2019版高考生物一轮复习生物技术实践第1讲无菌操作技术学案苏教版
高中生物第1章无菌操作技术实践提升课学案苏教版选修1
无菌操作技术实践素能提高课一、微生物的分别与判断微生物的分别方法有很多种，本专题中常用的是平板划线法、涂布平板法、微生物的选择培养等。
针对不同样微生物的特点选择不同样的方法，对目的微生物进行精选。
以下是尿素分解菌和纤维素分解菌的分别与判断比较。
项目尿素分解菌的分别与判断纤维素分解菌的分别与判断分别选利用尿素为唯一氮源利用纤维素为唯一碳源择条件在以纤维素为唯一碳源的培养基上，利判断培养基中加入酚红指示剂，变红色方法用刚果红染色法，出现透明圈分解纤维素的微生物产生纤维素酶，将细菌等微生物合成脲酶，将尿素分判断纤维素分解为纤维二糖或葡萄糖，使纤解产生 NH，使 pH 高升，加入酚红3维素—刚果红复合物降解而出现透明原理变红色圈土壤取样→制备培养基→样品梯度土壤取样→制备培养基→选择培养→步骤稀释→涂布平板→培养观察→进一富集培养→梯度稀释→涂布培养→刚步判断果红染色法→挑取菌落→进一步判断二、纯化细菌的方法1．倒平板与涂布平板法的操作(1)倒平板操作(2)涂布平板操作①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中②取少量菌悬液不高出0.1 mL）滴加到培养基表面③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，④用涂布器将菌悬液均匀地涂布在待酒精燃尽后，冷却 8～ 10 s培养基表面，涂布时可转动培养皿使涂布均匀2．两种纯化细菌的方法比较项目优点缺点适用范围平板划线法能够观察菌落特点，对混不能够计数适用于好氧菌合菌进行分别稀释涂布平能够计数，能够观察菌落吸取量较少，较麻烦，适用于厌氧菌平板不干燥，收效不板法特点和兼性厌氧菌好，简单延长三、影响植物组织培养过程的几种主要因素1．培养资料不同样的植物组织，培养的难易程度差别很大，简单进行无性生殖的植物也简单进行组织培养。
同一种植物质料，资料的年龄、保存时间的长短对培养也有影响。
幼龄、保存时间短的植物质料简单培养成功。
菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。
2．无菌条件培养基上有细菌等微生物存在时，它们比植物细胞生长、生殖得更快，而且它们会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡。
高考生物一轮复习 第1讲 无菌操作技术实践课时训练 苏
第1讲无菌操作技术实践1.平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法，下列描述正确的是( )A.都要将菌液进行一系列的梯度稀释B.平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作C.稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养D.都会在培养基表面形成单个的菌落解析平板划线法不需要进行梯度稀释，稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液滴加到固体培养基的表面。
平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个菌落。
答案 D2. 分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是( )A．经选择培养后即可将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B．选择培养这一步可省略，但纤维素分解菌少C．经稀释培养后，用刚果红染色D．此实验中需设置对照组解析经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；选择培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈；设置对照能证明经选择培养的确得到了欲分离的微生物。
答案 A3.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是( )A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B.取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C.将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48 hD.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数解析在细菌计数时，为保证实验结果的准确性，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，求出平均数，再根据对应的稀释度计算出样品中的细菌数。
答案 D4.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。
