微生物限度检查方法适用性验证方案
最新版中国药典微生物限度检查方法验证方案
最新版中国药典微生物限度检查方法验证方案
人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查方法验证方案起草部门：QC 组签名：日期：
审核
部门：QC组签名：日期：
部门：质量部签名：日期：
批准质量负责人签名：日期：
质量部颁发本文件根据需要应分发于以下部门：
01 质量部
下表用于记录修订/变更主要内容及历史。
文件编号修订原因修订日期TS-VP-4201-00 按GMP（2010年修订版）要求新制定2015.10.22
目录
1. 概述
2. 验证目的和范围
3. 组织及职责
4. 验证进度计划表
5. 验证所需要的仪器设备及相关文件的确认
6. 验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认
7.验证项目和验证方法
7.1试验菌株
7.2需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备
7.3需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法7.4需氧菌总数检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法
7.5控制菌检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法
8.偏差与漏项控制
9.验证报告会审
1. 概述
我公司生产品种人工牛黄甲硝唑胶囊，产品微生物限度检查项目
为需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、以及大肠埃希菌检查和沙门菌检查。参照《中国药典》2015版四部附录1105：微生物计数法，以及1106：控制菌检查法的规定，本公司对该产品的微生物限度检查方法予以验证。通过验证以确认所采用的微生物限度检查方法适用。
人工牛黄甲硝唑胶囊处方中含有甲硝唑、人工牛黄以及常用辅料成分，文献资料介绍甲硝唑对细菌有抑菌特性，对霉菌和酵母菌无抑菌活性。甲硝唑在水中微溶，可以通过离心沉淀-薄膜过滤法去除其对微生物生长的影响。本验证方案通过试验菌株的回收率测试，首先确认常规倾注平皿法是否适用于本品的微生物限度检查；如常规倾注平皿法不适用，则进一步验证可去除供试品抑菌物质的离心沉淀-薄膜过滤法是否适用于本品的微生物限度检查。
微生物限度检查方法适用性试验方案模板2015版药典
微生物限度检查方法适用性试验方案模板2015版药典
验证文件
类别：
编号：
部门：
XXXX微生
物限度检查方法适用性试验方案
XXXXX公司
2016年
XXXX微生物限度检查方法适用性试验方案审批
目录
1、适用范围
2、目的
3、概述
4、适用性所需要的仪器设备及文件
5、可接受的限度范围标准
6、测试方法
7、异常情况处理
8、测试结果
9、结论
10、再适用性周期
11、附表
1、适用范围
本适用性方案适用于XXXX微生物限度检查的方法适用性试验。
2、目的
因《中华人民共和国药典》（2015年版）颁布实施，为确保该产品的微生物限度检查方法的可靠性和可操作性，故对其检验方法进行适用性试验，以符合《中华人民共和国药典》规定。
3、概述
3.1根据《中华人民共和国药典》2015年版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法，对XXXX进行需氧菌、霉菌和酵母菌、大肠埃希菌检查方法的适用性试验，以确认供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性。
3.2适用性试验时间及批号：年月日开始分别对、、
三批XXXX进行独立的方法适用性试验。
3.3验证小组
4、仪器设备及文件
4.1需用仪器设备
5、可接受的限度范围标准
5.1XXXX微生物限度检查质量标准
5.2需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法采用《中华人民共和国药典》2015版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法中叙述的平皿法中的倾注法。控制菌检查方法采用1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法中大肠埃希菌检查方法
6、测试方法
6.1供试品 XXXX 批号：
微生物限度检查方法适用性试验方案
微生物限度检查方法适用性试验方案
验证方案组织与实施
微生物限度检查方法适用性试验工作应由质量管理部门负责组织，质量管理部门有关人员组成验证小组，参与实施。
方案起草
方案审核
方案批准
目录
一、概述
二、验证目的和风险评估
三、验证内容
四、方法判定
