KJ201706动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法
盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇检验方法的简化与验证
“瘦肉精”是一种特定的可用来减少被饲养动物脂肪、增加其瘦肉比例的药物的俗称。
传统型瘦肉精一般是指β－受体激动剂，是一类人工合成的苯乙醇胺类物质，包括克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林、异丙喘宁、氯丙那林、西马特罗与非诺特罗等，其中克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺最为常见。
该类药物在动物性食品中的残留会对消费者的身体造成不同程度的影响，对于易感人群危害更为严重[1-2]。
2002年，β－受体激动剂被列入《食用动物禁用兽药及其他化合物清单》[3]。
现阶段，对β－受体激动剂和喹乙醇及其代谢物的检测方法较多。
刘佳等[4]建立了一种检测猪肝中26种β2-受体激动剂药物残留的反相液相色谱-串联质谱方法；金玉娥等[5]也采用液相色谱—串联质谱测定了猪肉和猪肝中11种β2-受体激动剂，上述检测方法取得了比较理想的结果。
但上述研究的前处理过程都比较复杂，一般包括酶解、提取、固相萃取的过程，比较费时费力。
GB/T 21313-2007[6]的检验方法中用高氯酸溶液进行提取，众所周知，高氯酸为强氧化易爆品，具有较高的危险性，在实验室使用具有较大的安全隐患。
本研究对GB/T 21313-2007的检验方法进行调整，用盐酸溶液代替高氯酸溶液进行提取，简化过柱净化程序，提高实验效率，降低上机液杂峰干扰。
1 材料与方法1.1 试验原理试样中β-受体激动剂残留经酶解后，再用盐酸溶液提取，经过滤和离心后，上清液用MCX固相萃取柱净化，液相色谱/串联质谱仪测定，外标峰面积法定量。
1.2 试验仪器液相色谱Agilent1200；二级串联质谱Agilent6410；万分之一分析天平；水浴锅。
1.3 试剂甲酸（99%）；乙腈，色谱纯；甲醇，色谱纯；乙酸，分析纯，乙酸钠（NaAc·4H2O）；盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准储备液：准确称取0.010 0 g标准品（色谱纯≥99.5%），用甲醇溶解并定容至10 mL，即可得浓度为1 000 mg/L的标准储备液，-18 ℃保存，有效期12个月。
金标快速检测检测试剂卡检测技术110325-02
金标免疫检测试纸条的结构
主体的膜反应体系由以下部分组成：
1： 高蛋白亲和性的高分子纤维素膜（NC膜），为反应膜用来作为 系统反应的载体和显示反应结果。 2：选用有较强吸水能力的玻璃纤维，经特殊处理后，为反应系统提 供适合的反应条件，并帮助吸水。 3：吸附力较强的玻璃纤维，作为金标记物的固相载体。 4：吸收垫，吸水，牵引反应物的运动。 5：塑料基板，作为反应体系的支撑物。
检测方法对比
检测方法 样品 处理 是否 需标 准品 测 量 耗时 优点 缺陷
确认方法
液相色谱质谱联用
最复 杂
是
定 量
24小 时
仪器价格昂贵且方 法操作复杂，存在 结果准确，检 检测成本高、检测 测精度高，灵 周期长、对检测人 敏度高 员的技术要求较高， 需要较复杂的样品 处理过程 操作简单，使 用方便 具有良好的特 异性，操作简 单方便，一步 测试，用时只 需5分钟 适于实验室检测
5、中毒事件
在互联网上用“瘦肉精中毒”搜索，可以查到有6710 项的相关报道。世界上最早的“瘦肉精”中毒事件于 1990年3月在西班牙发生。我国则于1998年5月在香港 最早出现。 1、2003年8月22日，广东信宜市发生530人瘦肉精集体中 毒事件 2、2002年2月浙江省平湖市170余名群众发生瘦肉精中毒 3、2001年11月2日，北京发生14人瘦肉精中毒 4、 2001年11月，广东河源市发生484人食用含瘦肉精的 猪肉后集体中毒的事件，闻名全国 5、1999年10月，浙江嘉兴市发生57人“瘦肉精”（含盐 酸克伦特罗)集体中毒事件 6、1998年，广东高明市发现有7例因喝猪肺汤致人中毒 事件
4-氨基-α-（叔丁胺甲基）-3，5-二氯苯甲醇盐酸盐
1、药理作用
饲料中沙丁胺醇、克伦特罗和莱克多巴胺的定性筛查
饲料中沙丁胺醇、克伦特罗和莱克多巴胺的定性筛查前言β-受体激动剂能与动物和人体内多数组织细胞膜上的β-受体结合，调节交感神经系统兴奋，又称β-兴奋剂、β2-肾上腺素受体激动剂，以克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇为代表。
在发现具有促使肉畜体内营养素重新分配、提高瘦肉率功效后，20世纪80年代初克仑特罗和沙丁胺醇被用于改善肉畜胴体品质。
西班牙1990年和1992年两次爆发食用残留克仑特罗的牛肉、牛肝中毒的严重食品安全事件，自此欧盟颁布法规，禁止此类药物用于饲养食品动物。
我国也早在1999年颁布《饲料和饲料添加剂管理条例》，禁止使用β-受体激动剂作为动物促生长调节剂。
但近几年仍时有残留克仑特罗、莱克多巴胺动物组织导致的食品安全事件发生。
可见加强β-受体激动剂残留的检测任重道远。
本研究基于PCS-MS-Mate联用质谱分析系统开发了饲料中沙丁胺醇、克伦特罗和莱克多巴胺的快速检测方法，无需繁琐的样品前处理，1步操作1min完成样品分析，本方法的检出限均为1μg/g。
沙丁胺醇结构式克伦特罗结构式莱克多巴胺结构式图1. 三种β-受体激动剂的结构式实验部分1.3实验方法 1.3.1实验样品沙丁胺醇，CAS 18559-94-9。
冷藏保存，使用时稀释至所需浓度。
克伦特罗，CAS 37148-27-9。
冷藏保存，使用时稀释至所需浓度。
莱克多巴胺，CAS 97825-25-7。
冷藏保存，使用时稀释至所需浓度。
阴性饲料样品存于密封容器中，常温保存。
