第一届中国微生物培养皿艺术大赛 - 中国微生物学会
厌氧菌预还原琼脂平板培养方法
㊀基金项目:国家自然科学基金项目(Ｃ０５０１０３)ꎻ湖南农业大学人才科学基金项目(０７ＷＤ０５ꎬ０９ＷＤ０６)㊀作者简介:郑昕㊀男ꎬ硕士研究生ꎮ主要从事动物肠道益生菌研究ꎮＥ￣ｍａｉｌ:１１９８８２７４５６＠ｑｑ.ｃｏｍ㊀∗通讯作者ꎮ男ꎬ教授ꎬ硕士生导师ꎮ主要从事动物肠道微生物的研究ꎮＥ￣ｍａｉｌ:ｃｈｏｎｇｙ＠ｈｕｎａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ㊀收稿日期:２０１９￣０６￣１４厌氧菌预还原琼脂平板培养方法郑㊀昕ꎬ宫利宏ꎬ杨㊀毅ꎬ王贵平ꎬ尹㊀崇∗(湖南农业大学动物医学院ꎬ湖南长沙㊀４１０１２８)摘㊀要㊀为简化厌氧菌分离培养方法ꎬ使其在普通实验条件下于固体培养基上形成单菌落ꎬ本研究增加庖肉培养基无氧溶液体积ꎬ用作无氧倍比稀释液ꎬ在琼脂柱下进行倍比稀释ꎬ将皿盖带有胶塞孔的厌氧琼脂平板进行预还原ꎬ注射接种倍比稀释菌液ꎬ通过厌氧指示剂监测无氧效果ꎬ初步试用于肠道厌氧菌分离培养ꎮ结果显示ꎬ该方法整个操作过程厌氧效果良好ꎬ无需专门厌氧设备即可以分离纯化培养肠道乳酸杆菌ꎬ甚至无芽胞专性厌氧菌ꎬ如双歧杆菌和韦荣球菌ꎮ关键词㊀厌氧菌ꎻ预还原ꎻ厌氧装置ꎻ培养方法中图分类号㊀Ｑ９３－３３５㊀㊀㊀文献标识码㊀Ａ㊀㊀㊀文章编号㊀１００５－７０２１(２０２０)０１－００９４－０６ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００５－７０２１.２０２０.０１.０１３ＡＭｅｔｈｏｄｏｆＰｒｅ￣ＲｅｄｕｃｅｄＡｇａｒＰｌａｔｅｆｏｒＡｎａｅｒｏｂｉｃＢａｃｔｅｒｉａＣｕｌｔｉｖａｔｉｏｎＺＨＥＮＧＸｉｎꎬＧＯＮＧＬｉ￣ｈｏｎｇꎬＹＡＮＧＹｉꎬＷＡＮＧＧｕｉ￣ｐｉｎｇꎬＹＩＮＣｈｏｎｇ∗(ＡｎｉｍａｌＭｅｄ.Ｃｏｌｌ.ꎬＨｕｎａｎＡｇｒｉｃ.Ｕｎｉ.ꎬＣｈａｎｇｓｈａ４１０１２８)Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｓｉｍｐｌｉｆｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｏｆａｎａｅｒｏｂｉｃｂａｃｔｅｒｉａａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｔｈｅｍｔｏｆｏｒｍｓｉｎｇｌｅｃｏｌｏｎｉｅｓｏｎｓｏｌｉｄｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｕｎｄｅｒｏｒｄｉｎａｒｙｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌａｂｏｒａｔｏｒｙꎬｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆｃｏｏｋｅｄｍｅａｔｂｒｏｔｈｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄꎬａｎｄｕｓｅｄａｓａｎａｅｒｏｂｉｃｍｕｌｔｉｐｌｅｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌｄｉｌｕｔｅｓｏｌｕｔｉｏｎ.Ｔｈｅｍｕｌｔｉｐｌｅｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌｄｉｌｕｔｉｏｎｓｏｆａｎａｅｒｏｂｉｃｂａｃｔｅｒｉａｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｕｎｄｅｒａｇａｒｃｏｌｕｍｎ.Ｔｈｅａｎａｅｒｏｂｉｃａｇａｒｐｌａｔｅｗｉｔｈａｔｉｎｙｈｏｌｅａｔｔｈｅｃｏｖｅｒｓｅａｌｅｄｂｙａｒｕｂｂｅｒｐｌｕｇｗａｓｐｒｅ￣ｒｅｄｕｃｅｄꎬｉｎｊｅｃｔｅｄａｎｄｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｍｕｌｔｉｐｌｅｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌｌｙｄｉｌｕｔｅｄｂａｃｔｅｒｉａｌｓｏｌｕｔｉｏｎｓ.Ｔｈｅａｎ￣ａｅｒｏｂｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｗｈｏｌｅｏｐｅｒａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｅｓｗａｓｍｏｎｉｔｏｒｅｄｂｙａｎａｅｒｏｂｉｃｉｎｄｉｃａｔｏｒ.Ｔｈｅｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｕｒｒｅｎｔｍｅｔｈｏｄｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｄｕｒｉｎｇｔｈｅｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌａｎａｅｒｏｂｉｃｂａｃｔｅｒｉａ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｗｉｔｈｏｕｔｓｐｅｃｉａｌａｎａｅｒｏｂｉｃｅｑｕｉｐｍｅｎｔꎬｔｈｅａｎａｅｒｏｂｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆｃｕｒｒｅｎｔｍｅｔｈｏｄｗａｓｒｅｌｉａｂｌｅｔｏｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｉｓｏｌａ￣ｔｉｏｎｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓꎬｅｖｅｎｆｏｒｎｏｎ￣ｓｐｏｒｅ￣ｆｏｒｍｉｎｇａｎａｅｒｏｂｅｓꎬｓｕｃｈａｓＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｎｄＶｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