最新+实验细菌革兰氏染色法1汇总
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1、涂片后为什么要固定?固定时应注意什么/ 2、革兰氏染色过程中,哪些操作是成败关键?为什么?
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2010+实验细菌革兰氏染色法1
当用结晶紫初染后,所有细菌都被染成初染剂的兰紫色, 碘作为媒染剂,它能与结晶紫结合成结晶紫-碘复合物,从而 增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时,两类细菌 的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要有舦聚 糖形成的网状结构组成,壁厚,类脂含量低,用酒精脱色时 细胞壁脱水,使舦聚糖层的网状结构孔径缩小,透性降低, 从而使结晶紫碘复合物不易被洗脱而保留在细胞内,经脱色 和复染后仍保留初染剂的兰紫色。革兰氏阴性细菌则不同, 由于其细胞壁舦聚糖层较薄,类脂含量较高,,所以当脱色 处理时,类脂质被酒精溶解,细胞壁透性增大,使结晶紫-碘 复合物比较容易被洗脱出来,用复染剂复染后,细胞被染上 复染剂的红色。
图6 无菌操作过程
1、结晶紫染1min 2、水洗 3、碘液媒染1min 4、水洗 5、乙醇脱色30秒 6、水洗 7、番红复染2min 8、水洗 9、吸水纸吸干
图7 革兰氏染色程序
实验结果:
1、绘出大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的革兰氏染色视野图,并指 出哪种是革兰氏阳性菌,哪种是革兰氏阴性菌。
思考题:
三、实验器材: 1、菌种:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 2、染色剂:革兰氏染液 3、接种环、载玻片、酒精灯、洗瓶、显微镜、 双层瓶、擦镜纸等
四、实验方法
1、制片 涂片——干燥——固定
2、初染 滴加结晶紫染色1——2分钟,水洗; 3、媒染 用碘液冲去残水,并用碘液覆盖1分钟; 4、脱色 滴加95%酒精脱色,25-30秒,立即水洗; 5、复染 用番红液复染约2分钟,水洗; 6、镜检 干燥后,用油镜观察。
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当用结晶紫初染后,所有细菌都被染成初染剂的兰紫色, 碘作为媒染剂,它能与结晶紫结合成结晶紫-碘复合物,从而 增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时,两类细菌 的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要有舦聚 糖形成的网状结构组成,壁厚,类脂含量低,用酒精脱色时 细胞壁脱水,使舦聚糖层的网状结构孔径缩小,透性降低, 从而使结晶紫碘复合物不易被洗脱而保留在细胞内,经脱色 和复染后仍保留初染剂的兰紫色。革兰氏阴性细菌则不同, 由于其细胞壁舦聚糖层较薄,类脂含量较高,,所以当脱色 处理时,类脂质被酒精溶解,细胞壁透性增大,使结晶紫-碘 复合物比较容易被洗脱出来,用复染剂复染后,细胞被染上 复染剂的红色。
图6 无菌操作过程
1、结晶紫染1min 2、水洗 3、碘液媒染1min 4、水洗 5、乙醇脱色30秒 6、水洗 7、番红复染2min 8、水洗 9、吸水纸吸干
图7 革兰氏染色程序
实验结果:
1、绘出大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的革兰氏染色视野图,并指 出哪种是革兰氏阳性菌,哪种是革兰氏阴性菌。
思考题:
三、实验器材: 1、菌种:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 2、染色剂:革兰氏染液 3、接种环、载玻片、酒精灯、洗瓶、显微镜、 双层瓶、擦镜纸等
四、实验方法
1、制片 涂片——干燥——固定
2、初染 滴加结晶紫染色1——2分钟,水洗; 3、媒染 用碘液冲去残水,并用碘液覆盖1分钟; 4、脱色 滴加95%酒精脱色,25-30秒,立即水洗; 5、复染 用番红液复染约2分钟,水洗; 6、镜检 干燥后,用油镜观察。