯度高的ACE抑制肽。

3.对获得的ACE抑制肽进行生物活性评价，证明其具有一定的抑制活性。

四、研究意义和创新点1.采用新型酶解方法制备ACE抑制肽，具有高效、环保、易操作等优势。

2.开发了一种利用芝麻饼粕蛋白制备ACE抑制肽的新途径，丰富了ACE抑制肽的来源。

超声辅助酶解鹰嘴豆蛋白制备抗氧化肽的研究

超声辅助酶解鹰嘴豆蛋白制备抗氧化肽的研究超声辅助酶解鹰嘴豆蛋白制备抗氧化肽的研究随着生活水平的提高，人们已经开始更加关注健康和饮食。

鹰嘴豆是一种非常营养丰富的食品，其中蕴含着许多优质的蛋白质。

而在蛋白质中，抗氧化肽又是一种非常重要的成分，它可以清除体内自由基，从而有效地保护身体健康。

因此，针对鹰嘴豆中的蛋白质进行研究，制备出更多有效的抗氧化肽，对于人们的健康非常重要。

超声波技术作为一种新型的物理处理方法，可以有效地改善鹰嘴豆蛋白的酶解效果，从而制备出更多的抗氧化肽。

鹰嘴豆蛋白酶解前后的质量变化也是一个非常关键的问题。

因此，本文主要介绍在超声辅助下酶解鹰嘴豆蛋白制备抗氧化肽的研究。

实验中，首先要选取合适的酶，通常使用的是蛋白酶来进行酶解。

而超声波的处理则是在酶解前对蛋白质进行物理处理，目的是让蛋白质更容易被酶分解，从而提高酶解效率。

处理时间和功率则需要根据实际的实验情况进行调整，一般来说，处理时间在几分钟到几十分钟不等，处理功率一般在20W-100W之间。

在实验中，我们发现，与普通酶解方法相比，超声辅助酶解几乎可以在相同的时间内获得更多的抗氧化肽。

此外，超声波处理还可以保留更多的氨基酸，对于鹰嘴豆蛋白的营养价值也有很大的帮助。

因此，超声辅助酶解是一种非常有效的方法，可以大大提高鹰嘴豆蛋白的酶解效率，从而制备出更多的抗氧化肽。

总之，超声辅助酶解鹰嘴豆蛋白制备抗氧化肽的研究是一项非常重要的研究工作。

我们发现，在超声辅助下酶解鹰嘴豆蛋白可以获得更多的抗氧化肽，并且可以保留更多的营养成分，对于人们的健康具有非常重要的价值。

未来，我们仍需要更加深入地研究这一领域，更好地服务于人们的健康饮食。

酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究张瑞东;迟玉杰;阮长青【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2010(031)014【摘要】为获取酶解蛋清蛋白制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的工艺参数,研究4种蛋白酶酶解蛋清蛋白所得产物对ACE的抑制活性,筛选出胰蛋白酶作为制备蛋清蛋白ACE抑制肽的适宜用酶.运用响应曲面法研究酶解时间、底物浓度([S])和酶与底物质量比([E]/[S])对制备ACE抑制肽工艺的影响,建立以上3因素与ACE抑制率关系的数学模型.结果确定胰蛋白酶酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的适宜酶解条件为酶解时间4.87h、[S]3.06%、[E]/[S]2.91%、酶解温度45℃、pH7.4,此条件下制备的蛋清蛋白酶解产物ACE抑制率达到50.73%.【总页数】4页(P1-4)【作者】张瑞东;迟玉杰;阮长青【作者单位】东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨,150030;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨,150030;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨,150030;黑龙江八一农垦大学食品学院,黑龙江大庆,163319【正文语种】中文【中图分类】TS201.1【相关文献】1.Alcalase2.4L酶解核桃分离蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究 [J], 朱振宝;周慧江;易建华2.酶解桃仁分离蛋白制备肾素和ACE 双重抑制肽的工艺研究 [J], 朱振宝;杨梅;易建华;王留续3.酶解法制备榛子粕ACE抑制肽工艺研究 [J], 殷金莲; 靳毓4.酶解南极磷虾蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究 [J], 张伦;赵国旭;乔倩倩;王斌;赵玉勤5.酶解南极磷虾蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究 [J], 张伦;赵国旭;乔倩倩;王斌;赵玉勤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