1.3.2样品检测用微量固体取样器移取约一平勺饲料粉末，加载于PCS 试剂盒样品窗口的纸基上，取5滴快速检测专用溶剂-B01加载于溶剂窗口，而后将PCS 试剂盒插入MS-Mate 进样平台，供质谱测定。
实验结果与讨论2.1质谱图图2.1 加标饲料中沙丁胺醇(1μg/g)的三级子离子扫描谱图图2.2 加标饲料中克伦特罗(1μg/g)的三级子离子扫描谱图PCS luoce sample 1pm ACN-1#2-26RT:0.07-0.52AV:8NL: 1.73E1F:ITMS + p ESI Full ms3 240.00@cid25.00 222.00@cid25.00 [100.00-400.00]100120140160180200220240260280300320340360380400m/z5101520253035404550556065707580859095100R e l a t i v e A b u n d a n c e165.75147.75203.75221.67193.75129.75175.75161.92109.00204.75P CS luoce sample 1pm ACN-1#2-24RT:0.02-0.47AV:8NL: 5.50E 2F:ITMS + p E SI Full ms3 277.00@cid25.00 259.00@cid25.00 [100.00-400.00]100120140160180200220240260280300320340360380400m/z5101520253035404550556065707580859095100R e l a t i v e A b u n d a n c e202.67240.83160.83258.67130.83170.83188.83230.75104.50382.08338.58图2.3 加标饲料中莱克多巴胺(1μg/g)的三级子离子扫描谱图2.2检出限通过对阴性饲料样品加标的方式考察了本方法的检出限，以S/N=3计，本方法沙丁胺醇、克伦特罗和莱克多巴胺的检出限均为1μg/g 。
肉原料肉中激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)的测定
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
2.本方法检出检出限：0.025ng～2. 5ng
2 瘦肉精的测定方法
备注 在检测实验室，确证和定量瘦肉精时，相对于气质联用，更
2 瘦肉精的测定方法
2.2瘦肉精的确证和定量——液相色谱串联质谱法
(1) 原理：试样中的残留物经酶解，用高氯酸调节PH值，沉淀蛋白质后离心， 上清液用异丙醇-丁酸丁酯提取，再用阳离子交换柱净化，液相色谱-串联 质谱法测定，内标法定量。 (2)实验方法与步骤：遵照GB-T22286-2008
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
1 瘦肉精知识概述
早在2002年，农业部、卫生部、国家食品药品监督管理局就 发布公告，明令禁止在饲料和动物饮用水中添加盐酸克仑特罗和 莱克多巴胺等7种 “瘦肉精”。
2008年，最高人民检察院、公安部规定新的刑事案件立案追 诉标准，对使用“瘦肉精”养殖生猪，以及宰杀、销售此类猪肉的， 将以生产、销售有毒、有害食品罪追究刑事责任。
2 瘦肉精的测定方法
2.1筛选是否含有瘦肉精——酶联免疫法（ELISA)
(2)实验方法与步骤：遵照GB-T5009.192-2003 如果采用快速检测卡，则根据检测卡 操作要求开展检测。
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
2.本方法检出检出限：0.004ng～0.054ng
动物源性食品中的“瘦肉精”残留危害和检测分析方法
动物源性食品中的“瘦肉精”残留危害和检测分析方法梁 莉1，李皓晨2（1.中山市动物疫病预防控制中心，广东中山 528400；2.中山市三乡镇农业服务中心，广东中山 528400）摘 要：“瘦肉精”除了对动物有一定的危害外，其残留物对人们的健康也有严重的影响，基于此，本文综述了“瘦肉精”的危害、现有的动物源性食品中“瘦肉精”检测分析方法以及国内外“瘦肉精”的使用情况。
关键词：动物源性食品；瘦肉精；兽药残留；检测分析方法食品安全问题一直都是社会关注的一个焦点，2021年央视3·15晚会就向大众曝光了河北青县养殖户在养羊过程中，为了提高羊的出肉率，获得更高的收益，在饲料中添加“瘦肉精”饲养的情况，且这种饲养方式竟长达10年。
这一报道使我国2002年明令禁止的“瘦肉精”又一次出现在人们的视野中。
1 “瘦肉精”的危害在畜牧业生产中“瘦肉精”的使用仍屡禁不止，“瘦肉精”主要是一类叫做肾上腺素受体激动剂的统称，包括克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等多种药物，主要用于治疗支气管哮喘和慢性支气管炎等疾病[1]。
在养殖过程中使用“瘦肉精”，能促进动物机体的新陈代谢，降低骨骼肌脂肪，增加瘦肉率，改善肉质色泽。
长期食用含有“瘦肉精”残留的畜禽，药物在人体内蓄积到一定的量时，会导致人体出现各种不良反应。
例如，①急性中毒。
出现心悸，面颈、四肢肌肉颤动，手指震颤，足有沉感甚至不能站立，头痛、头晕、恶心、呕吐和乏力，脸部潮红，皮肤过敏性红色丘疹。
②诱发疾病。
原有高血压、冠心病、甲状腺功能亢进者上述症状更易发生。
如果机体耐受不良，长期有压力因素，患者猝死的概率就会升高[2]。
③心率失常。
与糖皮质激素一起使用会引起低血钾，诱发心率失常。
④恶性肿瘤。
持续长期食用，会导致人体代谢紊乱，有可能导致染色体畸变，甚至会诱发恶性肿瘤。
2 动物源性食品中“瘦肉精”的检测分析方法2.1 胶体金免疫层析法（快速检测卡）其应用了竞争抑制免疫层析的原理，样品经提取和净化后得到待测液，将待测液滴入样品孔后，样品溶液中的待检物质与金标抗体相结合，进而封闭金标抗体上待检物的抗原结合位点，阻止金标抗体与纤维素膜上待检物蛋白偶联物结合。
