食品卫生微生物学检验-阪崎肠杆菌
食品微生物之检验方法-阪崎肠杆菌之检验
附件食品微生物之檢驗方法－阪崎腸桿菌之檢驗1 適用範圍〆本方法適用於一般食品及奶粉中阪崎腸桿菌之檢驗。
2 檢驗方法〆2.1 工作環境〆工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度為100呎燭光以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。
每15分鐘落菌數不得超過15 CFU／培養皿。
2.2 器具及材料〆2.2.1 乾熱滅菌器。
2.2.2 高壓滅菌釜。
2.2.3 攪拌均質器（Blender）或鐵胃（Stomacher）〆適用於無菌操作者。
2.2.4 天平〆可稱量到2000 g者，靈敏度為0.1 g々可稱量到120 g者，靈敏度為1 mg。
2.2.5 冰箱〆能維持5 ±3℃者。
2.2.6 吸管或吸管尖〆已滅菌，1 mL吸管應有0.01 mL之刻度々5 mL及10 mL吸管應有0.1 mL之刻度。
2.2.7 吸管輔助器（Pipette aid）或微量分注器。
2.2.8 稀釋瓶〆160 mL，玻璃、聚乙烯（polyethylene）、鐵弗龍（Teflon）或其他能耐121℃濕熱滅菌20分鐘以上之塑膠材質，附螺旋蓋。
2.2.9 培養皿〆已滅菌，內徑約9 cm，深度約15 mm，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮傷或其他缺點。
2.2.10 增菌用容器〆附螺旋蓋之125 mL、250 mL、2 L三角錐瓶或廣口瓶々玻璃、聚乙烯、鐵弗龍或其他能耐121℃濕熱滅菌20分鐘以上之塑膠材質。
2.2.11 pH測定儀。
2.2.12 培養箱〆能維持內部溫度在±1℃以內者。
2.2.13 溫度計〆量測溫度範圍1～55℃，最小刻度0.1℃。
2.2.14 水浴〆加蓋，具水流循環系統，能維持水溫溫差在±0.2℃以內者。
2.2.15 接種針及接種環（直徑約3 mm）〆鎳鉻合金、鉑銥或鉻線材質，或可拋棄式者。
2.2.16 曲玻棒〆可滅菌者，直徑3～4 mm，塗抹區域45～55 mm。
2.2.17 試管〆10 ×100 mm，13 ×100 mm，13 ×120 mm，15 ×150 mm，16 ×150 mm試管，或其他適用者。
阪崎肠杆菌检验 ppt课件
在肠杆菌的生化鉴定中使用最广泛的是API 20E和Vitek GNI+。
第一部分：一般特征
一．
培养特征
二．
三． 四．
生化反应
抵抗力 增殖能力
与其他常见肠杆菌相似
5
一、培养特征
阪崎肠杆菌兼性厌氧，营养要求不高，能在营养琼脂、血平板、麦康凯(MacConkey， MAC)琼脂、伊红美蓝琼脂、脱氧胆酸琼脂等多种培养基上生长繁殖。
ES在VRBGA平板上首次划线分离时，37℃培养24h可生成2种不同的 形态学特征：
2.
