小鼠骨髓细胞微核试验
实验五小鼠骨髓细胞微核试验
遗传毒性研究
微核试验可用于研究化学物质或其他因素 对遗传物质的影响，了解其对细胞分裂和 增殖的影响。
癌症研究
药物筛选
微核试验可用于研究癌症发生和发展过程 中染色体畸变的情况，为癌症的预防和治 疗提供参考。
微核试验可用于筛选具有抗突变、抗癌作 用的候选药物，为新药研发提供依据。
03 实验步骤
实验前的准备
可以结合现代分子生物学技术和遗传学方法，研究致突变物对基因组稳 定性和遗传信息的影响，为预防和治疗致癌疾病提供新的思路和方法。
感谢您的观看
THANKS
结果应用
将实验结果应用于评估化学物质、辐射等环境因素对生物 体的遗传损伤风险，为环境保护和公共卫生提供科学依据。
02 实验原理
微核的形成机制
微核是由于染色体片段的丢失或断裂形成的，通常是由于DNA损伤或复制异常导致 的。
在细胞分裂过程中，丢失的染色体片段未能随细胞分裂而分离，从而形成微核。
微核的形成与多种因素有关，如辐射、化学物质、病毒等。
实验五小鼠骨髓细胞 微核试验
目录
CONTENTS
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果分析 • 结论与讨论
01 实验目的
了解微核试验的原理
微核试验是一种用于检测染色体畸变和DNA损伤的细胞遗传 学方法。它通过观察细胞中微核（微小的细胞核）的数量， 来评估细胞受到的遗传损伤程度。
小鼠骨髓细胞微核试验
医学ppt
2
化学致突变物
染色体
作用于纺锤丝
无着丝点,片或环
整条染色体 带着丝粒的环和断片
形成微核
于细胞分裂末期细胞质中
微核成因
医学ppt
3
小鼠骨髓嗜多染医学红ppt 细胞微核的形成
4
因此，微核试验用于检测断裂剂和部分非整 倍体致突变剂。
微核可出现在多种细胞中，但在有核细 胞 中较难与正常核的分支相区别，由于红 细胞在成熟前最后一次分离后数小时可将 主核排出，而仍保留微核于PCE细胞中，因 此，通常计数PCE细胞中的微核数。
周龄，体重18～20g的小鼠。每组10只，雌 雄各半。
医学ppt
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剂量及分组
受试物应至少设三个剂量组，最高剂量组 原则上为不产生动物死亡的最大毒作用剂 量。一般取受试样品1/5、1/10、1/20 LD50 剂量。
另设溶剂对照组和阳性对照组。阳性对照 组可用环磷酰胺腹腔注射1次。阴性对照组 使用等体积的溶剂。
医学ppt
1
1 目的
通过本次实验，学习和Hale Waihona Puke Baidu握小鼠骨髓多染 红细胞（PCE）微核测定方法。
2 原理
微核是在细胞的有丝分裂后期染色体有 规 律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留 在细胞质中的染色单体或染色体的无着丝 粒断片或环。它在末期以后，单独形成一 个或几个规则的次核，被包含在细胞的胞 质内而形成，由于比核小得多故称微核。
中山毒理课件微核试验和染色体畸变详解
结果分析与评价
结果： 以每只动物为观察单位，每只动物观察100个中 期分裂相，计算其畸变细胞率 分析与评价： 1 阴性和阳性对照组的畸变率应与所用动物 的种属及有关资料相符 2 试验结果可以用多种统计方法处理，所得 结果应该是相同的 3 各实验组即便细胞率与阴性对照组相比较， 应该有显著性差异，还应有剂量反应关系
结果与分析： 1 结果：试验只计数PCE中的微核，微核率 以千分率表示。每组的雌雄动物分开计数 微核PCE均值。 2 分析：正常的PCE/NCE比值为1（0.6-1.2）， 如果＜0.1，则表示PCE形成受到严重抑制； 如果＜0.05，则表示受试物剂量过大，结果 不可靠。
图 1 ：正常嗜多染红细胞 PCE （× 400 ） 图 2 带微核嗜多染红细胞 MNPCE （× 400）
低渗、固定、再离心 固定两次
