红细胞血型血清学技术的发展和应用资料
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红细胞血型血清学技术
（二）红细胞悬液的配制
用于血型鉴定、配血等的红细胞至少要 用大量生理盐水洗一次，其目的是通过 洗涤可以去除红细胞表面的下列物质：
1) 少量的血浆 蛋白；如纤维 蛋白原等； 2)已溶解红细 胞的基质；他 们有竞争抗体 的作用。
3)可溶性的抑 制物质 ，如 A、 B、H、Lewis 等血型物质； 4)抗凝剂；他 们有抗补体作 用。
练习题：
1.用于抗人球蛋白试验的标本要抗凝，否则： A．C3b 容易致敏红细胞造成抗人球蛋白试验假 阳性。 B．C4b容易致敏红细胞造成抗人球蛋白试验假阳 性。 C．血型物质吸附于红细胞造成试验结果假阳性. D．血型抗体致敏红细胞造成抗人球蛋白试验假 阳性。 E．A和B。
2 ．血型血清学试验中，关于红细胞悬液使用 浓度正确的是： A．2%的红细胞悬液一般用于滴定抗体效价。 B．5%的红细胞悬液一般用于血型鉴定、配血 试验及抗人球蛋白试验等大多数血型血清学试 验。 C．10% 的红细胞悬液一般用于测定抗体的亲 和力试验。 D．血型血清学试验与红细胞悬液使用浓度无 关。 E．A、B及C均正确。
（一）标本采集 1．红细胞标本
★特殊情况： 用于抗球蛋试验（ Coomb’s 试验）的 标本要抗凝，否则，补体C3b、C4b容 易致敏红细胞造成抗球蛋试验 （Coomb’s试验）假阳性。 存在有受Ca2+抑制的自身抗体时，不 宜用抗凝血液作为红细胞抗原标本。
（一）标本采集 2．血清标标本
盐水介质凝集试验
原 理
盐水介质中红细胞上的抗原决定簇与 相应抗体分子上的抗原结合部位结合，交 叉连结形成肉眼可见的凝集块。
★用 途：
盐水介质凝集试验用于 IgM 抗体 的检出、鉴定、盐水配血试验。 盐水抗体鉴定的血型抗原 ，如 ABO、MN、P等血型系统的抗原。
第八章 红细胞血型
功能区的作用有： ①高变区是结合抗原的部位； ②恒变区决定抗体蛋白自身性质； ③ IgG的CH2 和IgM的 CH3 具有补体 C1q
结合位点，可启动补体活化经典途径； ④IgG 可通过胎盘；
人类Ig 根据其重链稳定区的分子 结构和抗原特异性的不同，分为 五类：
IgG、 IgA、 IgM、 IgD、 IgE
IgG
温度升高时（ 370C ）抗体滴度高 只能部分被可溶性血型物质中和 分子量 16万 能通过胎盘 通常在盐水中不发生聚集，仅在酶 处理或白蛋白溶液中发生聚集
红细胞血型检测
（一 ） 概念
在红细胞的悬液中加入相对应的抗血清，抗 体在细胞抗原决定族之间形成桥梁，使细胞联结 成块，这种现象称为红细胞凝集反应
2.半抗原（hapten，又称不完全抗原 incomplete antigen ） 无免疫原性，只有 抗原性的物质。
3.载体（carrier） 赋予半抗原以免疫 原性的蛋白质。
半抗原 + 蛋白质 完全抗原
（一）红细胞血型抗原分类
红细胞血型抗原根据化学结构可分为3类
类型
型特异性决定族
例
糖脂质
寡糖
间接抗球蛋白试验的原理
待分型检测的红细胞与抗血清反应，相应血型抗 体使红细胞致 敏。然后加入抗人球蛋白血清，抗人 球蛋白抗体与致敏红细胞上的血型抗体发生抗原抗 体反应，如同在致敏红细胞间‘ 搭桥’，使红细胞 出 现可见凝集，证明待测红细胞上具有与抗血型抗 体相对应的抗原。阴 性结果则证明待测红细胞上没 有与血型抗体相对应的抗原，综合红细 胞的反应结 果，判断红细胞的血型。
动电位的大小取决于红细胞表面负电荷的程 度与介质中的离子浓度，也决定了红细胞间 距，与凝集反应的发生有密切关系
结合位点，可启动补体活化经典途径； ④IgG 可通过胎盘；
人类Ig 根据其重链稳定区的分子 结构和抗原特异性的不同，分为 五类：
IgG、 IgA、 IgM、 IgD、 IgE
IgG
温度升高时（ 370C ）抗体滴度高 只能部分被可溶性血型物质中和 分子量 16万 能通过胎盘 通常在盐水中不发生聚集，仅在酶 处理或白蛋白溶液中发生聚集
红细胞血型检测
（一 ） 概念
在红细胞的悬液中加入相对应的抗血清，抗 体在细胞抗原决定族之间形成桥梁，使细胞联结 成块，这种现象称为红细胞凝集反应
2.半抗原（hapten，又称不完全抗原 incomplete antigen ） 无免疫原性，只有 抗原性的物质。
3.载体（carrier） 赋予半抗原以免疫 原性的蛋白质。
半抗原 + 蛋白质 完全抗原
（一）红细胞血型抗原分类
红细胞血型抗原根据化学结构可分为3类
类型
型特异性决定族
例
糖脂质
寡糖
间接抗球蛋白试验的原理
待分型检测的红细胞与抗血清反应，相应血型抗 体使红细胞致 敏。然后加入抗人球蛋白血清，抗人 球蛋白抗体与致敏红细胞上的血型抗体发生抗原抗 体反应，如同在致敏红细胞间‘ 搭桥’，使红细胞 出 现可见凝集，证明待测红细胞上具有与抗血型抗 体相对应的抗原。阴 性结果则证明待测红细胞上没 有与血型抗体相对应的抗原，综合红细 胞的反应结 果，判断红细胞的血型。
动电位的大小取决于红细胞表面负电荷的程 度与介质中的离子浓度，也决定了红细胞间 距，与凝集反应的发生有密切关系