分步酶解酪蛋白制备小分子ACE抑制肽

分步酶解酪蛋白制备小分子ACE抑制肽王桂春;吕兵【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2011(032)021【摘要】通过模拟胃肠道消化,采用单酶和复合酶分步水解酪蛋白获得小分子的血管紧张素转化酶（angiotensin-con-verting enzyme,ACE）抑制肽。

首先通过胃蛋白酶水解条件的优化获得具有高ACE抑制活性肽。

然后以此为底物通过胰蛋白酶和胰凝乳蛋白复合酶水解条件优化获得具有高ACE抑制活性的小分子肽。

结果表明：第一步的胃蛋白酶水解最优条件为：[E]/[S]=6%、[S]=0.015g/mL、pH=1.8、t=37℃、t=2h,水解产物稀释10倍后ACE抑制率为84.5%,分子质量集中在2000D以下;第二步的复合酶水解最优条件为：m胰蛋白酶（6%）：m胰凝乳蛋白酶（3%）=2：1、pH=7.8、t=48℃、t=5h,水解产物稀释10倍后ACE抑制率为85.9%,分子质量集中在500D以下。

研究表明,通过分步酶解选择合适的酶解条件可以获具有较高ACE抑制活性的小分子肽。

【总页数】4页(P152-155)【作者】王桂春;吕兵【作者单位】江南大学食品学院,江苏无锡214122;江南大学食品学院,江苏无锡214122;常熟市金城食品添加剂有限公司,江苏常熟215531【正文语种】中文【中图分类】TS252.1【相关文献】1.酪蛋白制备ACE抑制肽的酶解工艺优化 [J], 洪伟;薛正莲;陈玲2.超滤法分离酪蛋白酶解物中的ACE抑制肽 [J], 姜瞻梅;田波;霍贵成3.Alcalase 酶解羊乳酪蛋白制备 ACE 抑制肽的研究 [J], 陈合;王娟;舒国伟;张秋红;高丽嫚4.罗非鱼肉双酶分步控制酶解制备血管紧张素转化酶抑制肽的研究 [J], 朱志伟;曾庆孝;林奕封;阮征;张立彦5.牦牛乳酪蛋白水解制备DPP-IV抑制肽的蛋白酶发掘及其酶解工艺优化 [J], 王玲丽;刘同杰;张兰威;公丕民;易华西因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

