用酶联免疫法检测猪肉中莱克多巴胺含量

用酶联免疫法检测猪肉中莱克多巴胺含量

摘要用酶联免疫法对某区域内的猪肉进行莱克多巴胺含量检测，结果表明：在低添加水平为0.012 5mg/kg、0.025 0mg/kg、0.050 0 mg/kg、0.100 0mg/kg、1.000 0mg/kg时，均能将莱克多巴胺检出，该法具有灵敏度高、简单、快捷的优点。

关键词猪肉；莱克多巴胺；酶联免疫法

近年来全社会对“瘦肉精”猪非常关注，政府出台了一系列相关法律法规，加大了对生产、销售以及在猪饲料、饮水中添加“瘦肉精”等违禁药物的打击力度，同时对饲料、尿样、内脏中“瘦肉精”残留量的检测水平和检测频率也有了很大的提高，现有证据表明，莱克多巴胺作为“瘦肉精”替代品已在养猪生产中被使用。

对于莱克多巴胺含量的测定，常用的检测方法有分光光度法、液相色谱法和气相色谱法等。本试验用酶联免疫方法对某区域内的猪肉进行莱克多巴胺含量检测，以摸索有效、快速的莱克多巴胺检测方法。

1材料与方法

1.1材料与试剂

样品来源：采自某区域销售的5份猪肉样品。

莱克多巴胺标准品，纯度99.5%，购自中国药品生物制品检定所；超纯水由Milli-Q liocel纯水器制备；莱克多巴胺标准溶液，质量浓度为10ug/mL，用莱克多巴胺标准品自行配制。

1.2仪器

96孔的酶标板；BP310S电子分析天平，感量为0.001g，Sartorius公司；RJ-TDL-40B离心机，转速为4 000rmp，锡市瑞江分析仪器有限公司；Wellscan MW．3型酶联检测仪，芬兰Labsystems；MS2型漩涡混合器，IKA公司；100μL 可调微量移液器，美国RAININ。

1.3试验方法

1.3.1样品前处理。加4倍样品抽提缓冲液到适量的样品中，用均质器混匀。

称取1.4g均质样品，4 000rmp在室温（20～25℃）下离心5min，转移0.5mL上清液到管子里，75℃孵育5min，最大速度涡旋1min。4 000rmp室温离心5min，转移0.2mL上清液到1个新管子里，加5μL样品平衡缓冲液，混合，稀释因子为4。

1.3.2测定。采用间接ELISA法，操作步骤如下：用碳酸盐缓冲液将包被抗原按合适浓度稀释后包被酶标板（100 μL/孔），于37℃温箱中反应1~2h，然后移至4℃冰箱过夜；洗涤液洗酶标板3次，每次3～4min；用1％OV A封闭，300μL/孔，置37℃反应lh；洗涤后加入倍比稀释的待测抗体（100μL/孔），置37℃反应2 h；洗涤后加羊抗兔IgG-HRP（1∶1 000），置37℃反应1h；洗涤后每孔加入底物溶液100μL，置37℃反应15～20min后，每孔加入50μL终止液以终止反应。待测抗体每个稀释度作3个平行试验。

1.3.3加标样品测定。吸取10μL/mL莱克多巴胺标准溶液50μL、250μL和500μL，分别添加到5g（精确至0．001g）的空白样品中，使添加水平为0.012 5mg/kg、0.025 0mg/kg、0.050 0mg/kg、0.100 0mg/kg、0.500 0mg/kg和1.000 0mg/kg，每添加水平设5个重复，同时设样品空白对照。

2结果与分析

从表1可看出，在低添加水平为0.012 5mg/kg、0.025 0 mg/kg、0.050 0mg/kg、0.100 0mg/kg、0.500 0mg/kg和1.000 0 mg/kg时，检测结果分别为阴性、阴性、阳性、阳性、阳性、阳性。可以看出用酶联免疫方法均能将莱克多巴胺检出。

3结论与讨论

（1）应用酶联免疫法测定猪肉中的莱克多巴胺，方法可行、灵敏度较高，是一种简单和快捷的筛选方法。

（2）猪肉样品前处理，在转移上清液时，要避免吸入脂肪层，脂肪容易影响抗原与抗体反应，容易得出假阴性的结果。猪肉样品要充分研磨，以充分将莱克多巴胺抽提出来。

（3）酶联免疫法测定猪肉中莱克多巴胺，方法简捷可靠，是一种值得推广的定性筛选方法，可作为液相色谱等仪器法的补充。

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