红细胞血型血清学检测技术规范-孙续丽
AABB•: 有AA输B血B 史Sta或nd/和ard妊娠21史st e的d 献血者需要进行红细
胞血型抗体鉴定(具临床意义的抗体)
红细胞血型抗体鉴定
主要内容
试剂: 用于筛选的试剂红
细胞必须来自至少两名
• 中国输血技术操作规程无种(关细血胞O站型为部供R分1者R，1)，1要9另9求7一年一种版
• 中国输血技术操作规程为(R血2R站2表部型分，)且(征表求达意下)
鉴定其他弱或弱B亚型
I. 红• 细中胞国与输抗血-A技、术抗操-A作1规、程抗(-血B及站抗部-A分B)的19凝97集年程版度 II. 红• 细中胞国上输的血H技物术质操活作性规的程强(血弱站部分)(征求意) III. 血• 清A中A是BB否T存ec在hn抗ic-aAl 1M和a不nu规al则14抗th-Bed IV. 分• 泌A型A人BB唾S液ta中ndAar、dB2、1sHt e物d 质
ABO血型鉴定
主要内容 原理: 根据红细胞上和血清(或血浆)中有或无A抗原或/
和B抗原及其抗体, 将血型分为A、B、AB及O型。
• 中国输血技术操作规程(血站部分)1997年版 • 中国输血技术操作规程(血站部分)(征求意) • AABB Technical Manual 14th ed • AABB Standard 21st ed
•
AABB
Technical
M an列Duia抗a,lk原1, :F4Mytha,,eNFdy, Sb,,
s, Mur, Jka, Jkb
,
• AABB Standard 21st Leeda。并尽可能多的包含
Duffy, Kidd血型系统中
主要抗原的纯合子以及
低频率抗原。
红细胞血型抗体鉴定
胞血型抗体鉴定(具临床意义的抗体)
红细胞血型抗体鉴定
主要内容
试剂: 用于筛选的试剂红
细胞必须来自至少两名
• 中国输血技术操作规程无种(关细血胞O站型为部供R分1者R，1)，1要9另9求7一年一种版
• 中国输血技术操作规程为(R血2R站2表部型分，)且(征表求达意下)
鉴定其他弱或弱B亚型
I. 红• 细中胞国与输抗血-A技、术抗操-A作1规、程抗(-血B及站抗部-A分B)的19凝97集年程版度 II. 红• 细中胞国上输的血H技物术质操活作性规的程强(血弱站部分)(征求意) III. 血• 清A中A是BB否T存ec在hn抗ic-aAl 1M和a不nu规al则14抗th-Bed IV. 分• 泌A型A人BB唾S液ta中ndAar、dB2、1sHt e物d 质
ABO血型鉴定
主要内容 原理: 根据红细胞上和血清(或血浆)中有或无A抗原或/
和B抗原及其抗体, 将血型分为A、B、AB及O型。
• 中国输血技术操作规程(血站部分)1997年版 • 中国输血技术操作规程(血站部分)(征求意) • AABB Technical Manual 14th ed • AABB Standard 21st ed
•
AABB
Technical
M an列Duia抗a,lk原1, :F4Mytha,,eNFdy, Sb,,
s, Mur, Jka, Jkb
,
• AABB Standard 21st Leeda。并尽可能多的包含
Duffy, Kidd血型系统中
主要抗原的纯合子以及
低频率抗原。
红细胞血型抗体鉴定
红细胞血型系统分析与发展概述
血型抗原 是红细胞上的化学构型，依生化性质分 为：
1、决定簇是糖分子的血型抗原 ABH，Lweis。。 。，也称组织血型抗原.
不仅分布红细胞表面，而且存在于大部分上皮细 胞，初级感觉神经元，各种体液和分泌物中。
出生后逐渐发育成熟。
红细胞血型系统分析和发展概述
2、决定簇为多肽的有：MNS、Rh、Kidd等血型系统 其化学组成为蛋白质、糖蛋白、脂蛋白 仅分布在红细胞及其他血细胞膜上 大多数血型抗原出生时已经成熟，但抗原性较弱
A基因和B基因对于O基因是显性基因。
红细胞血型系统分析和发展概述
红细胞血型系统分析和发展概述
ABO血型的遗传
红细胞血型系统分析和发展概述
（三）ABO血型的鉴定 血液中持续存在ABO抗体（除新生儿） 正定型（查抗原） 用已知的标准抗A和抗B血清来测定
红细胞上有无相应的A抗原和B抗原 反定型（查抗体） 用已知的标准A型红细胞和标准B型
1、血型的概念 狭义只指存在于红细胞上的特异性同种抗原。 广义应包括血液各成分的抗原在个体间出现的差
异 已经发现并为国际输血协会承认的血型系统有30
种，其中最重要的两种为“ABO血型系统”和“Rh血 型系统”。 血型是血液系统的一种遗传多态性，血型系 统基因是独立遗传的，是产生抗原抗体的遗传性 状。
在盐水介质中能够直接凝集红细胞的抗体，为完全抗体。 A型、B型的ABO抗体以IgM为主。 2、IgG抗体是唯一能通过胎盘屏障的免疫球蛋白，有结
合补体的能力。 不完全抗体多数为IgG类，在盐水介质中能使红细胞致
敏，需通过抗人球蛋白或其他介质使红细胞凝集。 O型人抗-A,B以IgG类抗体为主。
红细胞血型系统分析和发展概述
红细胞血型系统分析和发展概述
1、决定簇是糖分子的血型抗原 ABH，Lweis。。 。，也称组织血型抗原.