ａｎａｅｒｏｂｅꎻｐｒｅ￣ｒｅｄｕｃｔｉｏｎꎻａｎａｅｒｏｂｉｃｄｅｖｉｃｅꎻｃｕｌｔｕｒｅｍｅｔｈｏｄ㊀㊀厌氧菌是在无氧环境中才能生长的细菌[１]ꎬ肠道菌群中９０％以上为厌氧菌[２]ꎮ受培养条件限制ꎬ厌氧菌研究的开展程度远不及非厌氧菌[３]ꎮ亨氏滚管法和厌氧培养箱是目前分离培养厌氧菌最可靠的方法ꎬ但是设备的购置和运行都需要很高的费用[４]ꎮ厌氧罐和厌氧袋是分离培养厌氧菌更为常用的方法ꎬ但是在操作与耗氧过程中ꎬ仍然使细菌暴露氧气一段时间ꎬ非芽胞专性厌氧菌的初始分离培养较难用此方法获得[５￣６]ꎮ深层试管法和庖肉培养基是在普通条件下培养厌氧菌的常用方法ꎬ但是这些液体培养方法无法对厌氧菌进行分离纯化培养[７]ꎮ如上因经费和方法的限制ꎬ使得广大基层细菌实验室难以开展厌氧菌研究ꎮ本研究改进庖肉培养基ꎬ用以代替硫化钠等制备无氧试剂ꎬ在琼脂柱下进行菌液倍比稀释ꎬ并将厌氧琼脂平板进行预还原ꎮ通过厌氧指示剂全程监４９微生物学杂志㊀２０２０年２月第４０卷第１期㊀ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹＦｅｂ.２０２０Ｖｏｌ.４０Ｎｏ.１测ꎬ专性厌氧菌青春双歧杆菌分离培养ꎬ鸡源肠道乳酸杆菌及Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａｍａｇｎａ的分离鉴定ꎬ证明该方法无需特殊厌氧设备ꎬ即可在普通实验条件下有效分离厌氧菌ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀材料１.１.１㊀菌种来源㊀枯草芽胞杆菌(湖南农业大学动物医院微生物实验室分离保存)ꎻ青春双歧杆菌(市售双歧杆菌活菌胶囊)ꎮ１.１.２㊀培养基㊀ＴＰＹ液体培养基㊁ＴＰＹ琼脂培养基(青岛高科园海博生物技术有限公司)ꎻ营养琼脂培养基(国药集团化学试剂有限公司)ꎮ１.１.３㊀试剂与仪器㊀厌氧指示剂(０.５％美蓝水溶液ꎻ０.１ｍｏｌ/ＬＫＯＨꎻ葡萄糖ꎬ按照１︰２︰２的比例用蒸馏水等量稀释后混合)[８]ꎻ注射器ꎻ１５㎝长针头ꎻ细菌基因组ＤＮＡ提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司产品)ꎻ手提式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂)ꎻ超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司)ꎻ生化培养箱(广东省医疗器械厂)ꎮ１.２㊀方法１.２.１㊀预还原琼脂平板制备方法(图１)㊀预还原琼脂平板培养法需制备如下三部分:①无氧稀释液:在试管内分装庖肉液体培养基[８]ꎬ用倒立小试管或自制铁丝网将肝粒承托ꎬ使之悬于液面下ꎬ高压灭菌备用(图１Ａ)ꎻ②厌氧倍比稀释管:取蒸馏水和琼脂粉配置成１％琼脂ꎬ加热溶解后分装至试管中ꎬ每个试管约５ｍＬꎬ高压灭菌备用(图１Ｂ的０号试管)ꎻ③预还原琼脂平板:由大培养皿(直径１５０㎜)和小培养皿(直径８０㎜)组成ꎬ皿盖上都打小孔并粘贴胶塞密封ꎬ以小孔为中心在皿盖上画出垂直十字线ꎮ小培养皿用于培养厌氧菌ꎬ大培养皿用于培养耗氧菌(图１Ｃ)ꎮ在超净工作台中将灭菌的ＴＰＹ琼脂培养基倒入小培养皿ꎬ等待凝固后倒置ꎬ加入玻璃珠ꎬ将小培养皿盖上的十字线和大培养皿盖上的十字线重叠ꎬ使两培养皿胶塞孔对准ꎮ营养琼脂铺满大培养皿上下两个面ꎬ在上下两个面上均匀接种枯草芽胞杆菌[９]ꎬ合住大培养皿上下两面ꎬ用融化的１％琼脂注入大培养皿盖与底的缝隙ꎬ待凝固后套上橡皮筋固定(图１Ｄ)ꎮ放入湿盒中于培养箱中培养４８ｈ进行预还原备用ꎮ图１㊀厌氧菌培养装置示意图Ｆｉｇ.１㊀Ｓｃｈｅｍａｔｉｃｄｉａｇｒａｍｏｆａｎａｅｒｏｂｉｃｂａｃｔｅｒｉａｃｕｌｔｕｒｅｄｅｖｉｃｅａ:肝粒ꎻｂ:稀释液ꎻｃ:１％琼脂ꎻｄ:大培养皿ꎻｅ:小培养皿ꎻｆ:营养琼脂培养基ꎻｇ:ＴＰＹ琼脂培养基ꎻｈ:胶塞ꎻｉ:玻璃珠ａ:ｌｉｖｅｒｇｒａｎｕｌｅｓꎻｂ:ｄｉｌｕｅｎｔꎻｃ:１％ａｇａｒꎻｄ:ｌａｒｇｅｐｅｔｒｉｄｉｓｈꎻｅ:ｓｍａｌｌｐｅｔｒｉｄｉｓｈꎻｆ:ｎｕｔｒｉｅｎｔａｇａｒｍｅｄｉｕｍꎻｇ:ＴＰＹａｇａｒｍｅｄｉｕｍꎻｈ:ｒｕｂｂｅｒｐｌｕｇꎻｉ:ｇｌａｓｓｂｅａｄｓ５９１期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀郑㊀昕等:厌氧菌预还原琼脂平板培养方法㊀㊀㊀㊀㊀１.２.２㊀预还原琼脂平板操作方法㊀①用安装长针头的注射器将样本菌液注射接种到庖肉培养基中ꎬ放入培养箱中增菌培养２４~４８ｈꎻ②注射器吸取少许无氧稀释液ꎬ置换注射器和长针头内空气后ꎬ取１.８ｍＬ无氧稀释液和０.２ｍＬ增殖菌液ꎬ酒精灯灼烧稀释管底部３~５ｓꎬ使底部琼脂融解形成缝隙ꎬ长针头穿过琼脂柱将稀释菌液打入１号稀释管底部ꎬ混匀３次ꎬ照此方法依次倍比稀释至１０－７(图１Ｂ)ꎻ③分别从６号稀释管和７号稀释管中吸取５０μＬ稀释菌液ꎬ穿过预还原琼脂平皿胶塞孔接种到ＴＰＹ琼脂培养基表面ꎬ通过前后左右倾斜使玻璃珠在小培养皿内反复滑滚ꎬ将接种菌液涂匀后放入培养箱中培养４８ｈ观察菌落形成ꎮ１.２.３㊀预还原琼脂平板培养法无氧效果检测①厌氧指示剂检测:厌氧指示剂替代蒸馏水ꎬ配制庖肉培养基㊁倍比稀释液ꎬ检测倍比稀释过程的无氧效果ꎮ在厌氧指示剂中加入２％的琼脂粉ꎬ加热溶解后注入到小试管内ꎬ置沸水浴加热至无色ꎬ等待凝固后将小试管放入小培养皿中ꎬ预还原４８ｈ后模拟细菌接种操作ꎬ通过观察厌氧指示剂的颜色变化检测预还原琼脂平板的无氧效果ꎮ②双歧杆菌分离培养检测:取市售双歧杆菌活菌胶囊内菌粉颗粒ꎬ用ＴＰＹ液体培养基增菌２４ｈꎬ取１０－６和１０－７稀释菌液注射接种至预还原琼脂平板和普通ＴＰＹ琼脂平板ꎬ置培养箱中培养４８ｈꎮ用接种环挑取单个菌落ꎬ革兰染色镜检观察菌体形态ꎮ细菌基因组提取试剂盒提取菌株ＤＮＡꎬ１６ＳｒＲＮＡ通用引物２７Ｆ(５ᶄ￣ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＭＴＧＧＣＴＣＡＧ￣３ᶄ)㊁１４９２Ｒ(５ᶄ￣ＧＧＴＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ￣３ᶄ)扩增目的片段ꎮ将扩增产物送生工生物工程(上海)股份有限公司测序ꎬ测序结果在ＮＣＢＩ网站ＢＬＡＳＴ进行同源性比较ꎮ１.