碱性蛋白酶水解豆粕制备ACE抑制肽水解条件的优化

碱性蛋白酶水解豆粕制备ACE抑制肽水解条件的优化田中原;王亚萍;刘屾;任毅;冯欣;孙建华【摘要】为了寻求高效的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽制备方法,在实验室条件下利用碱性蛋白酶水解豆粕生产ACE抑制肽,并采用单因素和多因素实验相结合的方法对酶解条件进行优化.结果发现,适当延长碱性蛋白酶的水解时间和提高pH,可大幅度提高ACE抑制肽的抑制活性.单因素和多因素实验综合结果显示,碱性蛋白酶水解豆粕产生ACE抑制肽的适宜水解条件为:pH为9.0,水解温度为50℃,水解时间为4h,蛋白酶质量分数(酶质量/底物质量)为2.0％,底物质量浓度为40g/L,在此条件下制备的ACE抑制肽的抑制率可达到97.97％.【期刊名称】《天津师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(036)003【总页数】5页(P64-68)【关键词】豆粕;ACE抑制肽;碱性蛋白酶;酶解条件;优化【作者】田中原;王亚萍;刘屾;任毅;冯欣;孙建华【作者单位】天津师范大学生命科学学院,天津300387;天津师范大学天津市动植物抗性重点实验室,天津300387【正文语种】中文【中图分类】Q556豆粕是大豆提取豆油后的副产品，其蛋白质含量较高，一般为43%左右.其中，赖氨酸约为6.0%，色氨酸约为1.2%，亮氨酸约为9.4%［1］.利用酶解豆粕法可以制备食源性的血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme，ACE）抑制肽［2］，它能够抑制ACE的活性，从而实现降低血压的功能，是一种潜在的降压药物［3］.ACE通过两条途径对血压产生影响：一方面，ACE可以将血管紧张素Ⅰ转变为血管紧张素Ⅱ，而血管紧张素Ⅱ能够促进血管收缩，导致血压升高；另一方面，ACE作用于舒激肽使其失活，从而失去扩张血管的作用，可以导致血压升高［4］.若能够抑制ACE的活性，就可以对高血压进行有效防治.传统的化学合成降压药可有效抑制ACE的活性，但长期服用具有副作用大的缺点.食源性降压肽虽然效果不如合成药物，但其具有无副作用、温和、安全的特点且不影响正常者的血压.因此，食源性ACE抑制肽的研究备受关注，其应用前景十分广阔［5］.降压肽的制备方法多种多样：从原料看，包含多种动植物原料及下脚料；从生产工艺区分又可分为发酵法［6］、自溶法［7］、酶解法［8］等.酶解法是目前最常用的制备方法，如使用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶制备降压肽等.其中碱性蛋白酶水解产物具有较高的ACE抑制活性［9］.本课题组前期研究结果表明，碱性蛋白酶水解豆粕产物的ACE抑制活性能够随着酶解条件的优化有效提高至64.24%［10］.在此基础上，本研究对碱性蛋白酶水解豆粕生产ACE抑制肽的酶解条件进行更深入的优化，旨在进一步提高碱性蛋白酶水解豆粕产物的ACE抑制活性，以期为ACE抑制肽的大规模生产提供理论和实验依据.1.1 材料与试剂碱性蛋白酶（天津市诺奥科技发展有限公司）；食用级豆粕（市售）；硼酸（分析纯，天津市风船化学试剂科技有限公司）；硼砂（分析纯，天津市元立化工有限公司）；三氟乙酸（分析纯，上海市科丰试剂厂）；甲醇（色谱纯，美国迪马科技公司）；马尿酰组氨酰亮氨酸（HHL）和ACE（ACE来自兔肺，美国Sigma公司）.1.2 仪器与设备电热恒温水槽（DK-8D，上海精宏实验设备有限公司）；加热磁力搅拌器（EMS-8A，天津市欧诺仪器仪表有限公司）；pH计（PHS-3E，上海仪电科学仪器股份有限公司）；高效液相色谱仪（1200，美国安捷伦公司）；微型超声波清洗器（KQ116，郑州长城仪器有限公司）.1.3 方法1.3.1 酶解抑制肽样品的制备本研究主要考察pH、水解温度、水解时间、酶浓度、底物浓度对碱性蛋白酶水解豆粕制备ACE抑制肽的影响.通过向体系中滴加1mol/L的NaOH溶液保持反应体系pH值的恒定，同时记录加入量，用于计算水解度.将取得的样品溶液在4℃、12500 r/min条件下离心15min，吸取上清液.对上清液进行冷冻干燥，然后制成ACE抑制肽粉末.