不仅分布红细胞表面，而且存在于大部分上皮细 胞，初级感觉神经元，各种体液和分泌物中。
出生后逐渐发育成熟。
红细胞血型系统分析和发展概述
2、决定簇为多肽的有：MNS、Rh、Kidd等血型系统 其化学组成为蛋白质、糖蛋白、脂蛋白 仅分布在红细胞及其他血细胞膜上 大多数血型抗原出生时已经成熟，但抗原性较弱
A基因和B基因对于O基因是显性基因。
红细胞血型系统分析和发展概述
红细胞血型系统分析和发展概述
ABO血型的遗传
红细胞血型系统分析和发展概述
（三）ABO血型的鉴定 血液中持续存在ABO抗体（除新生儿） 正定型（查抗原） 用已知的标准抗A和抗B血清来测定
红细胞上有无相应的A抗原和B抗原 反定型（查抗体） 用已知的标准A型红细胞和标准B型
1、血型的概念 狭义只指存在于红细胞上的特异性同种抗原。 广义应包括血液各成分的抗原在个体间出现的差
异 已经发现并为国际输血协会承认的血型系统有30
种，其中最重要的两种为“ABO血型系统”和“Rh血 型系统”。 血型是血液系统的一种遗传多态性，血型系 统基因是独立遗传的，是产生抗原抗体的遗传性 状。
在盐水介质中能够直接凝集红细胞的抗体，为完全抗体。 A型、B型的ABO抗体以IgM为主。 2、IgG抗体是唯一能通过胎盘屏障的免疫球蛋白，有结
合补体的能力。 不完全抗体多数为IgG类，在盐水介质中能使红细胞致
敏，需通过抗人球蛋白或其他介质使红细胞凝集。 O型人抗-A,B以IgG类抗体为主。
红细胞血型系统分析和发展概述
红细胞血型系统分析和发展概述
鉴定血型的实验报告
鉴定血型的实验报告一、实验目的本实验旨在通过血清学方法鉴定一个人的血型，以便了解其红细胞的抗原和抗体特性，以及输血或接受器官移植时的兼容性。
二、实验原理血型鉴定是基于抗原和抗体的特异性反应。
红细胞表面所携带的抗原与血清中的抗体相互作用，通过观察是否发生凝集反应来判断血型。
本实验将采用经典的ABO血型系统进行鉴定。
三、实验步骤1、准备试剂和器材：抗A抗体、抗B抗体、抗D抗体、生理盐水、微量移液器、离心机、试管、滴管等。
2、采集样本：使用微量移液器从受试者静脉中抽取50微升血液。
3、实验操作：a.将50微升血液分别加入抗A抗体和抗B抗体试管中；b.用生理盐水将试管中的血液稀释至100微升；c.用滴管缓慢加入5滴抗D抗体；d.摇匀后，观察凝集反应；e.用离心机分离血清和红细胞，观察结果。
4、结果记录：记录每个试管中的凝集反应情况，包括凝集颗粒的数量、颜色变化等。
5、结果分析：根据记录的凝集反应情况，判断受试者的血型。
四、实验结果与分析1、实验结果：在加入抗A抗体的试管中，受试者血液呈现凝集反应，形成明显的凝集颗粒；而在加入抗B抗体的试管中，血液未发生凝集反应。
2、结果分析：根据ABO血型系统的特点，受试者的红细胞表面可能携带A抗原，而未携带B抗原。
因此，可以初步判断受试者为A型血。
为了进一步确认血型，可以继续进行Rh血型等其他血型系统的鉴定。
五、结论本实验通过血清学方法成功鉴定了受试者的ABO血型为A型。
这一结果对于了解受试者的红细胞抗原和抗体特性，以及输血或接受器官移植时的兼容性具有重要意义。
在实际应用中，鉴定血型是确保医疗安全和有效治疗的关键环节之一。
红细胞血型系统课件一、引言红细胞血型系统是生物学和医学领域中的一个重要概念。
红细胞血型是指红细胞表面抗原的特异性，这些抗原在个体之间存在差异。
了解红细胞血型系统对于临床输血、器官移植、新生儿溶血病等疾病的诊断和治疗具有重要意义。
本课件将介绍红细胞血型系统的基本概念、分类和应用。
红细胞血型检测技术
1）结果敏感、准确：灵敏度、准确度比传统的玻片 法和试管法液体介质中的凝集试验更高，重复性好， 肉眼观察清晰明确，易于判定且客观，避免了因经验 不足对结果判断的影响。
2）结果保存时间长：在室温条件下，凝胶试剂卡一 般可保存数天甚至数周，也可以拍照保留试验结果图 像存档备用。
3）标本用量少：标本用量为试管法的1/10～1/5，尤 其有利于新生儿及某些特殊血液标本的检测。
第二章 红细胞血型检测技术 P36
血型血清学检验的重要性
血型血清学检验是输血前检查的必要内容，是 输血安全的重要保证，同时也是新生儿溶血病、 器官移植等重要的实验室检查。
红细胞抗原抗体反应基本理论
红细胞抗原与相应抗体无论是在体内或是在体 外，均可发生反应。
体外试验红细胞抗原抗体反应的本质是凝集反 应，其中抗体以前多从人血清中提取（但现在 的抗A、抗B试剂一般为基因工程制备的单克 隆抗体），又称为血清学试验。
微柱凝胶试剂卡分类
应用
中性凝胶试剂卡：用于ABO血型正反定型、RhD抗原 测定、其他血型抗原鉴定及盐水介质交叉配血等；
特异性凝胶试剂卡：用于ABO血型正定型、RhD抗原 测定和其他血型鉴定；
抗球蛋白凝胶试剂卡：用于IgG抗D抗体鉴定RhD抗原， 红细胞不规则抗体筛查和交叉配血等。