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第一法：阪崎肠杆菌的检验
第二法：阪崎肠杆菌的计数
18
第一法 阪崎肠杆菌的检验
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阪崎肠杆菌检验程序
检样 100 g/mL+BPW稀释液 900 mL 36℃±1℃，18 h±2h
1mL + mLST-Vm 10mL 44℃±0.5℃，24 h±2h
DFI琼脂 36℃±1℃，24 h±2h 挑取蓝绿色菌落 TSA 25℃±1℃，48 h±4h 挑取黄色菌落 生化鉴定 报 告 生 化 鉴 定 选择性分离 前 增 菌
选择性增菌
5.1 前增菌和增菌
BPW（合适时可选择无菌水） 左图：未混合； 右图：混合后。
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mLST-Vm
mLST-Vm，即在大肠菌群增菌肉汤LST中另加入 适量的NaCl和Vm 。
研究证明与其他肠杆菌科细菌（如沙门菌属、大肠埃希氏
菌等）相比，ES具有较高的耐渗透压能力。加入0.5 M 的
NaCl在保证ES良好生长的同时，可以有效地抑制上述其他 细菌的生长。 Vm可有效地抑制G+菌的生长。而较高的生长温度可以进一 步抑制其他细菌的生长。
阪崎肠杆菌的测定.pptx
阪崎肠杆菌的分布
1.环境 原油、切削液、苍蝇、食品加工厂（奶制品、谷类、
巧克力、马铃薯粉），医院（空气、听诊器、临床 食品）、家庭、温泉、鼠、沉积物、沼泽地、土壤 2.食品及相关用品 啤酒杯、干酪、婴儿配方奶粉和豆粉、婴儿配方粉 冲调用品（搅拌器、勺子、甁刷），普通奶粉、碎 牛肉、肉类、香肠、发酵面包、豆腐、蔬菜、水 （管道、生物膜）、调味品
冷藏条件下可以生长 5、在TSA培养基上产生黄色色素 6、产生α-葡萄糖苷酶，其它肠杆菌均不产生； 7、较强的耐干燥性，耐高渗透压， “干燥逆境抗
性”比其他，大多数乳品中分离得到的肠杆菌更 加耐热，但标准的高温短时巴氏杀菌可消灭
5
易感人群
• 阪崎肠杆菌可引起各年龄段的感染，但从 报道病例的年龄分布来看，高危人群主要是 婴儿（即＜1岁的儿童），新生儿（≤28天）、 尤其是早产儿、低出生体重或免疫力下的婴 儿，发生严重感染的危险性最高。
• 母亲HIV阳性的婴儿
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主要感染渠道
虽然现在还不能确定阪 崎肠杆菌的宿主和传播 模型，但在多起新生儿 阪崎肠杆菌感染事件的 调查中发现婴幼儿配方 粉是主要的感染渠道
7
阪
崎
检
1前增菌 2选择性增菌
测 3平板分离
பைடு நூலகம்
步
4平板确认 5 生化鉴定
骤
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阪崎肠杆菌检验——前增菌
操作：100g样品+900mL增菌液，培养18h±2h GB使用的增菌液为BPW 主要作用：营养丰富，更利于食品检验具有缓冲体系
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阪崎肠杆菌检验——平板分离
操作：各取培养物一环，接种显色平板，培养24h±2h 培养基作用 显色培养基 •显色培养基利用阪崎特异性α-葡萄糖苷酶原理，分解底物
长春阪崎肠杆菌科鉴定流程
长春阪崎肠杆菌科鉴定流程
阪崎肠杆菌属于肠杆菌科中的一种常见细菌，其主要存在于人和动物的肠道中。
该细菌可引起多种疾病，如腹泻、肺炎、败血症等。
因此，在医学诊断和食品安全监管方面，对阪崎肠杆菌的鉴定十分重要。
下面是长春阪崎肠杆菌科鉴定的流程：
1.搜集样本
对于可能污染阪崎肠杆菌的样品，如肉类、蔬菜、水果、动物粪便等，进行采集，并妥善保存。
2.培养
将样品进行培养，常用的培养基为MacConkey培养基或兰伯特培养基。