２.３㊀预还原琼脂平板培养法的试用①细菌分离培养:取鸡盲肠内容物ꎬ用ＴＰＹ液体培养基增菌２４ｈꎬ取１０－６和１０－７稀释菌液注射接种至预还原琼脂平板和普通ＴＰＹ琼脂平板ꎬ置培养箱中培养４８ｈꎮ②细菌形态学观察及种属分析:挑取单个菌落纯化３代后ꎬ革兰染色镜检观察菌体形态ꎮ细菌基因组提取试剂盒提取菌株ＤＮＡꎬ１６ＳｒＲＮＡ通用引物２７Ｆ㊁１４９２ＲꎻｄｎａＫ基因测序引物Ｂ１(５ᶄ￣ＡＴＴＧＡＹＴＴＡＧＧＷＡＣＡＡＣＡＡＡ￣３ᶄ)㊁Ｂ２(５ᶄ￣ＧＣＴＴＴＴＴＣＡＧＣＨＧＣＤＴＣＹＴＴ￣３ᶄ)[１０]扩增目的片段ꎬ将扩增产物送生工生物工程(上海)股份有限公司测序ꎬ测序结果在ＮＣＢＩ网站ＢＬＡＳＴ进行同源性比较ꎬ用ＭＥＧＡ７软件构建系统进化树ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀预还原琼脂平板培养法无氧效果２.１.１㊀稀释液的无氧效果(图２)㊀１号试管用厌氧指示剂空白对照ꎻ２号试管底部加入数颗肝粒ꎻ３号试管在２号试管基础上添加１ｍＬ液体石蜡ꎻ４号试管用倒立小试管将肝粒托起ꎮ结果显示ꎬ２号和３号试管在肝粒周围形成无氧区域ꎬ且加了液体石蜡的３号比２号无氧区域稍有增加ꎬ而将肝粒托起的４号试管无氧效果最好ꎬ只有液体表面变蓝ꎬ试管内均为无氧ꎮ图２㊀稀释液的无氧效果Ｆｉｇ.２㊀Ａｎａｅｒｏｂｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｌｕｅｎｔａ:肝粒ꎻｂ:液体石蜡ａ:ｌｉｖｅｒｇｒａｎｕｌｅｓꎻｂ:ｌｉｑｕｉｄｐａｒａｆｆｉｎ２.１.２㊀厌氧稀释管无氧效果(图３)㊀将图２中４号试管所制备的无氧稀释液直接注入１号空试管ꎬ因与氧气接触ꎬ溶液立即呈现绿色ꎻ将无氧稀释液穿过琼脂打入２号试管底部ꎬ虽也变色但相比１号颜色稍浅ꎻ用少许无氧稀释液置换注射器和针头的空气后吸取稀释液并穿过琼脂打入３号试管底部ꎬ仅轻微变色ꎮ说明排尽注射器内空气后吸取无氧稀释液再打入厌氧稀释管中ꎬ能够有效减少菌样与氧气接触ꎮ６９㊀㊀㊀㊀㊀微㊀生㊀物㊀学㊀杂㊀志㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀４０卷图３㊀厌氧稀释管无氧效果Ｆｉｇ.３㊀Ａｎａｅｒｏｂｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆａｎａｅｒｏｂｉｃｄｉｌｕｔｉｏｎｔｕｂｅ２.１.３㊀预还原琼脂平板无氧效果(图４)㊀２％琼脂厌氧指示管放入小培养皿内ꎬ大培养皿接种枯草芽胞杆菌(图４Ａ)ꎮ培养６ｈ后(图４Ｂ)厌氧指示瓶管口呈蓝色ꎻ２４ｈ后(图４Ｃ)厌氧指示瓶管口蓝色部分颜色变浅ꎻ４８ｈ后(图４Ｄ)厌氧指示瓶管口蓝色消失说明厌氧盒内为无氧ꎬ模拟接种后ꎬ未见指示剂有颜色变化ꎬ说明需氧菌生长耗尽平皿内氧气且该方法密封良好ꎬ接种操作没有破坏厌氧平皿内的预还原效果ꎮ图４㊀预还原琼脂平板无氧效果Ｆｉｇ.４㊀Ａｎａｅｒｏｂｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆｐｒｅｒｅｄｕｃｅｄａｇａｒｐｌａｔｅ２.１.４㊀双歧杆菌分离培养效果㊀市售双歧杆菌活菌胶囊内菌粉颗粒经过增殖㊁倍比稀释注射接种到预还原琼脂平板表面后ꎬ在预还原琼脂培养基上生长良好ꎬ而普通培养条件下不生长ꎮ镜检呈革兰阳性ꎬ短杆状(图５Ａ)ꎮ将１６ＳｒＤＮＡ序列在ＮＣＢＩ网站ＢＬＡＳＴ进行同源性比较ꎬ与ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓｓｔｒａｉｎＫＬＤＳ２.０６０９相似度为９８.８６％ꎬ确认为青春双歧杆菌ꎮ图５㊀革兰染色结果Ｆｉｇ.５㊀Ｇｒａｍｓｔａｉｎｉｎｇ２.２㊀试用结果从鸡盲肠内容物中分离到１５株厌氧菌ꎬ其中１４株乳酸杆菌ꎬ在普通培养条件下生长贫瘠甚至不生长ꎬ而在预还原琼脂平板上生长良好ꎻ１株韦荣球菌(命名为ＨＭ￣１)ꎬ严格厌氧的革兰阴性无芽胞球菌(图５Ｂ)ꎬ在普通培养条件下不生长ꎬ而在预还原琼脂平板上生长良好ꎮ韦荣球菌的１６ＳｒＤＮＡ基因扩增片段１４２６ｂｐ(图６Ａ)ꎬ序列上传到ＮＣＢＩ网站ꎬ序列登录号为ＭＫ０８８２４６ꎬ与图６㊀ＰＣＲ扩增结果Ｆｉｇ.６㊀ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓＭ:２０００ｂｐＤＮＡＭａｒｋｅｒＭ:２０００ｂｐＤＮＡＭａｒｋｅｒ７９１期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀郑㊀昕等:厌氧菌预还原琼脂平板培养方法㊀㊀㊀㊀㊀Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａｍａｇｎａｌａｃ１８Ｔ[１１]菌株相似度为９９ ８％ꎮｄｎａＫ基因扩增片段５８７ｂｐ(图６Ｂ)ꎬ与Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａｍａｇｎａｌａｃ１８Ｔ菌株相似度为９９.４９％ꎮ选取与其同源性最高的韦荣球菌核酸序列进行同源性分析ꎬ构建ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ(ＮＪ)进化树(图７)ꎮ由图７可见ꎬＨＭ￣１号菌株与Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａｍａｇｎａｌａｃ１８Ｔ模式菌株处于同一个进化分支ꎬ同源性最高ꎮ图７㊀基于１６ＳｒＲＮＡ基因序列构建的系统发育树Ｆｉｇ.７㊀Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣Ｊｏｉｎｉｎｇｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｂａｓｅｄｏｎ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓ参与比对序列的ＧｅｎＢａｎｋ登录号列于括号中ꎻ分支处标注有自展值ꎻ标尺所示长度为０.