PAS染色液糖原染色液实验原理方法 PH1144 Phygene

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糖原染色实验

糖原染色实验要求：
1. 掌握糖原染色的原理、操作、注意事项、结果判断及临床意义；
2. 熟悉正常细胞、病理细胞的染色情况及临床意义。
糖原染色(过碘酸---雪夫氏反应法) periodie acid-PAS
原理：
细胞内糖类 (1,2- 乙醇基 )→ 过碘酸 ( 氧化 ) →双醛基 + Schiff液→无色品红→紫红色化合物定位于胞浆。
试剂：
1. PAS固定液：含甲醇等 2. PASⅠ液：含过碘酸等 3. PAS Ⅱ液：含碱性品红、偏重亚硫酸钠 4. 苏木素复染液：
操作：
1. 涂片滴加固定液5~8滴，5分钟流水冲洗待干； 2. 滴加Ⅰ液染色10分钟，流水冲洗待干； 3. 放置入Ⅱ液内室温暗处放置30分钟，流水
冲洗数分钟； 4. 苏木素复染8~10分钟，流水冲洗待干，镜检。
结果判断：
阳性---细胞胞浆内出现红色沉淀物（颗粒、块状物或均匀红色）
阴性---胞浆内无红色沉淀物–) →早幼粒→中性分叶粒阳性渐强；嗜酸粒颗粒本身不着色，但颗粒间的胞浆呈红色；嗜碱粒(+)大小不一颗粒；
2.红系：( – )；淋巴系：多数(+)； 3. 单核系：原单( – )，幼单+成熟单(+)~(++)； 4.巨核系：红色颗粒或红色团块(+)；
注意事项
1. 标本和器材应避免带醛基和还原性的物质
污染，以免假阳性；
2. 滴加Ⅰ液后水洗应充分，涂片完全干燥后才能放置入Ⅱ液内。
作业
实验要求、原理、操作步骤、实验结果、注意事项、讨论
血小板细颗粒状或小团块状(+)。
临床意义：
1. 帮助鉴别巨红细胞贫血和红白血病：前者(–)，后者(+) 2. 帮助鉴别急性白血病：

三种糖原染色方法的灵敏度比较

三种糖原染色方法的灵敏度比较【关键词】糖原染色；过碘酸-席夫反应；高碘酸-雪夫反应；雪夫试剂；PAS 法糖原染色对鉴别诊断急性白血病、骨髓增生异常综合征等血液病具有重要价值[1]。

糖原染色法的雪夫试剂配制方法有多种，包括标准法[2]、亚硫酰氯法[3]及陈啸梅法(冷配法)[4]等典型方法。

遂对3种染色法的灵敏度进行比较，以避免选用不灵敏的方法。

1 材料与方法1．1 实验方法取同一患者的骨髓片3张，分别用标准法、亚硫酰氯法及陈啸梅法雪夫试剂进行糖原染色。

为了确定特别重要的雪夫试剂(Schiff液)质量，必须统一反应条件以进行准确比较，即3种染色法骨髓片均选用95%乙醇固定15 min、10 g/L(44 mmol/L)过碘酸22℃氧化60 min[5]、入雪夫试剂(席夫染液)中22℃水浴染色60 min[5]等最关键步骤。

1．2 患者选择及计算积分患者共20例。

其中，慢粒(CML)、原发性血小板增多症(ET)、缺铁性贫血(IDA)及特发性血小板减少性紫癜(ITP)共5例，急性淋巴细胞白血病L1型(L1)、L2型(L2)共8例，急性早幼粒细胞白血病完全缓解(M3CR)仅1例，巨幼细胞贫血(MA)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、溶血性贫血(溶贫)共6例，均以中性杆状核粒细胞、中性分叶核粒细胞判断阳性程度[1]及计算积分(阳性指数)[1]。

1．3 统计学分析对积分结果进行随机区组设计资料的Friedman秩和检验，以标准法为共同对照组进行多样本的两两比较。

用PEMS 3．1统计软件分析。

2 结果标准法(1组)、亚硫酰氯法(2组)及陈啸梅法(3组)积分均数及中位数依次降低(见表1)，随机区组设计资料的Friedman秩和检验示校正χ2=27．564 1，P=0．000 0，说明1～3组染色积分相比较差异具有极显著性；以1组为共同对照组进行多样本的两两比较(q’检验)，1组与2组q’值为1．976 4，P＜0．05，1组与3组q’值为5．138 7，P＜0．01。

糖原(PAS)染色

糖原(PAS)染色[原理]过碘酸能使细胞内乙二醇基氧化成二醛，醛基与雪夫氏溶液起反应，使无色品红结合成红色反应，沉着含糖原的细胞结构上，标本上所能显红色的糖类主要为多糖包括糖原、糖蛋白、粘多糖和糖脂等。