在37摄氏度下，进行18-24小时的培养，以使菌落生长到足
够数量。
3.鉴定
（1）形态特征：观察菌落的形态，如颜色、形状、大小等，再
观察细菌的形态、大小和运动性等。
（2）生化特性：采用一系列生化试验，如氧化酶试验、卡氏试验、甲烷酸盐发酵试验等，以区分阪崎肠杆菌和其他肠杆菌。
（3）免疫学鉴定：采用免疫学方法，如酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光抗体法等，检测阪崎肠杆菌的抗原。
以上是长春阪崎肠杆菌科鉴定的流程。
在鉴定过程中，需要严格控制卫生条件，避免交叉污染。
鉴定结果的准确性将影响到后续的治
疗和防控措施。
食品微生物之检验方法-阪崎肠杆菌之检验
食品微生物之检验方法－阪崎肠杆菌之检验1 适用范围：本方法适用于一般食品及奶粉中阪崎肠杆菌之检验。
2 检验方法：2.1 工作环境：工作平台须宽敞、洁净、光线良好，操作平台光度为100呎烛光以上，密闭室内换气良好，尽可能没有灰尘及流动空气。
每15分钟落菌数不得超过15 CFU／培养皿。
2.2 器具及材料：2.2.1 干热灭菌器。
2.2.2 高压灭菌釜。
2.2.3 搅拌均质器（Blender）或铁胃（Stomacher）：适用于无菌操作者。
2.2.4 天平：可称量到2000 g者，灵敏度为0.1 g；可称量到120 g者，灵敏度为1 mg。
2.2.5 冰箱：能维持5 ± 3℃者。
2.2.6 吸管或吸管尖：已灭菌，1 mL吸管应有0.01 mL之刻度；5 mL及10 mL吸管应有0.1 mL 之刻度。
2.2.7 吸管辅助器（Pipette aid）或微量分注器。
2.2.8 稀释瓶：160 mL，玻璃、聚乙烯（polyethylene）、铁弗龙（Teflon）或其它能耐121℃湿热灭菌20分钟以上之塑料材质，附螺旋盖。
2.2.9 培养皿：已灭菌，内径约9 cm，深度约15 mm，底皿之内外面应平坦，无气泡、刮伤或其它缺点。
2.2.10 增菌用容器：附螺旋盖之125 mL、250 mL、2 L三角锥瓶或广口瓶；玻璃、聚乙烯、铁弗龙或其它能耐121℃湿热灭菌20分钟以上之塑料材质。
2.2.11 pH测定仪。
2.2.12 培养箱：能维持内部温度在± 1℃以内者。
2.2.13 温度计：量测温度范围1～55℃，最小刻度0.1℃。
2.2.14 水浴：加盖，具水流循环系统，能维持水温温差在± 0.2℃以内者。
2.2.15 接种针及接种环（直径约3 mm）：镍铬合金、铂铱或铬线材质，或可抛弃式者。
2.2.16 曲玻棒：可灭菌者，直径3～4 mm，涂抹区域45～55 mm。
2.2.17 试管：10 × 100 mm，13 × 100 mm，13 × 120 mm，15 × 150 mm，16 × 150 mm试管，或其它适用者。
GBT_4789[1].40-2010_食品卫生微生物学检验_阪崎肠杆菌检验标准培训资料
![GBT_4789[1].40-2010_食品卫生微生物学检验_阪崎肠杆菌检验标准培训资料](https://img.taocdn.com/s3/m/323c55ecf8c75fbfc77db227.png)
USFDA 方法 （一） （一）USFDA
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• •
优点：所使用的各种培养基常见、价格便宜，更易普及。 缺点：选择性差
：竞争性抑制作用 1. EE broth broth：竞争性抑制作用 2. VRBGA ：（ 1）其它细菌也能生长，产生粉紫色菌落，胆 VRBGA：（ ：（1 2）ES 无特征性菌落，不易 汁酸沉淀形成紫色晕圈；（ 汁酸沉淀形成紫色晕圈；（2 ES无特征性菌落，不易 ES 和其他微生物 区别 区别ES ES和其他微生物 3. TSA:多种产生黄色素沉着的肠杆菌科菌株均能生长，如： pantoea spp .，E. hermanii，E. vulneris。 spp.
