1株产耐盐碱高温淀粉酶嗜盐菌的筛选和鉴定
1株产耐盐碱高温淀粉酶嗜盐菌的筛选和鉴定
３ ｍｏｌ／Ｌ，Ｍｇ＋浓度为１０ ｎｚｎｏｌ／Ｌ），２００ ｒ／ｒａｉｎ条件下，在１５—５５
℃范围内研究温度对ＳＹＭ生长的影响。
１．６粗酶液的制备用产酶培养基培养的菌液４℃离心收
集上清液，置一２０℃保存备用。
１．７淀粉酶活力测定淀粉酶反应体系为：１．０ ＩＩｄ反应液含
０．１ ＩＩｌｌ粗酶液，Ｏ．２ ｌｌｄ １％（吖ｙ）淀粉溶液和５０ ｍｍｏｌ／Ｌ的
１ＳＹ．Ｍ菌１菌株样为与实试验验室菌分株离菌菌样株采，自对盐照城菌的株射Ｈａ阳／盐ｏｒ场ｕｂ结ｒｕ晶ｍ础池．，
ｔ＇ｏｔｌｏｌ＇ｕｍ购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心（ＣＧＭＣＣ），菌种编号１．２１４７。 １．２培养基收集菌体培养基为Ｐａｙｎｅｒ ９｜，富集及分离纯化
基金项目 江苏省自然科学基金项目（Ｂｒ，２００５１３６）；江苏省教育厅高校 自然科学研究项目（０７ＫＪＤｌ８０２３７）。
关键词嗜盐茵；鉴定；淀粉酶；酶活
中图分类号Ｑ９３９．９
文献标识码Ａ
文章编号０５１７—６６１１（２００６）１５—０６１７３一０４
．
Ｓｃｒｅｎ衄硼ｄ阳朗僦缸出嘶ｏｆ ａ ｌｔａｌｏｌＪＡｅｔｅ—ａ Ｓ把痂ｎｑｈｄｌ擎Ａｒａｒｌ蛾ｗｉｔｈ‰Ａｌｋａｌｉ ａｎｄ Ｈｉ曲Ｔｍｌｏｅｒａｔｌｕ嘴助蛔撇
Ｆｅｎｇ－ｍ Ｉ－ＩＡＮ
ｔＯ ｆｉｖｅ ｉｎ ｓａｔｕｒａｔｅｄ ＮａＣＩ ＣＯｈｅｎ．ｔｈｅ ｃｙｔｏａｅｒｍ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈａｌｌｉ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ出ｃｅｒｏｌ ｄｉｅｔｈｅｒ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｗｉｔｈ
ｈ０呱咖ａｎａｌｙｓｉｓ．１ｈｅ ｈａｌｏｐｌｌｉｌｏｕｓ ａｒｅｈａｅａ ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ．ＴＩ砣吕ｌ壕ｐｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈａｌｌｉ啪ｓ ｓｐｈｅｒｉｃａｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｌｏｎｙ ｗａｓ ｏｒ删ｇ，ｅ ｒｅｄ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ ｈａｌｏｐｈｉｌｏｕｓ ａｒｃｈａｅａ，
一株盐单胞菌的分离及16S rDNA基因序列分析鉴定
一株榆林盐碱土壤嗜盐菌的分离及鉴定*孙晓宇陈锐李玥路鹏鹏门欣韩丽萍黄继红沈卫荣**（陕西省微生物研究所微生物资源中心西安710043）摘要目的：从陕西定边盐湖高渗极端环境中筛选分离获得嗜盐微生物，并对筛选获得的微生物进行种属鉴定。
方法：通过高盐选择性培养基平板分离法，从陕西定边盐湖土壤样品中，分离筛选获得极端嗜盐菌株，该菌最适生长温度35℃，最适pH8.0。
通过传统的表型特征（包括形态学观察、生长因子实验、生理生化特征）和系统发育学16S rDNA序列分析鉴定嗜盐菌株的分类学地位。
结果：获得一株最适生长盐浓度在10%~20%的细菌菌株A426，初步鉴定其为盐单胞菌科(Halomonadaceae) 盐单胞菌属(Halomonas)菌株。
结论：成功获得定边盐湖地区中度嗜盐菌株A426。
关键词:嗜盐菌，极端微生物，盐单胞菌, 鉴定Isolation and 16S rDNA Gene Sequence Analysis of a Halomonas sp. strain* CHEN Rui LI Yue SUN Xiao-Yu LU Peng-Peng MEN Xin HAN Li-Ping SHEN JianHUANG Ji-Hong SHEN Wei-Rong**（Shaanxi province institute of microbiology, xi’an, 710043）[Abstract] Objective: Isolate halophilic bacteria strain from DingBian salt lake sample. Methods: By high salt selected culture method and gradient dilution isolation method isolate a halophilic bacteria strain from the DingBian salt lake sample. According to the classic phenotypic characteristics which include morphological observation, growth factor and the physiological and bio-chemical characteristics, moderate halophile strain A426was to be identified. To determine the taxonomy position of the newly isolated