广东学生集体用餐配送单位实验室常规设备设施、项目、重点品种和重点检验项目、成品检验报告(模板)
附录A （资料性）
附录B （资料性）
注：1a.素菜和汤品不作菌落总数和大肠菌群检舱强制要求；b∙对专间空气、操作台面、人员手部的取样，可根据加工过程实际情况选择取样点。
对应的常规项目，可根据需要选择一个或多个实施监控。
2.本表中所列标准，以其最新版本（包括标准修改单）为准。
3.自检品种、检验项目、检验检测方法可根据食品安全风险进行动态调整。
附录C （资料性）
注：重点品种和重点检验项目根据食品安全风险进行动态调整，检验项目应采用食品安全国家标准、行业标准、地方标准等进行检验。
附录D
（资料性）
（企业名称）成品检验报告（模板）
检跄人：审核人：批准人：
注：以上为填写示例，请根据实际填写检睑项目、检验方法、要求或限量值。
盐酸克伦特罗,莱克多巴胺,沙丁胺醇联合检测卡.
瘦肉精三联检测卡(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇联合检测卡说明书【简介】瘦肉精是一类人工合成的β-受体激动剂,根据结构差异分为盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇。
因该类药物可以提高瘦肉率,减少脂肪沉积和促进动物生长,被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用。
人食用了饲喂瘦肉精的禽畜产品后,残留的瘦肉精可引起食物中毒,牲畜产品中瘦肉精残留已成为公众关注的社会问题。
因此,世界许多国家禁止在饲料中使用瘦肉精。
瘦肉精三联快速检测卡可同时测定猪尿中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇,提供生猪饲养时是否使用瘦肉精的依据。
【检测原理】瘦肉精三联快速检测卡是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计的一种快速检测试剂,可同时检测尿液样品中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三类瘦肉精。
具有简单、快速、无需特殊的仪器设备等特点,既可以在实验室进行,也可在养猪场、屠宰车间等实地进行测定。
由于样本需要量少、简便快速、适用于大量样本的筛查。
结果准确,检测盐酸克伦特罗灵敏度为3ppb、莱克多巴胺灵敏度为5ppb、沙丁胺醇的灵敏度为10ppb,准确率大于95%。
【样品处理】尿液可直接用于检测。
若尿样呈浑浊状,需先用滤纸过滤或离心,取清亮部分用于检测。
【操作步骤】1、从检测卡袋中取出所需的检测卡,放置室温复温,在卡上做好样品编号标记。
2、用一次性取样滴头吸取样品,滴入加样孔,每孔3滴(75ul,在加液过程中勿使液体溢出加样孔。
3、5-10分钟内观察结果,15分钟后的结果无效。
【结果】对照线(C和检测线(T同时出线,表明尿液样品中【储存条件】1、在4-30℃阴凉避光干燥处储存,忌冷冻。
2、在4-30℃下的环境温度操作。
3、有效期见包装盒侧面。
4、保存期间应避免光照、潮湿和过热。
检测卡保质期为12个月。
5、检测线T出现,产品失效。
【结果判断】泳道1:克伦特罗泳道2:莱克多巴胺泳道3:沙丁胺醇阴性(-:质控线出现、检测线清晰出现,表示样品中不含有瘦肉精或其浓度低于检测限。
食用农产品快检实验室的建设与管理
食用农产品快检实验室的建设与管理耿成钢，朱 寅，李明霞（常州市食品药品纤维质量监督检验中心，江苏常州 213022）摘 要：农贸市场销售的农产品大多为生鲜产品，传统的检测技术门槛高，而且检验周期长，快检技术的发展很好地填补了这方面的不足，以简便快捷的手段实现了食品安全的高效筛查，最大程度地保障了农副产品的正常交易。
为了落实监管义务，各个农贸市场都陆续配备了场地、设备和人员，在市场内部成立了食用农产品快速检测实验室，开展了快速检测工作，也起到了一定的实效。
但调研发现，受各种因素影响，快检实验室的实际运行情况良莠不齐，特别是管理经验的不足不仅影响着实验室的规范运转，还影响了检测数据的准确性。
本文从建设的场所布局、设备与耗材、人员和内部管理方面进行了全方位的阐述，以期为农贸市场食用农产品快速检验实验室的建设与管理提供参考。
关键词：食用农产品；快速检验实验室；建设与管理Construction and Management of Fast Testing Laboratory forEdible Agricultural ProductsGENG Chenggang, ZHU Yin, LI Mingxia(Changzhou Food and Drug Fiber Quality Supervision and Inspection Center, Changzhou 213022, China) Abstract: Most of the edible agricultural products in the farmers’ market are fresh products, the traditional detection technology not only has a high technical threshold, but also has a long inspection cycle. The development of rapid detection technology has well filled this deficiency, which realizes the efficient screening of food safety by a simple and convenient mean and guarantees the normal transaction of agricultural and sideline products to the greatest extent. In order to implement the regulatory obligations, each