染色
阅片
小鼠骨髓细胞微核试验
受试物: 环磷酰胺 受试动物: 小鼠
实验目的
学习和掌握小鼠骨髓多染红细胞(PCE)微核测定方 法
细胞分裂分为四个期：
1、G1期（DNA合成前期）：细胞生长，为DNA复制做 准备。 2、S期（DNA合成期）：体细胞的DNA含量由2C增加 到4C 3、G2期(DNA合成后期)：该期主要为M期作准备，包 括复制因子的失活和有丝分裂促进因子的分化,有 关细胞骨架系统重新组装的蛋白质合成 4、M期(有丝分裂期)：前期，早中期，中期， 后 期（微核形成期），末期
毒理学实验四
毒理学实验四
小鼠骨髓细胞微核试验
一、实验目的
1、了解微核试验原理
2、学习微核试验测定方法
二、实验原理
微核试验：是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法。
微核：是指细胞内染色体断裂或纺锤丝受到影响而在细胞有丝分裂后期留在
细胞质中的染色单体或染色体的无着丝粒断片或环。它在末期以后，单独形成一
个或几个规则的次核，被包含在细胞的胞质内而形成。
红细胞在成熟前最后一次分离后数小时可将主核排出，而仍保留微核于PCE
细胞中，因此，通常计数PCE细胞中的微核数。
微核形态：圆形或椭圆形，大小相当于细胞直径的1/5～1/20，嗜色性、折
光率与主核一致，边缘光滑。
嗜多染红细胞（PCE）：是尚未完全成熟的红细胞，细胞体积多数比正染红细
胞（NCE）大，无细胞核，胞浆中富含嗜碱性的核糖体，故Giemsa染色呈灰蓝色。
三、实验动物及器材
1、实验动物：健康小鼠，体重25～30g。
2、器材：手术剪、镊子、注射器（1ml）、5号针头、载玻片、显微镜、滤纸、
凉片架、染色缸。
3、试剂：甲醇（分析纯），吉姆萨（Giemsa）储存液；1/15mol/L Na2HPO4；1/15mol/L KH2PO4。
四、实验内容及步骤
1. 骨髓细胞制片和涂片：
小鼠脱颈椎处死，将两腿股骨取下→用滤纸擦去残肉→剪去两端骨质，用1ml 注射器吸取小牛血清，反复冲洗骨髓腔后，点在载玻片上，混匀→推片。
2. 固定
待涂片晾干→置甲醇中固定10分钟→取出后晾干。
3. 染色
固定完的涂片→Giemsa染液中，染色15分钟→自来水冲洗，晾干。
小鼠骨髓多染红细胞微核试验
小鼠骨髓多染红细胞微核试验
实验原理
微核是由细胞分裂末期滞留的染色体片段或整条迟滞的染色体在分裂间期的子代细胞浆内形成的游离团块物质。微核实验作为细胞遗传损伤的标志之一，可用于染色体断裂剂和纺锤体损伤剂的检测。当骨髓成红细胞发展成为红细胞时，主核排除，成为多染红细胞，这些细胞保持其碱性约24小时，然后成为正染红细胞，并进入外周血中。在主核排出时，已形成的微核可留在胞浆中。由于这些细胞没有主核，便于观察微核。观察并计数多染红细胞中的微核，可反映染色体断裂和纺锤体损伤情况。本次试验的检测终点为染色体损伤。
一、实验动物
健康的成年ICR小鼠50只，体重18-22g，每组10只，雌雄各半，随机分组。
二、试剂与其器材
40%工业久效磷，环磷酰胺，PH6.8的小牛血清，甲醇，PH6.8的磷酸缓冲液，Giemsa 染液；注射器、小鼠灌胃针头、动物秤、剪刀、镊子、纱布、载玻片、染色盘、染色架、固定用染色缸、显微镜。
三、试验方法
1.实验动物：采用配伍组设计法对小鼠进行分组。每组10只，共5组。
2.剂量分组：设置阳性对照及阴性对照组。阳性对照物采用120mg/kg环磷酰胺，阴性对照物采用蒸馏水。此外设计三个剂量组，分别为高中低剂量组。通常取受试物LD50的1/2,1/4,1/8等剂量。剂量分别为1
3.2mg/kg，6.6mg/kg，3.3mg/kg。
3.染毒途径：经口灌胃染毒。
4.染毒次数及骨髓采样时间：一次染毒，24小时后取样测定。
5.取材：按照上述步骤染毒24小时后，颈椎脱臼处死动物，仔细剥离并取下一侧后肢股骨。用纱布擦净碎肉，减去股骨两端，露出骨髓腔，用注射器吸取少量小牛血清冲洗骨髓腔数次，冲洗物滴在玻片上。