卡式法的优点：
2. 原理 ：葡聚糖凝胶颗粒-凝胶微柱-微柱凝胶卡。
是利用凝胶颗粒之间的间隙形成的分子筛作用，在微柱凝胶介质 中红细胞与相应抗体结合，经低速离心，凝集成块的红细胞因体 积大被凝胶阻滞不能通过凝胶层，留于凝胶介质的上层或中间， 即阳性反应；未凝集游离红细胞因体积小而通过凝胶之间的间隙 沉积于微柱凝胶检测管底部，形成细胞扣，即阴性反应。
7）药物：药物如低分子右旋糖酐、聚乙烯吡 咯烷酮及静脉注射某些造影剂，血液粘滞性增 高，可使红细胞凝集而类似凝集表现。
2）结果保存时间长：在室温条件下，凝胶试剂卡一 般可保存数天甚至数周，也可以拍照保留试验结果图 像存档备用。
3）标本用量少：标本用量为试管法的1/10～1/5，尤 其有利于新生儿及某些特殊血液标本的检测。
第二章 红细胞血型检测技术 P36
血型血清学检验的重要性
血型血清学检验是输血前检查的必要内容，是 输血安全的重要保证，同时也是新生儿溶血病、 器官移植等重要的实验室检查。
红细胞抗原抗体反应基本理论
红细胞抗原与相应抗体无论是在体内或是在体 外，均可发生反应。
体外试验红细胞抗原抗体反应的本质是凝集反 应，其中抗体以前多从人血清中提取（但现在 的抗A、抗B试剂一般为基因工程制备的单克 隆抗体），又称为血清学试验。
微柱凝胶试剂卡分类
应用
中性凝胶试剂卡：用于ABO血型正反定型、RhD抗原 测定、其他血型抗原鉴定及盐水介质交叉配血等；
特异性凝胶试剂卡：用于ABO血型正定型、RhD抗原 测定和其他血型鉴定；
抗球蛋白凝胶试剂卡：用于IgG抗D抗体鉴定RhD抗原， 红细胞不规则抗体筛查和交叉配血等。
卡式法的优点：
2. 原理 ：葡聚糖凝胶颗粒-凝胶微柱-微柱凝胶卡。
是利用凝胶颗粒之间的间隙形成的分子筛作用，在微柱凝胶介质 中红细胞与相应抗体结合，经低速离心，凝集成块的红细胞因体 积大被凝胶阻滞不能通过凝胶层，留于凝胶介质的上层或中间， 即阳性反应；未凝集游离红细胞因体积小而通过凝胶之间的间隙 沉积于微柱凝胶检测管底部，形成细胞扣，即阴性反应。
7）药物：药物如低分子右旋糖酐、聚乙烯吡 咯烷酮及静脉注射某些造影剂，血液粘滞性增 高，可使红细胞凝集而类似凝集表现。
红细胞免疫检测及临床应用新进展
1986年凯斯（L.Keyes）等发现人自身红细胞可 增加T细胞产生γ-干扰素。
1987年鲁杰利斯（M.T.Rugeles）发现自身红 细胞加入外周血单个核细胞培养管中可增强原 发性和继发性特异抗体应答。
1987年郭峰通过体外对比实验证明血清中还存 在一种加热（58℃30'）不灭活的红细胞免疫 粘附促进因子。
④CR1簇状分布优点：可使它与C3b包被的IC结 合位点呈多价性，连接更为牢固。
⑤红细胞膜上的CR1总数比白细胞多。 ⑥红细胞对粘附C3b分子的抗原（如肿瘤细胞、
细菌等）的亲和力显著大于吞噬细胞，红细胞 在清除CIC致热原中占有重要地位。CR3：可能 具备对某些小抗原有吞噬，通过释放过氧化酶 对抗原加以消毁和可直接识别某些细菌有关。
①CR1是一种单肽链糖蛋白，具有明显的多肽 性，有4个同种异型，其配体是C3b、iC3b、C4b、 iC4b均可结合于CR1，但C3b仅需少量即可发生 免疫粘附（约60个分子/细胞），而C4b则需较 大数量（＞2500个分子/细胞），才能发生反 应。
iC3b也可结合于CR1，但结合程度较轻，它与 CR3型受体结合能力强。
LFA-3作用：LFA-3与受体CD2结合后可传 递足以诱导T细胞增殖，淋巴因子分泌及 非MHC限制性细胞毒作用的跨膜信号， 使T细胞活化，分泌IL-2，IFN-r和表达IL2受体等，另外CD2/LFA-3在胸腺发生及 T、B细胞相互作用中均起作用。
因此，LFA-3与CD2作用是免疫细胞间相 互协调作用，淋巴细胞活化，产生淋巴 因子的分子基础。
我国在红细胞免疫研究工作始于1982年。
1989年成立全国红细胞免疫研究协作组。
1993年12月又成立了全国免疫学会基础 免疫委员会红细胞免疫专业学组。
1987年鲁杰利斯（M.T.Rugeles）发现自身红 细胞加入外周血单个核细胞培养管中可增强原 发性和继发性特异抗体应答。
1987年郭峰通过体外对比实验证明血清中还存 在一种加热（58℃30'）不灭活的红细胞免疫 粘附促进因子。
④CR1簇状分布优点：可使它与C3b包被的IC结 合位点呈多价性，连接更为牢固。
⑤红细胞膜上的CR1总数比白细胞多。 ⑥红细胞对粘附C3b分子的抗原（如肿瘤细胞、
细菌等）的亲和力显著大于吞噬细胞，红细胞 在清除CIC致热原中占有重要地位。CR3：可能 具备对某些小抗原有吞噬，通过释放过氧化酶 对抗原加以消毁和可直接识别某些细菌有关。