五、再验证周期
六、参考文献
七、结果评价及结论
1、概述：
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括需氧菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌检查。当建立产品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法的适用性试验和控制菌检查方法的适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌、霉菌和酵母菌数的测定和控制菌检查。
由于依照中国药典2010版的检查方法验证,需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌均采用平皿法。故现升级为中国药典2015版，需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采用平皿法进行方法适用性试验。
2、试验目的和风险评估：
验证目的：确认所采用的需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制菌检查方法适合我公司所生产产品的微生物限度检查。
风险评估：
3、验证内容：
3.1、培养基来源：
确认人：确认日期：
3.2、检查用培养基配制方法：
确认人：确认日期：
3.3、使用仪器
确认人: 确认日期：
3.4、验证试验用菌种：
确认人：确认日期：
3.5试验方法：
取供试品 10 g加PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供试液。需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌采用常规法。
3.6菌液的制备：
3.6.1取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金饵，加入胰酪大豆胨液体培养基中置30～35℃培养箱中培养18～24h，取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养物1ml加入9ml0.9％无菌氯化钠溶液中，制成10-1 的菌液，依法10倍稀释至10～7，分取各菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基20ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。
微生物限度检查方法的再确认方案 - 副本
微生物限度检查方法验证方案编号
微生物限度
检查方法验证方案
***制药有限公司
验证方案审批表
1. 验证的目的及范围
1.1目的
为保证微生物检测方法的准确可靠，制定本验证方案，以确认所采用的检查方
法适合于原料药车间生产的的微生物限度检查。
1.2本次验证的范围
适用于的微生物限度检查方法的验证实施。
2概述
根据2015年药典标准，通过验证采用合适的方法进行的微生物限度检查。所使用培养基已进行适用性检查。
3合格标准
《中国药典》2015年版规定，试验组的菌数回收率均应在0.5~2范围内，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数；控制菌试验检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查；若验证结果达不到规定，应采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。
4试验准备工作
4.1验证环境要求：验证应在环境洁净度C级下的局部洁净度A级的单向流空气区域内进行。
4.2验证所用仪器
附表：所用仪器表
4.3验证用培养基
（1）胰酪大豆琼脂培养基胰酪大豆液体培养基
（2）沙氏葡萄糖琼脂培养基
4.4验证用菌种名称及其编号
表4：所用菌种
5验证内容
5.1操作方法
操作方法可按《中国药典》2015年版四部“微生物限度检查法”中的平皿法。
5.1.1菌液的制备：
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌用胰酪大豆液体培养基，30-35℃培养18-24小时，白色念珠菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基，20-25℃培养2-3天，黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂培养基，20-25℃培养5-7天。
微生物限度检查方法验证方案
文件制修订记录
微生物限度检查方法验证方案
1.0概述