将粉末用硼酸缓冲液（pH 8.3，含0.3 mol/L的NaCl）稀释到一定浓度，测定其抑制活性.1.3.2 碱性蛋白酶水解度的测定方法采用Ph-STAT法［11］测定碱性蛋白酶的水解度.1.3.3 ACE抑制肽活性的检测方法本研究采用HPLC法测定ACE抑制肽的活性.原理：以HHL为底物，ACE抑制肽为催化剂，通过检测加入ACE抑制肽前后生成物马尿酸的峰面积的差值，计算得到抑制率.该方法检测时间短、准确性高［11］，既可测定天然源抑制肽，也可测定人工合成的抑制肽.用0.45 μm的滤膜分别过滤质量浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、15.0和20.0 μg/mL的马尿酸标准液，之后用高效液相色谱仪检测，分别测得不同标准液的相对峰值，进行线性回归，得到回归方程为：式中：x为马尿酸的质量浓度（μg/mL）；y为峰面积（mAu·s）.色谱分析条件：色谱柱为Zorbax300SB-C18型（5 μm，4.6 mm×150 mm，美国Agilent公司）；紫外检测波长为228 nm；柱温为26℃；流动相为甲醇-超纯水（体积比为1∶1），含体积分数为0.1%的三氟乙酸；流速为0.7 mL/min；进样量为20 μL；时间为8 min.测定管：取配置好的0.5 g/L的抑制肽样品60μL 与10 μL的ACE溶液混合，37℃水浴10 min后，加入50 μL的HHL溶液.将反应体系置于37℃水浴中反应60 min后，加入100 μL的浓度为1 mol/L的HCl终止反应.而后将反应液过0.45μm的滤膜，再进行液相色谱检测分析.对照管：用60 μL的硼酸缓冲液（pH为8.3，含0.3 mol/L的NaCl）替代抑制肽溶液.空白对照：用70 μL的硼酸缓冲液（pH为8.3，含0.3 mol/L的NaCl）替代抑制肽溶液和ACE溶液.计算公式为：式中：［HA］C为对照样品的马尿酸浓度；［HA］S为测定样品的马尿酸浓度；［HA］H为空白对照的马尿酸浓度.1.3.4 单因素实验本研究设计了5组实验，每组只改变pH、水解温度、水解时间、酶浓度（酶质量/底物质量）、底物浓度5种因素中的1种，探讨其对碱性蛋白酶水解度的影响. 1.3.5 多因素实验由于酶的最适水解温度和最适pH值相对固定，根据单因素实验的数据分析，遵循“均匀”和“整齐”的原则设计多因素实验，分析水解时间（2、3、4、5 h）、酶的质量分数（1.0%、1.5%、2.0%、2.5%）、底物质量浓度（40、45、50、55、60 g/L）3个因素对实验结果的影响.多因素实验能够对单因素实验的结果进行验证和补充说明.2.1 碱性蛋白酶的水解度与其制备的冻干样品ACE抑制肽的活性本研究采用碱性蛋白酶水解豆粕，其水解度和产生的ACE抑制肽的活性随取样时间的变化规律如图1所示.HHL和马尿酸的检测波长与保留时间参考温雪琴等［10］的方法.由图1可以看出，随着水解时间的延长，碱性蛋白酶的水解度在最初的1h内急剧升高，之后增速放缓.ACE抑制肽的抑制率在最初的1 h内也是急剧升高，在水解2 h后达到峰值，抑制率超过55%.之后的2 h内抑制率保持平稳，水解4h后抑制率开始下降.此结果与温雪琴等［10］的研究存在差异，可能是由于水解条件中pH的改变引起的.2.2 不同pH值对碱性蛋白酶水解度的影响在底物质量浓度为40 g/L、温度为50℃、水解时间为4 h、酶的质量分数为2.0%的条件下，分别测定pH 为7.0、8.0、9.0、10.0、11.0时的水解度，结果如图2所示.由图2可以看出，pH为7.0、8.0、9.0时，碱性蛋白酶水解度的曲线在4 h内的上升趋势相似，但pH为7.0时的水解程度明显高于pH为8.0和9.0时的水解程度.在pH为10.0和11.0的条件下，底物在最初的1 h内就快速水解，水解度高达90%以上，在2 h以后水解度均达到了100%，这种情况可能导致蛋白质在水解过程中大量水解成氨基酸，肽的得率相对较低.尽管pH为7.0时碱性蛋白酶的水解度高于pH为8.0和9.0，但是水解度的高低与抑制率的高低并不完全一致，后期实验结果表明在pH7.0、8.0、9.0条件下制备的ACE抑制肽活性分别是90.56%、94.62%、94.65%.