[试剂](1)由上海虹桥乐翔医用试剂技术有限公司提供。

(2)试剂组成:固定液4.5ml；过碘酸溶液20ml；雪夫氏溶液20mg。

(3)苏木素。

[操作](1)新鲜或陈旧血片、骨髓片于固定液内3-5分钟，水洗、晾干。

(2)滴加过碘酸于涂片上氧化10分钟，水洗、晾干。

(3)放入雪夫氏溶液中，置37度水浴箱5-10分钟。

(4)取出后流水冲洗10-20分钟，晾干、镜检。

(5)苏木素复染。

[结果观察]糖原在细胞浆内可染成红色，其判断标准随细胞不同而异。

有核红细胞判断：(-)：无红色阳性颗粒和浅红色物质。

(+)：胞浆中有少数分散红色阳性颗粒，或呈浅红色反应，比正常红细胞色深。

(++)：胞浆中有1或2个浓的红色颗粒环，或胞浆中有1一10个中等大的颗粒，或弥漫的红色物。

(+++)：胞浆中有11—20个红色中粗颗粒或染深红色。

(++++)：胞浆中红色颗粒明显增多且较粗，致密或呈紫红色物质。

淋巴细胞的判断:(-)：胞浆内无粉红色颗粒。

(+)：胞浆内有1一10个红色小颗粒或弥漫的浅红色物质。

(++)：10个以上红色颗粒。

编写：胡芙蓉制定日期：2009.01.01(+++)：胞浆中含有较多红色颗粒及小块紫红色物质。

(++++)：胞浆中含许多红色颗粒及小块紫红色物质。

[临床意义](1)用于营养性巨幼细胞贫血与红(白)血病的鉴别，前者的正常红细胞及有核红细胞常为阴性，而后者可呈强阳性反应。

(2)用于鉴别急性淋巴细胞性白血病与急性非淋巴细胞性白血病，前者的原淋巴细胞和幼稚淋巴细胞可见大块红色物质。

后者的原始阶段细胞常为阴性。

(3)高雪氏细胞呈强阳性，而尼曼匹克氏细胞呈微弱阳性。

[附注](1)雪夫氏液变红即不能再用，以免细胞出现假阳性。

糖原的显示(PAS)反应

0.5%过碘酸溶液；Schiff‘s试剂 3．材料：小鼠肝脏石蜡切片
切片经二甲苯和各级酒精复水后，入0.5%的过碘酸溶液中作用15分钟，取出后水洗。
注意：过碘酸的氧化是整个实验中最关键的步骤，过碘酸的作用时间与反应环境温度有关，当室温较高时，反应较快，过碘酸的作用时间应适当缩短，当室温较低时，反应较慢，过碘酸的作用时间应适当延长。
糖原的显示(PAS反应)
山东师范大学生命科学学院邢维贤
❖ 实验目
目的要求
• 通过PAS反应，了解糖原显示的基本原理、方法以及糖原在细胞中的分布。
实验用品
1．器材：石蜡切片机，盖玻片、载玻片、染色缸等． 2．试剂
切片充分洗净后入Schiff‘s试剂中进行显色。作用15分钟左右，将切片取出水洗，为洗去非特异性着色，将切处理品入三级新配制的亚硫酸中进行冲洗，取出后水洗，镜检。
对照片的设置
• 为了确保实验结果的可信性，在实验中需设置阴性对照片。
• 对照片在复水后，用唾液淀粉酶37℃水解 30—60分钟，取出后水洗，再入过碘酸处理。
实验结果
实验报告
• 绘图表示糖元在细胞中的分布情况； • 在实验过程中，过碘酸处理能起到什么作
用，它和Feulgen反应中HCl的作用有何异同？

糖原D-PAS染色液(淀粉酶消化法)

糖原D-PAS 染色液(淀粉酶消化法)简介：糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus 在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该染色试剂盒不仅能够显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。

糖原D-PAS 染色液的特点在于糖原PAS 染色之前经淀粉酶处理，糖原消化时需要两张相同的切片，脱蜡后一张切片用含有淀粉酶的适当缓冲液处理，另一张仅用缓冲液处理。

然后两张切片均用PAS 法染色，消化后染色消失表明存在糖原。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、两张相同切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇入水。

2、一张切片入37℃淀粉酶溶液处理1h 。

3、流水冲洗两张切片各5～10min 。

4、入过碘酸溶液，室温放置。

5、自来水冲洗1次，再用蒸馏水浸洗2次。

6、入Schiff Reagent ，置于室温阴暗处浸染。

7、自来水冲洗10min 。

8、入Mayer 苏木素染色液染细胞核。

9、(可选)酸性乙醇分化液分化。

10、自来水冲洗，更换蒸馏水清洗使其返蓝。

11、二甲苯透明，中性树胶封固。

编号名称DG0009 5×50ml DG0009 5×100ml Storage试剂(A): 淀粉酶溶液 50ml 100ml 4℃ 试剂(B): 过碘酸溶液 50ml 100ml 4℃ 避光试剂(C): Schiff Reagent 50ml 100ml 4℃ 避光试剂(D): Mayer 苏木素染色液 50ml 100ml 4℃ 避光试剂(E): 酸性乙醇分化液 50ml100ml RT使用说明书1份染色结果：糖原、中性，唾液黏蛋白红紫色各种糖蛋白红紫色未处理的切片，糖原呈亮红色或红紫色；淀粉酶处理的切片，糖原阴性。