在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌。
利用上述方法能从混杂的微生物群体中分离出(多选)( )A.固氮细菌B．霉菌C.大肠杆菌D．放线菌解析缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长，而固氮细菌能生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌，霉菌能生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌，放线菌能生长。
第一章 无茵操作技术实践 第1课时 复习学案 苏教版选修1
第一章无茵操作技术实践第1课时复习学案苏教版选修1微生物营养要素及培养基配制过程、原则1、微生物的营养要素微生物的营养物质主要包括碳源、氮源、水、无机盐和生长因子五大类，列表总结如下：微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐；对于异养生物而言，含有C、H、O、N的化合物既是碳源也是氮源，也可能是能源；NaHCO3既是无机盐，也是自养微生物的碳源；绝大多数微生物缺乏合成生长因子的能力或合成能力有限，所以要在培养基中加入生长因子。
2、微生物培养基的配制（以牛肉膏蛋白胨培养基为例）（1）配制培养液在200 mL烧杯中加入100 mL蒸馏水，再加入0. 5 g牛肉膏、l g蛋白胨、0. 5 g NaCl、1g琼脂，边加热边搅拌，配制成培养液。
（2）调节pH采用pH试纸测试，调节培养基的酸碱度至7. 0～7. 2。
（3）分装将培养基趁热分装到洁净的试管中. 培养基的高度约为试管高度的1／5。
注意不要污染试管口，用棉花塞塞紧试管。
（4）包扎将3～5支试管扎成一捆，外包1层牛皮纸或2层报纸，用线扎好。
在试管壁上注明培养基的名称、组别、配制日期等。
（5）灭菌高压蒸汽灭菌是常用的灭菌方法。
在温度为121℃，气压为1.0 kPa的条件下灭菌20 min。
切断电源，待压力表中指针指向“0”点后，取出灭菌物品。
（6）搁置斜面待试管冷却至50℃左右，将试管口部枕在高约1 cm的木条或其他合适高度的物体上，使其自然倾斜，斜面长度不超过试管总长的1／2。
3、微生物培养基的配制原则（1）目的要明确（根据微生物的种类、培养目的等）。
如培养基可由简单的无机物组成，生产用的培养基内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类鉴定用的培养基内必须加入已知化学成分的物质。
（2）营养要协调。
注意各种营养物质的浓度和比例。
（3）pH要适宜。
各种微生物适宜生长的pH范围不同。
如细菌、放线菌和真菌的最适pH 分别为：6.5～7.5、7.5～8.5、5.0～6.0。
2019-2020学年高中生物 第1章 无菌操作技术实践学案苏教版选修1【共4套31页】
本套资源目录2019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践第1节微生物的分离和培养学案苏教版选修12019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践第2节分离特定的微生物并测定其数量学案苏教版选修12019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践第3节植物组织培养技术学案苏教版选修12019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践素能提升课学案苏教版选修1第一节微生物的分离和培养[学习目标] 1.简述高压蒸汽灭菌锅的使用方法及注意事项。
(重点) 2.掌握制备细菌培养基的方法。
(重点) 3.学会利用无菌操作技术接种与培养大肠杆菌。
(难点)知识点一| 培养基及接种操作一、高压蒸汽灭菌锅1．实验室常采用的灭菌方法实验室常利用高温处理达到灭菌效果，包括采用干热灭菌或湿热灭菌等方法。
2．高压蒸汽灭菌锅的使用使用步骤包括：加水―→装锅―→加热排气―→保温保压―→出锅等。
二、配制培养基1．培养基的概念为人工培养微生物而制备的，适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。
2．培养基的类型3．培养基的成分各种培养基的配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等最基本的物质。
三、接种微生物1．接种的概念指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
2．不同接种工具的使用(1)穿刺接种要用接种针。
(2)斜面划线接种或平板划线接种要用到接种环。
(3)涂布平板接种要用到玻璃涂布器。
[合作探讨]探讨1：高压蒸汽灭菌锅是依赖高压灭菌吗？提示：不是，是通过高压来提高湿热的温度灭菌的。
探讨2：在固体培养基中加入的琼脂能为微生物提供营养吗？为什么？提示：不能。
微生物不能分解琼脂。