综合以上结果，证实碱性蛋白酶水解豆粕生产ACE抑制肽的最佳pH为9.0.2.3 不同温度对碱性蛋白酶水解度的影响在底物质量浓度为40 g/L、pH为9.0、水解时间4 h、酶的质量分数为2.0%的条件下，测定水解温度分别为50、55、60、65、70℃条件下碱性蛋白酶的水解度，结果如图3所示.由图3可以看出，反应体系中的温度越高，水解度反而越低，这可能是由于高温抑制了蛋白酶的活性.因此认为碱性蛋白酶的最佳反应温度为50℃.2.4 不同水解时间对碱性蛋白酶水解度的影响在底物质量浓度为40g/L、pH为9.0、温度为50℃、酶的质量分数为2.0%的条件下，分别测定水解1、2、3、4、5、6 h的水解度，结果如图4所示.由图4可以看出，碱性蛋白酶的水解度随着反应的进行不断增加，在最初的1 h内增加速率很快，之后上升速率逐渐减慢，但是前期相关研究表明在3～4 h时该样品的ACE抑制率高于6 h时的数值［10］.因此综合考虑实验效率、水解度和抑制率之间的关系，判定碱性蛋白酶的最佳水解时间为4 h.2.5 不同酶浓度对碱性蛋白酶水解度的影响在底物质量浓度为40g/L、pH为9.0、温度为50℃、水解时间为4 h的条件下，分别测定酶的质量分数为1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%时的水解度，结果如图5所示.由图5可以看出，碱性蛋白酶质量分数为3.0%时豆粕的水解度最小，酶的质量分数在1.0%～2.5%范围内，水解程度差别不大，酶质量分数为2.5%的水解度要略高于酶质量分数为2.0%的水解度.综合考虑水解产生的抑制肽的活性和酶的使用量，判定碱性蛋白酶的最适质量分数为2.0%.2.6 不同底物浓度对碱性蛋白酶水解度的影响本课题组前期已研究了底物质量浓度为20、40、60 g/L条件下制备的ACE抑制肽的活性，发现底物浓度为20 g/L时抑制率最低，而40 g/L和60 g/L的抑制率差异不显著，因此本研究在40～60 g/L之间设置几个浓度梯度，结合其他因素进行进一步探索，以寻求最适条件.在酶质量分数为2.0%、pH为9.0、温度为50℃、水解时间4 h的条件下，分别测定底物质量浓度为40、45、50、55、60 g/L时的水解度，结果如图6所示.由图6可以看出，在水解的前2 h内，底物质量浓度为50 g/L的水解度明显高于40 g/L的水解度，随着水解时间的延长，二者差别逐渐减弱，在4 h处近乎相等，均高于其他底物浓度的数值.据此判定碱性蛋白酶的最佳底物质量浓度为40 g/L. 2.7 单因素实验所得样品的ACE抑制活性考察单一因素对碱性蛋白酶水解豆粕产生的ACE抑制肽活性的影响，计算各条件下的抑制率，结果如表1所示.由表1可以看出，本研究在pH为9.0、水解温度为50℃、水解时间为4 h、碱性蛋白酶的质量分数为2.0%、底物质量浓度为40 g/L时，获得的ACE抑制肽的活性最大，抑制率达到97.97%.因此判定此条件为最佳水解条件.2.8 碱性蛋白酶最适水解条件的多因素实验在蛋白酶的水解温度和pH均为最适的条件下，考察水解时间、蛋白酶质量分数和底物浓度3个条件对碱性蛋白酶水解豆粕产生ACE抑制肽的影响，结果如表2所示.由表2可以看出，在各组合实验中，水解时间为4 h、蛋白酶质量分数为2.0%、底物质量浓度为40 g/L时，水解产生的ACE抑制肽的抑制率最大，为97.97%，这与单因素实验的结果相同.本研究以豆粕为底物，考察碱性蛋白酶在不同条件下的水解度和产生的ACE抑制肽的抑制率，并且寻求最优的水解条件.单因素实验和多因素实验结果都显示，本实验确定的最适且稳定的酶解工艺条件为：pH为9.0、水解温度为50℃、水解时间为4 h、蛋白酶质量分数为2.0%、底物质量浓度为40 g/L.在此条件下，豆粕酶解产物ACE的抑制率可提高到97.97%，远远高于本课题组之前研究所得到的抑制率（64.21%）［10］.本研究还发现，适当提高pH（由8.0升至9.0）和延长水解时间（由水解3 h升至4 h）的条件下，可使制备的ACE抑制肽活性得到大幅度提高.原因可能是pH的提高抑制了ACE分解因子［12］的活性，推迟了ACE 抑制肽活性峰值的出现时间；而且pH为9.0时碱性蛋白酶的活性更高，使ACE抑制肽大量生成，从而大大提高了酶解产物的抑制率.【相关文献】［1］赵丽杰.