022 薄层色谱法
薄层色谱法实践技巧大总结
薄层色谱法实践技巧大总结薄层色谱法（TLC）是一种快速、简便、灵敏的分离和分析方法，在化学、药学、生物学等领域得到了广泛的应用。
然而，要想获得准确、可靠的实验结果，掌握一些实践技巧是非常必要的。
接下来，就为大家详细总结一下薄层色谱法的实践技巧。
一、实验准备1、选择合适的吸附剂常用的吸附剂有硅胶、氧化铝等。
硅胶适用于大多数有机化合物的分离，氧化铝则对某些极性较大的化合物有较好的分离效果。
在选择吸附剂时，要根据样品的性质和分离目的来确定。
2、制备薄板可以购买商品化的预制薄板，也可以自己制备。
自制薄板时，将吸附剂与适量的黏合剂（如羧甲基纤维素钠水溶液）混合均匀，调成糊状，均匀地涂布在玻璃板上，然后在室温下晾干，活化备用。
3、选择展开剂展开剂的选择是影响分离效果的关键因素之一。
一般根据“相似相溶”的原则，先尝试单一溶剂，如石油醚、乙酸乙酯、甲醇等，如果分离效果不理想，再考虑混合溶剂。
可以通过查阅相关文献或进行预实验来确定合适的展开剂。
4、样品的制备样品要尽可能纯净，溶解在适当的溶剂中，浓度不宜过高，以免出现斑点拖尾现象。
二、点样技巧1、点样量点样量要适中，过多会导致斑点扩散、重叠，过少则可能检测不到。
通常，点样量在 1-10μL 之间。
2、点样方式可以使用微量注射器、毛细管或点样器进行点样。
点样时，要保持点样点的直径小于 5mm，且尽量集中，以保证分离效果。
3、点样位置点样位置距离薄板底边 15-2cm 为宜，点与点之间的距离要适中，一般不少于 1cm，以避免斑点之间相互干扰。
三、展开技巧1、展开缸的准备展开缸要预先饱和，即将展开剂倒入展开缸中，盖上盖子，让缸内的气氛达到饱和状态。
这样可以减少边缘效应，提高分离效果。
2、展开方式可以采用上行展开、下行展开或水平展开等方式。
上行展开是最常用的方式，展开速度适中，分离效果较好。
3、展开距离展开距离一般为薄板长度的 3/4 左右，不宜过长或过短。
过长会导致斑点扩散，过短则可能分离不完全。
薄层色谱法详解
薄层板的活化：硅胶板于105-110℃烘30分钟，氧化铝板于150-160℃烘4小时，可得活性的薄层板。
点样
点样
点样方式：分为手动点样和自动点样。手动点样主要器具为微量毛细管、微量注射器等。自动点样采用半自动点样仪或全自动点样仪，按预设程序自动点样。手动点样灵活方便，常用于各种TCL鉴别中，器具以微量毛细管最常用。仪器的自动点样准确性好，常用于薄层扫描法的含量测定。
影响展开的因素
制备离心色谱仪
A相对湿度的影响
B溶剂蒸汽的影响(a展开室的饱和b预吸附)
C温度的影响
D展距的影响与分离度仅正比与展距的平方根
显色
A光学检出法
a自然光(400~800nm)
b紫外光(254nm或365nm)
c荧光一些化合物吸收了较短波长的光，在瞬间发射出比照射光波长更长的光，而在纸或薄层上显出不同颜色的荧光斑点(灵敏度高、专属性高)
B蒸汽显色法
显色
多数有机化合物吸附碘蒸气后显示不同程度的黄褐色斑点，这种反应有可逆及不可逆两种情况，前者在离开碘蒸气后，黄褐色斑点逐渐消退，并且不会改变化合物的性质，且灵敏度也很高，故是定位时常用的方法；后者是由于化合物被碘蒸气氧化、脱氢增强了共轭体系，因此在紫外光下可以发出强烈而稳定的荧光，对定性及定量都非常有利，但是制备薄层时要注意被分离的化合物是否改变了原来的性质。
显色方法a喷雾显色：显色剂溶液以气溶胶的形式均匀的喷洒在纸和薄层。b浸渍显色：挥去展开剂的薄层板，垂直的插入盛有展开剂的浸渍槽中，设定浸板及抽出速度和规定在显色剂中浸渍的时间。
022麦冬饮片检验标准操作规程
麦冬饮片检验标准操作规程1范围本标准建立了麦冬饮片的检验标准操作规程。
本标准适用于麦冬饮片的检验。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，其最新版本适用于本标准。
《中华人民共和国药典》2010版一部《麦冬饮片质量标准》编号3 职责检验人员、复核人员对实施本标准负责。
4 操作规程4.1 试药与试剂三氯甲烷、甲醇、乙醇、甲苯、稀甘油、水合氯醛试液、冰醋酸、高氯酸、正丁醇、氨试液、麦冬对照药材、鲁斯可皂苷元对照品。
4.2 设备及仪器放大镜、直尺、生物显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、酒精灯、层析缸、天平、硅胶GF254薄层板、点样毛细管、紫外光灯、水浴锅、坩埚、扁形称量瓶、回流装置、紫外-可见分光光度计、烘箱、具塞试管、250ml容量瓶、锥形瓶、箱式电阻炉、电炉、干燥器。
4.3 检验项目4.3.1 性状（1）操作方法取用供试品，用目视或用放大镜观察，并用直尺测量其直径；闻其气，用口尝其味。
（2）记录记录观察的形状，供试品其直径数值和气味。
（3）结果判定呈纺锤形，两端略尖，长1.5～3cm，直径0.3～0.6cm。
表面黄白色或淡黄色，有细纵纹。
质柔韧，断面黄白色，半透明，中柱细小。
气微香，味甘、微苦，判为符合规定。
4.3.2 鉴别4.3.2.1 显微鉴别（1）操作方法取本品横切面，滴加水合氯醛试液后，加热透化，再加稀甘油装片，在显微镜下观察。
（2）记录记录横切面鉴别特征。
（3）结果判定横切面：表皮细胞1列或脱落，根被为3～5列木化细胞。
皮层宽广，散有含草酸钙针晶束的黏液细胞。
有的针晶直径至10um；内皮层细胞壁均匀增厚，木化，有通道细胞，外侧为1列石细胞，其内壁及侧壁增厚，纹孔细密。
中柱较小，韧皮部束16～22个，木质部由导管、管胞、木纤维以及内侧的木化细胞连结成环层。