探讨3：为什么要对培养基、接种环、实验空间、一些液体等进行消毒或灭菌处理？提示：培养某种微生物的目的是获得数量较多的、单一的该种微生物，如果不进行消毒或灭菌，则会出现其他一些杂菌，影响微生物的纯度。
[思维升华]1．消毒与灭菌的区别条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体上绝大多数微生物(包括病原微生物和有害微生物的营养细胞)煮沸消毒法(如100 ℃下5～6min可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢)、巴氏消毒法、化学药剂消毒法灭菌强烈的物理学或化学方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子干热灭菌、高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌营养物质定义作用主要来源碳源能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO2、NaHCO3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白品现黑色，并带有金属光泽)1．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法可分别用于杀灭哪些部位的杂菌( )A．接种针、手、培养基B．高压锅、手、接种针C．培养基、手、接种针D．接种针、手、高压锅C [培养基通常用高压蒸汽灭菌，常用酒精擦拭对手进行消毒，接种环、接种针等用火焰灼烧的方法进行灭菌。
【苏教版】高考生物一轮复习金榜课件(知识概览+主干回顾+核心归纳)：选修1 第一章 无菌操作技术实践
苗→移栽
14
1.在配制培养基时，一般微生物除满足营养需求外，还应该考 虑pH、氧气及特殊营养物质的要求。( √ ) 【分析】一般微生物需要一定的营养、氧气、pH及特殊物质 (如添加维生素)，但培养厌氧微生物时，培养基就不能与氧气 接触。 2.(2012全国卷T5B)常用液体培养基分离获得细菌单菌落。
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含义及作用
主要来源
生长 ①含义：生长不可缺少的微量有机物 维生素、氨基
因子 ②作用：酶和核酸的成分
酸、碱基等
①含义：为微生物提供除C、H、O以
外的各种重要元素，包括大量元素和
无 机
微量元素
盐 ②作用：细胞内的组成成分，生理调
节物质;某些化能自养菌的能源、酶
的激活剂
培养基及大气
作用：优良的溶剂，维持生物大分子 培养基、大气18、
效果图。则获得图A效果的接种方法是
，图B效果的
接种方法是
。
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【解析】(1)该菌是异养型细菌，则X需提供碳源、氮源和能源 物质，从作用来看，该培养基属于选择培养基。 (2)如图可知，A种接种方法是涂抹平板法，B接种方法是平板 划线法。 答案：(1)碳源 氮源 选择培养基 (2)涂抹平板法 平板划线法
21
【典例1】配制的培养基成分是纤维素粉、NaNO3、Na2HPO4、 KH2PO4、MgSO4、KCl、酵母膏、水解酪素，该培养基能使下面 哪种微生物大量繁殖( )
A.酵母菌
B.自生固氮菌
C.各种细菌
D.纤维素分解菌
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【解析】选D。该培养基中加入的纤维素粉为唯一的碳源，而 只有纤维素分解菌能利用纤维素粉。因此，只有纤维素分解菌 能在该培养基上生长。自生固氮菌能够利用自然界中的无机氮， 但是却不能利用纤维素，因此不能在该培养基上生长。
2019高三生物(苏教版)一轮课件：13.1 无菌操作技术实践
第13单元
第1讲 无菌操作技术实践
自主梳理
核心突破
考向感悟
-25-
4.(2017江苏)苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中,对环境有 严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤,从处理废水的活性污 泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题。
(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚 和水,其中可作为碳源的有 。
第13单元
第1讲 无菌操作技术实践
自主梳理
核心突破
考向感悟
-26-
(3)下图为连续划线法示意图,在图中 (填图中序号)区域更 易获得单菌落。
(4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚 残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应,下表中1~5号比色 管的苯酚浓度应分别为 。
自主梳理
核心突破
考向感悟
-22-