①CR1是一种单肽链糖蛋白，具有明显的多肽 性，有4个同种异型，其配体是C3b、iC3b、C4b、 iC4b均可结合于CR1，但C3b仅需少量即可发生 免疫粘附（约60个分子/细胞），而C4b则需较 大数量（＞2500个分子/细胞），才能发生反 应。
iC3b也可结合于CR1，但结合程度较轻，它与 CR3型受体结合能力强。
LFA-3作用：LFA-3与受体CD2结合后可传 递足以诱导T细胞增殖，淋巴因子分泌及 非MHC限制性细胞毒作用的跨膜信号， 使T细胞活化，分泌IL-2，IFN-r和表达IL2受体等，另外CD2/LFA-3在胸腺发生及 T、B细胞相互作用中均起作用。
因此，LFA-3与CD2作用是免疫细胞间相 互协调作用，淋巴细胞活化，产生淋巴 因子的分子基础。
我国在红细胞免疫研究工作始于1982年。
1989年成立全国红细胞免疫研究协作组。
1993年12月又成立了全国免疫学会基础 免疫委员会红细胞免疫专业学组。
红细胞血型血清学技术综述
红细胞血型血清学技术综述血型是人类血液的主要特征之一，表达了血液各种成分的遗传多态性。
人类红细胞血型抗原是研究最早的抗原，1901年奥地利维也纳大学的Kar Landsteiner发现人类第一个血型——ABO血型后，迄今发现的血型系统已接近30个，包括ABO、MNS、P、RH、Lutheran、Kell等。
1 红细胞血型鉴定1.1 ABO血型鉴定1.1.1原理根据红细胞上和血清（或血浆）中有或无A抗原或/和B抗原及其抗体，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
正定型是用已知抗-A或抗-B定型试剂来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；反定型是用已知A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。
应用筛选红细胞检测鉴定标本的血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，以确定抗体的特异性。
1.1.2 结果判读细胞均匀无凝集者为阴性（-），细胞有凝集者或反应中红细胞溶血者为阳性（+）。
1.2.1 原理Rh血型系统是继ABO血型系统之后又一重要的血型系统，与ABO血型系统不同的是，在没有相应的抗原免疫的情况下，一般不会产生Rh抗体[1] 。
红细胞表面存在正常D抗原，则该细胞与抗D（IgM）试剂发生直接凝集，与抗D （IgG ）试剂发生间接凝集，该细胞Rh血型为阳性；若红细胞表面D抗原位点数减少或抗原结构产生变异，则该细胞与抗D（IgM）试剂不发生直接凝集，与抗D（IgG ）试剂发生间接凝集，该细胞Rh血型为D弱反应型；红细胞无论在间接凝集试验还是在直接凝集试验中发生凝集都应为RhD阳性。
若不存在D抗原，则该细胞无论在间接凝集试验还是在直接凝集试验中均不发生凝集，该细胞Rh血型为阴性。
用抗C、抗c、抗E、抗e這4种Rh定型试剂通过血凝试验来检查红细胞上是否存在相应抗原。
用筛选红细胞检测RhD阴性确证血清中是否存在不规则抗体，如果存在用谱细胞进行抗体鉴定，以确定抗体的特异性。
血型相容性实验技术进展与输血安全
B细胞 + 0 + 0
研究员 李勇 博士
O AB A B
14
长春生物制品研究所
1、血型定型
二 、 红 细 胞 血 型 相 容 性 实 验
卫生部在2000年发布文件，要求我国临床对每一名 患者和献血员都同时进行ABO正反定型，但是至今还没 有做到。最主要原因是应用于反定型的人新鲜红细胞试 剂容易溶血，只有3到4周的有效期。在我国没有单位能 够大规模制备和供应新鲜的红细胞反定型试剂。 ABO血型正反定型结果不相符问题往往不是依靠高 质量血型试剂能够解决的，如 “多凝集现象”的标本，应 用单克隆抗体试剂正确判断其ABO血型，但也正是由于 此“优点”，而漏掉了原来一般由于应用人血清抗-A和抗B试剂所发现的“多凝集现象”。
RhD单抗试剂：
特异性：由于RhD血型抗原的多表位性质和其临床意义，选择能够制 备抗-D试剂的单克隆抗体，其标准是极为苛刻的。对人血清抗-D试剂所确 定的RhD阳性和Rh D阴性人红细胞，具有同样反应格局的很多株单克隆抗 体，各自的特异性实质存在很大差别。
长春生物制品研究所
长春博德公司
研究员 李勇 博士
长春生物制品研究所
长春博德公司
研究员 李勇 博士
9
3、单克隆抗体和单克隆抗体血型试剂
血型单克隆抗体试剂是由单抗制备，但单抗并不就等于试剂。
单克隆抗体-无性克隆细胞系杂交瘤细胞分泌-性质单一。
ABO单抗试剂：
特异性：多株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体具有的可能符合 制备试剂的要求，但是 亲合性/效价/稳定性：临床要求的高亲合性，很少能很难符合要求。
长春博德公司
研究员 李勇 博士
2
一、 基本概念
1.