００５核苷酸置换率ＴｈｅＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｕｍｂｅｒｓｏｆａｌｉｇｎｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓａｒｅｓｈｏｗｎｉｎｔｈｅｂｒａｃｋｅｔｓꎻＴｈｅｂｏｏｔｓｔｒａｐｖａｌｕｅｓａｒｅｓｈｏｗｎａｔｔｈｅｎｏｄｅꎻＢａｒ０.００５ｍｅａｎｓｔｈｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｒａｔｅｏｆ０.００５３㊀讨㊀论亨氏滚管技术和厌氧手套箱技术因为设备昂贵㊁操作复杂ꎬ大多数基层实验室不能满足这样的条件ꎬ所以依然有人在试图寻找简易的厌氧菌培养方法[１２￣１５]ꎮ厌氧罐和厌氧袋由于在操作过程中易与氧气接触而较难分离到非芽胞专性厌氧菌[１６]ꎮ为了减少菌液与氧气接触机会ꎬ通常应用无氧试剂进行菌液稀释ꎮ但由于无氧试剂所采用的硫化钠等试剂性质不稳定ꎬ存放期间如果暴露空气容易吸潮和氧化ꎮ动物组织块经过高温处理ꎬ也能在液体培养基中制造稳定厌氧环境ꎬ在配置液体培养基时加入０.０１％的琼脂(通常０ ０５％)能够有效防止液体对流ꎬ减慢氧气扩散ꎬ因而深层试管庖肉培养基是在普通培养条件下培养厌氧菌的常用方法ꎮ通过对深层试管庖肉培养基制备方法进行改进ꎬ将肝粒用倒立的小试管托起至培养基液面下ꎬ从而获得足量用于倍比稀释的无氧稀释液ꎮ在稀释的过程中也充分考虑氧气的排除问题ꎬ每次使用注射器和长针头均用预还原的厌氧肝汤置换注射器和长针头内的空气ꎬ并注射到１％琼脂柱下面ꎬ最大可能减少样本与氧气接触ꎮ最终将无氧倍比稀释菌液注射接种到预还原琼脂平板表面ꎬ使厌氧菌能在固体培养基上形成单个菌落ꎮ本研究双歧杆菌的成功培养以及成功分离到ＨＭ￣１非芽胞专性厌氧菌都证明了该方法的可靠性ꎮ如若在临床上应用ꎬ可省去增菌和稀释两个步骤将样本直接注射接种到预还原琼脂平板表面ꎬ相比早年Ｃｈａｎ等[１７]对亨氏滚管方法的改进ꎬ此方法更加简便ꎮ预还原琼脂平板装置中的大培养皿也可用厌氧袋代替ꎬ在厌氧袋外需进针处粘贴胶塞密封ꎬ在袋内放另一平皿培养需氧菌或用市售厌氧产气袋耗氧ꎮ本研究设计方法操作简单ꎬ有望被基层实验室采用ꎮ参考文献:８９㊀㊀㊀㊀㊀微㊀生㊀物㊀学㊀杂㊀志㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀４０卷[１]㊀ＬｏｅｓｃｈｅＷＪ.Ｏｘｙｇｅｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｖａｒｉｏｕｓａｎａｅｒｏｂｉｃｂａｃｔｅｒｉａ[Ｊ].ＡｐｐｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌꎬ１９６９ꎬ１８(５):７２３.[２]㊀劳一ꎬ李萍ꎬ宁兴旺ꎬ等.肠道菌群与消化系统疾病的关系[Ｊ].中华检验医学杂志ꎬ２０１８ꎬ４１(１):１３￣１６. 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第二届中国微生物培养皿艺术大赛圆满结束 - 中国微生物学会
第二届中国微生物培养皿艺术大赛圆满结束2018年10月20日，由中国微生物学会主办、安琪酵母股份有限公司承办的“第二届中国微生物培养皿艺术大赛”颁奖盛典在江西南昌召开的中国微生物学会学术年会上隆重举行。
中国微生物学会理事长邓子新院士、学会副理事长张克勤教授、学会秘书长东秀珠研究员、学会常务副秘书长杨海花研究员为一、二、三等及优秀作品奖颁奖，安琪酵母股份有限公司微生物营养事业部副总经理杨移志代表大赛承办单位主持颁奖仪式。
大赛专家评选组认为第二届中国微生物培养皿艺术大赛一、二、三等奖获奖作品主题鲜明，色彩纷呈，最显著的特征之一是以人为本。
首先，从作品中很容易发现科学家的一颗颗“中国心”。
一等奖作品“翰墨飘逸”用微生物为“颜料”，在方寸之间展现了清雅的中国画和遒劲的中国书法，洁白的天鹅与“鹅”字，亦静亦动，相得益彰；三等奖“花旦”，也把中国的国宝——京剧中花旦的扮相描绘的惟妙惟肖，呼之欲出，体现了中国传统文化在科学家心中的根深蒂固的地位。
另一方面看，当我们的科学家偶尔转身为艺术家时，不曾忘记那些曾经为人类做出卓越贡献的伟大前辈科学家们，因此他们用微生物“颜料”会就了工作中的科赫和在豌豆中沉思的孟德尔。
而二等奖作品“孕育”把科学的发展比作孕育中的胚胎，必将展现其勃勃的生机，前途充满无限希望。
三等奖作品“舞者”应当是科学家在漫长探索过程中偶尔的一次热情的释放和对美好青春的向往或怀念吧。
整体来看，今年的优秀做品更多。
在前六名中，除了一等奖作品，二等奖和三等奖都是人物或人像。
从另一方面体现了这些从事微生物研究的学者，始终把人类的发展、生存和未来放在最重要的位置上。
其实，科学研究本身就是让人类过的更美好，与自然更加和谐相处。
益微增产菌是陈延熙教授学术思想典型代表,也是陈先生为植物病理学作出划时代贡献核心范例。河北益微上传
陈延熙教授是1932年参加革命，作出杰出贡献科学家——纪念陈延熙教授百年诞辰梅汝鸿等河北益微生物技术有限公司上传陈延熙教授出生1914年12月23日，2014年是陈延熙教授百年诞辰。
在1990年12月9日他老逝世之后。
他的同事、朋友、战友，以及王琦教授为首的团队本着“尊师敬老、怀念前辈、传承发展、创新争优”的宗旨，不但关心微生态学科及其事业的发展，非常希望能为陈延熙教授出本论文集。
2008年大家达成一个共识，陈先生对发表论文非常严格，不但他生前留下墨宝甚少，就是他的团队成员，发表文章也少。
大量学术成就反应不出来，更反应不出来学术思想传承、发展、创新的过程。
决定系统整理益微增产菌系统资料，在纪念陈延熙教授百年华诞时，陈延熙教授的理论和实践有个粗线条的认识。
因此，目前“微生态学及其事业资料汇编”已出到第八集，已收到陈先生百年华诞纪念文章20多篇（更多的在近期脱稿），其中12篇已作为7次催稿，分别呈送给各位领导和诸位同仁。