小鼠骨髓细胞微核试验讲解学习
植物细胞微核实验（蚕豆根尖） 淋巴细胞微核实验 双核微核实验 小鼠骨髓微核实验
嗜多染红细胞（PCE）
嗜多染红细胞是分裂后期的红细胞，由幼年发 展为成熟红细胞的一个阶段
特点： 1.无主核、易识别微核（有核细胞中微核与正常核
叶及核的突起难以鉴别） 2.胞内含核糖体，染色后成灰蓝色（区别于成熟红
剂量选择：以1/5 LD50为最高剂量组，下设3-4个剂量组，同时设阳 性和阴性对照。
染毒途径：经口、经皮、经呼吸道、注射。
染毒次数：多次染毒法（每天染毒一次，连续4天，第五天取样） 两次染毒法（第一次染毒24h后进行第二次染毒，6h取样）
五、操作步骤
本次实验染毒处理： 环磷酰胺
剂量：0.8mg/10g 每次染毒(腹腔注射） 次数：多次染毒法（4次）----最佳浓度及作用时间
五、操作步骤
观察 显微镜的使用 低倍镜：细胞群 高倍镜：分布均匀、染色良好 油镜：细胞形态、微核
五、操作步骤
观察
镜下有3种细胞：
PCE:
灰蓝色
NCE： 橘黄色
有核细胞：蓝紫色
微核：
蓝紫色、 圆形、 边缘规则
五、操作步骤
计数及结果分析
1. 总共200个细胞中，计数PCE与NCE的比值 正常范围 0.6-1.2 PCE/NCE评价细胞毒性的指标 P值具有统计学意义：受试化学物剂量过大，PCE形成受
小鼠骨髓中嗜多染红细胞(PCE)微核实验简介
小鼠骨髓中嗜多染红细胞（PCE）微核实验简介
微核（micronucleus），与染色体损伤有关，是染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期遗留在细胞质中，末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，包含在子细胞的胞质中，比主核小，故称微核。故微核试验能检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点。
实验目的
1.学习和掌握小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）微核测定方法
2.了解细胞染色体损伤情况，掌握检测断裂剂和部分非整倍体致突
变剂的测定方法
3.进一步熟练制片和镜检操作
器材与试剂
1.器材
手术剪、无齿镊、小型弯止血钳、载玻片、玻璃染色缸、定时钟、晾片架、显微镜（带油镜）、注射器及针头、干净纱布、乳头吸管、玻璃铅笔、电吹风机
2.试剂
甲醇、Giemsa储备液、磷酸盐缓冲液（PH6.8）环磷酰胺
操作步骤
1.试验动物及处理
（1）动物选择：一般选用大小鼠，小鼠最常用，18-20g，每组10只，雌雄各半。
（2）染毒途径：根据研究目的或受试物性质不同，原则上可尽量采用人类接触受试物的途径：通常采用灌胃法和腹腔注射。（3）染毒次数：多次染毒法（每天染毒一次，连续4天，第五天取样）或两次染毒法（处死前30h+处死前6h）
（4）剂量及对照选择据受试物的LD50，以1/2LD50为最高剂量组，下设3-4个剂量组。同时设立阳性（环磷酰胺）和阴性对照（溶
剂组）
2.骨髓细胞制片和涂片：最后一次染毒后，在确定时间脱颈椎处死
动物，迅速剪取其胸骨，剔去肌肉，用干净纱布擦拭，剪去每节骨骺端，用小型弯止血钳挤出骨髓液，点在载玻片一端预先滴好的一滴小牛血清中。混匀后推片。长度为2-3cm。
毒理学 实验三、微核试验
Hale Waihona Puke Baidu10
6. 结果分析与评价
• 本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表示。 • PCE／NCE为评价细胞毒性的指标。 • 正常的PCE/NCE比值为1（0.6-1.2），
如果＜0.1，则表示PCE形成受到严重抑制； 如果＜0.05，则表示受试物剂量过大，结果不可靠。
因此通常计数PCE细胞中的微核。