moderate halophile bacterium in evolution history, 16S rRNA sequence homologous alignment were performed between it and related species. Results: The strain A426 which can grow optimally in culture media that contain 10%~20%NaCl. The moderate halophile strain A426 was identified to belong to Halomonas sp.Conclusion: Successfully isolate a moderate halophile strain A426from DingBian salt lake.Keywords: Halophilic Bacteria, Extreme microorganism, Halomonas sp., Identify嗜盐菌是指能在高浓度盐环境下正常生长的微生物, 其广泛分布于盐湖、盐场和海洋等富盐极端环境。
“产淀粉酶菌株的筛选”设计方案
“产淀粉酶菌株的筛选”设计⽅案产淀粉酶（α-淀粉酶）细菌菌株筛选⼀、实验⽬的：1.掌握从环境中采集样品并从中分离纯化某种微⽣物的完整操作步骤。
2.巩固以前所学的微⽣物学实验技术。
3.学习淀粉酶活性的测定⽅法。
⼆、实验原理：1.α-淀粉酶是⼀种液化型淀粉酶，它的产⽣菌芽孢杆菌，⼴泛分布于⾃然界，尤其是在含有淀粉类物质的⼟壤等样品中。
2.从⾃然界筛选菌种的具体做法，⼤致可以分成以下四个步骤：采样、富集培养、初步筛选、分离纯化和性能测定。
a)采样：即采集含菌种的样品采集含菌样品前应调查研究⼀下⾃⼰打算筛选的微⽣物在哪些地⽅分布最多，然后才可着⼿做各项具体⼯作。
在⼟壤中⼏乎各种微⽣物都可以找到，因⽽⼟壤可说是微⽣物的⼤本营。
例如厨房⼟壤、⾯粉加⼯⼚和菜园⼟壤中淀粉的分解菌较多。
b)富集培养：富集培养就是在所采集的⼟壤等含菌样品中加⼊某些物质，并创造⼀些有利于待分离微⽣物⽣长的其他条件，使能分解利⽤这类物质的微⽣物⼤量繁殖，从⽽便于我们从其中分离到这类微⽣物。
c)初步筛选：i.（选择培养基）初筛使⽤选择培养基对菌种进⾏培养，通过培养基的特殊成分，来筛选出⽬的菌种，从⽽进⾏培养。
ii.（鉴别培养基）初筛利⽤鉴别培养基，通过添加⼀些特殊的试剂或成分来鉴别出⽬的菌种，从⽽筛选出来并对其进⾏培养。
d)分离纯化：通过上述的筛选只能说我们要分离的⽬的菌种已经存在，但还要把夹杂在其中的杂菌除去，从⽽得到纯种的菌落。
纯种分离的⽅法很多，主要有：平板划线分离法、稀释分离法、单孢⼦或单细胞分离法、菌丝尖端切割法等。
e)性能测定：分离纯化得到的菌种之后，所分得的菌种是否具有实验所要求的性能，还必须要进⾏性能测定后才能决定取舍。
三、实验材料：1.培养基配制：a)培养基按以下⽐例配制后，加蒸馏⽔调⾄100%；b)富集培养基：可溶性淀粉1%、蛋⽩胨1%、葡萄糖0.5%、NaCl 0.5%、琼脂粉0.8%、⽜⾁膏0.5%、pH7.0；c)分离培养基：⽟⽶粉2%、黄⾖饼粉1.5%、CaCl 0.02%、MgSO4 0.02%、NaCl 0.25%、K2HPO4 0.2%、柠檬酸钠0.2%、硫酸铵0.075%（溶解后加⼊）、Na2HPO40.2%、pH7.0。
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定作者：姚凌妍沈建华来源：《科技创新导报》2019年第36期摘; ;要：分离筛选耐盐的蛋白酶高产菌并加以鉴定。
从厨余垃圾存放处土壤中分离细菌，利用蛋白水解透明圈初筛蛋白酶高产菌，并进行蛋白酶高产菌的耐盐试验，对所得的耐盐蛋白酶高产菌进行革兰氏染色与半固体穿刺培养。
从土壤中分离得到19个单菌落，在初筛培养基上点种接种，有4株有比较明显的水解透明圈，其中P2，P3为蛋白酶高产菌，耐盐试验表明P3最适盐浓度为2%，为耐盐高产菌株。
P3革兰染色阳性，杆状，产芽孢，好氧，有鞭毛。
从厨余垃圾存放处的土壤中分离得到一株耐盐的蛋白酶高产菌P3，为高渗条件下发酵生产蛋白酶提供了一种可能的菌种。
关键词：蛋白酶; 耐盐; 初筛; 鉴定碱性蛋白酶、α-淀粉酶及糖化酶是三大工业酶制剂，其总产量约占酶类制剂的80%以上。
催化蛋白质水解的酶称为蛋白酶，其中碱性条件下能水解蛋白质中肽键的酶即碱性蛋白酶，其最适pH在9～11范围内，广泛应用于洗涤剂、食品、医疗、酿造、丝绸、制革等行业。
因此，蛋白酶的生产在酶制剂乃至整个生物技术产业中占有重要的地位。
蛋白酶广泛分布于动物、植物与微生物中。
由于植物受生长地域、季节、气候等的影响，生产酶制剂的产量、质量都不稳定。
动物产生的酶主要从屠宰牲畜的腺体中提取，来源有限。
只有微生物生产的酶，可满足任何规模的需求，产率高、质量稳定。
同时，微生物产生的蛋白酶通常为胞外酶，分泌到发酵液中，相较于动植物来源的蛋白酶，分离纯化的难度大大降低。
工业上规模化培养微生物时，出于提高产率的考量，一般培养液的浓度尽量提高，这就要求发酵菌种能够耐受较高的渗透压，往往使用耐高盐的菌种。
耐盐的蛋白酶高产菌菌种的选育成为蛋白酶生产的关键。
本文拟从土壤中分离细菌，筛选出耐盐的蛋白酶高产菌，并进行初步鉴定，以期为蛋白酶生产提供可能的细菌菌株。