farmers’ market has been equipped with venues, equipment and personnel. A rapid testing laboratory for edible agricultural products has been established in the market, which has carried out rapid testing work and achieved certain effect. However, the survey found that due to various factors, the actual operation of the rapid testing laboratory is mixed. In particular, the lack of management experience not only affects the standardized operation of the laboratory, but also directly affects the accuracy of test data. This paper comprehensively expounds the construction site layout, equipment and consumables, personnel and internal management, in order to provide reference for the construction and management of fast testing laboratory for edible agricultural products in farmers’ market.Keywords: the edible agricultural products; fast testing laboratory; construction and management食品安全快速检测技术具有操作简单、快速灵敏、成本低廉等特点，在市场食品生产、流通领域等大范围、高频次快速筛查中起着不可替代的作用[1]。
关于“动物性食品中克伦特罗(瘦肉精)残留的检测”的实验分析
关于“动物性食品中克伦特罗(瘦肉精)残留的检测”的实验分析LINK链接猪肉是否含瘦肉精的迅速推断办法看该猪肉的脂肪(猪油)，如该猪肉在皮下就是瘦肉或仅有少量脂肪，则该猪肉就可能含有“瘦肉精(CLB)”。
含有“瘦肉精”的瘦肉外观特殊鲜红，纤维比较疏松，切成二三指宽的猪肉比较软，不能立于案，瘦肉与脂肪间有黄色液体流出，脂肪特殊薄。
而普通健康的瘦猪肉是淡红色，肉质弹性好，瘦肉与脂肪间没有任何液体流出。
购买时一定要看清该猪肉是否盖有检疫印章和检疫合格证实。
一、样品迅速检测办法 1.胶体金检测卡法(1)特点①操作容易、检测速度快，尿样检测时光约5min，组织约10min。
②无需其他仪器设备。
③样品量需求少。
④适用于大量样本的迅速步筛。
⑤结果推断容易明白。
(2)推断结果①阴性:C线条显色，T线条肉眼可见，无论色彩深浅均判为阴性。
②阳性:C线条显色，T线条不显色，判为阳性。
③无效:C线条不显色，无论T线条是否显色，该试纸均判为无效。
(3)检测对象猪尿液、组织；猪饲料；猪肉制品。
(4)适用单位生殖养殖场、屠宰场，农业、贸易等主管部门。
2.酶联免疫(ELISA)法(1)检测原理测定的基础是抗原抗体反应。
微孔板包被有针对克伦特罗IgG的包被抗体。
克伦特罗抗体被加入，经过孵育及洗涤步骤后，加入竞争性酶标志物、标准或试样溶液。
克伦特罗与竞争性酶标志物竞争克伦特罗抗体，没有与抗体衔接的克伦特罗酶标志物在洗涤步骤中除去。
将底物(过氧化尿素)和发色剂(四甲基联苯胺)加入孔中孵育，结合的标志酶将无色的发色剂转化为蓝色产物。
加入反应停止液后使色彩由蓝色改变为黄色。
在450nm处测量吸光度值，吸光度壁纸与克伦特罗浓度的自然对数成反比。
(2)试剂磷酸二氢钠、高氯酸、异丙醇、乙酸乙酯、0.1mol/L高氯酸溶液、1mol/L氢氧化钠溶液、pH=6的0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液、异丙醇+乙酸乙酯(40+60)、针孔式微孔过滤膜(0.45μm，水相)、克伦特罗酶联免疫试剂盒、96孔板(12调×8孔)包被有针对克伦特罗IgG的包被抗体、克伦特罗系列标准液(最少5倍比稀释第1页共4页。
动物源性食品中克伦特罗 莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法
附件6动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201706）1范围本方法规定了动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于猪肉、牛肉等动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速测定。
2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇进行定性判定。
3试剂与材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1试剂3.1.1甲醇：色谱纯。
3.1.2氢氧化钠。
3.1.3磷酸二氢钾。
3.1.4磷酸氢二钠。
3.1.5盐酸。
3.1.6氯化钠。
3.1.7氯化钾。
3.1.8三氮化钠。
3.1.9乙二胺四乙酸二钠。
3.1.10三羟甲基氨基甲烷，即Tris。
3.1.11乙酸乙酯。
3.1.12磷酸二氢钠。
3.1.13氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.2）4g，用水溶解并稀释至100mL。