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实验步骤
1．实验动物及处理 2．骨髓液的制备和涂片 3．固定 4．染色 5．观察计数 6. 结果分析与评价
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1．试验动物及处理
（1）动物选择：小鼠，分为五组，每组8只 （2）染毒途径：腹腔注射 （3）受试物： 环磷酰胺 （4）剂量设计：12.5、25、50、75、100 mg/kg
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3．固定：
将推好晾干的骨髓片放进染色缸中，甲醇固定15分钟， 取出晾干。
4．染色(建成试剂盒Giemsa染液)
用染液一3滴，染色8min，再加染液二6滴，洗耳球混 匀5min。细流水冲掉玻片染色液，晾干。
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5．观察计数
先用低倍镜观察，选择分布均匀的区域，再在油镜下观察 计数。 PCE细胞呈灰蓝色，正染红细胞（NCE）桔黄色。 细胞中的微核大半呈圆形，边缘光滑，嗜色性与核质一致， 一个细胞内可以出现一个或多个微核。
小鼠骨髓微核试验
小鼠骨髓细胞微核试验
一、目的与要求
1. 熟悉微核的概念、微核的来源、体内微核试验的实验设计、微核试验检测的遗传学终点。
2. 学习和掌握小鼠骨髓细胞微核试验基本方法步骤，嗜多染红细胞及微核细胞镜下观察。
3. 了解微核试验数据整理、分析方法及结果的评价。
二、实验原理
微核与染色体损伤有关，是染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损伤而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期遗留在细胞质中，末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称微核。
无论是断片还是整条染色体，其实质都是遗传物质，一但发生畸变，就有能形成遗传物质方面的问题，造成突变，因此，微核的检测实质上就是遗传物质突变的检测，现已被卫生部定为外来化合物毒理检测的—个必检指标。
微核试验是观察受试物能否产生微核的试验。主要可检出DNA断裂剂和非整倍体诱变剂。
传统的微核试验是体内试验，它观察骨髓嗜多染红细胞（PCE）中的微核。微核可位于多种细胞，但在有核细胞中难与正常核的分叶及核突出物区分，所以只有在无核的红细胞中才易辨认。在骨髓中无核的红细胞有嗜多染红细胞或称晚幼红细胞（呈灰蓝或浅蓝色）和成熟红细胞（呈粉红或桔红色）两种，正常情况下嗜多染红细胞占多数，所以观察骨髓嗜多染红细胞。PCE指在红细胞成熟之前，最后一次分离后数小时将主核排出而微核仍保留在细胞质中的细胞，但由于嗜多染红细胞的胞质内含有核糖体，因此Giemsa染色呈灰蓝色，成熟红细胞的核糖体已消失，被染成淡橘红色，使嗜多染红细胞在染色上与正常RBC（NCE）有所不同。微核可以由染色体诱裂剂导致的染色体无着丝粒片段所构成，也可以由非整倍体诱发剂所导致的落后染色体形成。
3.小鼠骨髓细胞微核试验
重庆医科大学实验教学管理中心 公共卫生实验教学中心
一.实验目的： 1.掌握小鼠骨髓涂片技术 2.掌握微核形成原理 3.掌握镜下辨认微核的技术
二.实验原理： 细胞分裂过程中在染色体断裂剂或纺锤体毒物作用下，细胞染色体 断裂产生不含着丝粒的断片，或者整条染色体遗失在细胞质中，形 成微核。 染色与主核一致，大小相当于细胞直径的1/20-1/5，圆形或椭圆 形，一个或多个。 在多种细胞中出现。 在红细胞成熟前组后一次分裂后数小时主核排除而微核保留。