1; 材料与方法1.1 土壤样品稀释液从南京科技职业学院校园内厨余垃圾存放处土地采集土样，五点取样，取表层以下5～10cm处的土样，混匀，放入无菌的袋中备用。
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定
盐渍化是困扰全球农业持续发展的问题之一。
在高盐环境下，微生物为了适应环境，
往往会产生一些耐盐酶，这些酶具有广泛的应用前景，目前对这类酶的研究越来越受到关注。
本研究通过对芽孢杆菌菌株进行耐盐蛋白酶的筛选及鉴定，旨在找到一株高产耐盐蛋
白酶的菌株，为该类酶的产业化应用提供基础资料。
研究中使用了来自不同环境中的细菌菌株作为研究对象，经过耐盐筛选和试验验证，
筛选出一株产酶菌株。
该菌株的形态特征和生化特性表明，它属于芽孢杆菌属。
为了进一步了解筛选出的菌株的耐盐蛋白酶的生化特性，对该菌株产酶条件的影响进
行了初步研究。
结果表明，最佳的产酶条件为温度37℃，pH值为8.0，盐度为12%。
在此
条件下，该菌株耐盐蛋白酶的相对酶活达到了最高值。
此外，研究还分别分析了该菌株产酶过程中酶活力与时间、碳源和氮源等因素的关系，并对其酶解产物进行了初步的质谱分析。
结果表明，该菌株的耐盐蛋白酶主要是以胶原蛋
白为底物，可将胶原蛋白降解成小分子多肽和氨基酸。
一株黄河三角洲盐碱地耐盐菌的分离_鉴定及耐盐能力分析
Ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈａｌｏｔｏｌｅｒａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｏｍ Ｙｅｌｌｏｗ Ｒｉｖｅｒ Ｄｅｌｔａ ｓａｌｉｎｅ－ａｌｋａｌｉ ｓｏｉｌ ａｎｄ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｉｔｓ ｓａｌｔ ｔｏｌｅｒａｎｔ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ
ＬＵ Ｈｏｎｇ－ｓｈｅｎｇ，ＸＵ Ｙｉｎｇ－ｙｉｎｇ，ＹＵ Ｍｅｎｇ－ｍｅｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｑｉｎｇ－ｙｉｎｇ， ＷＡＮＧ Ｊｉａｎ－ｙａｎ，ＴＡＮ Ｈａｏ－ｃｈｅｎ
取２０ !Ｌ 上述细菌富集液平板划线到分离固体培养基上，３０ ℃静置培养，取单菌落重复划线 ３ 次， 直至菌落形态一致，将分离纯化后的菌落保存在半固体分离培养基中，４ ℃ 冰箱保存，暂 命 名 为 ＮＭ－１， 待用．
１．３ 生 理 生 化 性 质 测 定 对上述纯化得到的单菌落用耐盐菌富集液体培养基进行富集培养 ，得到富集培养液，对其生理生化
即装入灭菌的密封袋中，土样带回实验室后立即对菌进行富集和分离．剩余样品储存于４ ℃冰箱中待用． 富集培养基成分：（ＮＨ４）２ＳＯ４１ｇ，Ｋ２ＨＰＯ４７ｇ，ＫＨ２ＰＯ４３ｇ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．１ｇ，葡 萄 糖 １０
ｇ，蒸馏水１ ０００ｍＬ．分离培养基成分：酵母膏 １０ｇ，蛋白胨７．５ｇ，柠檬酸钠３．０ｇ，ＫＣｌ ２．０ｇ，ＭｇＳＯ４· ７Ｈ２Ｏ ０．２ｇ，ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．０３６ｇ，ＮａＣｌ ２０．０ｇ，Ｎａ２ＣＯ３１０．０ｇ，蒸馏水１ ０００ｍＬ，ｐＨ 用盐酸或氢氧 化钠调节．富集培养基及分 离 培 养 基 均 在 １２１ ℃ 灭 菌 ２０ ｍｉｎ 后 使 用，制 备 固 体 平 板 培 养 基 时 加 入 １５ ｇ·Ｌ－１琼 脂 ，制 备 半 固 体 培 养 基 时 加 入 ２ｇ·Ｌ－１琼 脂 ． １．２ 耐 盐 细 菌 的 富 集 、分 离 和 筛 选
一株产生物表面活性剂耐盐碱菌株的分离及鉴定
一株产生物表面活性剂耐盐碱菌株的分离及鉴定王君;范延辉;姚志刚【摘要】从黄河三角洲石油污染盐渍土中分离获得产生物表面活性剂的耐盐碱菌株,用于治理该地区的土壤污染问题.采用富集培养方法,分离得到4株优势菌,其中菌株BG降表面张力的能力最强.经生理生化实验和16S rRNA序列分析,鉴定菌株BG属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.).对该菌株产生物表面活性剂的性能进行研究,结果表明:菌株BG在37℃、180 r/min下振荡培养48 h,可将发酵液的表面张力由初始的58.4 mN/m降低至25.1 mN/m;温度对菌株BG产生物表面活性剂的影响较大,最适温度是37℃,此温度下菌株BG有良好的耐盐碱特性,显著降低发酵液表面张力.采用酸沉法提取了菌株BG产生的生物表面活性剂,鉴定为一种脂蛋白类物质,其中脂类和蛋白质质量分数分别为64.7％、35.3％.【期刊名称】《环境污染与防治》【年(卷),期】2016(038)009【总页数】5页(P31-35)【关键词】生物表面活性剂;芽孢杆菌属;表面张力;耐盐碱【作者】王君;范延辉;姚志刚【作者单位】滨州学院生命科学系,山东省黄河三角洲野生植物资源开发利用工程技术研究中心,山东滨州256603;滨州学院生命科学系,山东省黄河三角洲野生植物资源开发利用工程技术研究中心,山东滨州256603;滨州学院生命科学系,山东省黄河三角洲野生植物资源开发利用工程技术研究中心,山东滨州256603【正文语种】中文生物表面活性剂是微生物或植物在一定条件下培养时，在其代谢过程中分泌出的具有一定表面活性的代谢产物，其种类繁多，包括糖脂、磷脂、脂肪酸、脂肽或中性类脂衍生物等[1-2]。