待大部分纪念文章集中起来后，将就陈先生的学术理论和实践分几个主要方面进行专题研究、总结提高、提炼升华。
在2014年7月1日前完成此工程。
为各位领导、诸位同仁提供一个对陈延熙教授的理论和实践有个细线条的认识。
本集（微生态学及其事业资料汇编第八集）将是陈延熙教授1932年参加革命及对植物病理学划时代贡献的精华版本。
供各级领导、诸位同仁筹备纪念陈延熙教授百年华诞时的参考资料。
一、陈延熙教授是1932年就参加革命的老前辈陈延熙教授是在1932年，参加“左翼社会工作者联盟”，是他正式参加革命工作的时间。
（附件一：1988年7月26日中共农业部党组第77号文件“关于更改陈延熙通知参加革命工作时间的批复”）。
直至1949年新中国成立，他坚定、积极、出色地完成党的各项工作，发挥了党员起不到的作用。
新中国成立时，按党的指示在农业科技战线上传承、发展、创新地实现他为共产主义战斗一生的誓言。
（一）1932年就参加革命1932年，陈教授考入上海大同大学，在党的领导下，积极做学生工作，他参加了中国共产党的外围组织“左翼社会科学工作者联盟”（简称“社联”）。
从摇瓶到发酵罐的发酵放大问题
从摇瓶到发酵罐的发酵放大问题发酵发酵罐重复性标题:从摇瓶到发酵罐的发酵放大问题摘要:从摇瓶到发酵罐的发酵放大问题我在实验室50ml 250ml三角瓶做，37℃150rpm；放大到300L发酵罐，转速180rpm（不能调），风量要控制在多少合适啊？这个细菌是微好氧的。
有一次，溶氧都降到2%了，反而结果还比前几次好。
但是产物也只有摇瓶做的50%。
怎么优化啊？回复：溶氧控制在转速180rpm时，是比较扯淡的，因为转速不足以把微量空气氧打散到促进气液两相的传质程度！！（我在10L罐上……关键词:发酵发酵罐重复性回复：优化大罐需要考虑：罐压，接种量，pH范围，通气量范围，起使转速，温度，DO范围。
这些都是必须考虑的，你可以适当固定1到2个条件，看看生长怎么样。
穷孩子，发酵罐和摇瓶相差太大，因为整体的机制不甚相同，我觉得最大的区别在于1 摇瓶靠的是离心力，而发酵罐是真正的剪切，有些菌种在摇瓶中生长良好，但到发酵罐上由于剪切作用而无法结团，所以很多时候两者是不一样的。
2 溶氧问题：上面几位说得很全了，我就不多说了:P流加式的，你在摇瓶上无法实现持续流加吧，但是发酵罐是可以的。
测到（但是现在已经出现直接跟着检测系统的摇瓶系统），所以你无法维持一个恒定的pH。
发酵罐可以通过在线控制pH值恒定5 数据：你做发酵，最重要的是得到合适的配方与工艺吧，往往在发酵罐上可以比较全地反映出你的整个发酵状态，什么时间菌体疯狂生长，什么时间进入产素阶段，根据一些指标可以看得出来，所以摇瓶只是表层，发酵罐才是深层，总之吧，摇瓶肯定是基础，只有在摇瓶的基础上进行系统的发酵罐的研究才能真正适合生产。
再者，你就是由小罐到大罐的工艺操作还是不尽相同。
仅供参考，大家多交流！微生物发酵的放大实验，要注意反应罐的培养温度，培养基浓度，PH值，搅拌转速，还要不断的反应罐增加补料。
温度好控制pH上罐子是可以调节的，在摇床上你只能定时取样检测溶氧就差的很大了，摇床上基本就是缺氧的，上罐子因为有通气所以在一定条件下能确保溶氧，这样会导致用摇床摇菌的时间远远大于上罐子的时间，我现在做的菌，在摇床上基本是16小时左右吧，上罐子就6、7个小时不锈钢最怕氯离子了,特别是盐酸.酸的种类多了,看你需要补课的多,还是自己先学一阵子先吧.回复选择硫酸或磷酸即可不知楼主为何选盐酸:sweat:回复不锈钢最怕氯离子啦，尤其是盐酸，有些用自来水的厂子都要严格控制水中氯的含量！你们做多久啦？多大的罐子呀？发酵罐是压力容器，先停下来检修吧，不然出了事就是人命关天的大事:cat3:回复主要看HCl在发酵过程中起什么作用，是否可以替换。
课程教学大纲-微生物学
《微生物学》课程教学大纲（执笔人：审核人：教学院长：）课程简介（一）课程代码：（二）课程名称（含英文名称）：微生物学Microbiology（三）课程类别：专业必修课（四）修读对象：生物技术专业本科学生（五）总学时与学分：45学时。
其中理论45学时。
2.5学分。
（六）相关课程：先修课程：医学免疫学；后续课程：发酵工程（七）内容提要（不超过200字）本课程主要学习微生物细胞的结构与功能，微生物的营养与代谢、生长繁殖及控制，病毒的分离、鉴定、特性、感染及控制、微生物的基因组、遗传规律与特性、微生物的基因表达、调控及基因工程、微生物的生态、进化、系统发育、分类鉴定及物种多样性，微生物感染与免疫及微生物生物技术与产品。
二、教学目的和教学方法学习微生物学在工、农、医等方面的应用，了解该学科的发展前沿、热点和问题，使学生牢固掌握微生物学的基本理论和基础知识，了解微生物的基本特性及其生命活动规律，为学生今后的学习及工作实践打下坚实的基础。
教学方法采取多媒体教学与讨论相结合。
三、理论与实践教学学时分配四、选用教材和主要教学参考书教材：《微生物学》沈萍主编高等教育出版社2006第二版主要参考书：1.《微生物学教程》周德庆编高等教育出版社2002.5 第二版2.《医学微生物学》戚中田主编高等教育出版社2009第二版3.《现代工业微生物学》杨汝德主编华南理工大学出版社2001五、理论教学内容（一）第一章绪论主要讲授内容：1.微生物定义及其类群2.微生物学的发展史：微生物与疾病间的关系；免疫学与微生物感染的关系微生物学的未来。
3.微生物学的发展对人类进步的贡献4.微生物的五大共性5.微生物学及其研究内容教学时数：2学时重点与难点：掌握微生物学的特点及微生物的发展历史。
熟悉微生物学的目的。
了解微生物学研究的主要范围。
思考题或练习题：为什么说巴斯德和柯赫是微生物学的奠基人？（二）第二章微生物的纯培养和显微技术主要讲授内容：1.无菌技术2.用固体培养基获得纯培养3.用液体培养基获得纯培养稀释法4.单细胞（抱子）分离5.选择培养6.微生物的保藏技术教学时数：4学时重点与难点：掌握微生物学研究的基本技术，即无菌技术、纯种分离技术、培养技术及显微镜技术。
微生物艺术画的制作