红细胞发育过程： 骨髓多能干细胞→定向干细胞→原红细胞→早幼红细胞→中幼红细 胞→晚幼红细胞→网织红细胞→成熟红细胞 从原红细胞到晚幼红细胞需分裂3-4次。形成晚幼红细胞后即不再 分裂，在发育过程中主核排出形成网织红细胞。网织红细胞含有少 量RNA，甲酚蓝染色成蓝色丝网状。网织红细胞进一步发育，RNA消 失成为成熟红细胞。
Giemsa染色时网织红细胞呈蓝灰色，称为多染红细胞；而成熟红细 胞染色呈橘红色，称为正染红细胞。
三.实验步骤 1.染毒：昆明种小鼠，环磷酰胺100mg/kg腹腔注射。 2.骨髓液制备和涂片：颈椎脱臼处死动物。解剖后取胸骨或股骨， 去除肌肉，剪去骨骺，将骨髓挤出或冲洗出，滴于载玻片推片。 3.固定：晾干后甲醇固定15秒，取出晾干。 4.染色：晾干后以新鲜配制的Giemsa染液染色5-10分钟，自来水冲 洗，晾干。 5.观察计数：低倍镜选择分布均匀、染色较好的区域，油镜下观察 计数。含有微核的PCE/1000个PCE；PCE/NCE。
[整理版]小鼠骨髓多染红细胞微核试验
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小鼠骨髓多染红细胞微核实验
目的和意义
微核试验用于检测受试物在哺乳动物所引起的染色体或原红细胞有丝分裂器损伤，以确定该受试物有无诱变性。通过本次实验学习和掌握小鼠骨髓多染红细胞微核测定方法。
原理
正常细胞的有丝分裂的分裂中期，染色体均匀地排列在赤道板附近，到分裂后期便分成两份，分别向两极移动，并在末期分别形成两个子细胞的核。如果由于某种化学物质的作用而使分裂期的细胞染色体受到损伤，在中期就会观察到染色体断裂，在进入分裂后期时，这种断片落后于向两极移动的染色体而滞留在赤道板附近，当其它染色体分别形成子细胞核时，这些落后的断片便独立形成微核，如果纺锤体功能受损，也可产生微核。
由上可见，微核的出现和染色体畸变有密切相关性，同时微核的观察是在细胞的间期，不必分析中期相，这比分析染色体畸变要方便一些。进行骨髓细胞微核分析一般观察红细胞，记数嗜多染红细脑中微核出现率。
器材与试剂
1、器材
载玻片、推片、血细胞计数器、滴管、注射器、解剖剪、镊子、止血钳、晾片架、滤纸、电吹风机、染色缸、研钵、恒温水浴箱、光学生物显微镜（或荧光显微镜）。
2、试剂
小牛血清；
甲醇；
吉姆萨储备液：将1g 吉姆萨倒入研钵内，加入少许甘油混合研细，分次倒入剩余的甘油至66ml，转移到烧杯内（或试剂瓶内）。放入55~60℃水浴中并不断搅动至2h。取出冷却后加入60ml甲醇，混匀后置室温，2~3周后过滤，保存于棕色瓶内备用（存放时间越长染色效果越好）。
吉姆萨染色液：实验前取吉姆萨储备液与磷酸盐缓冲液（pH 6.8）1 : 9混匀。
磷酸盐缓冲液（pH 6.8）
小鼠骨髓细胞微核试验
小鼠骨髓细胞微核试验
小鼠骨髓细胞微核试验是一种用于检测物质对小鼠骨髓细胞基因毒性的方法。骨髓细
胞微核是正常细胞中小核细胞数量的标志。在受到某些化学物质的影响后，骨髓细胞可以
形成异常小鼠骨髓微核和形态不规则的细胞，这是指指出该物质可能是致癌物或基因毒物，因此，这种试验可以用于评估某种物质对人类健康的风险。
在小鼠骨髓微核试验中，通常将小鼠的骨髓细胞放置在培养基中进行培养，然后将待
检物质加入培养中。待检物质可能是化学物质、辐射或生物质等。随后，经过一定时间后，分离的细胞会被染色并进行显微镜检查，以确定细胞数量和微核的数量。
通过小鼠骨髓细胞微核试验得出的结果可以帮助研究人员判断待检物质是否是基因毒
物和可能是致癌物，是否影响细胞的正常生长和健康。因此，小鼠骨髓细胞微核试验已成
为一种广泛使用的实验室技术，以评估物质的潜在致癌性和毒性。
总之，小鼠骨髓细胞微核试验是一种快速且有效的实验室技术，用于评估化学物质、
辐射等物质对人类健康的影响和风险。虽然该方法需要一定的经验和技能，但它已被广泛
使用于实验室中，并成为确定制定公众卫生政策的重要工具之一。
骨髓细胞微核试验
骨髓细胞微核试验(保健食品)
1.实验动物