相比化学表面活性剂，生物表面活性剂除了具有降低界面张力和表面张力外，还具有无毒、易降解、用量少及生物兼容性等特点[3]，故其在石油工业的生物降黏、提高原油采收率、修复石油污染土壤等方面得到广泛应用。
此外，还应用于医药、化妆品生产、造纸、重金属去除等诸多领域[4]。
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定随着全球环境变化和土地盐碱化现象日益加剧，盐碱地的利用与开发成为当前生物技术领域的研究热点之一。
由于盐碱地上生长着各种耐盐植物，这些植物通常能够分泌出多种耐盐蛋白酶来适应高盐环境。
耐盐蛋白酶是一类具有较强抗盐性的酶，具有在高盐环境中稳定地保持生物体正常代谢的能力，因此对耐盐蛋白酶的研究对于开发盐碱地资源具有重要意义。
为了筛选出高产耐盐蛋白酶的菌株，本实验通过土壤微生物样本的采集和处理，利用培养基筛选、酶活性测定等方法对菌株进行筛选和初步鉴定。
下面将介绍一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定方法。
1. 土壤样品的采集与处理在盐碱地上采集表层土壤样品，将其放入密封袋中，并在4℃条件下运送至实验室。
将土壤样品经过筛选和加工处理后制备为土壤样品悬液。
2. 菌株的分离和筛选将土壤样品悬浊液进行稀释处理，将稀释液均匀的涂覆到含有不同盐浓度的LB琼脂平板上，然后分别在25℃和37℃条件下进行培养。
培养过程中观察并挑选出对盐浓度具有较强耐受能力并有较高细菌光带形成的菌落。
3. 耐盐菌菌落的增殖和纯化将所挑选出的耐盐菌菌落进行传代培养，增殖菌株。
然后将增殖好的菌株进行传代分离和纯化，选择菌落形态较好的细菌单体进行单菌分离。
最后进行双层琼脂平板法纯化和扩展培养。
4. 菌株的酶活性测定利用琼脂酶平板法对菌株进行酶活性测定。
将筛选到的菌株接种于含有抗生素和不同盐浓度的琼脂平板上，使用碘液染色观察菌落周围的透明圈的直径。
透明圈直径越大，表示菌株产生的蛋白酶活性越高。
5. 菌株的初步鉴定利用生化鉴定和16S rDNA序列分析方法对菌株进行初步鉴定。
根据菌落形态、生理生化特性和16S rDNA序列进行分析，确定菌株的属种和种属。
通过上述方法，成功筛选出了一株耐盐蛋白酶高产菌，并对其进行了初步的鉴定。
本实验为从盐碱地土壤中筛选出具有应用潜力的高产耐盐蛋白酶菌株奠定了基础，为盐碱地资源的开发与利用提供了科学依据。
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定随着全球环境的变化以及产业的不断发展，盐碱化土地的面积不断扩大，海洋水质的污染也越来越严重，导致许多微生物栖息环境的盐度浓度逐渐增加。
在这种背景下，具有耐盐特性的微生物资源逐渐备受关注，因为高盐环境是其适宜生长的环境，因此具有耐盐能力的生物对于生物制药、食品加工、工业废水处理等领域具有非常重要的应用价值。
其中，耐盐蛋白酶在生物技术领域有着重要的应用，在酶工程、制药、食品加工、皮革加工等方面具有广泛应用前景。
一般来说，耐盐蛋白酶的产生需要在高盐度的环境中进行培养，因此筛选高产耐盐蛋白酶的菌株和生产技术非常重要。
在本次研究中，我们使用了土样和海水样品进行菌株筛选，主要通过营养琼脂平板和液体培养基筛选获得。
在培养基中添加NaCl和其他盐类，以及蛋白质为碳源，使得耐盐菌能够在高盐浓度下生长、形成菌落并产生蛋白酶。
经过初步的筛选，我们通过对菌落形态、色素、生长速度等外在特征进行观察，从中挑选出了一株耐盐蛋白酶高产的菌株。
接下来，我们对这株菌株进行了初步的鉴定。
首先，我们对菌株的形态和结构进行了测定和分析。
通过显微镜和染色技术，我们观察到该菌株为无色单杆菌，形态规则，长约2~3μm，宽约0.5~1μm。
然后，我们对其生理生化特性进行分析。
该菌株具有产酸能力，无能产氧化酶，无需氧生长，依赖碳酸盐共存进行生长等特性。
接着，我们对其分子生物学特性进行了测定。
通过菌株的16S rRNA序列分析，我们鉴定出该菌株属于嗜盐菌属(Halomonas)，与Halomonas penaei的相似性为98%。
最后，我们通过蛋白酶活性测定，发现该菌株产生的蛋白酶活性较高，达到了100U/mL。
综上，我们成功地筛选出了一株耐盐蛋白酶高产菌株，并通过初步的形态、生理、生化、分子生物学特性的鉴定，确定了该菌株的分类学位置和蛋白酶产生能力。
该菌株的筛选和鉴定为耐盐蛋白酶的高效生产奠定了基础。
在未来，转基因技术、酶工程等手段的运用有助于进一步提高该菌株产酶能力，使其在实际应用中发挥更大的作用。
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定随着生物技术的不断发展，酶工程在生物技术领域中扮演着重要的角色。
蛋白酶是一类具有广泛应用价值的酶类，在生物工程、医药、食品加工等领域具有重要的应用价值。
目前市场上大多数的蛋白酶都是来源于微生物，因此寻找高产、耐盐蛋白酶的菌株成为了当前的研究热点之一。
本研究旨在筛选出一株耐盐蛋白酶高产菌，并对其进行初步鉴定和研究。
一、菌株的筛选1. 样品的采集样品是研究的基础，本研究选择了海水作为原料，海水中的微生物菌落丰富，是寻找耐盐菌株的理想来源。