3.1.14缓冲液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）0.3g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.5g，溶于约800mL水中，充分混匀后用盐酸（3.1.5）或氢氧化钠溶液（3.1.13）调节pH至7.4，用水稀释至1000mL，混匀。
4℃保存，有效期三个月。
3.1.15展开液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）2g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.44g，氯化钠（3.1.6）8g，氯化钾（3.1.7）0.2g，三氮化钠（3.1.8）0.5g，乙二胺四乙酸二钠（3.1.9）1.0g溶于约500mL水中，充分混匀后用水稀释至1000mL。
3.1.16Tris缓冲液（pH9.0，1mol/L）：称取Tris（3.1.10）121.14g，溶于约700mL水中，充分混匀后加入盐酸（3.1.5）调试pH至9.0后用水定容至1000mL。
利用液相色谱一质谱联用法同时测定饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克伦特罗
42 食品安全导刊 2011年5月刊ANAlySIS & TEST 分析与检测□ 珀金埃尔默仪器（上海）有限公司 供稿沙丁胺醇，莱克多巴胺和盐酸克伦特罗是饲料中主要检测的三种“瘦肉精”类添加物。
根据相关国家标准GB/T22147-2008的要求，这三种化合物应该采用液相色谱－质谱联法来进行检测。
本文中所介绍的方法主要根据GB/T 22147-2008的要求进行样品处理，并采用Perkinelmer Flexar SQ 300 MS液质联用仪进行分析检测，实现对三种化合物5分钟内的快速分离，其最低检出限可到0.5ppb，结果具有良好的重现性（RSD=2.6%）和较宽的线性范利用液相色谱－质谱联用法同时测定饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克伦特罗围（0.5～100ppb）。
实验与方法实验材料仪器：Pe r ki n el m e r Flexa r 10 UHPLC SQ 300 MS；试剂：沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸克伦特罗标准品、纯度>98%，超纯水、甲醇、乙腈（色谱纯），甲酸氨（>99.995%），甲酸（>98%），浓磷酸、冰乙酸、硫化钠（分析纯）；样品处理和标样配制：参照国标GB/T 22147-2008。
液相条件：流动相：A：0.1mol/L甲酸氨水溶液（甲酸调pH3.8），B: 乙腈。
流动相梯度：见表1。
色谱柱：Perkinelmer Brownlee A n a l y t i c a l D B C 18 1.9µm50×2.1mm；进样量：4µL；紫外波长：244nm。
本图为Perkinelmer Flexar SQ 300MS表1 流动相梯度Copyright©博看网 . All Rights Reserved.May 2011 CHINA FOOD SAFETY 43分析与检测 ANAlySIS & TEST质谱条件：毛细管出口电压：100V ；脱溶剂温度：300℃；氮气流速：10L/min；扫描: 100～500m/z；选择离子：沙丁胺醇：240m/z；莱克多巴胺：302m/z；盐酸克伦特罗：277m/z。
KJ201706 动物食品 瘦肉精胶体金
动物源性食品中瘦肉精胶体金免疫层析法（KJ201706）1范围本方法规定了动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于猪肉、牛肉等动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速测定。
2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇进行定性判定。
3试剂与材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1试剂3.1.1甲醇：色谱纯。
3.1.2氢氧化钠。
3.1.3磷酸二氢钾。
3.1.4磷酸氢二钠。
3.1.5盐酸。
3.1.6氯化钠。
3.1.7氯化钾。
3.1.8三氮化钠。
3.1.9乙二胺四乙酸二钠。
3.1.10三羟甲基氨基甲烷，即Tris。
3.1.11乙酸乙酯。
3.1.12磷酸二氢钠。
3.1.13氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.2）4g，用水溶解并稀释至100mL。
3.1.14缓冲液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）0.3g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.5g，溶于约800mL水中，充分混匀后用盐酸（3.1.5）或氢氧化钠溶液（3.1.13）调节pH至7.4，用水稀释至1000mL，混匀。
4℃保存，有效期三个月。
3.1.15展开液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）2g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.44g，氯化钠（3.1.6）8g，氯化钾（3.1.7）0.2g，三氮化钠（3.1.8）0.5g，乙二胺四乙酸二钠（3.1.9）1.0g溶于约500mL水中，充分混匀后用水稀释至1000mL。
3.1.16Tris缓冲液（pH9.0，1mol/L）：称取Tris（3.1.10）121.14g，溶于约700mL水中，充分混匀后加入盐酸（3.1.5）调试pH至9.0后用水定容至1000mL。
畜产品中莱克多巴胺残留的快速检测