小鼠是微核试验的常规动物，也可选用大鼠。通常用7周~12周龄，体重25g~30g的小鼠或体重150 g~200 g的大鼠。每组用两种性别的动物至少各5只。动物购买后适应环境至少3天。
2．剂量及分组
受试物应设三个剂量组，最高剂量组原则上为动物出现严重中毒表现和/或个别动物出现死亡的剂量，一般可取1/2LD50，低剂量组应不表现出毒性，分别取1/4LD50和1/8LD50
作为中、低剂量。急性毒性试验给予受试物最大剂量（最大使用浓度和最大灌胃容量）动物无死亡而求不出LD50时，高剂量组则按以下顺序：a) 10g/kg体重; b)人的可能摄入量的100倍;或c) 一次最大灌胃剂量进行设计，再下设中、低剂量组。另设溶剂对照组和阳性对照组。阳性对照物可用环磷酰胺40mg/kg体重经口或腹腔注射(首选经口)给予。
3．操作步骤
3.1 受试物配制
一般用蒸馏水作溶剂，如受试物不溶于水，可用食用油、医用淀粉、羧甲基纤维素等配成乳化液或悬浊液。受试物应于灌胃前新鲜配制，除非有资料表明以溶液(或悬浊液、乳浊液等)保存具有稳定性。
3.2 实验动物的处理
经口灌胃。根据细胞周期和不同物质的作用特点，可先做预试，确定取材时间。常用30h给受试物法。即两次给受试物间隔24h，第二次给受试物后6h，颈椎脱臼处死动物。3.3 标本制备
取胸骨或股骨,用止血钳挤出骨髓液与玻片一端的小牛血清混匀,常规涂片,或用小牛血
清冲洗股骨骨髓腔制成细胞悬液涂片,涂片自然干燥后甲醇固定5~10min。当日固定后保存。将固定好的涂片放入Gleams应用液中，染色10~15 min，立即用pH6.8的磷酸盐缓冲液或蒸馏水冲洗、晾干。写好标签，阴凉干燥处保存。
小鼠骨髓细胞微核试验.
Βιβλιοθήκη Baidu
一、实验目的
1． 观察诱变物质产生的微核； 2． 了解微核测定的方法与意义，计算微核 率。
二、实验原理
微核（Micronuclei）是真核类生物细胞中的一种异常结构， 往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间 期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主 核1/3 以下。 已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈 正相关，这一点和染色体畸变一样。所以，可用间期的微 核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。 目前国内外不少部门已经把微核测试用于辐射损伤，辐射 防护，化学诱变剂，新药实验，染色体遗传疾病及癌症前 期诊断等各方面。
三、实验材料
小鼠骨髓
四、实验步骤
1. 实验前6小时用对苯二酚80mg/kg注射于小鼠腹腔内， 处死动物，用0.85%的生理盐水吹出股骨骨髓，离心1000 转/分5分钟，除上清液，滴入少量小牛血清混匀后涂片。 2. 固定：放入甲醇和冰醋酸固定液中固定5-10分钟； 3. 染色：直接在Gimsa染液中染色10分钟，然后冲洗； 用滤纸擦干载片背面的水分，再用滤纸轻轻吸干载片上面 的水分，取出盖上盖片； 4. 观察：嗜多染红细胞呈灰兰色，成熟红细胞呈桔红色， 每只动物计数1000-2000个嗜多染红细胞，微核率为千分 之2.58+0.41。
五、作业
染色体畸变和微核检测标准操作文件
染色体畸变和微核检测标准操作文件
微核试验，简单说，就是看看细胞里的小圈圈。
你知道细胞里的小圈圈吗？它们叫微核，是细胞分裂时形成的小东西。通过看看这些微核的数量和样子，我们就能知道细胞是不是健康。
小鼠骨髓细胞微核试验，就是拿小鼠做实验，看看某种东西会不会让细胞里的微核变多。这样，我们就能知道这个东西是不是对细胞有害。
染色体畸变，有时候，我们的遗传密码本会出错，这就是染色体畸变。
想象一下，你的遗传密码本就像一本书，但有时候这本书的页码会乱，或者少了几页，这就是染色体畸变。它可能会导致一些健康问题。