3.(2016全国Ⅰ理综)空气中的微生物在重力等作用下,可以一定 程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物,以了 解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下:
①配制培养基(成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O); ②制作无菌平板; ③设置空白对照组和若干实验组,进行相关操作; ④将各组平板置于37 ℃恒温箱中培养一段时间,统计各组平板 上菌落的平均数。
自主梳理
核心突破
考向感悟
2.培养基的种类和用途
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第13单元
第1讲 无菌操作技术实践
自主梳理
核心突破
考向感悟
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第13单元
第1讲 无菌操作技术实践
自主梳理
核心突破
考向感悟
3.三种常用灭菌方法的比较
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高中生物第一章无菌操作技术实践章末整合提升同步备课教学案苏教版选修
第一章无菌操作技术实践章末整合提升知识系统构建【必背要语】1. 细菌培养基的配制过程：配制培养基T 调节 pH R 分装T 包扎T 灭菌T 搁置斜面。
2. 消毒和灭菌的实质不同：前者只杀死绝大多数微生物，后者则杀死所有的微生物。
3. 微生物的接种方法有穿刺接种、斜面接种、涂布平板接种和平板划线接种。
4. 用涂布平板法形成的细菌菌落通常仅在平板表面生长，而混合平板法形成的细菌菌落出现 在平板表面及内部。
5. 微生物分离的原理是提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长。
方法是使用选择懸71斜面培养基。
6. 统计菌落数目的方法可分为活菌计数法和显微镜直接计数法。
前者的原理是涂布平板法接种，一个菌落代表一个单细胞；后者的原理是利用血球计数板，在显微镜下计数。
脱分化再分化分化7. 植物组织培养的基本过程：外植体脱分化愈伤组织再―化胚状体―分化^式管苗。
8. 生长素、细胞分裂素是启动生长、细胞分裂、脱分化、再分化的关键激素。
进行组织培养时要配备二种培养基，分别是愈伤组织形成培养基、诱导生根培养基和诱导生芽培养基。
9. 天竺葵的组织培养过程：准备(器具准备、试剂准备)T配制培养基T灭菌T取材与接种T 观察与记录f转接培养。
规律方法整合整合一微生物的纯培养技术与无菌操作技术1. 微生物的纯培养技术(1) 自然环境中的微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物的基本原理：首先采用一定方法将单个的细胞与其他细胞分离开，进而提供细胞合适的营养和条件，使其生长成为可见的群体。
(2) 微生物的分散主要采用稀释的方法，而固体培养基能够使分散的细胞固着于一定的位置，与其他的细胞分离，从而生长成为一个单细胞来源的群体即纯培养物。
①平板划线法：将合适的无菌培养基倒入无菌培养皿中，冷却后制备成平板。
平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的划线和移动过程中，产生的单个细胞在培养基表面生长的后代就是纯培养物。
2019_2020学年高中生物第一章无菌操作技术实践本章整合课件苏教版选修1
一
二
一、实验设计
实验设计是本章的重点也是后面几章的重点,本题型的解答总结如下: 1.遵循的原则:对照原则和单一变量原则 (1)常用的对照方式 ①空白对照:空白对照是不给对照组任何处理因素。例如:用小白鼠进 行抗癌药物的实验,给甲组小白鼠注射溶于棉籽油的抗癌药物,乙组小白鼠 只注射等量的棉籽油,在相同条件下饲养并观察。在这个实验中,甲组为实 验组,乙组为对照组或控制组,这种对照方式叫空白对照。 ②标准对照:不设对照组,而是用标准值或正常值做对照的方式。 ③阳性对照:是给予对照组已经证明是一种有效因素的处理因素。例 如:研究者正在研究一种新的抗衰老药物,实验组使用这种抗衰老药物,设置 的对照组就用已经被证明有抗衰老作用的维生素 E 去处理以作对照。 ④自身对照:对照和实验均在同一对象上进行,叫自身对照。这种向一 组研究对象施加一个或数个实验因子,然后测量前后变化的实验方法又叫 单组实验法。
3.对实验结果的分析、评价:针对实验材料的特点,对环境条件的要求 作出评价;结合所学知识对结果进行分析,得到预期结果;分析材料、实验步 骤对结果可能造成的影响等。
一
二
⑤相互对照:不设对照组,而是几个实验组相互对照,这种实验方法又称 轮组实验法。
(2)整个过程中只有一个量是可变的,其他的条件完全相同,这样才能单 独地观察变量对实验的影响。
2.实验步骤保证无菌操作:微生物实验中,无菌操作是成功的关键所在。 微生物的培养基、组织培养的培养基都要求无菌,微生物的分离、培养和 组织培养都要求无菌操作。无菌操作保证实验成功的同时还保护操作者 不受感染。
高中生物第一章无菌操作技术实践第1课时微生物的分离和培养同步备课教学案苏教版选修