髓小，薄壁细胞类圆形，判为符合规定。
4.3.2.2 理化鉴别照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录VI B）。
薄层色谱法
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介绍
薄层色谱，或称薄层层析(thin—layer chromatography)，是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以 合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。这是一种快速分离诸如脂肪酸、 类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法，从50年代发展起来至今，仍被广泛采 用。
药物和药物代谢
薄层色谱法在合成药物和天然药物中的应用很广。有些文献和内容偏重于合成药物、化合物及其代谢产物， 有文献为在中草药分析中的应用。
优点
薄层层析有许多优点：它保持了操作方便、设备简单、显色容易等特点，同时展开速率快，一般仅需15～20 分钟；混合物易分离，分辨力一般比以往的纸层析高10～100倍，它既适用于只有0．01μg的样品分离，又能分 离大于500mg的样品作制备用，而且还可以使用如浓硫酸、浓盐酸之类的腐蚀性显色剂。薄层层析的缺点是对生 物高分子的分离效果不甚理想。
薄层展开
展开剂也称溶剂系统，流动性或洗脱剂，是在平面色谱中用作流动相的液体。展开剂的主要任务是溶解被分 离的物质，在吸附剂薄层上转移被分离物质，使各组分的Rf值在0.2~0.8之间并对被分离物质要有适当的选择性。 作为展开剂的溶剂应满足以下要求：适当的纯度、适当的稳定性、低黏度、线性分配等温线、很低或很高的蒸气 压以及尽可能低的毒性。
点样应注意的问题：
(1)点样量：原点位置对样品容积的负荷量有限，体积不宜太大，一般为 0.5~10μl，样品的浓度通常为 0.5~2mg，太浓时展开剂从原点外围绕行而不是通过整个原点把它带动向前，使斑点拖尾或重叠，降低分离效率。 点样量太小，不能检出清晰的斑点影响判断。点样量太多，展开剂不能全部负载，容易产生拖尾现象。当点样量 适合时，可采用点状点样；当点样量过大，原点无法负荷时，可采用条带状点样，得到更好的分离效果，提高分 辨率。
薄层色谱法的步骤
薄层色谱法的步骤
薄层色谱法是一种分离和分析化合物的常用技术，其步骤包括： 1. 准备样品和色谱板：样品需要纯净、干燥，色谱板需要先进行烘烤处理，去除水分和杂质。
2. 准备色谱溶液：根据样品的性质和分离要求，选择合适的溶剂和试剂，制备色谱溶液。
3. 涂覆色谱板：将准备好的色谱溶液，用吸管或微量注射器滴在色谱板的一个角落上，使其均匀地覆盖整个色谱板表面。
4. 开展色谱实验：将样品通过比色板，涂覆的样品会发生色带变化，通过色带的大小、颜色等特征，可判断化合物的纯度和种类。
5. 结果解释：根据色带的特征和样品的性质，对结果进行解释和分析。
6. 记录和汇报：将实验结果记录在实验笔记本上，并根据实验要求，进行汇报和分析。
- 1 -。
薄层色谱法
l点样器:
一般采用微升毛细管（定量点样毛细管： 0.5ul、1.0ul、2.0ul、5.0ul、10ul等）、微升注射
器或半自动、全自动点样器材，手动点样时建议
采用微量毛细管。
l展开缸
应用适合薄层板大 小的薄层色谱专用展开 缸（箱），展开缸有水 平式和直立式两种类型。 日常用的最多的是直立 式展开缸。它又分平底 展开缸或双槽展开缸。 双槽展开缸具有节省溶 剂、便于预平衡、可控 制展开缸内相对湿度等 有点，故此常推荐使用。 水平展开用专用的水平 展开缸。
Ø 限度检查 采用定量配制的对照品对照或对照品稀释 对照。供试品溶液色谱中待检查的斑点应与相应的 对照品溶液或系列对照品溶液的相应斑点比较，颜 色（或荧光）不得更深；或照薄层色谱扫描法操作， 峰面积不得大于对照品的峰面积值。必要时应规定 检查的斑点数和限量值。
Ø含量测定 照薄层色谱扫描法，测定供试品中相应成分 的含量。
高效薄层板（HPTCL）所使用的固定相较普通薄层 板平均粒度小，颗粒分布范围窄，因此在相对短的 展开距离中可以达到更好的分离效果。
传统薄层板与高效薄层板的比较
平均粒度（um） 颗粒分布（um） 点样量（ul） 展距(cm) 分离时间(min) 检测限：可见光（ng）
荧光（ng） 薄层厚度（mm）
TCL 10-40 宽 大 10-15 30-200 100-1000 1-ห้องสมุดไป่ตู้00 0.2-0.3
l 定义：薄层色谱法，或称薄层层析(thin—layer chromatography），系将适宜的固定相涂布于玻 璃板、塑料或铝基片上，成一均匀的薄层；将供 试品与相应的对照物点于薄层板的一端，在展开 容器内用适宜的溶剂（展开剂）展开，使供试品 中所含成分分离，采用适合的显色剂或显色方法 显色，将供试品色谱与对照物色谱比较，或采用 薄层扫描仪扫描，以进行鉴别、检查，或含量测 定的方法。
薄层色谱方法课件
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3、试剂显色法分离后的化合物在紫外光或可见光下不能显示斑点，可根据被检出化合物的理化性质选择适当的显 色剂使之生成颜色或荧光稳定、轮廓清楚、灵敏度 高、专属性强的斑点。这种方法是通过一种或几种试剂与被检物质产生化学反应，生成有色物质，是平面色谱广泛应用的 定位方法。