注意事项：1、切片脱蜡应尽量干净，否则影响染色效果。

需使用一张阳性对照片验证酶的活性。

2、过碘酸氧化时间不宜过久，氧化时温度以18～22℃最佳。

过碘酸-雪夫(PAS)染色

过碘酸-雪夫（PAS）染色实验原理胞浆内存在糖原或多糖类物质（如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）经过碘酸（periodicacid）氧化，转变为二醛基（CHO-CHO），与雪夫(Schiff)试剂中的无色品红结合，形成紫红色染料而沉积于细胞内多糖所在处。

该反应称为过碘酸-雪夫(PAS)阳性反应，以前也称为糖原染色。

实验方法材料：1.高碘酸氧化液：HIO4·2H2O1g,蒸馏水加至100ml。

此液溶解后保存于冰箱中待用。

2.Schiff试剂：将1g碱性品红溶于200ml煮沸的蒸馏水中。

摇荡5分钟，冷却至600C左右，过滤，并向滤液中入1mol/LHCl20ml，混匀。

冷至 250C时，加2g偏重亚硫酸钠（或钾）（Na2S2O5）。

将此液置带塞的棕色玻璃瓶中，放暗处24小时。

加1g活性碳，摇动1分钟，滤纸过滤。

保存于冰箱中。

3.亚硫酸液100g/L偏重亚硫酸钠6ml1mol/L盐酸5ml蒸馏水100ml每次用前新鲜配置。

4.20g/L甲绿甲绿2g蒸馏水加至100ml5.淀粉酶嚼石蜡刺激分泌唾液离心取上清液，内含淀粉酶，将麦芽糖淀粉酶0.1~1.0g溶于0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.0）100ml中。

方法：1.固定新鲜干燥的涂片用品5%乙醇固定10min，蒸馏水冲洗，待干；2.如涂片需要消化，可加唾液或麦芽糖淀酶，置室温消化60min，然后用蒸馏水冲洗；3.10g/L高碘酸氧化15～20min,蒸馏水冲洗，待干；4.置雪夫染液中室温染色30～60min；5.用亚硫酸溶液冲洗3次后，再用自来水冲洗2～3min，待干；6.20g/L甲绿复染10～20min；7.水洗，待干，镜检。

实验结果计算（1）中性粒细胞糖原含量参考标准：（-）胞质无颗粒（+）胞质呈淡红色，无颗粒（++）胞质呈红色，有少量颗粒（+++）胞质呈暗红色，颗粒较密（++++）胞质呈紫红色，颗粒极密（2）淋巴细胞系：大多数淋巴细胞呈阴性反应，少数为（+）的阳性反应。

PAS染色法

PAS染色法—概况、原理PAS染色法概况PAS染色法（P eriodic A cid-S chiff stain）在组织学上,主要用来检测组织中的糖类。

过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。

PAS染色法原理PAS染色又称过碘酸雪夫染色，糖原染色。

一般用来显示糖元和其它多糖物质。

原理：过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛,再与Schiff氏液的无色品红结合，红色，定位于胞浆上。

PAS染色法—应用、制作PAS染色法—应用随着医学实验技术的发展，近年来,糖原染色应用的范围更加广泛,如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质，心肌病变及其他心血管疾病的诊断,糖原累积病诊断和研究，糖尿病的诊断和研究,用于某些肿瘤的诊断等。

除用于糖原的鉴定和黏液的显示外，还可以观察肾小球基底膜、结肠杯状细胞中性黏液物质、阿米巴滋养体和霉菌的着色。

临床诊断、分类和治疗提供了重要的依据.PAS染色法-制作1. 固定液:用Carnoy液或75%酒精Carnoy固定液：纯酒精60 ml冰醋酸10ml氯仿30ml2. 染色液1）过碘酸酒清夜配法: 过碘酸(HIO .2H O）0.4g95％酒精35ml M/5醋酸钠(2。

72g+蒸馏水100ml）5ml蒸馏水10ml。

保存于冰箱内，用棕色瓶,可用两周.2）Schiff氏液：0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中，时时摇动三角瓶5分钟，使之充分溶解。

冷却至50℃后过滤，加入10毫升1N盐酸。

冷却至25℃,加入0.5—1克偏重硫酸钠，在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存。

3）Schiff氏酒精液配置Schiff氏液11.5ml1N HCI 0。

5ml纯酒精23ml4) 亚硫酸水1％偏重亚硫酸钠10ml1N HCI 10ml蒸馏水180ml的树胶溶解。

PAS染色法-实验效果准备1、10g/L过碘酸液2、Schiff染液：碱性品红0.5g ，DH2O 100ml煮沸后，待片刻，加入碱性品红，振荡数分钟使品红溶解,冷至50℃加入1M的盐酸20ml，混匀。