第1微生物的分离和培养[学习导航]1.简述高压蒸汽灭菌锅的使用方法及注意事项。
2.掌握制备细菌培养基的方法。
3.学会利用无菌操作技术接种与培养大肠杆菌。
[重难点击]1.培养基的配制方法及常见种类。
2.大肠杆菌的接种与分离培养。
一、微生物分离和培养的基本理论1.无菌操作技术实验室常利用高温处理达到灭菌效果，包括采用干热灭菌或湿热灭菌等方法。
(1)干热灭菌方法是将拟灭菌的物品放在干热灭菌箱内，在160～170 ℃温度下加热1～2 h 以达到灭菌的目的。
(2)湿热灭菌方法常采用高压蒸汽灭菌锅进行，如手提式高压蒸汽灭菌锅就是实验室常用的灭菌仪器之一。
高压蒸汽灭菌锅的使用包括加水、装锅、加热排气、保温保压、出锅等步骤。
2.配制培养基(1)培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。
(2)培养基类型①天然培养基：采用动植物组织或微生物细胞以及它们的提取物或粗消化物配制而成，如牛肉膏蛋白胨培养基。
优点：取材便利、营养丰富、配制简便；缺点：营养成分难以控制、实验结果的重复性较差。
②合成培养基：由准确称量的分析纯等级别的高纯度化学试剂加蒸馏水配制而成，如葡萄糖铵盐培养基。
优点：化学成分及其含量明确、实验的可重复性好；缺点：配制繁琐、成本较高。
(3)培养基成分：一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐等最基本的物质。
(4)培养基的配制原则：在配制培养基时，根据拟培养的微生物的不同需要，有时还要加入维生素等特殊的营养物质，并要调节培养基的pH使之满足微生物生长的需要。
3.接种微生物(1)接种的概念：在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
(2)常用的接种工具：玻璃涂布器、接种针、接种环等。
(3)接种方法①用接种针进行穿刺接种。
②用接种环进行斜面接种或在固体培养基平板上进行划线接种。
③用玻璃涂布器进行涂布平板接种等。
1.“无菌操作”与人们的生活休戚相关，无时无处不在。
高三生物一轮复习课件：无菌操作技术实践苏教版选修
4
避免污染
保持操作手的无菌状态，避免与非无菌物品接触。
5
封闭包装
无菌物品使用完毕后，立即封闭包装，避免二次污染。
无菌室的基本要求
空气净化
无菌室应具备高效过滤和空 气净化系统，保证室内空气 的无菌程度。
人员防护
操作人员需穿戴合适的防护 装备，如实验服、口罩、帽 子和手套。
严格控制进出
无菌室的进出口要设置空气 隔离区，降低外界微生物进 入的风险。
1 保护实验结果可靠性
避免实验中的细菌、病毒等微生物污染，确 保实验结果准确可靠。
2 保护操作者和环境安全
避免微生物传播给操作者和周围环境，保护 人们的健康。
实践中的无菌操作技术步骤
1
准备工作
洗手、穿戴防护服和手套，准备所需的无菌材料。
2
消毒操作区域
对操作台面、器械等进行消毒处理。
3
打开无菌包装
采用正确的方法和工具打开无菌包装，避免污染。
微生物检验和发酵过程控制等。
2 制药工业
药物生产和制剂灌装等。
4 医疗器械消毒
无菌手术和器械灭菌等。
结论和总结
无菌操作技术是实验室和医疗领域中至关重要的技术，通过避免微生物的污 染和传播，保障实验结果的可靠性和人们的健康安全。
常样品均匀涂布在无菌琼脂 培养基上，培养并观察微生物生 长。
注射法
使用无菌注射器将液体培养物转 移至无菌培养器具中，避免细菌 污染。
移液法
使用无菌移液管移取无菌溶液， 进行实验分析和操作。
无菌操作技术的应用领域
1 生物医学研究
细胞培养、细菌感染研究等。
3 食品和饮料工业
高三生物一轮复习课件： 无菌操作技术实践苏教版 选修
2019版高考生物一轮复习生物技术实践第1讲无菌操作技术学案苏教版
第1讲无菌操作技术考点一| 微生物的分离和培养(对应学生用书第227页)[识记—基础梳理]1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能——灭菌①分类：实验室常用高温处理达到灭菌效果，包括干热灭菌和湿热灭菌。
②作用：微生物分离和培养的基础。
③关键：防止外来杂菌的入侵。
(2)配制培养基①培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养物质。
②分类：按化学性质的不同分为天然培养基和合成培养基。
(3)接种微生物①接种：指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
②接种方法和常用工具(连线)接种方法常用工具Ⅰ.涂布平板接种 a．接种针Ⅱ.穿刺接种 b．接种环Ⅲ.斜面接种 c．玻璃涂布器Ⅳ.平板划线接种[答案]Ⅰ－c Ⅱ－a Ⅲ－b Ⅳ－b2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。
(2)斜面接种和培养大肠杆菌①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。