Ｉ ＳＳＮ ２ ０ ９ ５ — １ ５ ７ ４ ＣＮ １ １ — ９ ３ ０ ７ ／Ｒ ｂ ｉ ｏ ｔ ｅ ａ ｃ ｈ ． ｈ ｅ ｐ ． ｃ ｏ ｍ． Ｃ ｌ ｌ
专题
Ｄ ＯＩ １ ０ ． ３ ８ ６ ８ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ２ ０ ９ ５ — １ ５ ７ ４ ． ２ ０ １ ６ ． ０ ４ ． ０ １ １
方法与手段 以及教 学规 范性等 ７个方面 ，评 审委 员会评 出了本届 比赛获 奖作 品。本刊将从 本期起 陆续刊登 部分获
奖作 品 ， 以供 交流 互鉴 。
“ ２ ０ １ ６年全 国高校生命科学类微课教 学比赛” 优秀作品选登
微 生 物 艺 术 画 的 制 作
张霞‘ ’
上海交通大学生命科学技术学 院 ，上海 ，２ ０ ０ ２ ４ ０
一
４ ．细 菌的 染色观 察
由于细菌小 而菌体 透 明 ，对 细 菌进行 观 察 时一般 都要染色 。常用碱性染 料进行 简单染 色 ，因为在 中性 、
碱性或弱 酸性溶 液 中 ，细菌 细胞通 常带 负 电荷 ，而碱
般操作 前处 理超 净 工作 台 ，紫外灯 杀 菌半 小 时 ，操
性染 料在 电离 时 ，其分子 的 染色部 分带 正 电荷 （ 酸性 染料 电离 时 ，其分子 的染色部分 带正电荷 ） ，因此碱性
或者 打翻器１ ／ Ｉ ． ；第 二种 为 ｍ ｔ ／ ｊ ｔ ］ 法 ，平 皿 直接放 在 超净
教 学 切 入 点
课程开始就展 示大 量微生 物培 养皿 艺术大 赛 的参 赛作 品照片 ，让学 生们对微 生物 培养 的 “ 颜 值 ”有 了
微生物培养皿艺术大赛
微生物培养皿艺术大赛
微生物培养皿艺术大赛是我院发起的以微生物培养皿为媒介的艺术比赛活动。
借助此
次大赛，我们的艺术家及其他参与者将有机会用他们的想象力创作出可爱的、优美的艺术
作品。
此次大赛活动，欢迎来自各个领域的艺术家及其他参与者参加，无论是初学者或专业
人士都可以参与其中，大家可以根据自己的兴趣与爱好，以及各自的技能投稿自己的艺术
作品，展示他们的艺术创作能力的结晶。
此次活动将以“微生物装饰”为主题，旨在培养参赛者关注生物多样性的意识，展示
参与者关注生物多样性的大胆探索和创造性思维。
参赛者可以利用不同种类的标本，用微
生物培养皿、实物模型或图像创作出一件或多件装饰艺术作品，将这种“微观世界”中的
生物元素与“外部世界”中的艺术元素完美结合在一起。
活动期间将精心编排丰富有趣的线上活动，包括但不限于系列艺术讲座、在线展示、
教师导师心得分享等，旨在帮助参赛者更加深入地学习与探索这一独特的艺术形式，提高
他们的创作水平及技能。
最后，此次大赛活动将评选出优秀作品，并为获奖作品的创作者颁发证书及现金奖励。
更多信息，请参见官方网站或相关社交媒体账户详情，我们期待您的积极参与！。
培养皿大赛优秀作品及制作方法
培养皿大赛优秀作品及制作方法嘿，朋友们！今天咱就来讲讲培养皿大赛那些超厉害的优秀作品和制作方法。
你说这培养皿就像一个小舞台，各种神奇的“表演”都在这儿上演。
有的作品就像是一场盛大的魔法秀，那些微生物在里面排列组合出令人惊叹的图案和形状。
就好像是微生物们自己商量好了似的，组成了一幅美丽的画作。
先说说那些优秀作品吧。
有的作品呈现出了一个精致的微观城市，街道、建筑一应俱全，让人仿佛能看到里面的“微生物居民”在忙碌地生活着。
还有的呢，像是一片神秘的微观森林，各种奇奇怪怪的“微生物植物”茁壮成长。
你能想象吗？这么小的一个培养皿里，居然能有这么多奇妙的景象！这可都是参赛者们的心血和创意啊！那怎么才能做出这么厉害的作品呢？别急，听我慢慢道来。
首先得选好材料呀，就像厨师要挑好食材一样。
不同的培养基就像是不同口味的调料，能让微生物们呈现出不同的状态。
然后呢，就是接种啦，这可得小心谨慎，就像给小宝贝穿衣服，得轻手轻脚的。
接着就是培养的环境啦，温度、湿度都得恰到好处，不然微生物们可不乐意好好表现呢。
在制作过程中，可不能粗心大意哦。
你想想，要是不小心手抖了一下，或者环境没控制好，那不就前功尽弃啦？这就好比搭积木，一不小心碰倒了，就得重新再来。
但别担心，只要有耐心，多尝试几次，肯定能做出让人惊艳的作品。
你说这是不是很有趣？就像是在玩一个超级微观的游戏，而我们就是游戏的主宰者。
看着那些小小的微生物在我们的“指挥”下变成各种奇妙的形状和图案，心里那叫一个满足！而且啊，参加培养皿大赛不仅能展示自己的创意和才华，还能学到好多关于微生物的知识呢。
这可真是一举两得呀！所以啊，大家都快来试试吧！让我们一起在这个小小的培养皿里创造出大大的奇迹！不用害怕失败，不用害怕困难，只要勇敢尝试，就一定会有收获。
相信我，你会爱上这个神奇的微观世界的！。
会议提示
会议提示1．因10月是郑州的旅游黄金季节，所有涉及到宾馆、会议方面的费用都有所提高，预定宾馆房间紧张，因此会议参加者、公司参会人员务必尽快在线注册，以便我们尽早告之宾馆参加人员总数，安排好会议；未在线注册者在房源紧张时请自行解决。
2．会议日程初步安排：2017年10月20日报到。
10月21日上午大会开幕式；纪念中国微生物学界前辈事迹报告（20分钟）、特邀大会报告4个（每人报告30分钟+5分钟交流）；10月21日下午，主旨报告和分会场报告（主旨报告20分钟+5分钟交流，分会场报告15分钟+5分钟交流；）；10月21日下午，在“青年科学家论坛”分会场为由中国微生物学会主办、安琪酵母股份有限公司承办的“第一届中国微生物培养皿艺术大赛”获奖作品颁发一等、二等、三等奖和人气奖。
10月22日上午8:30-12:00，下午1:30-6:00，主旨报告和分会场报告；10月23日会议组织代表参观郑州大学新校区, 10月24日早餐后离会。
3．会议住房将统一安排（原则上是先到先安排入住），住宿标准为会议期间宾馆提供的优惠价格。
提前1天到达或推后1天离开的代表，可以以会议优惠价格住宿。
在房源紧张时，请大家尽量接受合住安排。
4．10月21日晚上召开中国微生物学会第十一届理事会第三次常务理事会会议。
希望各位常务理事安排好时间，务必出席；因公不能参加者，应尽可能委托代表出席，并告知学会办公室。