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喷雾显色法务必在通风柜中进行。自动喷雾器适用于定 量。手动喷雾器用于定量 分析时可能因喷雾不均匀 而产生较大误差。
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三、薄层色谱法的基本操作
薄层板的准备
定性与定量
样品处理
定位
展开
6Leabharlann ( 一) 薄层板 制备薄层板的载板包括有：玻璃板、塑 为制了薄使层薄板 定附相着有在在：： 上化便铝 素素，，、需聚要酰时胺 凝定胶相等中中，， 色的谱粘法 需在固定相中加入某些添加剂。
2
薄层色谱
高效液相色谱
色谱系统
开放式
闭路
展开方式
展开
洗脱
流速控制
吸附剂的毛细管作用
由泵调节
平衡时间
短
不定
分析样品
可同时分析多个样品
每次一个样品
样品量
高
低
板高 ( μm)
30
2~5
有效板数
<600
~5000
检测方式
静态
动态
溶剂用量
少
多
溶剂更换
易
难
固定相
一次弃去
反复使用
3
(二) 薄层色谱与高效液相色谱的比较
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溶剂分成6类：第Ⅰ类为电子授受体溶剂；第Ⅱ类为质子给予体溶剂；第Ⅲ类为强质子给予体溶剂；第Ⅳ类为质子受体溶剂；第Ⅴ类为偶极作用力溶剂；第Ⅵ类为惰性溶剂 (即非极性溶剂)。
薄层色谱法原理
薄层色谱法原理
薄层色谱法（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种常用
的色谱分离技术。
它基于混合物中不同成分在固定相上的亲疏性差异，利用了物质在固定相和移动相之间的分配行为来实现分离。
薄层色谱法的基本原理是将需要分离的样品溶解在合适的溶剂中，然后在一张薄石英玻璃或铝箔片上均匀涂覆一层薄的吸附剂作为固定相。
常用的吸附剂包括硅胶、氧化铝和硅胶凝胶等。
接下来，将涂层的薄片置于一个密闭的玻璃槽中，底部加入浸润吸附剂的移动相。
浸润过程中，样品分子会与固定相亲疏性不同，部分样品分子会被吸附在固定相上，而其他成分则会相对快速地移动。
移动相的选择是根据溶剂性质和样品成分的亲疏性来确定的。
当移动相通过薄片时，样品中的各个成分会根据其在固定相和移动相之间的分配系数在薄片上形成不同的斑点。
移动距离较短的成分代表亲吸附性较强，而移动距离较远的成分代表亲吸附性较弱。
通过比较样品成分的不同斑点之间的特征，可以确定其组成和相对含量。
为了可视化分离结果，通常会使用化学试剂进行显色。
不同的化学试剂可以与特定化合物反应，产生颜色变化或发光，从而使分离出的物质清晰可见。
薄层色谱法具有操作简单、快速、经济等优点，广泛应用于各个领域中，如药物分析、食品检验、环境监测等。
薄层色谱法标准操作规程
薄层色谱法标准操作规程依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。
内容：1 简述：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。
等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。
2 仪器与材料：2.1 玻板：除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm 的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。
2.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。
其颗粒大小，一般要求直径为10—40µm。
薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏（CaSO4•2H2O在140℃烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。
也有含一定展开液或缓冲液的薄层。
2.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。
2.4 点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。
2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。
3 操作方法：3.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。
即置有干燥剂的干燥箱中备用。
使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。
3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边 2.0cm，点样直径为2——4mm，点间距离约为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。
薄层色谱法
流动相的选择：
一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷 <己烷<苯<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇
根据被分离物的极性，先用单一溶剂展开，若Rf值太小，则加入
一定量极性强的溶剂，如乙醇、丙酮等；如果Rf值太大，则加入适量 极性弱的溶剂(如环己烷、石油醚等)，以降低极性。可加入一定比例 的酸或碱,使斑点集中。
薄层色谱法
薄层色谱法（ THIN LAYER CHROMATOGRAPHY ，TLC）
薄层色谱法,又称薄层层析（《中国药典》2015年
版四部通则0502薄层色谱法），系将供试品溶液 点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使 供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的标准 物质按同法所得色谱图对比，亦可用薄层色谱扫 描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。
薄层色谱扫描仪
二、基本原理
薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸 附剂吸附能力不同，使在流动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过 程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成 分的互相分离的目的。 薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析 (吸附剂）、薄层分配层析（纤维素）、薄层离子交换层析（离子交 换剂）、薄层凝胶层析（分子筛凝胶）等。一般实验中应用较多的是 以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。
微升毛细管
半自动点样器材
全自动点样器
③展开容器
薄层色谱展开方式按几何类型份为 ： 线型、环型和向心型。
（a，b）线型 （c）环型 （d）向心型
环型与向心型展开为特殊情况需求，需要借助特殊展开仪器进行展开； 线型根据展开方向的不同可分为上行展开、下行展开、双向展开，水平展开， 实验室一般使用的为线型上行展开与水平展开。 上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开式必须能 密闭。水平展开用专用的水平展开槽。
薄层色谱法原理
非极性
A’ A
非极性
极性
被分离物质
展开剂成分的选择：
对于容易分离的化合物，用单一溶剂展 开
优点：溶剂简单，分离重现性好。 对于难分离组分，则选用二元、三元、
甚至多元溶剂 Rf太小——加入强极性展开剂 Rf过大——降低展开剂的极性
优化
1.占比例较大的溶剂为主要溶剂，可使 试样组分溶解并基本分离。 占比例较小的溶剂可进一步调整各组 分Rf值，改善分离效果。
• 常用的吸附剂：硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭和大孔吸 附树脂等。
• 吸附剂的选择要合适，与流动相、被分离化合物不反应
• 2、流动相（展开剂）
薄层色谱法中采用单一溶剂或多元 混合溶剂作流动相，称为展开剂。
与吸附柱色谱法中选择流动相的一 般规则相同，展开剂的选用要从被分 离试样组分极性、吸附剂活性和展开 剂的极性三个因素综合考虑。
原点
A
B
比移值Rf
溶剂
前沿
原点到斑点中心的距离
Rf 原点到溶剂前沿的距离
c a
起始线
b
AA BB
Rf
a R
c
st
b c
Rf值相差越大，分离越好。一般要求分 离后组分的Rf值在0.2～0.8之间，各组 分的Rf值之差应大于0.05，以防斑点重 叠。
（二）固定相和流动相
• 1、固定相（吸附剂）
吸附剂和展开剂的选择
• 对于极性较小的被分离试样组分，应 选用活性较强的吸附剂，极性较小的 展开剂；
• 对于极性较大的被分离试样组分，应 选用活性较弱的吸附剂，极性较大的 展开剂。
被分离试样组分极性、吸附剂活性和展开剂极性之 间的关系
活泼 Ⅰ
极性
薄层色谱法的步骤
薄层色谱法的步骤
薄层色谱法是一种常用的分离和鉴定化合物的方法，在化学、药学等领域有广泛应用。
下面是薄层色谱法的步骤：
1、制备薄层色谱板：将硅胶、氧化铝等吸附剂与粘结剂混合均匀，涂布到玻璃、金属等基板上，制成薄层色谱板。
2、样品的制备：将待分离的混合物溶于适当的溶剂中，制成样品溶液。
3、取样：在薄层色谱板上画一条线，将样品溶液沿着线均匀地涂布在薄层色谱板的起点处，使样品成为一个薄层。
4、干燥：将样品干燥，使其完全脱水。
5、上色：将薄层色谱板浸泡在上色液中，使样品带电，易于被吸附剂吸附。
6、分离：将薄层色谱板放在色谱槽中，槽中加入适当的溶剂，使其在薄层上上升，逐渐分离出混合物中的各个成分。
7、鉴定：用紫外可见光谱、荧光光谱等方法对分离出的色斑进行鉴定，确定各个化合物的种类和含量。
以上是薄层色谱法的步骤，需要注意的是，实验中要仔细掌握每个步骤的操作技巧，保证实验结果的准确性和可靠性。
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薄层色谱法的操作步骤
薄层色谱法的操作步骤
嘿，朋友！今天咱们来聊聊薄层色谱法的操作步骤，这可是个挺有趣的小实验呢。
第一步呀，得准备好咱们要用的东西。
比如说薄层板，这就像是咱们画画的画布一样。
还有展开剂，这可是让样品能在板子上跑起来的关键。
另外，样品溶液也不能少，这就是咱们要观察的主角啦。
还有各种小工具，像点样毛细管、显色剂等等。
准备好东西之后，就该处理样品溶液啦。