血型相容性实验 “血型抗体”名词 单克隆抗体和单克隆抗体血型试剂
输血前血型血清学检查
输血后的抗体检测
输血后抗体检测的目的是检测受血者体内是否产生了针对供血者的特异性抗体， 以评估输血的安全性和有效性。
抗体检测的方法包括直接抗球蛋白试验（DAT）和血清学检测，通过检测受血者 血清中是否存在针对供血者红细胞的抗体，判断是否存在免疫反应。
输血不良反应的预测
输血不良反应是指在输血过程中或输血后发生的与输血相关的反应，如发热、过敏 、溶血等。
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CATALOGUE
血型血清学检查的流程
采集样本
采集时间
通常在输血前进行，以确 保血型匹配。
采集方法
通过静脉采血的方式，采 集受检者的血液样本。
样本标识
对每个受检者的血液样本 进行唯一标识，以便后续 识别和追踪。
样本处理
离心分离
将采集的血液样本进行离心分离 ，以分离出血浆和红细胞。
血浆处理
将分离出的血浆进行适当的处理， 如灭活补体、去除血小板等。
结果报告
将检测结果以书面报告的形式提交给 医生或相关医疗机构，以便进行后续 的输血治疗或手术。
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CATALOGUE
血型血清学检查的临床应用
输血前的血型匹配
输血前血型血清学检查是确保输血安 全的重要环节，通过检查受血者和供 血者的ABO血型和Rh血型，以避免 因血型不匹配导致的输血反应。
除了ABO血型和Rh血型，其他稀有血 型如MNS、KELL、LU、YT等也需要 进行匹配，以降低输血风险。
红细胞处理
将分离出的红细胞进行适当的处理 ，如洗涤、标记等。
检测方法
抗体检测
通过检测受检者血清中的抗体， 确定受检者的血型。
交叉配血试验
通过将受检者的红细胞与已知血 型的标准红细胞进行混合，检测 是否存在红细胞凝集反应，以确 定是否可以进行输血。
ABORh血型系统在临床输血中的重要性
2 自动化血型血清学仪器的使用。
一类是微量反应体系的仪器，一类是微量试管柱式 反应体系的仪器。
四、红细胞血型学新的应用技术的探索
使用少量的含DNA的任何组织样品，采用DNA分型 术，即可对红细胞抗原的表现型和基因型作鉴定。目前， 使用Rh阴性母亲的血浆的DNA分析，来对新怀胎儿的 RhD基因定型已经可能。使用生物基因工程来制备红细 胞定型试剂。试剂红细胞的抗原，将不来自于人红细胞， 而是使用重组蛋白或多肽作为抗原来鉴定血型抗体，加 上单克隆抗体的大量应用，彻底摆脱依赖人血作血型试 剂的可能性。
夫妇因Rh血型不合引起新生儿溶血病中，以D抗原 不合为最多见，临床表现也最严重。除了Rh阴性，因抗E、抗C、抗c或抗e也可以引起新生儿溶血病，但临床表 现较轻。Rh不合新生儿溶血病一般在第二胎以后发生， 第一胎Rh不合胎儿时常不受影响，但当Rh阴性妇女在孕 前曾接受Rh阳性的输血或曾有过Rh阳性胎儿流产史（妊 娠2个月以上），此时母体内已产生抗体，当这种抗体在 再一次怀有Rh阳性胎儿时，通过胎盘进入胎儿血循环， 使胎儿红细胞大量破坏而发生溶血。当然，在Rh阴性个 体中约有1/3不会产生抗-D抗体，所以即使一个Rh阴性 的产妇多次怀孕Rh阳性的孩子也不一定会产生Rh溶血病。
三、血型血清学技术在临床中的应用
红细胞血型工作从一开始就衍生出相应的血清学技 术，并全面应用于各个生命科学领域里，其中输血医学 的应用最为广泛，为输血治疗的安全作出了巨大的贡献。 血型血清学技术的基础是血凝反应，而最具划时代意义 当推抗人球蛋白试验，由Coomb’s等于1945年介绍的 抗人球蛋白试验，用于对红细胞致敏但不能发生凝集的 红细胞抗体的检测，抗球蛋白试验的理论和技术被应用 至今，不仅没有淘汰，而且作为经典的基准技术，在不 断地发扬光大。
红细胞血型血清学技术的发展和应用PPT
免疫性溶血性疾病诊断
通过红细胞血型血清学技术，对免疫性溶血性疾病进行诊断，为 临床治疗提供依据。
自身免疫性疾病研究
利用红细胞血型血清学技术，研究自身免疫性疾病的发病机制和免 疫反应特点。
移植排斥反应监测
在器官移植后，通过红细胞血型血清学技术监测排斥反应，及时发 现并处理排斥反应。
红细胞血型血清学技术在法医学中的应用
亲子鉴定
01
利用红细胞血型血清学技术进行亲子鉴定，为法医学中的身份
认定提供科学依据。
犯罪嫌疑人身份鉴定
02
通过红细胞血型血清学技术，对犯罪嫌疑人进行身份鉴定，协
助警方破案。
交通事故中身份鉴定
03
在交通事故中，利用红细胞血型血清学技术对遇难者进行身份
鉴定，为后续处理提供依据。
红细胞血型血清学技术在生物学和医学研究中的应用
免疫治疗
利用红细胞血型血清学技术鉴定 免疫相关抗原，为免疫治疗提供 新的靶点和策略。
个体化医疗
通过红细胞血型血清学技术了解 个体差异，为个体化医疗提供依 据，实现精准医疗。
红细胞血型血清学技术的标准化和国际化发展
标准化发展
制定红细胞血型血清学技术的国际标 准，促进不同国家和地区之间的技术 交流和应用。
红细胞血型血清学技术的质量控制和标准化
试剂质量控制
确保试剂的质量和稳定性，定期进行试剂质量检查。
操作标准化
制定标准的操作流程和规范，确保实验结果的准确性 和可靠性。
结果解读和报告
根据实验结果，准确解读并出具报告，为临床输血和 血液相关工作提供依据。
03
红细胞血型血清学技术 的应用
红细胞血型血清学技术在输血医学中的应用
采用高分辨率和高灵敏度的检测方法，如质谱分析、荧光共振能量转移
通过红细胞血型血清学技术，对免疫性溶血性疾病进行诊断，为 临床治疗提供依据。
自身免疫性疾病研究
利用红细胞血型血清学技术，研究自身免疫性疾病的发病机制和免 疫反应特点。
移植排斥反应监测
在器官移植后，通过红细胞血型血清学技术监测排斥反应，及时发 现并处理排斥反应。
红细胞血型血清学技术在法医学中的应用
亲子鉴定
01
利用红细胞血型血清学技术进行亲子鉴定，为法医学中的身份
认定提供科学依据。
犯罪嫌疑人身份鉴定
02
通过红细胞血型血清学技术，对犯罪嫌疑人进行身份鉴定，协
助警方破案。
交通事故中身份鉴定
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在交通事故中，利用红细胞血型血清学技术对遇难者进行身份
鉴定，为后续处理提供依据。
红细胞血型血清学技术在生物学和医学研究中的应用
免疫治疗
利用红细胞血型血清学技术鉴定 免疫相关抗原，为免疫治疗提供 新的靶点和策略。
个体化医疗
通过红细胞血型血清学技术了解 个体差异，为个体化医疗提供依 据，实现精准医疗。
红细胞血型血清学技术的标准化和国际化发展