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五、增殖能力
℃，37 ℃分别是 13.7h ，1.7h ，19 －21min 。 • 6℃，21 21℃ 37℃ 分别是13.7h 13.7h， 1.7h， 19－ 21min。 发现，与本底相比， 25 ℃放置 6h 该菌的相对危险 • MRA MRA发现，与本底相比， 发现，与本底相比，25 25℃ 放置6h 6h该菌的相对危险 30 倍； 25 ℃放置 10h 可增加 30 000 倍。 性可增加 性可增加30 30倍； 倍；25 25℃ 放置10h 10h可增加 可增加30 000倍。 年2月FAO/WHO 在日内瓦召开的婴儿配方粉中 ES • 2004 2004年 FAO/WHO在日内瓦召开的婴儿配方粉中 在日内瓦召开的婴儿配方粉中ES ES （＜ 3 专家研讨会上提出婴儿配方粉中微量的 专家研讨会上提出婴儿配方粉中微量的ES ES（＜ （＜3 CFU/100g ）污染也能导致感染的发生。 CFU/100g）污染也能导致感染的发生。
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五五��世世界界范范围围内内 感感染染情情况况
阪崎肠杆菌的测定
阪 崎 检 测 步 骤
1前增菌 2选择性增菌 3平板分离 4平板确认 5 生化鉴定
操作：100g样品+900mL增菌液，培养18h±2h GB使用的增菌液为BPW 主要作用：营养丰富，更利于食品检验具有缓冲体系
阪崎肠杆菌检验——前增菌
未混匀
混合均匀
阪崎肠杆菌检验——选择性增菌增菌
操作：1mL样液+10mL增菌液， 44℃±0.5℃培养24h±2h 培养基的作用
婴儿配方粉中的污染状况
公共卫生关注的婴儿配方粉中阪崎肠杆菌的
来源包括以下2种情况： 内在污染—二次污染 如：加工环境中微生物ห้องสมุดไป่ตู้存在；加工装置的 表面微生物的存在，热处理后，与干燥基粉 混合的加入成分中存在的微生物。 外源性污染—配方粉中调制环境和调制器皿 受阪崎污染的配方粉或调制配方在较高温度 下存放，食用前不加热或加热不彻底，喂食 时间较长等都可导致阪崎有机会生长繁殖， 增加患病的危险性。
生化鉴定（API20E）
步骤一
步骤二
步骤三
生化鉴定（API20E）
改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨加万古霉素增菌液(mLST-Vm)， Vm有效抑制G+，同时能在高温下长的更好。而较高温度 可以抑制其他细菌生长 mLST含盐高，利于筛选高渗透压的阪崎 因前增菌优化，仅使用1mL前增菌液即可 注： mLST-Vm，灭菌后使用前加Vm，放置不超24h 要求44℃培养，温度波动＜0.5℃
阪崎肠杆菌的危害
婴儿：
1. 脑膜炎
2. 坏死性小肠结肠炎
3. 菌血症 • 严重的神经系统后遗症 成人：局部感染、菌血症、术后骨髓炎
阪崎肠杆菌的生物学特征
DBS13 003-2015 食品安全地方标准 阪崎肠杆菌和沙门氏菌检测
肠杆菌科和阪崎肠杆菌结果判读表
结果判读 肠杆菌科及阪崎肠杆菌阳性，可能含有沙门氏菌 肠杆菌科阳性，阪崎肠杆菌阴性，可能含有沙门氏菌 肠杆菌科、阪崎肠杆菌及沙门氏菌阴性 无效的结果
内部扩增对照（IAC） ROX 阳性或阴性 阳性或阴性 阳性 阴性
引物和探针名称 肠杆菌科-F 肠杆菌科-R 阪崎肠杆菌-F 阪崎肠杆菌-R 内部扩增对照（IAC）-F 内部扩增对照（IAC）-R 肠杆菌科探针 阪崎肠杆菌探针 IAC 探针
目标基因引物和探针序列及每个反应体系内的终浓度