把咱们要检测的东西溶解在合适的溶剂里，让它变成均匀的溶液。
这一步可得细心点，要是溶液不均匀，后面的结果可能就不准确喽。
点好样之后，把薄层板放进装有展开剂的层析缸里。
这就像是让样品们开始赛跑啦。
展开剂会慢慢地沿着薄层板往上爬，带着样品一起跑。
这个时候咱们得耐心等待，看着展开剂一点点往上走，就好像在期待一场精彩的比赛结果。
等展开剂差不多爬到板子的顶部了，就把板子拿出来，放在通风的地方让它晾干。
这时候呀，样品们已经在板子上跑出了不同的距离，形成了一道道的痕迹。
然后就是显色啦。
根据样品的性质，选择合适的显色剂。
把显色剂喷在板子上或者把板子泡在显色剂里，这时候样品的痕迹就会变得更加明显。
有的会变成五颜六色的斑点，可好看啦。
呢，咱们就可以观察和分析结果啦。
看看样品在板子上形成的斑点位置、形状、颜色等等。
通过和标准样品的对比，就能知道咱们检测的东西到底是什么啦。
怎么样，朋友，薄层色谱法的操作步骤是不是没有想象中那么复杂呀？只要咱们一步一步认真做，就能得到想要的结果啦。
多练习几次，你一定会越来越熟练的！。
薄层色谱法的步骤
薄层色谱法的步骤
1.准备薄层板：在玻璃、铝或塑料板上涂上一层薄薄的吸附剂，如硅胶或氧化铝。
2. 样品制备：将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，制备样品涂抹在薄层板上。
3. 薄层板干燥：将涂有样品的薄层板在通风处晾干。
4. 选择合适的展开剂：将干燥的薄层板放入薄层层析仪中，选择合适的展开剂，如正己烷-乙醇（9：1），使之均匀覆盖整个薄层板。
5. 样品展开：将展开剂加入后，放置薄层层析仪中，待展开完成后取出。
6. 显色：用染色剂或紫外灯将展开后的薄层板进行可视化。
7. 鉴定：根据样品的展开位置和色谱图形来鉴定化合物。
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薄层色谱法
0502薄层色谱法薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上,在展开容器内用展开剂展开,使供试品所含成分分离,所得色谱图与适宜的对照标准物质按同法所得的色谱图对比,亦可用薄层色谱扫描仪进行扫描,用于鉴别㊁检查或含量测定㊂1.仪器与材料(1)薄层板市售薄层板市售薄层板按支持物的材质分为玻璃板㊁塑料板或铝板等;按固定相种类分为硅胶薄层板㊁键合硅胶板㊁微晶纤维素薄层板㊁聚酰胺薄层板㊁氧化铝薄层板等;㊂固定相中可加入黏合剂㊁荧光剂㊂硅胶薄层板常用的有硅胶G㊁硅胶G F254㊁硅胶H㊁硅胶H F254㊁G㊁H表示含或不含石膏黏合剂㊂F254为在紫外光254n m波长下显绿色背景的荧光剂㊂按固定相粒径大小分为普通薄层板(10~ 40μm)和高效薄层板(5~10μm)㊂按硅胶板是否含有荧光剂分为硅胶G板和硅胶G F254板㊂自制薄层板在保证色谱质量的前提下,如需对薄层板进行特别处理和化学改性,以适应供试品分离的要求时,也可用实验室自制的薄层板㊂最常用的固定相有硅胶G㊁硅胶G F254㊁硅胶H㊁硅胶H F25㊁微晶纤维素等,其固定相颗粒大小,一般要求粒径为10~40μm,㊂加水或羧甲基纤维素钠水溶液(0.2%~0.5%)㊁或改性剂溶液适量调成糊状,均匀涂布于玻板上㊂使用涂布器涂布应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层㊂玻板应光滑㊁平整,洗净后不附水珠㊂(2)点样器一般采用微升毛细管或手动㊁半自动㊁全自动点样器材㊂(3)展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸,展开时须能密闭㊂水平展开用专用的水平展开槽㊂(4)显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器,要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出;浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用;蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替㊂(5)检视装置为装有可见光㊁254n m及365n m紫外光光源及相应的滤光片的暗箱,可附加摄像设备供拍摄图像用㊂暗箱内光源应有足够的光照度㊂(6)薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点,或经激发后能发射出荧光的斑点,进行扫描,将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器㊂2.