糖原PAS染色液使用说明

糖原PAS染色液使用说明1.储存条件：-保持在室温下阴凉、干燥的地方；-避免阳光直射。

2.试剂配制：-糖原PAS染色液由两部分组成：糖原PAS染色液A和糖原PAS染色液B。

两者混合后即可使用。

-将糖原PAS染色液A和糖原PAS染色液B以1:1的比例混合。

3.样本制备：-取细胞样本，例如组织切片或细胞悬液；-依据实验需求，将样本制备成厚度为3-5μm的组织切片；-如果使用细胞悬液，则需要将细胞悬液离心，将沉淀后的细胞制备成细胞块。

4.染色步骤：-取一个玻片，将制备好的组织切片或细胞块平铺在玻片上；-用去离子水或磷酸缓冲液轻轻洗涤玻片上的样本，去除杂质；-用组织纸轻轻吸去多余的水分；-用移液管将糖原PAS染色液滴在样本上，确保样本完全覆盖；-在室温下将标本浸泡于糖原PAS染色液中15-30分钟。

时间过长可能导致染色过度；-将玻片用去离子水轻轻冲洗几次，以去除未结合的染色剂；-用组织纸轻轻吸去多余的水分。

5.染色结果观察：-将制备好的玻片在显微镜下观察；-糖原呈现红色至紫色的细小颗粒，分布在细胞质中；-根据颗粒的密度和分布情况，可以初步评估细胞内糖原的积累程度。

6.染色控制：-在染色过程中，正常细胞应该在细胞质中有较少的糖原颗粒；-通过对正常对照样本进行染色，可以确定阴性对照的糖原表达水平；-阴性对照样本应不显示糖原颗粒或仅有极少量的糖原颗粒。

7.离子蓝后染色：-如果需要对细胞核进行染色，可以在糖原染色后使用离子蓝（如伊红或核快蓝）进行核染色；-样本浸泡在离子蓝染色液中5-10分钟；-将玻片用去离子水轻轻冲洗几次，然后用组织纸吸去多余的水分；-在显微镜下观察并拍摄所需的染色结果。

糖原的显示PAS反应

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切片充分洗净后入Schiff‘s试剂中进行显色。作用15分钟左右，将切片取出水洗，为洗去非特异性着色，将切处理品入三级新配制的亚硫酸中进行冲洗，取出后水洗，镜检。
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对照片的设置
• 为了确保实验结果的可信性，在实验中需设置阴性对照片。 • 对照片在复水后，用唾液淀粉酶37℃水解30—60分钟，取出后水洗，再入过碘酸处理。
0.5%过碘酸溶液；Schiff‘s试剂 3．材料：小鼠肝脏石蜡切片
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切片经二甲苯和各级酒精复水后，入0.5%的过碘酸溶液中作用15分钟，取出后水洗。
注意：过碘酸的氧化是整个实验中最关键的步骤，过碘酸的作用时间与反应环境温度有关，当室温较高时，反应较快，过碘酸的作用时间应适当缩短，当室温较低时，反应较慢，过碘酸的作用时间应适当延长。
包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白和糖脂等。因此要
确定此红色物质是否糖原还需要同时进行对照实验。糖
原可被唾液淀粉酶水解，先用唾液淀粉酶作用再进行
PAS显色，若反应为阴性，则表明是糖原，反之则为其
他多糖。
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第3页/共10页Βιβλιοθήκη 实验用品1．器材：石蜡切片机，盖玻片、载玻片、染色缸等． 2．试剂
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实验结果
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实验报告
• 绘图表示糖元在细胞中的分布情况； • 在实验过程中，过碘酸处理能起到什么作用，它和Feulgen反应中HCl的作用有何异同？
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基本原理
• 糖原由D-葡萄糖的分支或直链组成，在肝和肌肉最丰富。过碘酸是一种强氧化剂，能将葡萄糖中乙二醇基（CHOH-CHOH）氧化成二个游离醛基（—CHO），游离醛基与Schiff ‘s试剂反应生成紫红色产物，颜色深浅与多糖含量成正比。