②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37_℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。
(3)平板划线分离和培养大肠杆菌①平板的作用：培养、分离细菌等微生物。
②平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。
[理解—深化探究]1．微生物的培养基(1)培养基的成分2.无菌技术图一图二(1)图一为倒平板操作过程。
操作时要待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近进行。
温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
平板冷却凝固后需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。
(2)图二为系列稀释操作。
注意移液管需要经过灭菌。
操作时，试管口和移液管应在离酒精灯火焰1～2 cm 处。
4．微生物纯化培养过程结果分析(1)B 区域出现了单个菌落，产生每个菌落的最初细菌数目是1。
高考生物一轮复习配套学案：《无菌操作技术实践》
1．涵盖范围本单元包括选修1全部内容——无菌操作技术实践、发酵技术实践、酶的应用技术实践和生物化学与分子生物技术实践。
2．考查内容及形式(1)微生物的培养与应用多以简答题形式考查。
(2)酶的应用，常与必修1中酶的本质、特性等知识有机结合考查。
(3)植物的组织培养技术常与植物有效成分提取相结合考查。
(4)发酵技术实践应用多以简答题形式考查。
(5)酶的应用、生物化学与分子生物学技术多以选择题形式考查。
3．复习指导(1)复习线索①以转基因——微生物培养——酶生产——酶应用为线索，系统复习微生物的分离与培养、酶的应用技术实践。
②以技术手段、技术流程为主线，复习发酵、组织培养、有效成分及DNA、蛋白质等有关知识。
(2)复习方法①列表比较法——DNA、蛋白质的分离。
②实践联系——发酵技术、植物有效成分提取技术。
③实验联系——植物组织培养、微生物培养实验过程。
第40讲无菌操作技术实践[考纲要求] 1.微生物的分离和培养。
2.某种微生物数量的测定。
3.培养基对微生物的选择利用。
4.植物的组织培养。
考点一微生物培养基的配制、无菌操作和接种技术[重要程度：★★☆☆☆]1．培养基的定义及分类(1)概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。
(2)营养成分：碳源、氮源、水、无机盐等。
(3)分类：按所含化学成分，培养基可分为天然培养基和固体培养基。
2．无菌操作与接种技术(1)灭菌和消毒①灭菌是指采用强烈的物理学或化学方法使物体内外所有的微生物永远丧失生长和繁殖能力的方法。
②消毒：用较为温和的物理学方法或化学方法杀灭物体上绝大多数微生物的方法。
(2)灭菌的方法：干热灭菌或湿热灭菌(如高压蒸汽灭菌等)。
(3)无菌操作——微生物接种技术的关键①培养基、试管、培养皿、接种器械在接种前都需要灭菌。
②操作人员及操作环境要求消毒。
(4)3．培养基的配制(1)配制原则：为所培养微生物的生长和繁殖或积累代谢产物提供所需的营养基质。
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第1讲无菌操作技术考点一| 微生物的分离和培养(对应学生用书第227页)[识记—基础梳理]1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能——灭菌①分类：实验室常用高温处理达到灭菌效果，包括干热灭菌和湿热灭菌。
②作用：微生物分离和培养的基础。
③关键：防止外来杂菌的入侵。
(2)配制培养基①培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养物质。
②分类：按化学性质的不同分为天然培养基和合成培养基。
(3)接种微生物①接种：指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
②接种方法和常用工具(连线)接种方法常用工具Ⅰ.涂布平板接种 a．接种针Ⅱ.穿刺接种 b．接种环Ⅲ.斜面接种 c．玻璃涂布器Ⅳ.平板划线接种[答案]Ⅰ－c Ⅱ－a Ⅲ－b Ⅳ－b2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。
(2)斜面接种和培养大肠杆菌①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。
②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37_℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。
(3)平板划线分离和培养大肠杆菌①平板的作用：培养、分离细菌等微生物。
②平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。
[理解—深化探究]1．微生物的培养基(1)培养基的成分图一图二(1)图一为倒平板操作过程。