5．自愿参加会后考察者，其费用自理，代表自行选择旅行社，会议组委会不承担任何责任。
6．家属随代表参加会议，需交纳1000元。
7．会议注册费在报到时缴纳，可以刷卡或现金缴纳。
请参会代表在开票时出示本单位的税号。
8．会议期间若有未赞助本次会议的公司或单位发放宣传资料，必须经会务组同意后方可进行。
9．10月23日会议组织代表参观郑州大学，所需费用（包括交通、餐费等）由会议组委会承担，请代表报到时登记。
10．盖章的会议报到通知会放入每位代表的会议资料中，方便代表报销时用，若有代表需要在会前使用盖章的报到通知，可发邮件至csm@索取。
我用粪肠球菌，画了我们实验室的创始人……然后，获奖了
我用粪肠球菌，画了我们实验室的创始人……然后，获奖了培养皿艺术，微生物实验室里的保留娱乐节目。
今年美国微生物学会又举办了新一届的培养皿艺术大赛，到今年已经是第三届了。
今天我们就来欣赏一下本届的获奖作品~1第一名获奖作品的灵感来源于夏天在蒙托克看到的落日场景，这幅画的绘制方式比较特别，它并不是传统的用接种环在培养皿上划线，而是用类似打印的方式在大块的平皿上逐个“像素”接种上了很多不同的酵母。
这些酵母含有编码不同色素的质粒。
作者：Jasmine Temple, Laboratory TechnicianJef Boeke, PhD, Director, Institute for Systems GeneticsMichael Shen, Graduate StudentLeslie Mitchell, PhD, Postdoctoral Fellow, New York University, New York, United States2第二名作品的灵感来自动画电影海底总动员（Finding nemo），作者用几种不同颜色的细菌和真菌绘制了一副珊瑚的图景。
在这里，紫色的部分是粘质沙雷菌（Serratia marcescens），粉红色带点黄绿的部分是金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），白色的部分是热带念珠菌（Candida tropicalis），而灰色粘液状的部分（我理解是中间的那一坨不明物体？）是肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）。
而最冷的事情在于，这幅作品的名字叫“Finding Pneumo”（寻找肺炎，取自肺炎克雷伯菌的名字，和原名谐音），谁要找它啊……不过创造者还是很认真地表示，希望能唤起大家对珊瑚的关注，毕竟在气候变暖的大背景下它们现在活得不太好。
作者：Linh Ngo, Microbiology Technologist, Sunnybrook Health Science Centre, Ontario, Canada。
寓美育于菌物学教学之中
寓美育于菌物学教学之中韩玉竹;王宝全;赵建军【摘要】审美化教学是一种新型的教育观念,也是一种有效教学方式,是进一步深化教学改革,推进素质教育的重要途径.菌物是一类富有艺术细胞的种群,菌物世界及其教学活动中蕴藏着丰富的美学因素,试从教学内容和教学艺术两个方面深入探索菌物世界漫游课程中的美学因素,将诸多教学因素转化为美感体验,把菌物教学过程转化为欣赏美、表现美和创造美的活动,从而使菌物教学显示出应有的美学特色.【期刊名称】《生物学杂志》【年(卷),期】2019(036)004【总页数】4页(P105-108)【关键词】菌物世界漫游;审美教学;教学内容;教学艺术【作者】韩玉竹;王宝全;赵建军【作者单位】西南大学动物科学学院,重庆402460;西南大学动物科学学院,重庆402460;西南大学动物科学学院,重庆402460【正文语种】中文【中图分类】G642笔者讲授的菌物世界漫游课程是参考裘维蕃院士编写的同名科普书籍[1]，为全校不同专业对菌物感兴趣的大学生开设的一门通识选修课，课程学时数27个，实验实践占总学时比例为1/3。
2009年首次开课以来，受到广大同学的欢迎和认可，至今已有1000多名学生选修。
菌物是一门系统性较强、知识点较多、相对专业化的学科，而选修的学生有动物科学、动物医学、食品科学、水产科学等生物学相关专业，也有商务贸易、市场营销、信息管理等非生物学专业。
针对微生物学专业基础比较薄弱的学生，如何调动他们对菌物学科的兴趣和热情至关重要。
在这9年的菌物教学过程中，本人不断思考菌物学科的自身特色，并不断对教学体系、教学方法等进行优化和实践[2]。
菌物是一类很神秘又美丽的生物，包括真菌、黏菌、卵菌和丝壶菌4大类，与人类的生产生活密切相关，广泛应用于医学、农学、食品、工业等领域中[3]。
菌物世界及其教学活动中蕴藏着丰富的美学要素，笔者试图深入挖掘各种审美构成要素，将美感体验融入教学内容、教学形式、教学设计、教学环境等诸多教学要素中[4]，并借用美的形象、情感、语言、媒介、实践等教学艺术，将整个教学过程转化为欣赏美、表现美和创造美的活动，从而使菌物教学显示出美学特色。
工程设计表达竞赛 白雪
工程设计表达竞赛白雪
为了提高厦门大学生物工程专业本科实验教学课程质量，加强大学生综合素质与能力培养，2019年5月30日，厦门大学化学化工学院生物化工研究所在2016级生物工程本科生《微生物学实验》课程中举办了“第一届培养基艺术设计大赛”。
本次工程设计表达竞赛白雪分为“平板作画”和“培养基艺术创作”两个部分，。
《微生物学实验》课程通过设计竞赛内容，有机地将课程的基本操作内容，如显微镜技术，微生物染色与形态结构观察，培养基的配制、灭菌与除菌，微生物接种与培养，微生物的分离与纯化等基本内容，以竞赛的方式，让学生强化理论认知，熟练掌握实验操作技能，将理论课学习与实践操作紧密的结合在一起，在教学内容、教学方法上进行改革，改变传统教学模式，将创新思维和创新能力培养融入课程教学过程中，加强学生动手能力，练就扎实的微生物实验技能，增强了同学们对生物工程以及生命科学的了解和热爱，既为同学提供了良好的学习交流平台，又为同学们提供了一个检验《微生物学实验》课程全面学习效果的舞台。