标准化发展
制定红细胞血型血清学技术的国际标 准，促进不同国家和地区之间的技术 交流和应用。
红细胞血型血清学技术的质量控制和标准化
试剂质量控制
确保试剂的质量和稳定性，定期进行试剂质量检查。
操作标准化
制定标准的操作流程和规范，确保实验结果的准确性 和可靠性。
结果解读和报告
根据实验结果，准确解读并出具报告，为临床输血和 血液相关工作提供依据。
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红细胞血型血清学技术 的应用
红细胞血型血清学技术在输血医学中的应用
采用高分辨率和高灵敏度的检测方法，如质谱分析、荧光共振能量转移
红细胞血型血清学技术的发展和应用
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红细胞血型血清学概要
规则抗体：ABO系统产生抗A、抗B是有规律的， 即A型人产生抗B，B型人产生抗A，O型人产 生抗A和抗B，这是符合Landsteiner规则的， 称为规则抗体（regular antibody）。 不规则抗体(irregular antibody)：除ABO系 统外，其它系统产生的抗体均无此规律，称 为不规则抗体或意外抗体，不规则抗体通称 意外抗体(unexpected antibody)。
红细胞血型血清学概要
• (一)血型定义
•
血型是血液系统的一种遗传多态性，是产生 抗原抗体的遗传性状。 红细胞上的化学构型，必须是用相应抗体检 测到的红细胞表面抗原。当给缺乏某种抗原的个 体输入此种抗原时，可以刺激产生相应的抗体。
• (二)血型抗原
•
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红细胞血型血清学概要
• 人类红细胞血型抗原 309个 • 30个血型系统 ，270个抗原; • ２个血型系列，７００系列（低频率） 18个抗原； ９０１系列（高频率） 9个抗原；
环境因素：pH值、离子强度、温度等
常用于解离IC的物质有：3M硫氰化钾、
pH2.4 0.1M甘氨酸、7M尿素等
解离后抗原、抗体仍保持原有特性
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血型血清学免疫基础概述
• 阶段性 第一阶段：特异性结合阶段 ①反应速度快，几秒钟或几分钟即可完成 ②不出现肉眼可见反应 第二阶段：可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结
IgA 180000 不受影响 部分降解 不 能 不 能
950000 活性减弱 降 解 能 不 能 易被中和
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红细胞血型血清学概要
红细胞血型血清学技术
单价特异性抗体鉴定容易，多价（多特 异性抗体和自身抗体）鉴定比较难 辅助其他实验鉴定 血型物质抑制实验、吸收放散实验等 采用不同温度、pH
抗体效价滴定 antibody titration
抗体效价滴定
一种抗体半定量的分析方法 用选定的RBC对系列稀释的血清（倍比 稀释）进行滴定 用肉眼明显可见凝集的最高血清稀释度 数值的倒数来表示效价
也可以非溶解性物质形式存在与毛发、 骨骼、皮肤等组织中
定义
抗体能与有相应抗原的RBC发生特异性 凝集，体液中的可溶性抗原物质可以与 该抗体发生特异性中和，抑制了抗体凝 集RBC的作用。这种利用可溶性抗原物 质来抑制抗体与RBC凝集作用的实验， 称为凝集抑制试验（Agglutination-inhibition
效价测定是以判断RBC凝集为基础的，判断方法如下： 4+：一个结实的大凝块，背景清楚 3+：数个结实的凝块，背景清楚 2+：中等大小的凝块加小凝块，背景清楚 1+：小凝块，背景较浑浊 ±或W+：细胞有微小的凝块，背景红色浑浊，通常用显 微镜观察 MF：混合外观凝集，少数RBC形成较大的凝集块，而 周围是游离的RBC 0：阴性，RBC呈游离状态，无凝集现象 H：溶血，有游离血红蛋白，为阳性结果
二硫苏糖醇 （DTT） 2-巯基乙醇 （2-Me）
方法： 二硫苏糖醇（DTT）/ 2-巯基乙醇（2Me）与等量血清在37℃反应30min
血清IgG抗体效价测定
原理 血清标本经巯基试剂处理后，IgM抗体 被破坏而失去相应的血清学反应能力， 此时运用辅助检测IgG抗体的方法如抗 球蛋白实验等，就可以进行IgG 抗体效 价滴定
效价评分
Marsh改良的Race和Sanger的效价数字系统 效价： 评分： “4+” 12分 “3+” 10分 “2+” 8分 “1+” 5分 “±或W+:” 2分 “0” 0分 各稀释度计分的总和即为总积分
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2020/10/11
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The complement system explained
2020/10/11
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血型血清学免疫基础概述
• 抗原抗体反应 • 是抗原和相应抗体之间的特异性结合反应 • 既可发生在体内，也可发生在体外 • 一般规律： • ①特异性 ②可逆性 • ③阶段性 ④比例性 •
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相容（Compatible）即和谐共存（existing in harmony）
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血型血清学免疫基础概述
• 抗 原： （1）免疫原性 （2）反应原性/抗原性
根据抗原来源与机体的亲缘关系分类： ①异种抗原 ②同种异型抗原：ABO、Rh、HLA等 ③自身抗原 ④异嗜性抗原
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红细胞血型血清学概要
• (一)血型定义 • 血型是血液系统的一种遗传多态性，是产生抗
原抗体的遗传性状。 • (二)血型抗原 • 红细胞上的化学构型，必须是用相应抗体检测
到的红细胞表面抗原。当给缺乏某种抗原的个体输 入此种抗原时，可以刺激产生相应的抗体。
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红细胞血型血清学概要
2020/10/11