操作方法(1)薄层板制备市售薄层板临用前一般应在110ħ活化30分钟㊂聚酰胺薄膜不需活化㊂铝基片薄层板㊁塑料薄层板可根据需要剪裁,但须注意剪裁后的薄层板底边的固定相层不得有破损㊂如在存放期间被空气中杂质污染,使用前可用三氯甲烷㊁甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗,晾干, 110ħ活化,置干燥器中备用㊂自制薄层板除另有规定外,将1份固定相和3份水(或加有黏合剂的水溶液,如0.2%~0.5%羟甲基纤维素钠水溶液,或为规定浓度的改性剂溶液)在研钵中按同一方向研磨混合,去除表面的气泡后,倒入涂布器中,在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.2~0.3m m),取下涂好薄层的玻板,置水平台上于室温下晾干后,在110ħ烘30分钟,随即置于有干燥剂的干燥箱中备用㊂使用前检查其均匀度,在反射光及透视光下检视,表面应均匀㊁平整㊁光滑,并且无麻点㊁无气泡㊁无破损及污染㊂(2)点样除另有规定外,在洁净干燥的环境中,用专用毛细管或配合相应的半自动㊁自动点样器械点样于薄层板上㊂一般为圆点状或窄细的条带状,点样基线距底边10~ 15m m,高效板一般基线离底边8~10m m㊂圆点状直径一般不大于4m m,高效板一般不大于2m m㊂接触点样时注意勿损伤薄层表面㊂条带状宽度一般为5~10m m,高效板条带宽度一般为4~8m m,可用专用半自动或自动点样器械喷雾法点样㊂点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不干扰为宜,一般不少于8m m,高效板供试品间隔不少于5m m㊂(3)展开将点好供试品的薄层板放入展开缸中,浸入展开剂的深度为距原点5m m为宜,密闭㊂除另有规定外,一般上行展开8~15c m,高效薄层板上行展开5~8c m㊂溶剂前沿达到规定的展距,取出薄层板,晾干,待检测㊂展开前如需要溶剂蒸气预平衡,可在展开缸中加入适量的展开剂,密闭,一般保持15~30分钟㊂溶剂蒸气预平衡后,应迅速放入载有供试品的薄层板,立即密闭,展开㊂如需使展开缸达到溶剂蒸气饱和的状态,则须在展开缸的内壁贴与展开缸高㊁宽同样大小的滤纸,一端浸入展开剂中,密闭一定时间,使溶剂蒸气达到饱和再如法展开㊂必要时,可进行二次展开或双向展开,进行第二次展开前,应使薄层板残留的展开剂完全挥干㊂(4)显色与检视有颜色的物质可在可见光下直接检视,无色物质可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色,或加热显色,在可见光下检视㊂有荧光的物质或显色后可激发产生荧光的物质可在紫外光灯(365n m或254n m)下观察荧光斑点㊂对于在紫外光下有吸收的成分,可用带有荧光剂的薄层板(如硅胶G F254板),在紫外光灯(254n m)下观察荧光板面上的荧光物质淬灭形成的斑点㊂(5)记录薄层色谱图像一般可采用摄像设备拍摄,以光学照片或电子图像的形式保存㊂也可用薄层色谱扫描仪扫描记录相应的色谱图㊂3.系统适用性试验按各品种项下要求对实验条件进行系统适用性试验,即用供试品和对照标准物质对实验条件进行试验和调整,应符㊃68㊃0502薄层色谱法合规定的要求㊂(1)比移值(R f)系指从基线至展开斑点中心的距离与从基线至展开剂前沿的距离的比值㊂R f=基线至展开斑点中心的距离基线至展开剂前沿的距离杂质检查时,各杂质斑点的比移值R f以在0.2~0.8之间为宜㊂(2)检出限系指限量检查或杂质检查时,供试品溶液中被测物质能被检出的最低浓度或量㊂一般采用已知浓度的供试品溶液或对照标准溶液,与稀释若干倍的自身对照标准溶液在规定的色谱条件下,在同一薄层板上点样㊁展开㊁检视,后者显清晰可辨斑点的浓度或量作为检出限㊂(3)分离度(或称分离效能)鉴别时,供试品对照与标准物质色谱中的斑点均应清晰分离㊂当薄层色谱的扫描法用于限量检查和含量测定时,要求定量成分斑点峰与相邻斑点峰之间有较好的分离度,分离度(R)的计算公式为:R=2(d2一d1)/(W1+W2)式中d2为相邻两峰中后一峰与原点的距离;d1为相邻两峰中前一峰与原点的距离;W1及W2为相邻两峰各自的峰宽㊂除另有规定外,分离度应大于1.0㊂在化学药品杂质检查的方法选择时,可将杂质对照品标准物质用供试品自身稀释对照溶液溶解制成混合对照溶液,也可将杂质对照品标准物质用待测组分的对照标准物质品溶液溶解制成混合对照标准溶液,还可采用供试品以适当的降解方法获得的溶液,上述溶液点样展开后的色谱图中,应显示清晰分离的斑点㊂(4)相对标准偏差重复性薄层扫描含量测定时,同一供试品溶液在同一薄层板上平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差应不大于5.0%;需显色后测定的或者异板的相对标准偏差应不大于10.0%㊂4.测定法(1)鉴别按各品种项下规定的方法,制备供试品溶液和对照标准溶液,在同一薄层板上点样㊁展开与检视,供试品色谱图中所显斑点的位置和颜色(或荧光)和位置应与对照标准物质色谱图的斑点应一致㊂必要时化学药品可采用供试品溶液与对照标准溶液混合点样㊁展开,与对照标准物质相应斑点应为单一㊁紧密斑点;㊂或选用与供试品化学结构相似的药物对照标准物质与供试品的主斑点比较,两者R f 应不同;或将上述两种溶液混合点样㊁展开,应显示两个清晰分离的斑点㊂(2)限量检查与杂质检查按各品种项下规定的方法,制备供试品溶液和对照标准溶液,并按规定的色谱条件点样㊁展开和检视㊂供试品溶液色谱图中待检查的斑点与相应的对照标准物质斑点比较,颜色(或荧光)不得更深;或照薄层色谱扫描法操作,测定峰面积值,供试品色谱图中相应斑点的峰面积值不得大于对照标准物质的峰面积值㊂含量限度检查应按规定测定限量㊂化学药品杂质检查可采用杂质对照法㊁供试品溶液的自身稀释对照法㊁或两法并用㊂供试品溶液除主斑点外的其他斑点与相应的杂质对照标准溶液或系列浓度杂质对照标准溶液的相应主斑点比较,不得更深,或与供试品溶液自身稀释对照溶液或系列浓度自身稀释对照溶液的相应主斑点比较,不得更深㊂通常应规定杂质的斑点数和单一杂质量,当采用系列自身稀释对照溶液时,也可规定估计的杂质总量㊂(3)含量测定照薄层色谱扫描法,按各品种项下规定的方法,制备供试品溶液和对照标准溶液,并按规定的色谱条件点样㊁展开㊁扫描测定㊂或将待测色谱斑点刮下经洗脱后,再用适宜的方法测定㊂5.