药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查。所以对感冒灵颗粒微生物限度检查进行方法的验证。
2.0目的
为了保证检验质量，对所用的检验方法必须经过验证，才能确保检验结果的准确可靠。
3.0适用范围
本方案适用于感冒灵颗粒微生物方法学的确认与验证。
4.0验证人员职责
4.1验证小组:
组长：质量管理部经理
成员：QC主管、微生物操作人员
4.2职责及分工：QC主管组织起草该验证方案，并组织实施该方案；
微生物操作人员具体实施该方案；
质量管理部经理协助和监控该方案的实施。
4.3验证方案批准后，应进行培训。由验证小组指定人员负责对小组成员及和验证有关的人员进行培训。
5.0验证依据
中国药典2015年版通则“1105”、“1106”
6.0感冒灵颗粒微生物限度检验方法验证风险分析：见附件。
6.1 结果分析：通过以上采取的措施，风险均控制在可接受范围内。
7.0人员培训确认表
8.1 仪器及设备名称
感冒灵颗粒规格：批号：感冒灵颗粒规格：批号：
感冒灵颗粒规格：批号：
验证用培养基：
胰酪大豆胨琼脂培养基生产厂家：批号：配制批号：
沙氏葡萄糖琼脂培养基生产厂家：批号：配制批号：
营养琼脂培养基生产厂家：批号：配制批号：
胰酪大豆胨液体培养基生产厂家：批号：配制批号：
沙氏葡萄糖琼脂培养基生产厂家：批号：配制批号：
麦康凯液体培养基生产厂家：批号：配制批号：
麦康凯琼脂培养基生产厂家：批号：配制批号：
8.3验证用菌种:
纯化水微生物限度检查方法验证方案
纯化水微生物限度检查方法验证方案
产品名称：纯化水
验证类型：验证
部门：质量部
目录
1、概述
2、验证目的
3、适用范围
4、验证小组成员及职责
5、验证项目
6、验证内容
7、验证总结论
8、偏差处理情况
9、再验证周期
10、结果审批及综合评价
11、参考文献
验证方案签字表
1、概述
纯化水作为我公司的一种用于产品生产的原辅料及清洁用水，为保证产品的质量，应对纯化水进行微生物限度检查方法的确认，参照《中国药典》2015年版二部纯化水微生物限度的要求，重新建立微生物限度检查的试验，以确认改产品在该试验条件下所采用的方法适合于该产品的微生物限度检查。
2、验证目的
按照《中国药典》2015年版规定对纯化水微生物限度检查采用薄膜过滤法进行试验，在现有检验程序、检测条件及培养条件下，通过试验以确认所采用的方法适合于纯化水需氧菌总数的测定；
3、适用范围
本验证方案适用于本公司 QC 实验室，对纯化水微生物限度检查方法（薄膜过滤法）适用性的验证。
4、验证小组成员及职责
5、验证项目及描述
5.1项目：需氧菌总数检查方法的验证
5.2 描述
取三个不同批号的纯化水用薄膜过滤法检测微生物限度，通过比较试验菌的恢复生长结果评价整个检验方法的准确性、有效性，通过计算回收率来判断检查方法是否有影响，通过验证来确认薄膜过滤法适合于纯化水需氧菌总数的测定。三次试验中，稀释剂对照回收率应在 50%～200%范围内，试验组回收率也应在 50%～200%范围内。进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证时，所有的平皿和稀释剂都应该严格灭菌消毒、灭菌，确保对试验结果没有影响。
微生物限度检查方法适用性试验方案
微生物限度检查方法适用性试验方案
一、试验目的
本试验旨在验证微生物限度检查方法的适用性，并评估其在实际样品中的准确性、精密度和灵敏度，以确保检测结果的可靠性。
二、试验范围
本试验适用于各类药品、食品、环境以及生物制品等样品的微生物限度检查。
三、试验设备与试剂
1. 培养基：本试验需使用适当的培养基，如大肠杆菌培养基、沙门氏菌培养基等，以满足特定微生物的培养需求。
2. 灭菌设备：试验中的培养基、工具及试剂需经过灭菌处理，以保证试验环境的无菌状态。
3. 微量移液器：用于准确取样和移液，确保实验的精确性。
4. 微生物培养箱：用于提供适宜的温度和湿度条件来培养微生物样品。
四、试验步骤
1. 样品制备：按照相关规定和标准采集样品，并根据不同样品的特性进行适当处理，以便得到具有代表性的样品。
2. 培养基接种：将样品按照试验要求接种到相应的培养基中，并在
一定条件下进行培养，以促使微生物生长。
3. 培养基培养：将接种过样品的培养基置于微生物培养箱中，根据
微生物的生长特性进行培养，通常包括温度、湿度和培养时间等方面
的控制。
4. 结果观察与记录：根据实验要求，观察培养基上是否有微生物的
生长，并记录对应的观察结果。
5. 试验数据处理与分析：根据试验结果进行数据处理与分析，并评
估微生物限度检查方法的适用性、准确性和灵敏度。
五、试验评价指标
1. 准确性：通过与参考方法的比对，评估限度检查方法的准确程度。
2. 精密度：利用不同实验者、设备和试剂的重复试验，评估方法的
可重复性和稳定性。
3. 确定度：评估方法的灵敏度和特异性，以确定方法对微生物的检
微生物限度检查——培养基的适用性检查与检查方法的适用性试验.