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血型血清学免疫基础概述
比例性（proportionality） ： 最适比或等价点：指抗原与抗体发生可见反应需遵
循一定的量比关系，只有当二者浓度比例适当时， 才出现可见反应 等价带：抗原与抗体分子比例合适的范围 带现象：Ag与Ab比例不适而不出现可见反应 前带(prozone) ：抗体过量时 后带(postzone) ：抗原过量时
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血型血清学免疫基础概述
特异性：由抗原决定簇和抗体分子超变区之间空间结构的 互补性决定
可逆性（reversibility)：指Ag与相应Ab结合成IC后，在 一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性
IC解离取决于： ①抗体对相应抗原的亲和力 ②环境因素
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血型血清学免疫基础概述
• 人类红细胞血型抗原 309个 • 30个血型系统 ，270个抗原; • ２个血型系列，７００系列（低频率）
18个抗原； ９０１系列（高频率） 9个抗原； 未归类，１2个抗原。
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红细胞血型血清学概要
• 血型抗原是红细胞上的化学构型。按照生化性质人
红细胞抗原决定簇可分为糖分子和多肽2类。
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血型血清学免疫基础概述
• 抗原抗体结合力： 抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合 不形成牢固的共价键，通过非共价键结合 涉及几种分子间的作用力：
①静电引力 ②范德华力 ③氢键结合力 ④疏水作用力
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血型血清学免疫基础概述
• 影响抗原抗体反应的因素： 一、反应物自身因素： 抗原：理化特性、Ag决定簇数量、Ag决定簇种类 抗体：来源、特异性与亲和力、浓度 二、环境条件： 电解质：0.85%NaCl 酸碱度：pH 6～9 温度：15 ℃ ～ 40℃
红细胞血型血清学
实验技术的发展和应用
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二十一世纪临床输血工作
安全
高效
准确
可靠
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输血安全和输血相容性实验
红细胞血型相容性实验规范化 输血传播病原微生物检测 输血相容性实验
• 血型定型：抗原、基因水平 • 抗体检测：筛检、鉴定、确证 • 交叉配血：完全和不完全抗体
环境因素：pH值、离子强度、温度等 常用于解离IC的物质有：3M硫氰化钾、
pH2.4 0.1M甘氨酸、7M尿素等 解离后抗原、抗体仍保持原有特性
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血型血清学免疫基础概述
• 阶段性 第一阶段：特异性结合阶段
①反应速度快，几秒钟或几分钟即可完成 ②不出现肉眼可见反应 第二阶段：可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结 合等反应 ①反应进行慢，需要几分钟、几十分钟或更长 ②受电解质、温度、酸碱度等多种因素影响
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血型血清学免疫基础概述
抗体: 抗体都是免疫球蛋白 并非所有免疫球蛋白都具有抗体活性 Ab是功能描述，Ig是化学结构描述 分泌型Ig(sIg)和膜型Ig(mIg) Ig不耐热，在60-70℃被破坏 Ig能被多种蛋白酶水解
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血型血清学免疫基础概述
类：根据CH抗原特异性的差异，将Ig分为IgG、 IgM、IgA、IgD、IgE 五类
亚类：根据CH(主要是铰链区)AA和二硫键的差 异
IgG: IgG1、IgG2、IgG3、IgG4
IgA: IgA1、IgA2
IgM: IgM1和IgM2
型：根据CL化学结构与抗原性的差异 和型 亚型：1、2、3、4
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血型血清学免疫基础概述
补 体： 主要由肝细胞、巨噬细胞等合成，半衰期约1天 多为糖蛋白，占血清蛋白总量的10%左右 血清中各成分含量不等，C3含量最高 正常生理情况下，以非活化形式存在于血清中 性质不稳定，加热56℃ 30min失活 对温度、酸、碱、蛋白酶、乙醇等敏感
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血型血清学免疫基础概述
补体系统的三条激活途径
经典途径（classical pathway）
旁路途径（alternative pathway） MBL途径（MBL pathway） ( MBL：甘露糖结合凝
集素) • 补体系统的激活是在某些激活物质的作用下，各补
体成分按一定顺序，以连锁的酶促反应方式依次活化， 并表现出各种生物学活性的过程，故亦称为补体级联 反应
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血型血清学免疫基础概述
• 检测抗原抗体反应的基本技术： 凝集反应（又称直接凝集反应）
颗粒性Ag + 相应Ab→→→→颗粒性团块样凝集 沉淀反应
可溶性Ag + 相应Ab→→→→免疫复合物出现沉淀 溶血反应
RBC血型Ag ＋ 相应血型Ab→→补→体→溶血（红细胞破坏）
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• 决定簇是糖分子的血型抗原：ABO, Hh, Lewis, P, Ii, 也称为组织型抗原，因为它们不仅存在于红细胞表 面，而且广泛存在于大部分上皮细胞、各种体液、分 泌液中。组织型抗原决定簇可以是细胞分化和成熟的 标志。
• 决定簇为多肽的血型抗原：MNS, Rh, Kell, Kidd 等，其抗原化学组成为蛋白质、糖蛋白、脂蛋白，只 分布于红细胞膜或其它骨髓造血干细胞。