pas染色原理

pas染色原理首先，我们需要了解一下pas染色的原理。

pas染色是指用Schiff试剂染色，然后用碘酸钾或者高碘酸盐脱色，再用碱性铅溶液或铅醋酸溶液显色的一种特殊染色方法。

它能够将细胞内的多糖类物质染成玫红色或者紫红色，而其他组织结构则呈现不同的颜色，从而可以清晰地观察到细胞内的多糖类物质分布和形态。

接下来，我们来详细介绍一下pas染色的步骤。

首先，将待染切片在60℃烘箱中干燥20分钟，然后在玻片上滴加Schiff试剂，静置15-30分钟。

接着，用蒸馏水洗净，然后在碘酸钾或者高碘酸盐中脱色。

最后，用蒸馏水洗净后，在碱性铅溶液或铅醋酸溶液中显色，最后用蒸馏水洗净，然后进行脱水、透明和封片，即可观察。

在染色过程中，需要注意一些问题。

首先是Schiff试剂的制备，如果试剂过老或者保存不当，会导致染色效果不佳。

其次是脱色的时间控制，脱色时间过长会导致染色物质流失，而脱色时间过短则会影响观察效果。

最后是显色的时间，显色时间过长会导致背景染色，影响观察结果。

pas染色主要用于观察肝脏、胰腺、肾小管、胃黏膜等组织中的糖原和粘多糖，能够清晰地显示它们的形态和分布。

在肿瘤病理学中，pas染色也常用于观察肿瘤细胞内的糖原和粘多糖，有助于对肿瘤类型和分化程度的判断。

总的来说，pas染色是一种非常重要的染色方法，它可以帮助科研人员观察细胞内多糖类物质的分布和形态，对于生物学和医学领域的研究具有重要意义。

在进行pas染色时，需要严格控制每个步骤的时间和操作，以确保染色效果的准确性和可靠性。

希望本文能够对大家对pas染色原理有所了解，谢谢阅读。

abpas染色实验原理

abpas染色实验原理
AB-PAS染色实验是一种通过染色来检测糖原在细胞和组织中分布和含量的方法。

该实验常用于病理学领域，特别是在肝脏病理学中，用于检测肝细胞内的糖原沉积和分布，从而评估肝脏疾病的类型和严重程度。

实验原理：AB-PAS染色实验是一种组合染色方法，由Alcian Blue和Periodic Acid-Schiff（PAS）染色组成。

Alcian Blue是一种酸性染色剂，主要用于染色酸性多糖，如硫酸肝素和酸性黏多糖。

而PAS染色则是一种选择性染色方法，用于检测组织中存在的糖原。

在AB-PAS染色实验中，细胞或组织切片首先被Alcian Blue染色剂染成蓝色，随后用Periodic Acid-Schiff溶液进行氧化，将细胞或组织中的糖原氧化为醛基。

最后，用Fuchsin染色剂染色，使氧化后的糖原变成颜色暗红色至紫色。

根据Alcian Blue和PAS染色剂的特殊性质，AB-PAS染色实验可以用于检测不同类型的糖原。

例如，肝细胞内的糖原可用AB-PAS染色进行鉴定，来帮助诊断肝脏病变。

总之，AB-PAS染色实验是一种常见的组织染色方法，可用于检测糖原在细胞和组织中的分布和含量，对于病理学研究和诊断具有重要意义。

PAS (Periodic Acid-Schiff stain)、糖原染色流程

PAS染色（Periodic Acid-Schiff stain）操作规程实验目的：PAS染色（P eriodic A cid-S chiff stain）又称过碘酸雪夫染色，糖原染色。

一般用来显示糖元和其它多糖物质。

糖原的鉴定和黏液的显示外，还可以观察肾小球基底膜、结肠杯状细胞中性黏液物质、阿米巴滋养体和霉菌的着色实验原理：过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液的无色品红结合，红色，定位于胞浆上。

试剂仪器：1） AAF固定液又称酒精醋酸福尔马林混合固定液，其配方：无水乙醇80 mL，冰醋酸5 mL、甲醛10 mL。

2） Carnoy固定液氯仿300 mL，冰醋酸100mL，95％酒精600 mL2. 染色液1) 过碘酸酒清夜配法: ：过碘酸0．8 g，95％乙醇70 mL，醋酸钠0．27 g，水20 mL。

待溶解后置于4~C冰箱避光保存。

保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周.2)1N盐酸：量取10mL商品化盐酸加水稀释至120mL3）Schiff氏液冷配法: 0.5克碱性品红加1N盐酸15ml摇动使溶解（不加热），再加入0.6%偏重亚硫酸钠（钾）85ml，紧盖瓶塞，,在室温中避光处静置12-24小时（本人用12小时），溶液呈草黄色，未加活性炭。

然后密封冰箱保存. 置于棕色瓶内保存在冰箱备用，如变为红色，则不能使用。

检测方法：滴加一滴草黄色Schiff 氏液到水中，可以马上呈现紫红色或红色。

4) 0.5%偏重亚硫酸钠1N盐酸7．5 mL加10％偏重亚硫酸钠(钾)7．5 mL，再加130 mL蒸馏水混合而成。

实验操作程序：新鲜组织编号取材后，投入从AFF液、Camoy固定液或者放人冰箱内低温固定。

入无水酒精中脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋。

常规切片厚5 tsrn，脱蜡至水。

1、入0．5％一1％高碘酸氧化5—10min，环境温度以不高于20~C为宜，室温高时氧化时间适当缩短。

2、流水冲洗5 rain，再用蒸馏水浸洗2次；3、Schif氏液(Schif氏液从冰箱取出升至室温使用)避光染色l0—30 min；4、0．5％偏重亚硫酸钠(钾)浸洗2次，每次1—2 min，以达到分化的目的；5、流水冲洗5—10 min，蒸馏水洗；6、Harris苏木精染2—5min，自来水洗；7、l％盐酸酒精分化，再用自来水充分冲洗；8、温水(或者1％氨水)返蓝，核染色稍浅为好；9、流水冲洗，常规脱水、二甲苯透明，中性树胶封固。