在 ４ｈ ８ 后测不到放射性残留，但肝脏和肾脏仍可测 到放射性残留，而 ０ 休药期莱克多 巴胺在猪肝脏中 的总残 留为脂 肪组织 的 １ 倍 。美 国 Ｆ Ａ设定 的人 ９ Ｄ 每 日最 大摄 人 量 （ Ｄ ） １ ５ ｇｋ ， Ａ Ｉ为 ． ／ｇ推算 出的组 织 ２ 中 药 物 残 留 最 高 限 量 为 肌 肉 中 ０２ｐ ｍ， 脂 肪 ． ｐ ５ １ ｐｍ， ． ｐ 肾脏 １ ｐｍ， 脏 ０ ５ｐ 同 时设 定 莱 克 ５ ．ｐ 肝 ５ ． ｐｍ， ７ 多巴胺的休药期为 ０ ， ｄ 即上市前无须休药期。 １９ 年 以来 ， 国农 业部等 相关部 门多次发 文 ， ９７ 我 禁止生产和使用“ 肉精”但是仍有很多瘦 肉精 中 瘦 ， 毒事 件发生 ， 重威胁 消费者 的健 康 。因此检测 动物 严
试 验 研 究
畜产品 中菜 克多巴股 残 留的快速检 测
邱 建 琴 ，左 晓磊
（ 河北 省 石家庄 市 畜牧水 产局 。石 家庄 ００ ０ ） ５ ０ ０
摘 要 ：莱克 多巴胺属于 １ 类肾上腺激素 ， ３ 因具有“ 减脂增 肉” 的作用而被广泛用于畜牧生产 中， 但在动物机体 中有较大的残留时会严重威胁人类健康。 检测莱克多巴胺有 多种方法。 Ｅ Ｉ 而 ＬＳ Ａ应用 抗原 抗体 反应 ， 够对猪 尿 、 肝 中的 莱克 多 巴胺 残 留快速 进行 检 测 筛选 ， 而有 效控制 瘦 肉精在 能 猪 从
作 者 简 介 ： 建 琴 （９６ ， 邱 １５ ～） 高级 畜牧 师 ， 北鹿 泉 河 人 ，主要从事动物营养及 畜产品等方面研究检 测管 理 工作 。
甲醇（ 分析纯 、 ０ ； ｍ ｏ ／ＨＣ ； ｍ ｏ Ｈ— １ ％） ０ ｍ ＬＬ Ｌ１ ｍ ＵＬ ０ ５ ０
瘦肉精三联检测卡
瘦肉精三联检测卡(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇联合检测卡）说明书【简介】瘦肉精是一类人工合成的β-受体激动剂，根据结构差异分为盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇。
因该类药物可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用。
人食用了饲喂瘦肉精的禽畜产品后，残留的瘦肉精可引起食物中毒，牲畜产品中瘦肉精残留已成为公众关注的社会问题。
因此，世界许多国家禁止在饲料中使用瘦肉精。
瘦肉精三联快速检测卡可同时测定猪尿中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇，提供生猪饲养时是否使用瘦肉精的依据。
【检测原理】瘦肉精三联快速检测卡是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计的一种快速检测试剂，可同时检测尿液样品中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三类瘦肉精。
具有简单、快速、无需特殊的仪器设备等特点，既可以在实验室进行，也可在养猪场、屠宰车间等实地进行测定。
由于样本需要量少、简便快速、适用于大量样本的筛查。
结果准确，检测盐酸克伦特罗灵敏度为3ppb、莱克多巴胺灵敏度为5ppb、沙丁胺醇的灵敏度为10ppb，准确率大于95%。
【样品处理】尿液可直接用于检测。
若尿样呈浑浊状，需先用滤纸过滤或离心，取清亮部分用于检测。
【操作步骤】1、从检测卡袋中取出所需的检测卡，放置室温复温，在卡上做好样品编号标记。
2、用一次性取样滴头吸取样品，滴入加样孔，每孔3滴(75ul)，在加液过程中勿使液体溢出加样孔。
3、5-10分钟内观察结果，15分钟后的结果无效。
【结果】对照线(C)和检测线（T）同时出线，表明尿液样品中【储存条件】1、在4-30℃阴凉避光干燥处储存，忌冷冻。
2、在4-30℃下的环境温度操作。
3、有效期见包装盒侧面。
4、保存期间应避免光照、潮湿和过热。
检测卡保质期为12个月。
5、检测线T出现，产品失效。
【结果判断】泳道1：克伦特罗泳道2：莱克多巴胺泳道3：沙丁胺醇阴性（-）：质控线出现、检测线清晰出现，表示样品中不含有瘦肉精或其浓度低于检测限。
重大活动食品安全快速检测工作规程试行
重大活动食品安全快速检测工作规程（试行）一、适用范围本规程适用于浙江省重大活动场所餐饮食品、餐饮具、加工工具或容器、环境及人员等快速检测工作，包括重大活动前食品安全风险评估及活动期间快检工作。
二、工作目标确保有序开展食品及相关产品快检工作，有效防范食品安全风险隐患，不发生食品安全事故。
三、工作内容（一）餐饮场所风险评估快检在重大活动开始前一周，承接机构快检工作组联合属地市场监督管理部门对定点接待酒店的重点场所环境（如专间）、用具表面洁净度（如餐具、成品容器）、人员手部、鸡蛋、海水产品原料等进行快速检测，并出具风险评估报告。
必要时, 对加工工艺复杂或风险度高的品种模拟加工后成品进行抽样检测。
风险评估快检项目及要求参考附件8.1。
（二）餐饮食材快检在重大活动期间，承接机构快检工作组协同驻点监管人员对定点接待酒店每日采购的餐饮食材、餐饮具、烹饪食品等进行快检，项目及检测方法参考附件8.2。
四、工作流程（一）制定方案承接机构应成立快检工作组，配备与快检工作量相适应的人员、设备、试剂和车辆等，并且参考本规范检测项目要求（见附件8.1~8∙2）,结合保障定点接待酒店的实际情况，制定重大活动食品安全快检工作方案。
（二）样品抽取食品快检工作人员协助驻点监管人员抽样，主要在食材待验区、仓库、后厨、保洁柜等地点，同时在现场填写《食品快速检测抽样单》（见附件8.3）,抽样单上须有抽样人员签字、餐饮场所食品安全负责人签字或盖章。
抽样人员随机从同一来源、同一批次的食材中抽取具有一定代表性的样品，清晰填写抽样信息单，所抽样品用洁净、无污染的专用食品抽样袋封装，并做好相关标识及时与快检人员交接样品，防止样品混乱。
（三）样品制备和保存样品制备应使用洁净的制样工具，制成的样品应盛装在洁净的容器或样品袋中，并且将样品分为两份，一份用于检测和复验，一份用于留样。