操作时要待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近进行。
温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
平板冷却凝固后需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。
(2)图二为系列稀释操作。
注意移液管需要经过灭菌。
操作时，试管口和移液管应在离酒精灯火焰1～2 cm处。
4．微生物纯化培养过程结果分析(1)B区域出现了单个菌落，产生每个菌落的最初细菌数目是1。
(2)在培养基上划线接种时，划线的顺序依次是A→C→B。
[运用—考向对练]◎考向微生物的分离和培养1．(2018·吉林长春二模)下面是筛选抗链霉素大肠杆菌的实验步骤及相关图解。
实验步骤：①把大量对链霉素敏感的大肠杆菌接种在不含链霉素的培养基1的表面，进行培养。
②待其长出密集的小菌落后，用影印法接种到不含链霉素的培养基2上，随即再影印到含有链霉素的培养基3上，进行培养。
③在培养基3上出现了个别抗链霉素的菌落，将其挑选出。
请回答：(1)配制培养基时除了满足基本的营养条件外，还需满足微生物生长对特殊营养物质、________、________的要求。
(2)从功能上看，含有链霉素的培养基属于________培养基。
若在培养基中加入伊红和美蓝，则培养皿中长出的菌落颜色为________。
由图可知，1号培养基接种的方法为______________________。
(3)对2和3进行比较，在2上找到与3上相应的菌落，挑取其中一个菌落接种到____________(填“含链霉素”或“不含链霉素”)的培养基上，如果有较多的菌落出现，则说明该抗性基因突变发生在该菌接触链霉素之________(填“前”或“后”)。
(4)3中的菌落比1、2中的菌落少很多，这说明了基因突变具有________的特点。
[解析](1)配制培养基时在提供几种基本营养条件的基础上，还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
(1)链霉素是抗生素，对大肠杆菌具有选择作用。
在伊红和美蓝培养基上，大肠杆菌菌落颜色为黑色。
由题图可知，1号培养基接种的方法为稀释涂布平板法。
(3)培养基2和培养基3上相同的菌落，是具有相同性状的大肠杆菌形成的，将培养基2中一个相应菌落接种到含链霉素的培养基上，若出现较多的菌落，则说明该抗性基因突变发生在该菌接触链霉素之前。
(4)抗链霉素性状是大肠杆菌基因突变后获得的性状，3号培养皿中的菌落比1号、2号中的菌落少很多，这说明了基因突变频率很低。
[答案](1)pH 氧气(2)选择黑色稀释涂布平板法(3)含链霉素前(4)频率低、低频性2．(2018·江西赣中南五校第一次联考)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题。
【导学号：41780164】(2)若根据用途划分，该培养基属于__________(填“选择”或“鉴别”)培养基。
若要用上述培养基来筛选出土壤中的尿素分解菌，培养基的营养成分必需怎样更改？________________，并用__________作为指示剂。
(3)在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行__________；操作者的双手需要进行清洗和__________。
(4)图1和图2是培养某细菌的结果图，其对应的接种方法分别是：______________和______________，这两种方法接种后培养基上都可以得到由单个细胞繁殖所形成的__________。
图1 图2[解析](1)大肠杆菌只能从环境中摄取有机物，不能自己合成有机物，属于分解者。
(2)该培养基中含有指示剂，属于鉴别培养基。
尿素分解菌可以分解尿素，而其他微生物不能，因此可将培养基中的蛋白胨改为尿素用于筛选土壤中的尿素分解菌，并用酚红作为指示剂，尿素分解菌分解尿素产生了NH3可使酚红变红。
(3)培养微生物时，培养基和培养皿需要灭菌，操作者双手需要进行消毒。
(4)图1采用的是稀释涂布平板法，图2采用的是平板划线法。
单个微生物细胞繁殖所形成的细胞群叫菌落。
[答案](1)分解者(2)鉴别将蛋白胨改成尿素酚红(3)灭菌消毒(4)稀释涂布平板法平板划线法菌落[规律总结] 关于培养基的理解考点二| 微生物的分离和计数(对应学生用书第229页)[识记—基础梳理]1．分离特定微生物的知识准备(1)区分涂布平板法和混合平板法①区分两种平板法过程图②结果不同a．涂布平板法：细菌菌落通常仅在平板表面生长。
b．混合平板法：细菌菌落出现在平面表面及内部。
③目的相同：分离各种目的微生物。
(2)选择培养分离①方法：针对某种微生物的特性，设计一个特定的环境，使之特别适合这种微生物的生长，而抑制其他微生物的生长。
②原理：不同微生物有不同的营养需求或对某种化学物质有不同的敏感性。
③用途：从众多微生物中分离出特定的微生物。
(3)菌落①概念：单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。