糖原(PAS)染色

糖原(PAS)染色[原理]含有乙二醇基的多糖类，被过碘酸氧化产生醛基，此醛基与雪夫氏试剂(Schiff’s液)作用，使无色的品红变成紫红色染料，而沉积于含有多糖类的细胞内。

[试剂]1．雪夫氏试剂：400m1蒸馏水煮沸除去C02，逐渐加碱性品红2．08溶解后，待冷却至60℃，加1mm01儿HCl40ml，再加偏重亚硫酸钠(NaHSO：)4g，次日加活性碳1．5g，放置半天后过滤。

配好后液体为无色透明，保存于4℃冰箱中。

2．过碘酸作用液：过碘酸1g溶于蒸馏水100ml中，或取过碘酸钾(1tI04)0。

698加蒸馏水100ml，微加热使溶解，再加浓硝酸0．3m1，置冰箱中保存。

3．固定液：95％乙醇90ml与甲醛10m1混匀。

4．20g/l甲基绿：甲基绿2g溶于100m1蒸馏水。

[操作](1)新鲜或陈旧血片、骨髓片于固定液内10分钟。

(2)水洗数次后，对照片先用唾液消化30分钟，也可在同一片，在其中间用蜡笔划界，一半做对照，另一半做测定。

(3)水洗后，滴加过碘酸数滴于涂片上，作用10分钟后，再水洗数次。

(4)浸入Schiff's液30分钟。

(5)自来水冲洗约2分钟，然后用208儿甲基绿复染20分钟，再水洗晾干。

[结果观察]糖原在细胞浆内可染成红色，其判断标准随细胞不同而异。

有核红细胞判断：(-)：无红色阳性颗粒和浅红色物质。

(+)：胞浆中有少数分散红色阳性颗粒，或呈浅红色反应，比正常红细胞色深。

(++)：胞浆中有1或2个浓的红色颗粒环，或胞浆中有1一10个中等大的颗粒，或弥漫的红色物。

(+++)：脑浆中有11—20个红色中粗颗粒或染深红色。

(++++)：胞浆中红色颗粒明显增多且较粗，致密或呈紫红色物质。

编写：谢平制定日期：2011.12.1淋巴细胞的判断:(-)：胞浆内无粉红色颗粒。

(+)：胞浆内有1一10个红色小颗粒或弥漫的浅红色物质。

(++)：10个以上红色颗粒。

(+++)：脑浆中含有较多红色颗粒及小块紫红色物质。

糖原PAS染色液

糖原PAS 染色液简介：糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus 在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该染色试剂盒不仅能够显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。

过碘酸(又称高碘酸)是一种强氧化剂，它能氧化糖类及有关物质中的1，2-乙二醇基，使之变为二醛，醛与Schiff 试剂能结合成一种品红化合物，产生紫红色。

由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质，使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间，使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化，这是很关键的步骤。

糖原PAS 染色液特点是采用特有配方技术，大大增强了染色效果；性能稳定，特异性强；操作简捷，仅需1h 左右。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、常规固定，常采用10%的福尔马林，常规脱水包埋。

2、石蜡切片脱蜡入蒸馏水；冰冻切片直接入蒸馏水。

3、自来水冲洗2～3min ，再用蒸馏水浸洗2次。

4、入过碘酸溶液，室温放置，一般不宜超过10min 。

5、自来水冲洗1次，再用蒸馏水浸洗2次。

6、入Schiff Reagent ，置于室温阴暗处浸染。

7、自来水冲洗。

8、入Leagene 苏木素染色液染细胞核。

9、酸性乙醇分化液分化。

10、自来水冲洗，更换蒸馏水清洗，使其返蓝。

11、逐级常规乙醇脱水。

二甲苯透明，中性树胶封固。

编号名称DG0005 4×50ml DG0005 4×100ml Storage试剂(A): 过碘酸溶液 50ml 100ml 4℃ 避光试剂(B): Schiff Reagent 50ml 100ml 4℃ 避光试剂(C): Leagene 苏木素染色液 50ml 100ml RT 避光试剂(D): 酸性乙醇分化液 50ml100ml RT使用说明书1份染色结果：PAS反应阳性物质(糖原或多糖)红色或紫红色细胞核蓝色细胞质深浅不一的红色备注：颜色深浅很大程度上取决于样品在过碘酸溶液和Schiff Reagent中作用时间的长短。

pas染色方法

pas染色方法
PAS（Periodic Acid-Schiff）染色方法是一种常用的组织学染色技术，主要用于检测和鉴定细胞和组织中存在的多糖、甘油脂和其他酸性物质。