在采集海水样品时，需要避免外界的污染，同时要选择距离海岸较远的地点进行采样。
2. 耐盐菌的筛选在采集得到的海水样品中，我们采用平板和液体培养的方法进行菌株的筛选。
首先将样品进行稀释，之后在含有不同盐浓度的琼脂平板上进行培养。
经过一段时间的培养后，观察并挑选出耐盐能力较强的细菌菌落进行复苗。
接着将耐盐菌菌液接种到含有不同盐浓度的液体培养基中，再次筛选出最适合耐盐性能力的菌株。
3. 蛋白酶产生菌株的筛选得到耐盐菌株后，我们将其进行蛋白酶产生能力的筛选。
将筛选得到的菌株分别接种到富含蛋白质的培养基中，之后进行培养和振荡，并使用凝胶电泳和光谱法检验菌株的蛋白酶产生能力。
二、菌株的初步鉴定1. 形态学鉴定接下来，我们对耐盐蛋白酶高产菌进行初步的形态学鉴定。
首先观察菌落的形态、颜色等特征，然后将其进行革兰氏染色和酸性染色等基本染色实验。
2. 生理生化特性鉴定在对菌株进行了形态学鉴定后，我们还需要对其进行生理生化特性鉴定。
菌株的氧气需求情况、产酶酶素的特性、温度和酸碱度的耐受能力等。
3. 分子生物学鉴定我们还将对该菌株进行分子生物学鉴定。
利用PCR扩增技术对其进行16S rDNA序列的测定和分析。
通过与NCBI数据库中已知菌株的16S rDNA序列进行比对，最终确定该菌株的属属和种属。
三、结论与展望经过以上几个步骤的研究和实验，我们筛选出了一株耐盐蛋白酶高产菌，并对其进行了初步的鉴定和研究。
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定随着全球气候变化和人类活动的影响，盐碱化和荒漠化的问题日益严重。
盐碱土壤中的高盐浓度不但对植物生长带来影响，也对微生物生长带来极大的压力。
而在这样的环境中，若能筛选出一些耐盐菌株，对维护土壤生态平衡和提高农业生产力都有着积极的意义。
本研究采用土壤样品培养菌株与测序分析相结合的方法，筛选出一株耐盐蛋白酶高产菌，并对其进行初步鉴定和评价。
1、筛选菌株从渭南市半夏沟盐碱土壤中挖取样品，使用平板法选取耐盐菌。
筛选条件为：15%NaCl、pH=8.0、温度为37°C。
经过3个孔眼培养基的筛选后，获得了一株能够在高盐高碱环境下生长的菌株。
2、16S rRNA测序分析使用菌落PCR方法提取该菌株的基因组DNA，将其16S rDNA片段扩增并纯化，测序结果表明该菌株属于葡萄球菌属。
经过BLAST比对分析，其与NCBI数据库中的Staphylococcus arlettae的同源性可达到99.67%。
3、蛋白酶高产能力评价培养该菌株于含有1.5%NaCl的LB培养基中，经过48小时后采集细胞沉淀并测定其蛋白酶活性水平。
结果表明，该菌株可产生100U/mL的蛋白酶活性，具有良好的蛋白酶高产能力。
4、耐盐性评价在不同浓度的NaCl中对该菌株进行耐盐性评价。
结果表明该菌株最大耐盐浓度为18%NaCl，具有较强的耐盐能力。
5、蛋白酶酶学性质研究将该菌株的蛋白酶纯化并研究其酶学性质。
结果表明，该蛋白酶在pH=9.0~10.0和温度为50℃时具有最高酶活性，属于碱性蛋白酶。
综合上述结果可知，本研究筛选出一株具有较强耐盐能力和蛋白酶高产能力的Staphylococcus arlettae，对于盐碱土壤的改良和农业生产都具有重要的潜在应用前景。
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定摘要：耐盐蛋白酶是一种具有重要生物学功能的酶，其高产菌的筛选与鉴定对于工业生产具有重要意义。
本实验旨在从自然环境中筛选出一株耐盐蛋白酶高产菌，并对其进行初步鉴定。
首先在不同盐浓度下对自然环境中分离的细菌进行耐盐筛选，然后对耐盐菌株进行蛋白酶产酶能力测定和酶学性质分析。
最终成功筛选出一株耐盐蛋白酶高产菌，并初步鉴定其为嗜盐菌属，为耐盐蛋白酶高产菌的鉴定和利用提供了参考。
关键词：耐盐蛋白酶；高产菌；筛选；初步鉴定2.材料与方法2.1 材料自然环境样品：盐池水样2.2 方法（1）耐盐菌株的筛选首先从盐池水样中分离出细菌，并进行盐耐性筛选。
分别将分离出的细菌接种于含有不同盐浓度的培养基中，观察培养基上的细菌生长情况，并筛选出耐盐菌株。
（2）耐盐蛋白酶高产菌的筛选将耐盐菌株接种于蛋白酶产酶培养基中，培养一定时间后，通过测定发酵液中的蛋白酶活力来筛选出耐盐蛋白酶高产菌。
（3）蛋白酶产酶能力的测定测定耐盐蛋白酶高产菌发酵液中的蛋白酶活力，采用琼脂酶活性测定法。
（4）耐盐蛋白酶的酶学性质分析对耐盐蛋白酶进行其酶学性质的初步分析，包括对其最适温度、最适pH以及热稳定性和耐受性等性质的测定。
3.结果（1）耐盐菌株的筛选经过盐浓度为10%、15%、20%培养基的耐盐筛选，分离出一株耐盐菌株，并命名为A 菌株。
（4）耐盐蛋白酶的酶学性质分析A菌株产生的耐盐蛋白酶最适温度为40°C，最适pH为8.0，热稳定性较好，在60°C 条件下仍具有较高的酶活力。
5.结论本实验从自然环境中筛选出一株耐盐蛋白酶高产菌，并对其进行了初步的鉴定和酶学性质分析，为耐盐蛋白酶的生产和利用提供了参考。
接下来，可以进一步对该菌株进行全面的生物学和遗传学研究，探寻其蛋白酶高产的分子机制，为其在工业生产中的应用奠定更加坚实的基础。
一株产酯酶窖泥细菌的筛选、鉴定及酶学性质研究
chain length of the optimum reaction substrate was 6.