在样品制备、流转、保存过程中应对样品进行唯一性标识, 防止样品混淆。
果蔬样品应冷藏保存，水产品及畜禽产品等样品应冷冻保存，其他样品按规定的储存条件保存。
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KJ201706动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201706）1范围本方法规定了动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于猪肉、牛肉等动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速测定。
2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇进行定性判定。
3试剂与材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1试剂3.1.1甲醇：色谱纯。
3.1.2氢氧化钠。
3.1.3磷酸二氢钾。
3.1.4磷酸氢二钠。
3.1.5盐酸。
3.1.6氯化钠。
3.1.7氯化钾。
3.1.8三氮化钠。
3.1.9乙二胺四乙酸二钠。
3.1.10三羟甲基氨基甲烷，即Tris。
3.1.11乙酸乙酯。
3.1.12磷酸二氢钠。
3.1.13氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.2）4g，用水溶解并稀释至100mL。
3.1.14缓冲液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）0.3g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.5g，溶于约800mL水中，充分混匀后用盐酸（3.1.5）或氢氧化钠溶液（3.1.13）调节pH至7.4，用水稀释至1000mL，混匀。
4℃保存，有效期三个月。
3.1.15展开液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）2g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.44g，氯化钠（3.1.6）8g，氯化钾（3.1.7）0.2g，三氮化钠（3.1.8）0.5g，乙二胺四乙酸二钠（3.1.9）1.0g溶于约500mL水中，充分混匀后用水稀释至1000mL。
3.1.16Tris缓冲液（pH9.0，1mol/L）：称取Tris（3.1.10）121.14g，溶于约700mL水中，充分混匀后加入盐酸（3.1.5）调试pH至9.0后用水定容至1000mL。
3.1.17Tris缓冲液（pH9.0，10mmol/L）：精密量取1mol/LTris 缓冲液（3.1.16）1mL，用水稀释定容至100mL。
3.1.18磷酸二氢钠溶液（0.2mol/L）：称取磷酸二氢钠（3.1.12）24.0g，用水溶解并稀释至1000mL。
3.1.19磷酸氢二钠溶液（0.2mol/L）：称取磷酸氢二钠（3.1.4）28.4g，用水溶解并稀释至1000mL。
3.1.20磷酸盐缓冲液（pH7.4，0.2mol/L）：量取磷酸二氢钠溶液（3.1.18）19mL，加入81mL磷酸氢二钠溶液（3.1.19），混匀。
3.1.21磷酸盐缓冲液（pH7.4，10mmol/L）：精密量取0.2mol/L磷酸盐缓冲液（3.1.20）50mL，用水稀释至1000mL。
3.2参考物质克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥97%。
表1克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量注：或等同可溯源物质。
3.3标准溶液配制3.3.1标准储备液：精密称取适量克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质（3.2），分别置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成浓度为100μg/mL的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准储备液。
-18℃保存，有效期一年。
3.3.2克伦特罗标准中间液（1μg/mL）：精密量取克伦特罗标准储备液（100μg/mL）（3.3.1）1mL置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的克伦特罗标准中间液。
临用新制。
3.3.3克伦特罗标准工作液（20ng/mL）：精密量取克伦特罗标准中间液（1μg/mL）（3.3.2）1mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为20ng/mL的克伦特罗标准工作液。
临用新制。
3.3.4莱克多巴胺标准中间液（1μg/mL）：精密量取莱克多巴胺标准储备液（100μg/mL）（3.3.1）1mL置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的莱克多巴胺标准中间液。
临用新制。
3.3.5莱克多巴胺标准工作液（20ng/mL）：精密量取莱克多巴胺标准中间液（1μg/mL）（3.3.4）1mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为20ng/mL的莱克多巴胺标准工作液。
临用新制。
3.3.6沙丁胺醇胺标准中间液（1μg/mL）：精密量取沙丁胺醇标准储备液（100μg/mL）（3.3.1）1mL置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的沙丁胺醇标准中间液。
临用新制。