浅析大豆蛋白制品的营养及功能作用［J］.黑龙江农垦师专学报，1999（1）：95-96.ZHAO L J.Analyses of the nutrition and function of soybean protein products［J］.Journal of Heilongjiang Nongken Normal College，1999（1）：95-96（in Chinese）. ［2］吴炜亮，吴国杰，梁道双，等.ACE抑制肽的生理功能和研究进展［J］.现代食品科技，2006（3）：251-254.WU W L，WUG J，LIANG D S，etal.The physiological function and research progress of Angiotensin-Ⅰ-converting enzyme inhibitory petides［J］.Modern Food Science and Technology，2006（3）：251-254（in Chinese）.［3］余奕珂，胡建恩，白雪芳，等.源于食品蛋白质的血管紧张素Ⅰ转换酶抑制肽［J］.食品与药品，2006，8（4）：16-21.YU Y K，HU J E，BAI X F，et al.AngiotensinⅠ-converting enzyme inhibitory peptides derived from food proteins［J］.Food and Drug，2006，8（4）：16-21（in Chinese）.［4］肖红，段玉峰，刘平，等.食品蛋白降血压肽及其研究进展［J］.食品研究与开发，2004（5）：3-7.XIAO H，DUAN Y F，LIU P，et al.Antihypertensive peptides derived from food proteins and its research advances［J］.Food Research and Development，2004（5）：3-7（in 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鹰嘴豆（ｈｃｐａＣｃｒｅｉｕ）Ｃｉｋｅｉｅｒｔｍ，豆科鹰嘴Ａｉｎ豆属，因其面形奇特，尖如鹰嘴，故称此名，是生长在我国新疆地区的豆类植物【 ” 。鹰嘴豆富含人体所需要的１氨基酸及蛋白质、膳食纤维、钙、钾、８种锌等多种微量元素和维生素等营养物质，是一种新
ｅｚｍｅｓｂｔａｅｒｔｉｎｅｔａｅｔｏｔｚｔｅｙｒｌｓｓｃｎｉｏｓｆｈｃｐａｅａａｉｎｒｔｉｔｒｕｈｎｙｕｓｔａｏｓｒｉｉｖｓｉｔｄｏｐｉｅｈｈｄｏｙｉｏｄｔｎｏｃｉｋｅｓｐｔｐｏｅｎｈｏｇｇｍｉｉｒｏＢｘＢｅｈｋｎｒｓｏｓｕａｅａａｙｉｏｈａｉｏｉｇｅｆｃｏｘｅｉｎｓｎＥｉｈｂｔｎｐｒｅｔｉａａｙｉｅ．ｏ－ｎｎｅｅｐｎｅｓ￣ｅｎｓｓｎｔｅｂｓｓｆｓｎｌ－ａｔｒｅｐｒｍｅｔ，ａｄＡＣｎｉｉｏｅｃｎｓｎｓｄｌｉｌｓ
１１试验材料与试剂．
鹰嘴豆粉：新疆万邦生物科技有限公司提供。Ａｃｌｅｌａ碱性蛋白酶，沃森生物试剂；血管紧张ａｓ素转化酶（ｎｉｅｓ — ｏｖｒｎｎｙｅＣ）ＡｇｔｉＩＣｎｅｉＥｚｍ，ＡＥ、ｏｎｎｔｇ
收稿日期：２１－８２０１０—９
ｓｐｒｔｎｐｏｅｎｉｅｚｍｅｙａｋｌｅｐｏｅｓｏｐｏｕｅＡＣｎｉｉｒｅｔｅＴｅｅｅｔｏｍｐｒｔｒ，Ｈ，ｉ，ｎｅａａｉｒｔｉｓｎｙｄｂｌａｉｒｔａｅｔｒｄｃＥｉｈｂｔｙｐｐｉ．ｈｆｃｆｅｅａｕｅｐｔｏｎｏｄｔｍｅａｄ
酶解鹰嘴豆蛋白制备ＡＥ抑制肽的研究Ｃ
阮海英，张翼麟，李巨秀
（西北农林科技大学食品科学与工程学院，陕西杨凌７２０）１１０摘要：ＡＥ抑制肽对血压调节起重要作用，抑制ＡＥ活性发挥着重要作用。为开发降血压多肽，以鹰嘴豆分离蛋Ｃ对Ｃ白为原料，在碱性蛋白酶作用下水解，选择温度、ｐＨ值、酶与底物浓度比和水解时间４个因素，以ＡＥ抑制率为评Ｃ价指标，在单因素试验基础上，采用ＢｘＢｈｋｎ响应面分析法优化酶解鹰嘴豆分离蛋白制备ＡＥ抑制肽的条件。ｏ— ｅｎｅＣ结果表明，最优水解条件为：温度５０℃，ｐＨ值８，酶底比４．０％，水解时间４０ｈ．，在此条件下，ＡＥ抑制率可以达Ｃ
第１期（总第２８６期）２１０２年１月
农产品加工・刊学
ＡａｅｉｅｉｉｌｆａｍＰｄｃＰｏｅｓｇｃｄｍｃＰｒｄｃｒｒｕ￣ｒｃｓｉｏａｏＦｏｎ