序列 5´-CTG AAA GCA TCT AAG CAC GAA ACT TG-3´ 5´-GTC GTC TTC AAC GTT CCT TCA GG-3´ 5´-AGG GGA TAT TGT CCC CTG AAA CAG-3´ 5´-AAA CGA GAA TAA GCC GCG CAT T-3´ 5´-TGT GAA ATA CCG CAC AGA TG-3´ 5´-AGC TGG CGT AAT AGC GAA G-3´ 5´-FAM-CCCGAGATGAGTTCTCCCTGASMCTTTAAGT-BHQ-1-3´ 5´-HEX-AGAGTAGTAGTTGTAGAGGCCGTGCTTCCGAAAG-BHQ-1-3´ 5´-ROX-TAAGGAGAAAATACCGCATCAGGCGCC-BHQ-2-3´ 终浓度（µmol/L） 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.2 0.2 0.2
目标基因扩增体系配制表
加样体积（µL） 12.1 2.5 2.0 0.5 1.0 0.5 0.15 0.25 1.0 5.0 25
GB坂崎肠杆菌检验
2024/6/19 即：不能观察到ES的特征性菌落。
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显色培养基的选择性较好
• DFI对ES的选择性较好，ES形成的蓝绿色特征性菌落 易于辨认，而且：
硫化氢指示剂可以区分ES和产生少量α-葡萄糖苷酶但H2S阳 性菌株（如普通变形杆菌）。
ES都可以在DFI平板上生长并产生蓝绿色菌落 其他常见菌在DFI平板的菌落颜色
2024/6/19
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二、培养特征
• G－无芽孢杆菌，兼性厌氧，在6℃-47℃范 围内均可生长，适温35-37℃
• 营养要求不高： VRBGA、TSA、NA、MAC、EMB、其他
与其他常见肠杆菌相似
2024/6/19
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三、生化反应
生化反应 D-山梨醇 产生吐温80脂酶 细胞外Dnase 氧化酶试验 黄色菌落 α-葡萄糖苷酶
Enterobacter sakazakii(ES)
2024/6/19
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内容
第一部分：一般特征 第二部分：流行病学特征 第三部分：ES的检验
2024/6/19
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第一部分：一般特征
命名 培养特征 生化反应 抵抗力 增殖能力 致病性
2024/6/19
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一、命名
1980年之前一直被称为黄色阴沟肠杆菌。 • DNA-DNA杂交 • 生化反应 • 黄色素 • 抗生素敏感性
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API 20E生化鉴定板典型生化反应图示
API 20E反应编码 3345 373 3305 173 3305 363 3305 373
API 20E结果评价 Excellent identification Excellent identification Very good identification
奶粉中发现阪崎肠杆菌，它有何风险？
奶粉中发现阪崎肠杆菌，它有何风险？昨天（2016年2月2日），国家食品药品监督管理总局发布婴幼儿配方乳粉监督抽检通告，其中有3批次奶粉因阪崎肠杆菌不符合国家标准、存在食品安全风险。
阪崎肠杆菌是什么东西？是怎么进到奶粉里边的？有什么安全风险？1.阪崎肠杆菌是什么？阪崎肠杆菌（Cronobacter ，又名Enterobacter sakazakii），是一种革兰氏阴性菌，存在于自然环境及食物中的一组细菌。