细菌分解葡萄糖,乳糖产酸产气使斜面与底层均呈黄色（酚红指示剂
1 课程名称微生物学检验技术授课专业医学检验学时2学时实验十二大肠埃希菌、产气杆菌检验一、实验目的 1.掌握E.coli、产气杆菌的分离培养与鉴定方法2.掌握E.coli、产气杆菌的形态、染色特性、培养特性、生化反应及鉴定依据。
二、实验器材与试剂1.菌种普通E.coli、产气杆菌 2.培养基SS中国兰KIAMIU蛋白胨葡萄糖蛋白胨水枸橼酸盐琼脂斜面硝酸盐culture media 3.试剂20尿素0.4酚红水溶液1中国兰水溶液20乳糖水溶液1玫瑰红酸酒精液1溴麝香草酚兰酒精溶液靛基质试剂甲基红试剂VP试剂40KOH肌酸溶液氧化酶试剂与纸片3过氧化氢 4.革兰染液擦镜纸电吹风显微镜恒温箱三、实验内容一标本的采集肠道细菌感染可采集粪便肠道外感染可根据临床感染情况采集中断尿液血液脓汁胆汁脑脊液痰分泌物水等。
二检验程序E.coli、产气杆菌接种SS中国兰KIAMIU蛋白胨水葡萄糖蛋白胨水枸橼酸盐琼脂斜面硝酸盐culture media 37℃24h 观察分析结果吲哚试验VP 试验甲基红试验GS2 报告结果三培养基的制备Producting culture media: 1.SS culture mediaSamonella-Shigella培养基重点⑴成分①营养物示胨蛋白质牛肉膏②抑制物煌绿胆盐硫代硫酸钠枸橼酸钠抑制非病原菌生长③促进剂胆碱盐促进病原菌生长④鉴别用糖乳糖⑤指示剂中性红酸红碱黄⑵原理能利用乳糖的细菌产酸使指示剂变红色枸橼酸铁能使产H2s的菌落中心呈黑色硫代硫酸钠有缓和胆盐对痢疾杆菌沙门菌的有害作用并能中和煌绿和中性红的毒性⑶用途是一种强选择culture media 用来分离肠道致病菌用附现在Ssagar一般使用成品只要按一定的量加入蒸馏水即可无需调PH值无需灭菌⒉中国兰culture media 弱选择culture media ⑴成分普通ager 100ml 乳糖20水溶液1g5ml 1中国兰水溶液2ml 1玫瑰红酸乙醇液1ml 配好后culture media呈淡红色⑵原理玫瑰红酸能抑制G菌的生长。
终生实践借鉴与创新的科学家——纪念方心芳百年诞辰
终生实践借鉴与创新的科学家——纪念方心芳百年诞辰
青宁生
【期刊名称】《微生物学报》
【年(卷),期】2007(47)2
【摘要】方心芳，1907年3月16日生于河南省临颖县石桥乡方庄。
曾任黄海化学工业研究社副社长、发酵菌学研究室主任、中国科学院菌种保藏委员会领导人、中国科学院北京微生物研究室研究员兼副主任、微生物研究所副所长兼工业微生物室主任、中国微生物学会副理事长、中国微生物学会酿造学会名誉理事长、中国微生物菌种保藏管理委员会主任委员、中国科学院学部委员等职。
【总页数】4页(P插1-插4)
【作者】青宁生
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】Q93-26
【相关文献】
1.纪念方心芳院士百岁华诞 [J],
2.论何其芳对新中国文学的独特贡献——纪念何其芳百年诞辰 [J], 陶德宗
3.方心芳院士百年诞辰纪念大会在京召开 [J], 黄丽娜
4.师从庄晚芳教授四十年追忆——纪念著名茶学家庄晚芳先生百年诞辰 [J], 潘根生
5.振兴民族工业的人民科学家微生物学奠基人方心芳院士诞辰110周年纪念活动在太原举行 [J],
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“第一届中国微生物培养皿艺术大赛”圆满结束
为向公众展示多姿多彩的微生物世界，吸引公众更多地了解微生物知识，同时为广大微生物科研工作者增添工作乐趣，中国微生物学会于2017年举办“第一届中国微生物培养皿艺术大赛”，本次活动由安琪酵母股份有限公司独家承办。
参赛对象包括高校、科研院所及相关企业的微生物科研工作者，大赛接受个人和团队报名参赛和提交作品。
该赛事从2017年7月正式启动，经过作品征集、初筛、网上投票和盲评的方式进行专家会议评审等四个阶段，历经4个月最终产生了本次大赛的一等奖、二等奖、三等奖作品、最佳人气奖和优秀作品奖。
获得一等奖的作品-《萌宝》由浙江省微生物研究所郭红缨创作，主要采用了毕赤酵母和出芽短梗霉；获得二等奖的作品有两个，分别是广州大学禤越华和齐优绮创作的《阿尔弗雷德·贝恩哈德·诺贝尔肖像画》和四川大学生物治疗国家重点实验室王丽苹创作的《秘密花园》，分别采用了海洋红酵母、酿酒酵母和表达荧光蛋白的大肠杆菌；三等奖获奖作品评出三名，分别是安徽大学翟璐创作的《显微镜》、四川理工学院余奎创作的《马踏飞燕》和兰州大学冯欢、沈喜和冯虎元创作的《年味》，主要采用了大肠杆菌。
山东银河生物科技有限公司巩豪创作的作品《青葡萄》因网络得票最高而获最佳人气奖。
此外，《东阳光LOGO》、《贺兰山葡萄酵母家族》、《丘比特之箭》、《荷趣》、《富贵牡丹》、《一花一世界》、《七夕》、《菌之语》、《小品花卉》、《怒放》、《竹报平安》、《苍天大树》和《战狼2》13幅作品获优秀作品奖。
2017年10月21日下午，在郑州建国饭店召开的中国微生物学会学术年会上，为“第一届中国微生物培养皿艺术大赛”获奖者颁发了获奖证书，奖杯和奖金。
中国微生物学会理事长邓子新院士、英国皇家学会院士Tom J.Simpson、中国微生物学会秘书长东秀珠研究员和中国微生物学会工业微生物学专业委员会主任委员程池研究员为一、二、三等奖获得者颁奖。
本次大赛的承办方、安琪酵母股份有限公司微生物营养事业部副总经理尤舸浩主持了颁奖典礼。
获奖者畅谈了自己在作品创作中的构思和获奖感言，一致认为此次活动对科研工作者的科研兴趣的激发和对公众微生物知识的普及具有积极的意义。
一等奖《萌宝》；作品编号0294；浙江省微生物研究所郭红樱作品
二等奖：《阿尔弗雷德·贝恩哈德·诺贝尔肖像画》；二等奖：《秘密花园》组图；
作品编号0347；广州大学禤越华和齐优绮作品编号0308；四川大学王丽苹作品
三等奖：《显微镜》；作品编号0011 ；三等奖：《马踏飞燕》；作品编号0255 安徽大学翟璐作品四川理工学院余奎作品
三等奖：《年味》；作品编号0360；兰州大学冯欢、沈喜和冯虎元作品。