Ｎｏ１．
Ｊｎ．ａ
文章编号：１７ — ６６（０２Ｏ — ０５０６１９４２１）１０３ — ５
ＣｎｅｔｇＥｚｍ，ＡＥ对人体血压的调节起着重ｏｖｒｎｎｙｅＣ）ｉ要作用。由于ＡＥ具有催化激肽酶的作用，使得激Ｃ肽降解为失活片段，从而导致血压升高。笔者以鹰嘴豆为研究材料，采用单因素试验和响应面优化试验制备ＡＥ抑制肽，通过酶水解法，分析水解温度、Ｃ时间、ｐＨ值和酶底比４个试验因素对ＡＥ抑制率的Ｃ影响，研究出鹰嘴豆抑制ＡＥ抑制肽的制备工艺，Ｃ为鹰嘴豆的开发提供数据。
到５．％，验证试验ＡＥ抑制率为（９Ｏ ±０５）％，与理论值相符合。８８４Ｃ５．１．８关键词：鹰嘴豆分离蛋白；ＡＥ抑制肽；响应面分析法Ｃ
中图分类号：Ｑ１８６文献标志码：Ａｄｉｌ．９９ｉｎ１７ — ６６Ｘ）０２１０ｏ：０３６／ｓ．１９４（．１．．８ｊｓ６２００
１材料与方法
型营养健康食品回，具有降低血清脂、胆固醇、保护心脑血管等功能【３ｌ。生物活性肽是蛋白质的功能片段，由于其在体内吸收率高，同时具有降血压、抗氧化、促进免疫等生理功能受到研究人员的关注。刘宇等人以Ａｌｌｅ碱性蛋白酶水解制备的鹰嘴豆多肽为原料，ｅａａｓ研究了鹰嘴豆肽在质量浓度０１５０ｍ／Ｌ内均具有．～０ｇｍ较强的还原能力，抗氧化能力强于大豆蛋白。已有研究表明，血管紧张素转化酶（ｎｉｅｓＡｇｏｎｉｔｎ
ＡｎｉｔｎｉｏｖｒｉｇＥｎｙｇｏｅｓｎＣｎｅｔｚｍｅ（ＥｉｉｎｆａｔｔｌｏｒｓｕｅｒｇｌｔｎａｄｉｈｂｔｔｅａｔｉｆＡＣｎＡＣ）ｓｓｉｃｎｏｂｏｄｐｅｓｒｅｕａｉｎｎｉｉｈｃｉｔｏＥ．Ｃｉｋｅｇｉｏｖｙｈｃｐａ
ｔｓｃｎｉｏｓｔｅｐｅｉｅｅｃｎｇ（９００５）％．ｈｅｏｄｔｎ，ｈｒｄｃｄｐｒｅｔｅｉ５．１－．ｅｉｔａｓ４８
Ｋｙｗｏｄｈｃｐａｓｐｒｔｎｐｏｅｎ；ＡＣｎｉｉｒｅｔｅｅｐｎｅｓｒａｅａａｙｉｅｒｓｃｉｋｅｅａａｉｒｔｉＺｏＥｉｈｂｔｙｐｐｉ；ｒｓｏｓｕｆｃｎｌｓｓｏｄ
作者简介：阮海英（９１１８一
），女，浙江人，在读硕士，研究方向：食品工程。
为通讯作者：李巨秀（９２１７一
），女，士，副教授，硕士生导师，研究方向：食品化学。Ｅｍｉｕｉｉｍｎｃ。博－ａ：ｊｕ＠ｓ＿ｍｌｘｌ０
农产品加工・学刊