以下是PAS染色的步骤：
1. 取得需要染色的组织切片或细胞制备物。

2. 将切片或细胞制备物进行固定，通常使用10%的中性缓冲福尔马林溶液进行固定处理。

3. 将固定的样品在水流中洗涤数次，以去除福尔马林残留。

4. 将样品放入0.5%的周期酸（Periodic Acid）溶液中，孵育5-10分钟，以氧化多糖。

5. 洗涤样品，使用去离子水洗涤至无色。

6. 将样品放入Schiff试剂中，孵育15-30分钟。

Schiff试剂是含有硫代硫酸钠和碱性红染料的溶液，它会与被氧化的多糖发生化学反应，形成紫红色沉淀物。

7. 再次洗涤样品，以去除未结合的Schiff试剂。

8. 可以选择进行对比染色，将样品放入含有碘酒（Lugol's iodine）的溶液中浸泡数分钟，然后洗涤。

9. 最后，将样品进行脱水、透明化和封片处理，最终在显微镜下观察和分析。

PAS染色方法常用于检测糖原、粘多糖、黏液等在组织中的存在情况，特别适用于肿瘤组织和炎症组织的研究。

1。

细胞pas糖原染色

细胞pas糖原染色一、什么是细胞pas糖原染色？细胞PAS糖原染色是一种常见的组织学染色方法，用于检测组织中存在的糖原和其他多糖类物质。

PAS是Periodic Acid-Schiff（周期酸-席夫）的缩写，这种染色方法可以将组织中的多糖类物质转化为紫红色的颗粒，并使它们在显微镜下清晰可见。

二、为什么要进行细胞PAS糖原染色？进行细胞PAS糖原染色有以下几个目的：1. 检测组织中是否存在糖原和其他多糖类物质，帮助诊断相关病理情况。

2. 评估肝脏和肌肉等组织中的储存能力和代谢状态。

3. 研究动植物及微生物等生物体内多糖类物质的分布、形态和含量等特征。

三、如何进行细胞PAS糖原染色？1. 材料准备：需要使用周期酸、硫酸水解液、PAS试剂、脱水酒精等试剂。

还需要切片机、显微镜等设备。

2. 制备组织切片：将需要染色的组织样本用切片机制备成薄片，厚度一般在3-5μm。

3. 固定和脱水：将组织切片放入4%的中性缓冲福尔马林液中固定，然后用不同浓度的乙醇进行脱水处理，使组织切片逐渐失去水分。

4. 去蜡和重现：将组织切片放入除蜡剂中去除石蜡，并用清水洗净。

然后将其放入硫酸水解液中加热处理，使多糖类物质被氧化成醛基物质。

5. 染色：将经过硫酸水解液处理的组织切片放入PAS试剂中染色，使多糖类物质被还原成紫红色颗粒。

染色时间一般为10-15分钟。

6. 脱色和反染：将经过PAS染色的组织切片放入稀盐酸或其他脱色剂中进行脱色处理，然后用清水洗净。

最后再用苏木素-伊红反染剂进行反染，使细胞核和其他细胞结构清晰可见。

7. 封片和观察：将处理好的组织切片放入透明胶中封好，然后在显微镜下观察和拍照。

四、细胞PAS糖原染色的应用领域1. 临床诊断：可以用于检测肝脏、肌肉、神经系统等组织中的糖原含量，帮助诊断相关病理情况。

2. 生物学研究：可以用于检测动植物及微生物等生物体内多糖类物质的分布、形态和含量等特征，从而深入了解生物代谢过程。

PAS染色显示细胞中多糖成分

12.脱水 13.透明 14. 封片

目的：去除水分，透明组织，便于观察和长期保存标本。方法：脱水：95%酒精 2分钟→100%酒精 2分钟透明：二甲苯I 2分钟→二甲苯II 2分钟封片：将载玻片从二甲苯中取出放在吸水纸，迅速地在切片的中间滴一滴中性树胶，拿起盖玻片，缓慢倾斜放下，避免产生气泡。
标记物为荧光素、过氧化物酶或金颗粒
糖原的显色——PAS反应
材料：

标本：成年小鼠肝和脾石蜡切片
试剂： 1% 过碘酸，蒸馏水，亚硫酸品红溶液（ Schiff 试剂）， 0.5% 偏重亚硫酸钠，苏木精，二甲苯，梯度酒精，中性树胶。器材：染色缸，烧杯，切片架，盖玻片等。

方法：
3.过碘酸氧化10分钟 4.蒸馏水洗3分钟 5.Schiff试剂避光染色10分钟 6. 0.5%偏重亚硫酸钠溶液浸洗3次（I、II、III），每次2分钟 7.自来水洗3次，每次1分钟，蒸馏水洗1分钟 8.苏木精染色1分30秒 9.自来水洗3次，每次1分钟，蒸馏水洗1分钟 10.梯度脱水：95%酒精 2分钟→100%酒精 2分钟，透明：二甲苯I 2分钟→二甲苯II 2分钟 11.中性树胶封片，显微镜下观察（低倍镜→高倍镜）
糖原的显色——PAS反应
（periodic acid schiff reaction）
任子健
一、制片技术

生物体的组织细胞大部分都是不透明的，不能直接在显微镜下观察，需要切成薄片，必须采用各种特殊的方法对材料进行处理，把材料制成薄片标本，经过染色后，置于显微镜下观察它们的微细结构。
石蜡切片
紫红色沉淀（PAS阳性反应）
糖原的显色——PAS反应