制作人：王丽娟 重庆医药高等专科学校
控制菌检查—— 培养基的适用性检查与检查方法的适用性试验
提纲
一、控制菌种类 二、培养基的适用性检查与检查方法的适用性试验 三、对照试验
一、控制菌种类
耐胆盐革兰阴性菌
白色念珠菌
大肠埃希菌
控制菌检查项目 梭菌 沙门菌
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
二、培养基的适用性检查与检查方法的适用性试验
1.控制菌检查用培养基的适用性检查 控制菌检查用培养基包括成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应进 行培养基的适用性检查，检查项目包括培养基的促生长、抑制能力和指示特性。
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
大肠埃希菌
乙型副伤寒沙门菌
白色念珠菌
生孢梭菌
2.检查方法的适用性试验 检查方法及流程同“微生物计数法适用性检查” 所用阳性对照菌液不同 结果判断不Hale Waihona Puke Baidu：控制菌检查用培养基制药检出阳性对照菌即可判为无抑菌性
三、对照试验
阳性对照试验 • • • 目的：检查供试品是否有抑菌作用及培养条件是否适宜 操作：同供试品操作，仅加入了不超过100cfu的阳性对照菌 结果要求：应呈阳性 阴性对照试验 • • • 目的：检查操作环境、试验物品、操作技术是否无菌 操作：用稀释剂代替供试品，其余同供试品。 结果要求：应呈阴性
微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查法验证方案
1。目的:
为确认所采用的方法适用于药品微生物限度检查，包括细菌、霉菌、酵母菌和对照菌的计数，特制定本验证方案。通过比较试验菌的复苏生长结果，评价整个试验方法的准确性、有效性和重现性，从而确定试验样品在实验条件下无抑菌活性或抑菌活性可忽略不计。所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。
验证过程应严格按照本计划规定的内容进行。因特殊原因确需变更的，应填写《验证计划变更申请书》，报验证领导小组批准。2.范围: 本验证计划适用于微生物限度检查方法的验证。
3。规范性引用文件:
根据《中国药典》XXXX版附录二附录九J微生物限度检查法的要求，由于部分试验品的抗菌活性，当已建立的微生物检查方法或产品的成分发生变化或原检查方法的检查条件发生变化时，可能会影响检查结果的准确性。因此，必须验证测试物品的抗菌活性和测试方法的可靠性。4.验证和实施:
4.4.1试验前准备:
4.4.1.1试验设备的准备:试管、刻度移液器、薄膜过滤器、滤膜(孔径0.22um，直径50毫米)、平皿、空三角瓶、称重纸等。试验要求用牛皮纸包裹，放在湿热灭菌器中，在121℃灭菌30分钟，3天内使用4.4.1.2试验培养基的制备:取脱水培养基如营养琼脂培养基、玫瑰红
钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基(BL)、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡萄糖醛酸苷培养基(MUG)等经适用性检验合格的脱水培养基，按相应的制备说明用纯净水配制，分装，2小时内放入湿热灭菌器中，121℃灭菌15分钟，3周内使用
微生物限度检查方法适用性试验方案模板药典
微生物限度检查方法适用性试验方案
模板药典
1
2020年4月19日
验证文件
类别：
编号：
部门：
XXXX微生
物限度检查方法适
用性试验方案
XXXXX公司
XXXX微生物限度检查方法适用性试验方案审批
起草
审核
批准
目录
1、适用范围
2、目的
3、概述
4、适用性所需要的仪器设备及文件
5、可接受的限度范围标准
6、测试方法
7、异常情况处理
8、测试结果
9、结论
10、再适用性周期
11、附表
2
2020年4月19日
1、适用范围
本适用性方案适用于XXXX微生物限度检查的方法适用性试验。
2、目的
因《中华人民共和国药典》（）颁布实施，为确保该产品的微生物限度检查方法的可靠性和可操作性，故对其检验方法进行适用性试验，以符合《中华人民共和国药典》规定。
3、概述
3.1根据《中华人民共和国药典》四部通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法，对XXXX进行需氧菌、霉菌和酵母菌、大肠埃希菌检查方法的适用性试验，以确认供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性。
3.2适用性试验时间及批号：年月日开始分别对、、三批
XXXX进行独立的方法适用性试验。
3.3验证小组
4、仪器设备及文件
4.1需用仪器设备
3
2020年4月19日
中国药典微生物限度检查方法验证方案
中国药典微生物限度检查方法验证方案
一、引言
药品的质量与安全性是保障患者用药安全的重要方面。微生物限度
检查是药品质量控制的重要环节，用于评价药品中微生物的污染情况。为确保检测结果的准确性和可靠性，本文旨在制定中国药典微生物限
度检查方法验证方案。
二、背景
微生物限度检查方法验证是指确定某一方法在特定条件下的适用性，方法验证的结果直接影响到药品生产和品质控制。为了保证方法验证
的可靠性，必须按照一定的规范和要求进行操作。
三、验证目的
验证中国药典中所规定的微生物限度检查方法在实际应用中的准确
性和可靠性，以确保药品的微生物限度符合国家及相关法规的要求。
四、验证程序
1. 确定验证方法：根据中国药典中规定的微生物限度检查方法，选
择合适的验证样品和验证条件。
2. 准备验证样品：从实际生产过程中随机选取药品样品，确保样品
的代表性。
3. 执行验证实验：按照中国药典中的方法操作，对验证样品进行微
生物限度检查。