薄层色谱扫描法系指用一定波长的光照射在薄层板上,对薄层色谱中可吸收紫外光或可见光的斑点,或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描,将扫描得到的图谱及积分数据用于鉴别㊁检查或含量测定㊂测定时可根据不同薄层色谱扫描仪的结构特点,按照规定方式扫描测定,一般选择反射方式,采用吸收法或荧光法㊂除另有规定外,含量测定应使用市售薄层板㊂扫描方法可采用单波长扫描或双波长扫描㊂如采用双波长扫描,应选用待测斑点无吸收或最小吸收的波长为参比波长,供试品色谱图中待测斑点的比移值(R f值)㊁光谱扫描得到的吸收光谱图或测得的光谱最大吸收和最小吸收应与对照标准溶液相符,以保证测定结果的准确性㊂薄层色谱扫描定量测定应保证供试品斑点的量在线性范围内,必要时可适当调整供试品溶液的点样量,供试品与对照标准物质同板点样㊁展开㊁扫描㊁测定和计算㊂薄层色谱扫描用于含量测定时,通常采用线性回归二点法计算,如线性范围很窄时,可用多点法校正多项式回归计算㊂供试品溶液和对照标准溶液应交叉点于同一薄层板上,供试品点样不得少于2个,对照标准物质每一浓度不得少于2个㊂扫描时,应沿展开方向扫描,不可横向扫描㊂㊃78㊃0502薄层色谱法。
薄层色谱法的步骤
实用文档
薄层色谱法的步骤
薄层色谱法是一种常用的色谱分离技术，其步骤如下：
1. 准备样品：将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，得到待分离的样品溶液。
2. 准备薄层色谱板：将薄层色谱板放入烘箱中预热，然后用毛刷均匀地涂上一层薄层色谱剂，待干燥后即可使用。
3. 样品上色：将准备好的样品溶液用微量注射器或毛玻璃棒点在薄层色谱板上，待样品点干燥后，再重复涂抹样品，直到涂抹的样品斑点足够大。
4. 运行薄层色谱：将准备好的薄层色谱板放在色谱槽中，注入色谱移动相，然后将色谱槽放入薄层色谱槽槽浴中，使移动相向上渗透，直至移动相达到薄层色谱板的顶端。
5. 检测分离结果：将薄层色谱板在紫外灯下照射，观察样品斑点的位置和颜色，并将斑点切下进行进一步分析。
以上就是薄层色谱法的基本步骤，通过这种方法可以对混合物中的化合物进行有效的分离和检测。
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022硫酸粘菌素质量标准
硫酸粘菌素质量标准1 目的本标准规定了硫酸粘菌素质量标准。
2 范围本标准适用于硫酸粘菌素的检验。
3 责任质检人员：按本标准的规定执行。
QC主管：按本标准的规定审核。
4 执行标准农业部部颁《兽药质量标准》2006年版。
5 贮存密封，在干燥处保存。
6复检周期一年7技术要求本品为一种多粘菌素。
按干燥品计算，每1mg效价不得少于19000粘菌素单位。
【性状】本品为白色或类白色粉求：无臭：有引湿性。
本品在水中易溶，在乙醇、丙酮或氯仿中几乎不溶。
比旋度取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每lml中约含50mg的溶液。
依法测定，比旋度为-63°至-73°。
【鉴别】(1)取本品约2mg，加水5ml溶解后，加lO％氢氧化钠溶液5ml，再滴加l％硫酸铜溶液5滴，每加l滴即充分振摇，溶液显红紫色。
(2)取本品50mg。
加盐酸溶液(1→2)10ml使溶解，135℃加热5小时，置水浴上蒸干，残渣加水5ml使溶解，作为供试品溶液；另称取亮氨酸、苏氨酸．苯基丙氨酸及丝氨酸各20mg，分别加水10ml使溶解，作为对照溶液(1)、(2)、(3)和(4)。
照薄层色谱法试验，吸取上述5种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯酚溶液(取苯酚75g，加水25ml加热使溶解)为展开剂，展开约12小时，在100℃干燥5分钟，趁热喷以茚三酮试液。
在110℃加热5分钟，检视。
供试品溶液所最示的主斑点及颜色和位置应与对照溶液(1)、(2)的主斑点颜色和位置相同，并不得显示与对照溶液(3)、(4)主斑点颜色和位置相同的斑点。
(3)本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应。
【检查】酸度取本品，加水制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定，pH值应为4．0～6．5。
硫酸盐取本品约0.25g，精密称定。
加水100ml使溶解，加浓氨溶液调节pH值至11后，精密加氯化钡滴定液(0.1mol/L)10ml、酞紫指示液5滴，用乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05mol/L)滴定，注意保持滴定过程中pH值为11，滴定至紫色开始消退，加乙醇50ml，继续滴定至蓝紫色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。
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薄层色谱法
1简述
薄层色谱法系指以适宜的固定相涂布于玻璃板、铝锚片或聚醋薄膜上使成一均匀的薄层，将供试品与相应的对照物点于薄层板的一端，以适宜的溶剂置展开容器内展开，使供试品所含的相应成分分离，采用适宜的显色剂或显色方法显色，将供试品色谱与对照物色谱相比较，或采用薄层扫描仪扫描，以进行鉴别、检查或含量测定的方法。
2仪器与材料 2.