应用：可根据紫红色的位置及深浅鉴定糖成分的分布及相对含量，用于心血管疾病、糖尿病以及某些肿瘤的诊断和研究。

pas反应是检测组织内的

pas反应是检测组织内的PAR（periodic acid-Schiff）反应，又称PAS（periodic acid-Schiff）反应，是一种常用于组织学和病理学中的染色方法。

该方法通过使用碘酸和硫酸的化学反应，能够将含有多糖或糖蛋白的组织或细胞染为紫红色，从而实现对其形态和化学成分的研究。

本文将详细介绍PAS 反应的原理、操作步骤以及其在组织学和病理学中的应用。

一、PAS反应的原理PAS反应的原理基于碘酸和硫酸之间的化学反应。

在该反应中，碘酸（HIO4）能氧化多糖分子中的羟基，使其转化为醛基。

接着，硫酸（H2SO4）与醛基反应生成醛酸，然后醛酸与甘氨酸缩合，形成一种稳定的紫红色产物。

这一系列的反应使得组织或细胞中的多糖或糖蛋白能够被染色，并能够在显微镜下观察到。

二、PAS反应的操作步骤1. 组织样本制备：将待检测的组织获取并固定在10%中性缓冲福尔马林中。

随后，将组织样本进行脱水和包埋处理，以获取切片样本。

2. 切片：使用切片机将包埋的组织样本切成薄片，并将薄片置于玻璃载玻片上。

3. 烘干：将载有组织切片的玻璃载玻片放置在60-70°C的烘箱中，烘干3-4小时。

4. 去蜡：将烘干后的切片玻璃载玻片放入戊醇中，连续处理2小时，并将玻璃载玻片洗净。

5. PAS染色液的制备：按比例将碘酸和硫酸混合，在制备过程中应避免产生气泡。

6. PAS染色：将去蜡的切片用PAS染色液浸泡，温度控制在20-25°C，时间控制在10-30分钟。

7. 脱色：将染有PAS染色液的切片进行脱色处理，可以选择三氯化铁0.5%-2%溶液进行脱色处理，时间为数秒至数分钟。

8. 除色：将脱色后的切片用明胶脱色，时间为5-10分钟。

9. 水洗：将明胶脱色后的切片进行水洗，可用自来水冲洗10分钟以上。

10. 固定和封片：将水洗后的切片用半胱氨酸固定液固定，然后涂上封片剂，覆盖载玻片，用甲苯浸泡5-10分钟。

三、PAS反应的应用PAS反应在组织学和病理学中具有广泛的应用。

糖原PAS染色

糖原PAS染色一、原理：糖原染色是利用过碘酸—雪夫（schiff）反应显示糖原。

雪夫氏试剂是利用碱性复（品）红配制的，复（品）红为含有醛基的染料，加入亚硫酸氯钠可将醛基结构破坏，则失去颜色，或为无色溶液，这种试剂是一种有效的醛试剂，用来测定醛基物质。

糖原经过高碘酸氧化可产生双醛基，再以雪夫氏试剂进行醛反应，产生紫红色。

这种方法可显示糖原的存在，称作：高碘酸雪夫式氏反应。

二、结果判断正常血细胞的染色反应1、粒细胞系统原始粒细胞为阴性反应，自早幼粒细胞至中性分叶核粒细胞均呈阳性反应，并随细胞的成熟，阳性反应的程度逐渐增强，嗜酸性粒细胞的颗粒本身不着色，而颗粒之间的胞浆呈红色，嗜碱性粒细胞为阳性反应，阳性反应物质为大小不一的紫红色颗粒。

2、红细胞系统正常幼红细胞和红细胞均呈阴性反应。

3、单核细胞系统原始单核细胞为阴性反应，幼单核细胞为（+）阳性反应，单核细胞为（+）~（++）阳性反应，有时在胞质的边缘处阳性反应颗粒较粗大。

4、淋巴细胞大多数淋巴细胞为阴性反应，少数淋巴细胞可呈（+）阳性反应。

5、巨核细胞和血小板巨核细胞为阳性反应，阳性反应物质为红色颗粒状，有时为红色块状。

血小板为阳性反应，阳性反应物质为细颗粒状，有时为红色小块状。

6、其他细胞浆细胞一般为阴性反应，少数可呈阳性反应，阳性反应物质为细颗粒状。

巨噬细胞可呈阳性反应，阳性反应物质为红色细颗粒状。

判定结果时需要根据可疑疾病来判断。

例如：怀疑患者为红白血病，则计数100个幼红细胞，计算阳性率。

怀疑患者为巨核细胞白血病，则计数100个巨核细胞，计算阳性率。

MDS（可阳性）、巨幼贫（阴性）、缺铁贫（可阳性）、溶贫（阴性）均计数幼红细胞。

急淋、慢淋、淋巴肉瘤、何杰金氏病计数淋巴细胞。

三、临床意义：1．鉴别淋巴系统增生的性质。

凡恶性增生时PAS多呈强阳性，阳性反应见于急性．慢性淋巴细胞白血病．淋巴瘤等。

急性淋巴细胞性白血病的原幼细胞常为大块状阳性，也有阴性者。