为了了解这种畸变，科学家们会研究小鼠等动物的染色体。他们会看看染色体是不是完整，数量对不对。这样，他们就能找出导
致染色体畸变的原因，并找到解决办法。
预防染色体畸变，就像保护一本书。我们要尽量避免让书受损，保持它的完整。这样，我们的遗传密码本就能正常工作，我们也就
更健康啦！
实验17 小鼠骨髓细胞微核试验
小鼠骨髓细胞微核试验
金一和
大連理工大学環境与生命学院
微核形成机理
微核实验原理
微核是染色体断裂或纺锤丝受损, 在细胞有丝分裂后期滞留在细胞核外的遗传物质。
RBC在成熟之前最后一次细胞分裂后，
主核排出细胞外，微核仍滞留在PCE细胞中。因此，可以根据PCE细胞中微核出现率，观察环境污染物对染色体完整性和染色体分离改变的影响，判定其有无遗传毒性。
实验目的
1.掌握小鼠骨髓细胞微核试验方法
2.掌握骨髓多染红细胞（PCE）中微核的观察方法
实验器材
1.手术刀
2.手术剪
3.无齿镊
4.小型弯止血钳
5.干净纱布
6.带橡皮头吸管
7.台式离心机
8.刻度离心管
9.电吹风机
10.玻璃蜡笔
11.2ml注射器及针头
12.载玻片及推片
13.定时钟
14.带油镜头显微镜
15.细胞计数器
16.玻璃染色缸
17.晾片架
主要试剂
甲醇（分析纯）
生理盐水
小牛血清
pH6.8的磷酸盐缓冲液
分别取1/15 mol/L的磷酸二氢钾溶液50.40ml和1/15 mol/L的磷酸氢二钠溶液49.60ml，两者混合均匀。
阳性对照物环磷酰胺或丝裂霉素C
实验操作步骤
•染毒次数连续 4 次染毒
取样时间
最后一次染毒后，经过24h，取骨髓制作骨髓涂片
骨髓涂片的固定、染色和封片
微核观察和细胞计数
骨髓细胞染色方法
取胸骨
剪去骨骺端擦净血污，剔去肌肉
小牛血清
Giemsa 应用液10~15min 甲醇中，固定
15min 混匀、推片冲洗、晾干晾干
冲洗、晾干细胞计数
嗜多染红细胞和微核
微核率计算方法
结果分析与评价
阳性判断
实验组中至少一个剂量组微核阳性率显著大于对照组，并具有重现性和剂量-反应关系。
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三、实验材料
小鼠骨髓
Βιβλιοθήκη Baidu
四、实验步骤
1. 实验前6小时用对苯二酚80mg/kg注射于小鼠腹腔内， 处死动物，用0.85%的生理盐水吹出股骨骨髓，离心1000 转/分5分钟，除上清液，滴入少量小牛血清混匀后涂片。 2. 固定：放入甲醇和冰醋酸固定液中固定5-10分钟； 3. 染色：直接在Gimsa染液中染色10分钟，然后冲洗； 用滤纸擦干载片背面的水分，再用滤纸轻轻吸干载片上面 的水分，取出盖上盖片； 4. 观察：嗜多染红细胞呈灰兰色，成熟红细胞呈桔红色， 每只动物计数1000-2000个嗜多染红细胞，微核率为千分 之2.58+0.41。
五、作业
1. 观察并记数细胞微核率； 2. 用统计学软件SPSS统计结果。
小鼠骨髓细胞微核试验
一、实验目的
1． 观察诱变物质产生的微核； 2． 了解微核测定的方法与意义，计算微核 率。
二、实验原理
微核（Micronuclei）是真核类生物细胞中的一种异常结构， 往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间 期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主 核1/3 以下。 已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈 正相关，这一点和染色体畸变一样。所以，可用间期的微 核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。 目前国内外不少部门已经把微核测试用于辐射损伤，辐射 防护，化学诱变剂，新药实验，染色体遗传疾病及癌症前 期诊断等各方面。