它的发现较晚，直到1980年才被发现并命名为坂崎肠杆菌，以纪念日本微生物学家坂崎利一在微生物分类学上所作的贡献。
阪崎肠杆菌有一个显著的特点：它不怕干，即使在极干燥的环境中也能生存！比如，婴儿配方奶粉、奶粉、茶叶、淀粉中，虽然水分基本都没了，它们也能顽强生存下去。
2.它是怎么进到奶粉里边的呢？配方奶粉被坂崎肠杆菌污染主要有两个来源：一是奶粉本身就含有少量坂崎肠杆菌；二是通过周围的环境和被细菌污染的器具或者双手进入配方奶。
实际上，婴儿配方奶粉在生产过程中是不可能完全无菌的，目前的生产工艺没有办法杀灭配方奶粉中所有的细菌。
所以，奶粉本身可能含有少量阪崎肠杆菌，但是，量一般很少。
另外，阪崎肠杆菌也可能通过周围的环境进入配方奶。
奶粉中检出阪崎肠杆菌超标，说明它的生产工艺可能存在安全隐患，作为监管机构应该进行处理。
3.它有什么安全风险？阪崎氏肠杆菌可令各年龄组别的人受入侵性感染，但新生儿(出生28天或以下)和不足2个月的婴儿，尤其是早产、体重不足2.5公斤和免疫力较弱的婴儿的风险最高。
新生儿(尤其是早产婴儿)胃的酸性较成年人为低，这可能是阪崎氏肠杆菌可在婴儿体内生存的一个主要原因。
坂崎肠杆菌感染可以引起婴儿菌血症或者脑膜炎。
婴儿一旦感染这种病菌，死亡率会非常高，有数据显示在40%-80%之间。
不过，坂崎肠杆菌感染发病率并不高，根据世界卫生组织数据显示，大约每10万名婴儿才有一例。
4.如何保护自己的孩子免受包括阪崎肠杆菌在内的细菌感染？1)母乳喂养。
食品中致病菌PCR检测方法-阪崎肠杆菌
备案号：ICS SN中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布前 言SN/T XXXX－XXXX《食品中多种致病菌快速检测－PCR方法》分为十一个部分：─ 第 1 部分：食品中沙门氏菌检测方法；─ 第 2 部分：食品中志贺氏菌检测方法；─ 第 3 部分：食品中金黄色葡萄球菌检测方法；─ 第 4 部分：食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌检测方法；─ 第 5 部分：食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法；─ 第 6 部分：食品中空肠弯曲菌检测方法；─ 第 7 部分：食品中肠出血性大肠埃希氏菌 O157:H7检测方法；─ 第 8 部分：食品中副溶血性弧菌检测方法；─ 第 9 部分：食品中霍乱弧菌检测方法；─ 第 10 部分：食品中创伤弧菌检测方法；─ 第 11 部分：食品中阪崎肠杆菌BAX®全自动PCR检测方法。
本标准修改采用Government of Canada Laboratory Procedure MFLP-27 THE DUPONT QUALICON BAX®1） SYSTEM METHOD FOR THE DETECTION OF ENTEROBACTER SAKAZAKII IN SELECTED FOODS （2003.9）本标准的附录A是资料性附录。
本标准由国家认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。
本标准起草人：卢行安等。
本标准系首次发布的检验检疫行业标准。
1） 为美国杜邦公司（DuPont Qualicon）产品。
食品中多种致病菌快速检测－PCR方法第11部分：食品中阪崎肠杆菌BAX®全自动PCR检测方法1 范围本部分规定了用BAX®全自动PCR技术快速检测阪崎肠杆菌的方法。
本部分适用于食品中阪崎肠杆菌的检验。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
婴幼儿健康的“敌人”食品中阪崎肠杆菌的检测方法