pit mud; bacterium; screening; identification; esterase; enzymatic property
酯酶（esterase）是指能够催化水解羧酸酯的所有酶的
对其进行形态观察和分子生物学鉴定，并对其产生的酯酶
进行纯化和酶学性质分析，以期对窖泥的改良与优化提供
一定的参考。
收稿日期：2018-12-20
修回日期：2019-03-28
基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目（31600042）；河南省高等学校重点科研项目（16A180052）；郑州轻工业学院博士基金项目
摘 要：该研究旨在从宋河酒厂窖泥中筛选出一株高产酯酶的菌株，通过形态观察和分子生物学技术对其进行鉴定，通过盐析法纯化
酯酶并对其酶学性质进行研究。结果表明，筛选分离出一株高产酯酶的菌株SH-17，被鉴定为约氏不动杆菌（
），
其产酯酶活力为2.83 U/mL；经饱和度60%的硫酸铵盐析得到该酯酶分子质量约为42 kDa，最适反应温度为40 益，最适pH值为8.0，高
（2014BSJJ072）
作者简介：韩 丽（1983-），女，讲师，博士，研究方向为微生物代谢工程。
医药、食品、化工、环保等领域，尤其在白酒酿造业。随着工
业的发展，人们对酯酶的要求越来越高，因此，选育性质
特殊、催化活性高的酯酶成为近年来研究的热点[5-8]。目前，
研究学者主要从土壤、海洋样品中筛选产酯酶细菌，为了
获得催化性能优良、耐极寒或酷热的酯酶，研究学者多在
高山、极地、深海或者火山口进行取样，筛选产酯酶细菌[9]。
1株产耐盐碱高温淀粉酶嗜盐菌的筛选和鉴定
1株产耐盐碱高温淀粉酶嗜盐菌的筛选和鉴定韩丰敏;赵庆新;袁生;蔡信之【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2008(036)015【摘要】[目的]研究极端嗜盐菌SYM菌株的形态和生理生化特点及其所产胞外淀粉酶性质.[方法]从江苏省盐城市射阳盐场筛选得到1株极端嗜盐菌SYM菌株,对其进行形态、生理生化和分子水平的鉴定,并对其产生的淀粉酶部分酶学性质进行研究.[结果]SYM菌株能在饱和NaCl浓度下生长,菌体细胞壁含有嗜盐古细菌特征性的甘油二醚衍生物,菌体形态为球状,菌落显橙红,经生理生化和16 SrD-NA基因序列同源性分析鉴定为嗜盐古细菌嗜盐深红菌属.SYM菌株淀粉酶最佳反应条件为1.15 mol/L NaCl、DH值7.0和温度70℃.Na Cl浓度为2.65 mol/L时,酶活可以保持最高酶活的61%;80℃时,酶活可保持最高酶活的69%;pH值13.0时,酶活可保持最高酶活的76%.[结论]SYM菌株产生的淀粉酶是一种能耐受高盐高碱高温的极端酶.【总页数】4页(P6173-6176)【作者】韩丰敏;赵庆新;袁生;蔡信之【作者单位】南京师范大学生命科学学院,江苏南京,210046;盐城师范学院生命科学与技术学院,江苏盐城,224051;盐城师范学院生命科学与技术学院,江苏盐城,224051;南京师范大学生命科学学院,江苏南京,210046;盐城师范学院生命科学与技术学院,江苏盐城,224051【正文语种】中文【中图分类】Q939.9【相关文献】1.一株产聚－β－羟基脂肪酸酯嗜盐菌的筛选与鉴定1） [J], 王海飙;刘长莉;刘润泽;常乐;王珺2.北冰洋产淀粉酶海洋细菌的筛选与鉴定及其产酶条件的优化 [J], 陈吉刚;张蓉蓉;杨季芳;毛芝娟3.一株产淀粉酶中度嗜盐菌Nesterenkonia sp.DQ-1的分离鉴定 [J], 张杰;刘永强;王滨松;范志薇;孙源;卢磊;刘长莉;赵敏4.北冰洋产淀粉酶海洋细菌的筛选与鉴定及其产酶条件的优化（摘要）（英文）[J], 陈吉刚;张蓉蓉;杨季芳;毛芝娟5.北冰洋产淀粉酶海洋细菌的筛选与鉴定及其产酶条件的优化 [J], 陈吉刚; 张蓉蓉; 杨季芳; 毛芝娟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一株降解PCBs嗜盐菌的筛选及产酶条件研究
农业环境科学学报２００７，２６（１）：３１０－３１３ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｏ－ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＳｃｉｅｎｃｅ摘要：从深海底泥中提取出一株生长盐度在１５％的降解ＰＣＢｓ的嗜盐菌，并将其命名为Ｂ２．６。
此菌株能以ＰＣＢｓ为惟一碳源和能源生长，７２ｈ的降解率可达９０％以上。
对其进行了形态观察、革兰氏染色及各项生理生化指标鉴定，并和Ｂｉｏｌｏｇ细菌鉴定系统鉴定的结果进行了比对。
研究结果表明，菌株Ｂ２．６合成ＰＣＢｓ降解酶的模式为延续合成型；主族的一价离子Ｎａ＋、Ｋ＋能够提高ＰＣＢｓ降解酶的酶活，过渡金属离子Ｃｏ２＋、Ｍｎ２＋、Ｃｕ２＋、Ｆｅ２＋和Ｆｅ３＋对酶活则有一定程度的抑制；此酶的最适温度和ｐＨ值分别为２５～３５℃和ｐＨ６～８。
关键词：嗜盐菌；多氯联苯；生物降解；Ｂｉｏｌｏｇ中图分类号：Ｘ１７２文献标识码：Ａ文章编号：１６７２－２０４３（２００７）０１－０３１０－０４收稿日期：２００６－０９－３０基金项目：国家重点基础研究发展规划项目资助（２００４ＣＢ４１８５）作者简介：赵喆（１９８０—），女，辽宁省人，博士研究生，主要从事环境生物技术方面的研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｏｚｈｅ１９８０＠１６３．ｃｏｍ多氯联苯（ＰｏｌｙｃｈｌｏｒｉｎａｔｅｄＢｉｐｈｅｎｙｌｓ，ＰＣＢｓ）是一类持久性有机污染物（ＰｅｒｓｉｓｔｅｎｔＯｒｇａｎｉｃＰｏｌｌｕｔａｎｔｓ，ＰＯＰｓ），由于其急性毒效应、高残留性、高富集性、远距离扩散，以及对生态系统和人类健康的影响，被国内外环境保护部门列入优先控制的有机污染物名单，再度成为环境科学界关注的热点之一［１、２］。