4. 数据分析和评估：根据验证实验的结果，进行数据分析和评估，
评估方法的准确性和可靠性。
5. 结果判定：根据数据评估结果，对微生物限度检查方法进行判定，判断方法是否适用于实际生产中的微生物限度检查。
6. 验证报告编制：根据验证实验的结果和结论，编制验证报告。
五、验证内容
本次验证主要包括如下内容：
1. 对选择的验证样品进行微生物限度检查。
2. 对验证样品进行菌落计数。
3. 对验证样品进行培养方法的验证。
4. 对不同微生物种类的检查方法进行验证。
5. 对不同微生物菌株的适应性进行验证。
六、风险评估
在验证过程中，存在一定的风险因素，需进行风险评估，确保验证
中国药典微生物限度检查方法验证方案
中国药典微生物限度检查方法验证方
案
人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查方法验证方案
下表用于记录修订/变更主要内容及历史。
目录
1. 概述
2. 验证目的和范围
3. 组织及职责
4. 验证进度计划表
5. 验证所需要的仪器设备及相关文件的确认
6. 验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认
7.验证项目和验证方法
7.1试验菌株
7.2需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备
7.3需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法
7.4需氧菌总数检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法
7.5控制菌检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法
8.偏差与漏项控制
9.验证报告会审
1. 概述
我公司生产品种人工牛黄甲硝唑胶囊，产品微生物限度检查项目为需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、以及大肠埃希菌检查和沙门菌检查。参照《中国药典》四部附录1105：微生物计数法，以及1106：控制菌检查法的规定，本公司对该产品的微生物限度检查方法予以验证。经过验证以确认所采用的微生物限度检查方法适用。
人工牛黄甲硝唑胶囊处方中含有甲硝唑、人工牛黄以及常见辅料成分，文献资料介绍甲硝唑对细菌有抑菌特性，对霉菌和酵母菌无抑菌活性。甲硝唑在水中微溶，能够经过离心沉淀-薄膜过滤法去除其对微生物生长的影响。本验证方案经过试验菌株的回收率测试，首先确认常规倾注平皿法是否适用于本品的微生物限度检查；如常规倾注平皿法不适用，则进一步验证可去除供试品抑菌物质的离心沉淀-薄膜过滤法是否适用于本品的微生物限度检查。
本验证方案根据样品特性制定微生物限度检查方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。
微生物限度检查方法适用性验证方案
微生物限度检查方法适用性验证方案
适用性验证是指对微生物限度检查方法所应用范围进行验证，确保方
法适用于具体药物产品的检测。适用性验证需要涉及以下几个方面：
1.准确性：准确性是微生物限度检查方法的基本要求。验证方法的准
确性需要进行重复性和中间精密度实验，确保在一定条件下对同一药物样
品进行测试时，结果之间具有较高的一致性和准确性。
2.灵敏度：灵敏度是指微生物限度检查方法能够检测到微生物数量的
最低限度。灵敏度验证需要使用一系列稀释溶液，以确定方法可以可靠地
检测到微生物的最低限度。
3.特异性：特异性是指微生物限度检查方法只对目标微生物有反应，
不受其他微生物的干扰。特异性验证需要进行对照实验，验证方法能够正
确地检测出目标微生物，并排除其他微生物的干扰。
4.精密度：精密度是指方法的重复性和中间精密度。重复性验证需要
多次重复测定同一样品，验证方法在相同条件下的结果具有较高的一致性；而中间精密度验证需要在不同的实验室、不同仪器、不同操作人员下进行
测试，验证方法在不同条件下的可靠性。
5.稳定性：稳定性是指方法在一定时间范围内的稳定性。稳定性验证
需要在一定时间范围内对同一样品进行测试，并比较结果的一致性，以确
保方法的可靠性和稳定性。
在实施适用性验证时需要注意以下几个方面：
1.选择合适的药物样品进行验证，确保样品具有代表性和典型性。
2.严格控制实验条件，包括试验环境、温度、湿度等，以减少实验条件对结果的影响。
3.提高实验人员的技能水平，确保实验人员具有足够的实验操作技能和知识背景。
4.在验证过程中及时记录实验数据，并进行统计分析，确保结果的可靠性和准确性。
微生物限度方法学验证方案沙门菌
微生物限度方法学验证方案沙门菌
微生物限度检测方法学验证方案
文件编号：YZ-WJ-001-0
批准签字页
目录
1.目的................................................................................................... 错误!未定义书签。
2.责任者及职责 ................................................................................... 错误!未定义书签。
3.验证简介 ........................................................................................... 错误!未定义书签。4．验证过程.. (5)
5．结果判断 (5)
6．结论和建议 (5)
7．再验证 (5)
8．附件 (5)
附件1：培养基的灵敏度复核 (6)
附件2：稀释液的无菌性检查 .............................................................. 错误!未定义书签。附件3：方法验证 (8)