②特征：不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落一般都具有稳定的特征，如菌落的大小、形状、边缘特征、隆起程度、颜色等，这些可以作为对微生物进行分类、鉴定的重要依据。
2．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)培养基采用唯一氮源为尿素的培养基。
(2)统计菌落数目统计样品中的活菌一般用涂布平板法。
(3)实验流程土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。
3．纤维素分解菌的筛选 (1)原理纤维素分解菌 ↓⎭⎪⎬⎪⎫刚果红纤维素―→红色复合物―――――→纤维素酶红色消失，出现透明圈。
(2)筛选方法：刚果红染色法。
(3)标志：以纤维素为唯一碳源的选择培养基，根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
(4)实验流程土壤取样：富含纤维素的环境 ↓选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度 ↓梯度稀释：制备系列稀释液 ↓涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上↓挑选产生：透明圈的菌落 4．显微镜直接计数法(1)原理：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。
(2)缺点：不能区分死菌还是活菌。
(3)1 mL 培养液中菌体的总数换算公式为：①16×25型的血球计数板：1 mL 悬液中待测标本(菌体)数＝100小方格内菌体数100×400×104×稀释倍数。
②25×16型的血球计数板：1 mL 悬液中待测标本(菌体)数＝80小方格内菌体数80×400×104×稀释倍数。
[理解—深化探究]平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同 1．第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。
2．每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。
3．划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
4．稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目“低”。
这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
而显微计数法由于不能区分死菌与活菌，故所得数值可能比实际值“偏高”。
5．平板划线法只适用于微生物的提纯，不适用于微生物的计数，并且在最后一次划线的末端处的菌种最纯。
[运用—考向对练]◎考向1 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数1．(2018·湖南郴州第四次质检)分解尿素的微生物广泛存在于农田等土壤中，某生物实验小组尝试对分解尿素的微生物进行分离与计数。
请回答下列问题：(1)分解尿素的微生物含有的酶是________；配制培养基时应以________作为唯一氮源。
(2)培养基中添加________作为指示剂，培养后，培养基pH 会________(填“升高”或“降低”)，可使指示剂变红色。
(3)对尿素溶液进行灭菌的最适方法是____________________________。
(4)该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一 段时间，这样做的目的是_____________________________________________；然后将1 mL 样液稀释10 000倍，在3个平板上用涂布法 分别涂布0.1 mL 稀释液；经适当培养后，3个平板的菌落数分别为39、42和45。
据此可得出每毫升样液中分解尿素的微生物活菌数为________个。
[解析](1)分解尿素的微生物含有的酶是脲酶；配制培养基时应以尿素作为唯一氮源。
(2)在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶分解尿素可产生氨，氨会使培养基的pH 升高，进而使酚红指示剂变红。
(3)对尿素溶液进行灭菌的最适方法是过滤法。
(4)在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，其目的是检测培养基平板灭菌是否合格。
每毫升样液中分解尿素的微生物活菌数＝(C÷V)×M＝[(39＋42＋45)÷3]÷0.1×10 000＝4.2×106(个)。
[答案](1)脲酶尿素(2)酚红升高(3)过滤法(4)检测培养基平板灭菌是否合格 4.2×106◎考向2 分解纤维素的微生物的分离2．(2014·全国卷Ⅰ)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。