1薄层板
按照固定相的种类，薄层板可分为正相薄层板(如硅胶薄层板、聚酷胶薄膜)、反相薄层板(如C18
GF m、硅胶H和硅胶HF254等。
高效薄层板所使用的固定相较普通薄层板平均粒度小，颗粒分布范围窄，键合相薄层板)等。
硅胶薄层板是目前使用最广的薄层板，如硅胶G、硅胶
因此在相对短的展开距离中可以达到更好的分离效果。
目前使用的薄层板有市售薄层板和自制薄层板两种。
一般市售薄层板分离效果较自制薄
层板好。
如需特殊薄层板(如改性板)时，可采用自制薄层板。
2.2点样器
2.2.1手动点样主要用微升毛细管、微量注射器或配合与之相应的手动点样仪等。
2.2.2自动
点样采用半自动点样仪或全自动点样仪，按预设程序自动点样。
2. 3展开容器又称展开缸，为大小适宜的密闭展开容器。
有双槽展开缸及平底展开缸等。
此外，也有自动展开仪器，可将薄层板按预定程序单次或多次展开，提高薄层展开的重现性。
2.4显色设备包括喷雾显色、浸渍显色以及蒸气熏蒸显色的设备。
2.4.1喷雾显色多用玻璃喷雾瓶或其它专用的喷雾设备，喷雾形成的雾滴应细小并且
均匀。
2.4.2浸渍显色多在盛有显色剂的展开缸中进行。
2.4.3蒸气熏蒸显色可在密闭的展开缸、干燥器等设备中进行。
如薄层
板需加热，可使用烘箱或专用的薄层加热台。
2.5检视和记录设备由暗箱及摄像设备组成。
2.5.1暗箱配备可见光、254nm和365nm紫外光光源以及相应的滤光片。
2. 5. 2摄像设备光学照相机、摄像头或数码相机等。
2. 6薄层色谱扫描仪
薄层色谱扫描仪是薄层色谱定性定量分析的专用仪器。
主要由光源、单色器、薄层板台、检
测器及工作站等组成。
有关内容详见薄层色谱扫描法标准操作规程。
3操作方法
3. 1薄层板的制备和处理
除另有规定外，自制薄层板应采用大小为20cm X20cm、20cm X IOcm或lOcm X lOcm等规格的光滑平整玻璃板进行涂布。
涂布时，将1份固定相和3份水(或其他加有蒙古合剂的水溶液适量)在研钵中按同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为O. 2~O. 3mm).将玻璃板取下，置水平台上室温下晾干，活化备用。
改性薄层板可在自制薄层板时加人改性剂，或用改性剂浸渍薄层板制备。
薄层板表面应均匀、平整、光滑，无麻点、无气泡、无破损及污染。
如果薄层板放置过久被杂
质污染，可用氯仿、甲醇或二者的混合溶剂展开预洗。
铝筒片市售薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破损。
市售薄层板和自制薄层板使用前一般应于105~110'C活化30分钟，活化后置干燥器中备用。
3. 2点样
薄层点样应在洁净干燥的环境中进行。
点样方法有接触式点样和喷雾点样两种。
接触式点样时将吸有样品溶液的毛细管或针头与薄层板表面接触，从而使样品在薄层板上形成圆点状的点。
接触式点样应注意防止毛细管损伤薄层板表面。
喷雾点样时，点样针针杆匀速缓慢下推，针头部形成的
小液滴被喷头喷出的气流吹落到薄层板上，机械控制薄层板匀速摆动，则形成均匀的条带状原点。
喷雾点样可提高点样的准确度与重现性，同时由于条带状原点的径向扩散较小，也可提高薄层色谱的分离度。
除另有规定外，点样基线距底边10~15mm，高效薄层板一般基线距底边8~10mm。
接触式点样原点直径一般不大于3mm，喷雾式点样所得条带宽度一般为5~10mm，高效薄层板条带宽度一般为4~8mm。
点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般不少于8mm.高效薄层板供试品间隔不少于5mm。
市售高效薄层板载样量较普通薄层板小，容易引起过载，应适当调整点样量。
3. 3展开选择大小适合的展开容器，将薄层板放入展开容器中，漫入展开剂的深度为距原点5mm 为宜，密闭，展开。
一般上行展开8~15cm.高效薄层板土行展开5~8cm。
溶剂前沿达到规定展距，取出薄层板，晾干，待检测。
展开前如需要溶剂蒸气预平衡，可在展开缸中加入适量的展开剂，密闭，放置15~30分钟，待溶剂蒸气平衡后，迅速放入薄层板，立即密闭，展开。
也可使用双槽展开缸，在一侧槽内加入展开剂，薄层板置另一侧槽内，密闭容器，放置15~30分钟，再迅速将薄层板放入装有展开剂的展开槽内，密闭，展开;或放置到规定时间后，保持容器密闭，小心倾斜展开容器，使展开剂进入到放置有薄层板的槽内，放平展开容器，展开。
3.4显色与检视
3.4.1直接检视在可见光下有颜色的供试品斑点可直接在日光下检视;有荧光的供试品斑点可在紫外光灯(365nm或254nm)下检视其荧光斑点;在254nm紫外光下有吸收的物质可使用带有荧光剂的薄层板(如硅胶GF254板)展开后，再于254nm紫外光灯下观察其荧光津灭所形成的色谱。
3.4.2显色后检视如供试品斑点不能直接检视，可喷以造宜显色剂或采用其它显色方法显色后再于可见光或紫外光下检视。
显色时应确保均匀。
浸渍显色应防止显色溶液溶解样品所造成的损失和色谱斑点变形。
3. 5记录可使用光学照相机、摄像头以及数码相机等设备拍摄色谱结果，以光学照片或电子图像的形式保存。
在紫外光下拍摄时，光源发出的紫外光会干扰摄像设备感光，导致拍摄结果与肉眼观察存在一定的色差，应使用适当滤光片滤除紫外光。
可见光下进行检视的薄层板也可采用平板扫描仪记录薄层色谱结果。
如拍摄的图谱不能完全反映实际图谱的情况时，可另附手绘图谱。
3. 6薄层色谱扫描详见薄层色谱扫描法标准操作规范。
起草人:何轶(中国药品生物制品检定所)
复核人:鲁静(中国药品生物制品检定所)。