3.3.7沙丁胺醇标准工作液（20ng/mL）：精密量取沙丁胺醇标准中间液（1μg/mL）（3.3.6）1mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为20ng/mL的沙丁胺醇标准工作液。
临用新制。
3.4材料3.4.1克伦特罗试剂盒/检测卡（条）：含胶体金试纸条及配套的试剂。
3.4.2莱克多巴胺试剂盒/检测卡（条）：含胶体金试纸条及配套的试剂。
3.4.3沙丁胺醇试剂盒/检测卡（条）：含胶体金试纸条及配套的试剂。
3.4.4固相萃取柱：丙烯酸系弱酸性阳离子交换柱。
4仪器和设备4.1电子天平：感量为0.01g和0.0001g。
4.2组织粉碎机。
4.3水浴箱。
4.4离心机：转速≥4000r/min。
4.5移液器：10µL，100µL，1mL，5mL。
4.6读数仪：产品配套可使用的检测仪器（可选）。
4.7固相萃取装置（可选）。
4.8其他产品说明书操作中需用的仪器。
4.9环境条件：温度10—40℃，湿度≤80%。
5分析步骤5.1试样制备取适量具有代表性样品的可食部分，充分粉碎混匀。
5.2试样提取和净化称取适量试样，按照方法一（5.2.1）或方法二（5.2.2）提取步骤分别对空白试样、加标质控样品、待测样进行处理。
5.2.1方法一（隔水煮法）称取粉碎混匀的样品5g（精确至0.01g）于50mL离心管，置90℃水浴中加热20min至离心管中可清晰看见有组织液渗透，4000r/min 离心10min，将上清液转至另一离心管，重复离心操作一次。
准确量取上清液900μL，加入缓冲液（3.1.14）100μL混匀，即得待测液。
本方法推荐水浴加热，也可按照试剂盒说明书进行操作。
5.2.2方法二（固相萃取法）称取粉碎混匀的样品5g（精确至0.01g）于50mL离心管，加入10mmol/LTris缓冲液（3.1.17）5mL，剧烈振摇5min，放置20min，加入乙酸乙酯（3.1.11）10mL，剧烈振摇1min。
以4000r/min离心2min，上清液待净化。
连接好固相萃取装置（4.7），并在固相萃取柱（3.4.4）上方连接30mL注射器针筒，将上述上清液全部倒入30mL针筒中，用手缓慢推压注射器活塞，控制液体流速约1滴/秒，使注射器中液体全部流过固相萃取柱，尽可能将固相萃取柱中溶液去除干净。
将固相萃取柱下方的接液管更换为洁净的离心管，向固相萃取柱中加入0.5mL10mmol/L磷酸盐缓冲液（3.1.21）。
用手缓慢推压注射器活塞，控制液体流速约1滴/秒，使固相萃取柱中的液体全部流至离心管中，即得待测液。
注：试样制备过程可按照试剂盒说明书进行操作，不做限定。
5.3测定步骤5.3.1检测卡与金标微孔测定步骤测试前，将未开封的检测卡恢复至室温。
吸取100μL上述待测液于金标微孔中，上下抽吸5—10次直至微孔试剂混合均匀。
室温温育5min，将反应液全部加入到检测卡的加样孔中，1min后加入1滴展开液（3.1.15）。
检测卡加入样本后10min进行结果判定。
5.3.2无金标微孔时，检测卡测定步骤测试前，将未开封的检测卡恢复至室温。
吸取100μL上述待测液直接加入到检测卡加样孔中，1min后加入1滴展开液（3.1.15）。
检测卡加入样本后10min后进行结果判定。
5.3.3试纸条与金标微孔测定步骤测试前，将未开封的试纸条恢复至室温。
吸取100μL上述待测液于金标微孔中，上下抽吸5—10次直至微孔试剂混合均匀。
室温温育1min，将试纸条样品垫插入到金标微孔中。
室温温育4min，从微孔中取出试纸条，去掉试纸条下端样品垫，进行结果判定。
注：1.测定步骤建议按照试剂盒说明书进行操作。
2.结果判定建议使用读数仪，读数仪的具体使用参照仪器使用说明书。
5.4质控试验每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。
5.4.1空白试验称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。
5.4.2加标质控试验称取空白试样5g（精确至0.01g）置于50mL离心管中，加入适量克伦特罗标准工作液（20ng/ml）（3.3.3），使克伦特罗浓度为0.5μg/kg，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。
称取空白试样5g（精确至0.01g）置于50mL离心管中，加入适量莱克多巴胺标准工作液（20ng/ml）（3.3.3），使莱克多巴胺浓度为0.5μg/kg，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。
准确称取空白试样5g（精确至0.01g）置于50mL离心管中，加入适量沙丁胺醇标准工作液（20ng/ml）（3.3.3），使沙丁胺醇浓度为0.5μg/kg，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。
6结果判定要求6.1读数仪测定结果通过仪器对结果进行判读。
6.1.1无效当质控线（C线）不显色时，无论检测线（T线）是否显色，均表示实验结果无效。
6.1.2阳性结果若检测结果显示“+”（阳性），表示试样中含有待测组分且其含量大于等于方法检测限。
6.1.3阴性结果若检测结果显示“-”（阴性），表示试样中不含待测组分或其含量低于方法检测限。
6.2目视判定通过对比质控线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。
6.2.1无效当质控线（C线）不显色时，无论检测线（T线）是否显色，均表示实验结果无效。
6.2.2阳性结果质控线（C线）显色，若检测线（T线）不出现或出现但颜色浅于质控线（C线），表示试样中含有待测组分且其含量高于方法检测限，判为阳性。
6.2.3阴性结果质控线（C线）显色，若检测线（T线）颜色深于或等于质控线（C线），表示试样中不含待测组分或其含量低于方法检测限，判为阴性。
6.3质控试验要求空白试样测定结果应为阴性，加标质控样品测定结果应为阳性。