附件4：培养基厂家报告 (9)
1.目的
按照中国药典（第四部）规定，确认所采用的方法适合该药品的沙门菌的测定。照此检测法和检验条件进行沙门菌检查，能保证结果的准确、可靠。2.责任者及职责
3.验证简介
验证时，按供试液的制备控制菌检查法所规定的方法及要求进行，验证实验至少进行3次独立平行实验。
3、微生物检验方法适用性试验(苏州 160429)
2、阳性对照
- 与可接受的标准不符 结论：重新试验
3、阳性菌计数
- 与标准不符 结论：重新开设大肠杆菌的恢复试验，制作 新的菌悬液直到符合规定。
优化控制菌验证步骤
n
扩大增菌液的体积
100ml 200ml 300ml 400ml 500ml
n
延长增菌液的培养时间 采用薄膜过滤法 加入活性试剂
n
n
检验法适用性试验（薄膜过滤法）
适用性试验结果
n
根据适用性试验结果，判断是否符合培养基适 用性标准。 按适用性方法和条件继续进行药品的微生物 限度检查；
- 符合：
- 不符合： 重新设计适用性试验方案，再进行试验，直 至适用性试验结果全部符合预定方案。
适用性试验报告的形成
1、全部适用性试验工作必须按照批准的适用 性试验进行。 2、适用性试验方案批准后，可以进一步再修 订，但必须在验证报告上注明。 3、适用性试验结束后，应该同时出具验证数 据记录和适用性试验报告。 4、最终样品稀释度及方法必须在SOP中 说明。
问题？
谢 谢
2016.04.15
非无菌产品微生物限度检查： 控制菌检查法
培养基适用性检查
n
培养基促生长能力检查
分离培养基在规定的最短时间内促生长能力考察。
n
培养基抑菌能力检查
分离培养基在规定的最长时间内的抑菌能力考察。
微生物限度检查方法适用性试验方案
微生物限度检查方法适用性试验方案
公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]
微生物限度检查方法适用性试验方案
验证方案组织与实施
微生物限度检查方法适用性试验工作应由质量管理部门负责组织，质量管理部门有关人员组成验证小组，参与实施。
方案起草
方案审核
方案批准
目录
一、概述
二、验证目的和风险评估
三、验证内容
四、方法判定
五、再验证周期
六、参考文献
七、结果评价及结论
1、概述：
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括需氧菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌检查。当建立产品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法的适用性试验和控制菌检查方法的适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌、霉菌和酵母菌数的测定和控制菌检查。
由于依照中国药典2010版的检查方法验证,需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌均采用平皿法。故现升级为中国药典2015版，需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采用平皿法进行方法适用性试验。
2、试验目的和风险评估：
验证目的：确认所采用的需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制菌检查方法适合我公司所生产产品的微生物限度检查。
风险评估：
3、验证内容：
、培养基来源：
确认人：确认日期：、检查用培养基配制方法：
确认人：确认日期：
、使用仪器
确认人: 确认日期：
、验证试验用菌种：
确认人：确认日期：
试验方法：
取供试品 10 g加氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供试液。需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌采用常规法。
菌液的制备：
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微生物限度检查方法适用性试验方案
验证方案组织与实施
微生物限度检查方法适用性试验工作应由质量管理部门负责组织，质量管理部门有关人员组成验证小组，参与实施。
方案起草
方案审核
方案批准
目录
一、概述
二、验证目的和风险评估
三、验证内容
四、方法判定
五、再验证周期
六、参考文献
七、结果评价及结论
1、概述：
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括需氧菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌检查。当建立产品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法的适用性试验和控制菌检查方法的适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌、霉菌和酵母菌数的测定和控制菌检查。
依照中国药典2015版，需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采用平皿法进行方法适用性试验。
2、试验目的和风险评估：
验证目的：确认所采用的需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制菌检查方法适合我公司所生产产品的微生物限度检查。
风险评估：
3、验证内容：
、培养基来源：
确认人：确认日期：
、检查用培养基配制方法：
确认人：确认日期：
、使用仪器
确认人: 确认日期：
、验证试验用菌种：
确认人：确认日期：
试验方法：