土壤水环境中的多氯联苯，目前可采用的最适宜的处理方法是土地生物处理，土壤号称“微生物的天然培养基”，它具有微生物生活最适宜的环境，它能够将多氯联苯降解为环境可以接受的物质，如二氧化碳和水等。
土地生物处理的方法相比于其他处理方法，如废物填埋、焚烧或土壤洗涤等来说［２］，具有对环境破坏性小、经济有效等特点，因此是一种广泛使用的处理方法。
高温淀粉酶高产菌株筛选及产酶条件优化
高温淀粉酶高产菌株筛选及产酶条件优化作者：易征璇赵彤师旋王征李立恒来源：《现代农业科技》2014年第07期摘要为筛选高温淀粉酶高产菌株，利用淀粉酶水解圈作筛选模型，从稻田中采集土样，筛选得到产淀粉酶能力较高的菌株E10。
为提高菌株产酶能力，进行了碳源种类及浓度，氮源种类及浓度，无机盐种类及浓度，pH值，种龄及接种量、温度、时间的单因素试验，并对发酵培养基及发酵条件进行了L9（34）正交优化试验。
结果表明：最佳产酶发酵培养基为2.0%麸皮、0.1%硝酸钾、0.25%氯化钙，最适初始pH值为6.0。
最适产酶条件为种龄24 h，接种量7 mL，于36 ℃下培养48 h。
在优化条件下，菌株产酶活力可达180.94 IU/mL。
关键词高温淀粉酶；高产菌株；筛选；发酵条件中图分类号 TQ925+.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）07-0240-04Screening of High-yield Strain Producing Thermostable Amylase and Optimization of Enzyme ProductionYI Zheng-xuan ZHAO Tong SHI Xuan WANG Zheng LI Li-heng *（College of Bioscience and Technology，Hunan Agricultural University，Changsha Hunan 410128）Abstract In order to screen a high-yield strain producing thermostable amylase，starch hydrolysis circle was employed as a screening model. The E10 strain achieved from the paddy field soil has high capacity of enzyme production. In order to improve the capability of enzyme production of E10，the single factor experiments was conducted for the kinds and concentrations of carbon source，the kinds and concentrations of nitrogen source，the kinds and concentrations of inorganic salt，pH value，seed age，inoculate volume，temperature and time，then the L9（34） orthogonal optimization test for the fermentation medium and conditions was carried out. The results showed that the best fermentation medium of the enzyme production of E10 was 2.0% wheat bran，0.1%KNO3，0.25% CaCl2，initial pH value of 6.0. The optimal fermentation conditions of the enzyme production of E10 were 24 hours of seed age，7 mL of inoculates volume，36 ℃ of culture temperature，48 hours of time. Under the optimized conditions，the enzyme production of E10 reached 180.94 IU/mL.Key words thermostable amylase；high-yield strain；screening；fermentation condition淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，广泛分布于动物（唾液、胰脏等）、植物（麦芽、山萮菜）及微生物中，是最早实现工业生产并且迄今为止用途最广、产量最大的酶制剂品种[1]。
盐碱土壤中耐盐细菌的分离与鉴定
山东农业科学 2008,9:49～50,54Shandong Agricultural Sciences收稿日期:2008-05-30基金项目:山东省科技攻关重点项目(项目编号:2005GG3209057)作者简介:张广志(1978-),男,山东临朐人,硕士,主要从事农业微生物与生物技术等方面的研究。
3通讯作者盐碱土壤中耐盐细菌的分离与鉴定张广志1,周红姿1,杨合同1,23,赵晓燕1(11山东省科学院中日友好生物技术研究中心,山东省应用微生物重点实验室,山东济南 250014;21山东省科学院生物研究所,山东济南 250014) 摘 要:从盐碱土壤中分离筛选耐盐菌株12株,经鉴定分别为假单胞菌属(Pseudo m onas ),黄杆菌属(Flavobacterium ),盐单胞菌属(Halo m onas ),微球菌属(M icrococcus )和芽孢杆菌(B acillus )。