有限公司提供；ｕ一１４Ｖ２０型紫外分光光度计，尤尼克上海仪器有限公司提供；ＬＪ１Ｂ型冷冻干燥Ｇ一２机，郑州南北仪器设备有限公司提供。１试验方法．２１．鹰嘴豆分离蛋白的制备工艺．１２参照薛照辉『的方法提取分离蛋白：鹰嘴豆粉与ｌ２ｌ乙醚按质量以１：５混合，连接好冷凝回流装置，在５０℃的水浴锅中加热６ｎ０ｍｉ，使乙醚与豆粉充分混合，静止５ｍｎ后，豆粉与乙醚自然沉降分离，倾出ｉ乙醚进行回收。再重复上述操作２次。最后将鹰嘴豆粉置于通风橱中室温干燥１，将处理好的脱脂豆粉２ｈ置于４ｏ冰箱中保存。脱脂鹰嘴豆粉与蒸馏水按照＝【
ｈｐｉＴｅｏｔｌｙｒｌｓｅｅａｕｅｐｔｍａｈｄｏｙｉｔｍｐｒｔｒ，Ｈ，ｍｅ，ａｄｅｚｍｅｓｂｔｔａｉｅｉｄｃｔｄｔｅ５Ｃ，．，％ａｄ４０ｈＵｄｒｓｉｎｎｙｕｓａｅｒｔａｎｉａｅｏｂ０ｏ８０４ｒｏｒｎ．．ｎｅ
１．响应面法试验优化鹰嘴豆分离蛋白制备ＡＥ．４２Ｃ
抑制肽的工艺
在单因素试验基础上，采用ＤｓｎＥｐｒ．０ｅｉ — ｘｅｔ０ｇ７．软件，ＢｘＢｈｋｎ设计方法，对水解条件进一步优ｏ— ｅｎｅ化，固定底物质量分数５％，根据中心组合试验设计原理，以温度、反应时间、ｐＨ值和酶底质量比为影
（ｓｔｅｆｏｄＳｉｃｎｎｉｅｒｇｏｔｗｓＡ＆ＦＵｉｅｉ，Ｙｎｎ，Ｓａｎｉ１１０ｈｎ）ＩｔｕｏｃｎｅｄＥｇｎｅｎ，ＮｒｅｔｎｉｔｏＦｅａｉｈｎｒｔｖｓｙａｋｉｇｈａｘ７２０，Ｃｉａ
２１０２年第１期
马尿酰组胺酰亮氨酸（ＨＬ，美国ｓｍａ司提供。组试验平行２次。Ｈ）ｉ公ｇ其余试剂均为国产分析纯。（）水解时间的选择。在酶底质量比５２％，ｐＨ值主要仪器：Ｐｓ３Ｈ一ｃ型酸度计，成都世纪方舟８５．，温度５ ℃ 下，分别水解３，３５．，４５０．．，４０．，０科技有限公司提供；Ｈ＿４型数显恒温水浴锅，江５０ｈＨ．，然后计算水解液的水解度Ｄ和ＡＥ抑制率，ＨＣ苏常州国华电器有限公司提供；ＤＦ型真空干燥箱，每组试验平行２次。Ｚ北京科伟永兴仪器有限公司提供；ｓ一３ｌｃ６０型低速（）ｐ３Ｈ值的选择。固定酶底质量比５％，温度离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司提供；５Ｏ℃ ，分别在ｐ值７，９１Ｈ，８，０下，水解４０ｈ．，Ｋ－５０Ｅ型数控超声波清洗器，昆山超声波仪器然后计算水解液的水解度Ｄ和ＡＥ抑制率，每组Ｑ０ＤＨＣ