婴幼儿健康的“敌人”-食品中阪崎肠杆菌的检测方法阪崎肠杆菌阪崎肠杆菌是广泛存在于环境中的一种微生物，可以感染婴幼儿并对他们的健康造成严重威胁，阪崎肠杆菌耐热、耐干燥、对渗透压有较强的忍耐力，可长时间生存在干燥的环境中。
阪崎肠杆菌最喜欢袭击1岁以下的婴儿，如果你在冲调、存放奶粉时操作不当，它就可以趁虚而入，婴儿的胃酸PH值比成人高，可以存活在他们的肠道中，并且婴儿血脑屏障未发育完全，阪崎肠杆菌可以轻易进入他们的脑部引发脑膜炎，由阪崎肠杆菌引起的新生儿脑膜炎、菌血症等严重疾病，死亡率高达20-50％。
世界卫生组织建议，您应当使用不低于70℃的热水冲调婴儿配方奶粉，并在2小时内尽快喂哺，如果需要预先冲调，冲调后应快速冷却并且存放在不超过5℃的冰箱内，还要在冲调后24小时内饮用，喂哺前必须重新加热，那些早产、体重低或免疫力低的高风险婴儿，可以使用商业无菌的液态婴儿配方奶，你记住了吗？食品中阪崎肠杆菌的检测方法1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下：1.1 恒温培养箱：25℃±1℃，36℃±1℃，44℃±0.5℃1.2 冰箱：2℃-5℃1.3恒温水浴箱：44℃±0.5℃1.4天平：感量0.1g1.5 均质器1.6 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）1.7 无菌锥形瓶：容量100mL、250mL、2 000mL1.8 无菌培养皿：直径90mm1.9 pH计或精密pH试纸2 培养基和试剂2.1 缓冲蛋白胨水2.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素2.3 阪崎肠杆菌显色培养基2.4 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）2.5 API 20E生化鉴定试剂盒2.6 氧化酶试剂3 操作步骤3.1 前增菌和增菌取样前，应消毒检样包装的开启处。
以无菌操作，称取检样100g（mL）加至预热到44℃装有900mL灭菌缓冲蛋白胨水的2 000mL锥形瓶中，缓缓振摇使样品充分溶解，36℃±1℃培养18h±2h。
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曾 静 北京出入境检验检疫局 2009.3.20
阪崎肠杆菌检验 GB/T 4789.40-2008 4789.40一、采标情况
二、适用范围 三、操作过程 1 第一法 阪崎肠杆菌的检验 2 第二法 阪崎肠杆菌的计数
第二法 阪崎肠杆菌的计数 6.1 样品的稀释 ：固体或半固体样品，无菌称取样品 固体或半固体样品， 100g,、10g和1g样品各 样品各3 加入到预热到44℃ 44℃的 100g,、10g和1g样品各3份，加入到预热到44℃的 900mL、90mL和9mL的BPW培养液中 培养液中， 900mL、90mL和9mL的BPW培养液中，36℃±1 ℃，培养 18 h ± 2 h 培养 6.3 报告：根据阳性管数查MPN表，报告每100g(mL) 报告：根据阳性管数查MPN MPN表 报告每100g(mL) 样品MPN MPN数 样品MPN数。
阪崎肠杆菌检验 GB/T 4789.40-2008 4789.40-
一、采标情况
本标准与ISO方法的主要区别： 本标准与ISO方法的主要区别： — 培养温度由35 ℃±1 ℃改为36℃±1 ℃ ； 培养温度由35 ℃± ℃改为36℃± —阪崎肠杆菌选择性培养基由ESIA改为DFI， 阪崎肠杆菌选择性培养基由ESIA改为DFI， 培养温度由44 ℃± ℃改为36℃± 培养温度由44 ℃±1 ℃改为36℃±1 ℃ ； — 增加了第二法，作为阪崎肠杆菌的MPN定量 增加了第二法，作为阪崎肠杆菌的MPN定量 检验方法
阪崎肠杆菌介绍 易感人群: 易感人群:
免疫力低下者和婴幼儿、新生儿， 尤其是早产儿、低体重儿可以致病。感 染来源主要是受阪崎肠杆菌污染的奶粉， 人与人之间无传染性。
阪崎肠杆菌介绍
1、阪崎肠杆菌在自然界分布广泛，在水、土壤、食 阪崎肠杆菌在自然界分布广泛，在水、土壤、 排泄物等中都能够检出。细菌不耐热， 物、排泄物等中都能够检出。细菌不耐热，加热到 72℃持续15秒就可以杀灭 细菌不在人与人之间传播。 持续15秒就可以杀灭。 72℃持续15秒就可以杀灭。细菌不在人与人之间传播。 2、阪崎肠杆菌在一般情况下不对人体健康产生危害， 阪崎肠杆菌在一般情况下不对人体健康产生危害， 但对于新生儿，尤其是早产儿、低体重儿可以致病。 但对于新生儿，尤其是早产儿、低体重儿可以致病。 3、绝大多数患者为轻症病例，表现为轻微的消化道 绝大多数患者为轻症病例， 症状，恢复良好；重症病例罕见但病死率高。 症状，恢复良好；重症病例罕见但病死率高。对于发 现的病例应及时报告。 现的病例应及时报告。
阪崎肠杆菌介绍
临床表现 多数患儿临床症状轻微且不典型，易被忽略。严重者可引起坏死性 小肠结肠炎、败血症、脑膜炎等。 （一）全身症状：发热，新生儿可表现为体温不升、精神萎靡、拒乳、 黄疸加重，面色发灰、皮肤发花甚至出现休克。 （二）消化系统症状：可有呕吐、腹胀、腹泻、粘液血便，肠鸣音减 弱甚至消失，严重时可发生肠穿孔和腹膜炎。 （三）神经系统症状：烦躁、哭声尖直、嗜睡甚至昏迷，可出现凝视、 惊厥，查体可有头围增大、颅缝裂开、前囟张力增高、脑膜刺激征阳 性。
阪崎肠杆菌检验 GB/T 4789.40-2008 4789.40-
二、适用范围
适用于婴幼儿配方奶粉、乳和乳制品及 其原料中阪崎肠杆菌的检验
阪崎肠杆菌介绍
阪崎ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ杆菌（ 阪崎肠杆菌（Enterobater sakazakii）属肠杆菌科肠杆 sakazakii）属肠杆菌科肠杆 菌属，革兰染色阴性杆菌。阪崎肠杆菌在自然界分布 广泛，繁殖迅速，但不耐热，可通过巴斯德消毒法杀 灭。阪崎肠杆菌属条件致病菌，在一般情况下，不对 人体健康产生危害，但对于免疫力低下者和婴幼儿、 新生儿，尤其是早产儿、低体重儿可以致病。感染来 源主要是受阪崎肠杆菌污染的奶粉，人与人之间无传 染性。
阪崎肠杆菌检验 GB/T 4789.40-2008 4789.40-
100 g(100 mL) 样品+900mLBPW稀释液， 均质 36℃±1 ℃ 18 h ± 2 h 1 mLBPW 增菌液+10 mL mLST 44℃±0.5 ℃ 24 h ± 2 h
三、操作流程
第一法 阪崎肠杆菌 的检验
划线接种DFI琼脂
阪崎肠杆菌检验 GB/T 4789.40-2008 4789.40-
一、采标情况
第一法 修改采用ISO /TS 22964. 2006《乳 修改采用ISO 2006《 和乳制品中阪崎肠杆菌》 和乳制品中阪崎肠杆菌》 第二法 修改采用FDA《婴儿配方奶粉中 修改采用FDA《 阪崎肠杆菌的分离和计数》 阪崎肠杆菌的分离和计数》
36℃±1 ℃ 24 h ± 2 h
挑取绿色菌落
接种TSA平板 25℃±1 ℃ 48 h ± 4 h
挑取黄色菌落
生化鉴定
报告
阪崎肠杆菌检验 GB/T 4789.40-2008 4789.40-
5.2 分离：阪崎肠杆菌在选择培养基上的特征菌落 阪崎肠杆菌在选择培养基上的特征菌落
ESIA
CES
DFI
阪崎肠杆菌在三种选择性培养基上的特征 阪崎肠杆菌在
DFI 培养基
阪崎肠杆菌检验 GB/T 4789.40-2008 4789.405.3鉴定 ：可用API20E或VITEK进行鉴定 5.3鉴定 ：可用API20E或VITEK进行鉴定 5.4 报告：报告100g（mL）中检出或未检出阪 报告：报告100g（mL）中检出或未检出阪 崎肠杆菌
阪崎肠杆菌检验 GB/T 4789.40-2008 4789.40三、操作