取供试品10 ml加氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供试液。需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌采用
常规法。
菌液的制备：
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金饵，加入胰酪大豆胨液体培养基中置30～35℃培养箱中培养18～24h，取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养物1ml加入％无菌氯化钠溶液中，制成10-1 的菌液，依法10倍稀释至10～7，分取各菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基20ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。
取白色念珠菌的沙氏葡萄糖琼脂斜面培养物，加入沙氏葡萄糖液体培养基中置20～25℃培养箱中培养24～48h，取白色念珠菌的沙氏葡萄糖液体培养物1ml加入％无菌氯化钠溶液中，制成10-1 的菌液，依法10倍稀释至10～7，取菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。
取黑曲霉的新鲜培养物接种子沙氏葡萄糖琼脂斜面上，20-25℃培养5-7天，加入3-5ml含%聚山梨酯80的%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。取1ml加入含%聚山梨酯80的9ml %无菌氯化钠溶液中，制成10-1的菌液，依法10倍稀释至10～7，取，取菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。
需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法适用性试验：
供试液制备：
取供试品10 ml，加氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供试液。
实验条件：
需氧菌培养温度：30～35℃3～5天培养箱：
霉菌和酵母菌培养温度：20～25℃5～7天培养箱：
试验方法：
试验组：
分别取供试液，分别加入浓度为1000CFU的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌，混匀后取其中1ml注皿,倾注温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基20ml，置30～35℃或培养箱中培养不超过3天，计数，每株试验菌平行制备2个平皿。
分别取供试液，分别加入浓度为1000CFU白色念珠菌、黑曲霉菌液，混匀后分别取其中1ml注皿,倾注温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基20ml，置30～35℃或培养箱中培养不超过5天，计数，每株试验菌平行制备2个平皿。另分别取其中1ml注皿, 倾注温度不超过45℃的沙氏葡萄糖琼脂培养基20ml，置20～25℃或培养箱中培养不超过5天，计数，每株试验菌平行制备2个平皿。
菌液对照组：分别取稀释液，分别加入浓度为1000CFU的菌液，按试验组操作,倾注温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基，置与试验组相同条件下培养, 计数。每株试验菌平行制备2个平皿。
供试品对照组：取供试液1ml，倾注温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基，置与试验组相同条件下培养, 计数。每株试验菌平行制备2个平皿。
实验结果
结果判定：试验组的菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在～2范围内。
比值=试验组菌落数～供试品对照组的菌落数*
对照组菌落数
需氧菌计数方法适用性试验结果
试验次数：1 供试品批号:
检验人：日期：
复核人：日期：
试验次数：2 供试品批号:
检验人：日期：
复核人：日期：
试验次数：3 供试品批号:
检验人：日期：
复核人：日期：霉菌和酵母菌计数方法适用性试验结果
试验次数：1 供试品批号:
检验人：日期：
复核人：日期：试验次数：2 供试品批号:
检验人：日期：
复核人：日期
试验次数：3 供试品批号:
检验人：日期：
复核人：日期
结论:
检验人：日期：
复核人：日期：
控制菌微生物检测方法适用性试验：
实验方法：
试验组：取供试液10ml及不大于100cfu大肠埃希菌菌液加入胰酪大豆胨液体培养基中，置30～35℃培养18-24小时, 取上述培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24-48小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上30～35℃培养18-72小时。试验组应生长良好。
阴性对照组：取稀释剂10ml,加入胰酪大豆胨液体培养基中，置30～35℃培养18-24小时，阴性对照应无菌生长。
阳性对照组：取不大于100cfu大肠埃希菌菌液加入胰酪大豆胨液体培养基中，置30～35℃培养18-24小时, 取上述培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24-48小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上30～35℃培养18-72小时。阳性对照组应生长良好。
实验结果：
试验次数：1 供试品批号:
检验人：日期：
复核人：日期：
试验次数：2 供试品批号:
检验人：日期：