各菌株均耐盐至10%,且对小麦、番茄、辣椒和黄瓜没有潜在致病性。
关键词:耐盐细菌;分离;鉴定;耐盐性中图分类号:S154138+1 文献标识号:A 文章编号:1001-4942(2008)09-0049-03Isol ati on and I denti fi cati on of Halotolerant Bacter i afro m Salt -soda SoilZHANG Guang -zhi 1,ZHOU Hong -zi 1,Y ANG He -t ong1,23,Z HAO Xiao -yan1(11S I NO -Japanese Friendship B iotechnology Research Center of Shandong A cade m y of Sciences,Shandong Provincial Key L ab for A pplied M icrobiology,J inan 250014,China;21Institute of B iology,Shandong A cade m y of Sciences,J inan 250014,China )Abstract 12hal ot olerant bacteria were is olated fr o m salt -s oda s oil and identified t o bel ong t o Pseudo 2m onas,F lavobacterium ,Halo m onas,M icrococcus and B acillus res pectively .Every strain had the t olerance upt o 10%NaCl and no potential pathogenicity t o wheat,t o mat o,hot pepper and cucu mber .Key words Hal ot olerant bacteria;Is olati on;I dentificati on;Salt t olerance 我国盐碱地面广量大,改造治理及合理开发利用这些资源是我国农业可持续发展的重要途径之一,也对改善生态环境,推动区域经济、社会和生态可持续发展具有特别重要意义[1]。
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１ 株极端嗜盐茵ＳＭ菌 对其进荇形态、 理生化和分子水平的鉴定， Ｙ 株， 生 并对其产生的淀粉酶部分酶学性质进行研究。［ 结果］ Ｍ菌株 Ｓ Ｙ
能在饱 和 Ｎ Ｃ浓 度下 生长 ， ａ１ 茵体 细胞壁含有 嗜盐古 细菌特征 性的甘 油二 醚衍 生物 ， 菌体形 态为球状 ， 茵落显橙 红 ， 生理 生化和 １ Ｄ 经 ６Ｓ — ｒ Ｎ Ａ基 因序 列 同源性 分析鉴 定为嗜盐 古细 菌嗜盐深红 茵属。Ｓ Ｍ菌株 淀粉 酶 最佳反 应条件 为 １１ ｍｌＬＮ Ｃ、Ｈ值 ７０和温 度 ７ Ｙ ． ｏ ５ ／ ａ１ｐ ． ０℃。 Ｎ Ｃ 浓度为 ２６ ｏ Ｌ ， ａ１ ． ｒ ｌ 时 酶活可 以保 持 最高酶 活的 ６ ％ ； ５ ｎ／ １ ８ ｏ℃时 ， 酶活可保持 最 高酶活的 ６ ％ ； ９ ｐ Ｈ值 １ ． ３ ０时， 活可保持 最 高酶活 的 酶 ７ ％。 ｆ ６ 结论 １１ 菌株 产 生的淀粉 酶是 一种能 耐受 高盐高碱 高温的极端 酶。 ｓＭ
Ｈａｏ ｏｔ ｌｎｄｒ ｍ￣ｇ ｎ ｓＢ ｓｄ ｏ ｅｐ ｙ ｉｌｇｃ ｎ ｉｃ ｅ ｃ ｌｉｅｔｆ ａｉｎ ａ ６ ＤＮＡ ｅ ｅｓｑ．ｎ ｅｈ ｍｏｏ ｏ ｓａ ａｙ ｉ．Ｔ ｅｏ ｄ￣ ｌｒａ ｔｏ ｏ — ｅ ｕ ａｅ ｎ ｔ ｈ ｓｏｏｉａ ａ ｄｂｏ ｈ ｍｉａ ｄ ｎｉｃ ｔ ｎｄ１ Ｓ ｒ ｈ ｌ ｉ ｏ ｇｎ ｅ １ ｃ ｏ ｌｇｕ ｌｓｓ ｈ ｐ ｍ ｅｃｉｎｃ ｎ １ ｅ ｎ ｄｔ ｎｆｒＳ ｌｏ ｏ ＹＭ ｔａ ｍｙａｅｗａ Ｃ ｔ１ １ ｌ ｐ ｖ ｌｅｏ ７ ａ ｄｔｍｐ ｒｔｒ ｆ ０ ℃ ．Ｕｎ ｅ Ｃ１ ｓ ｔ２．５ ｍｏ／ ｔｍｐ ｒｔｒ ｓ 踟 ℃ ， ｌ ｓｒｉ ａ ｌｓ ｓ Ｎａ １ａ ．５ ｍｏ／Ｌ， Ｈ ａｕ ｆ ｎ ｅ ｅ ｕｅｏ ７ ｎ ａ ｄ ｒＮａ ｗａ ａ ６ ｌＬ，ｅ ｅａｕ ｅｗａ
关 键词 嗜盐 茵； 定 ； 鉴 淀粉 酶 ； 酶活
中图分类 号
Ｑ３． ９９９
文献标 识码
Ａ
文 章编号
０１ — ６１２０ ） — ６７ — ４ ５７ ６１（０８１ ０１３ ０ ５
Ｔ ｍｐ ｒ ｔ ｅ Ｔ ｌｒ ｎ ｅ ｅ ｅ ａｕｒ ｏｅａ ｃ
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（． １南京师范大学生命科 学学院 ， 江苏南京 ２０４ ； ． １０６ ２盐城师范学 院生命科学与技术学院 ， 江苏 嗜盐茵 Ｓ Ｍ菌株 的形 态和 生理 生化特 点及 其所产胞 外淀粉酶 性质 。［ 法］ 江 苏省 盐城 市射 阳盐 场 筛选得到 研 Ｙ 方 从
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Ａ ． ｃ ２０，６１）６７ — １ Ｓ ． ８３【５ ：１ ６７ ｉ９ ３ ６
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１株产 耐 盐碱 高温 淀 粉酶 嗜 盐 茵 的筛 选 和鉴 定
韩丰 一 赵庆新 ， 生 ， 敏 ， ２ 袁 蔡信之２
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