AHSY-YP012-2017灵芝孢子粉饮片质量标(草案)

灵芝孢子粉饮片质量标准（草案）
AHSY-YP012-2017
灵芝孢子粉
Lingzhibaozifen
GANODERMA SPORE
本品为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum（Leyss.ex Fanch）Karst.的干燥成熟孢子。

灵芝弹射孢子时采收，除去杂质，干燥。

【炮制】灵芝孢子粉除去杂质。

破壁灵芝孢子粉取灵芝孢子粉，采用物理方法，如挤压、碾磨、剪切及气流粉碎等方式将孢子壁破碎。

过筛，干燥。

【性状】灵芝孢子粉为黄棕色的粉末；气微，味淡。

破壁灵芝孢子粉为棕褐色的粉末；气微，味淡或微苦。

【鉴别】（1）灵芝孢子粉本品粉末黄棕色。

孢子褐色，呈卵形，长6～11μm，宽4～7μm，顶端平截或钝圆形，孢子壁双层，外壁平滑、透明，内壁淡褐色或近褐色。

破壁灵芝孢子粉本品粉末棕褐色。

孢子壁，破碎，双层，外壁平滑、透明，内壁淡褐色或近褐色。

（2）取本品0.5g，加甲醇20ml，超声处理15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取灵芝孢子对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。

照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（3:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

供试品色谱图中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【检查】杂质取本品，置显微镜下观察：不得检出菌丝，淀粉粒等异物。

水分灵芝孢子粉不得过9.0%。

（中国药典2015年版四部通则0832第二法）
破壁灵芝孢子粉不得过4.5%。

（中国药典2015年版四部通则0832第二法）
总灰分不得过3.0%。

（中国药典2015年版四部通则2302）
重金属及有害元素破壁灵芝孢子粉照铅、镉、砷、汞、铜测定法（中国药典2015年版四部通则2321院子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法）测定，铅不得过百万分之二；镉不得过千万分之五；砷不得过百万分之一；汞不得过千万分之一；铜不得过百万分之二十；铬不得过百万分之二；镍不得过百万分之一。

破壁率破壁灵芝孢子粉取本品适量，60℃减压干燥至恒重，取约0.1g，精密称定，置
100ml 量瓶中，加水适量，涡旋震荡1分钟，加聚山梨酯801ml，涡旋震荡1分钟，超声处理30分钟，取出，放冷，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

另取灵芝孢子粉对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。

取血球计数板（25个中格×16个小格），用吸管分别吸取供试品溶液与对照药材溶液适量（吸取溶液前强力振摇1分钟，立即吸取），滴于盖玻片边缘，使液体缓缓渗入，多余的液体用吸水纸擦拭干净，静置30秒，置200倍及以上放大倍数的显微镜下观察。

计数血球计数板4个角上与中央5个中格中具完整形态的灵芝孢子个数。

如有部分孢子处于中格边线上，计数时应仅统计位于中格四个边线的其中两个边线的孢子数，计数时应去掉离群较大的值，每个样品有效观察计数应不少于3次，最后以平均数代入计算。

破壁率应不低于95%。

计算公式：X=(N A -N B ）/N A ×100%
X——破壁率（%）
N A ——对照药材溶液中完整孢子总数
N B ——供试品溶液中完整孢子总数
过氧化值破壁灵芝孢子粉不得过0.20。

（中国药典2015年版四部通则2303）
微生物限度破壁灵芝孢子粉照散剂微生物限度检查测定，应符合规定。

【特征图谱】破壁灵芝孢子粉
照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512）测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以二氯甲烷-乙腈（32:68）为流动相；蒸发光检测器检测。

理论板数按甘油三油酸酯峰计算应不低于3000。

参照物溶液的制备
取甘油三油酸酯对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml 含0.3mg 的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相25ml，称定重量，超声处理（250W，40kHz）10分钟，取出，称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱，测定，即得。

供试品特征图谱中应呈现5个特征峰，以参照物峰相应的峰为S 峰，计算各特征峰与S 峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内。

规定值为0.594（峰1），0.768（峰2）,0.807（峰3），1.000（峰S）及1.052（峰4）。

对照特征图谱
峰S：甘油三油酸酯
参考色谱柱：Agilent 公司SB-C 18柱（250×4.6mm，5μm）
【含量测定】甘油三油酸酯破壁灵芝孢子粉照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以二氯甲烷-乙腈（32:68）为流动相；蒸发光检测器检测。

理论板数按甘油三油酸酯峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取甘油三油酸酯对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml 含0.3mg 的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品，研细，取约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相25ml，称定重量，超声处理（250W，40kHz）10分钟，取出，称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液5μl 和10μl、供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。

本品按干燥品计算，含甘油三油酸酯（C 57H 104O 6）不得少于3.5%。

多糖破壁灵芝孢子粉对照品溶液的制备取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水使溶解，加水制成每1ml 含0.1mg 的溶液，即得。

标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.10ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.0ml，分别置10ml具塞试管中，各加水至2ml，摇匀，精密加入5%苯酚溶液1ml（临用配制），混匀，再精密加入硫酸5ml，摇匀，置狒水浴中加热20分钟，取出，置冰水浴中冷却5分钟，取出，以相应试剂为空白。

照紫外-可见分光光度法（中国药典2015年版四部通则0401），在488nm波长处测定吸光度。

以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线．
供试品溶液的制备取本品，研细，取约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加水50ml，称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，离心（4000r/min）
10分钟，精密量取上清液2ml，置15ml离心管中，精密加入无水乙醇10ml，摇匀，冷藏1小时，取出，离心（4000r/min）20分钟，沉淀加80%乙醇洗涤两次，离心，弃去上清液，沉淀加热水使溶解，置25ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

测定法精密量取供试品2ml，置10ml 具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入5%苯酚溶液1ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量，计算，即得。

本品按干燥品计算，含多糖以无水葡萄糖（C 6H 12O 6）计，不得少于1.0%。

【性味与归经】
甘、平。

归心、肺、脾经。

【功能与主治】
补气安神，止咳平喘，健脾和胃。

用于心神不宁，失眠心悸，肺虚咳喘，虚劳短气，不思饮食。

【用法与用量】
灵芝孢子粉6～12g，煎服；破壁灵芝孢子粉2～6g，开水冲服。

【处方应付】写灵芝孢子粉应付灵芝孢子粉；写破壁灵芝孢子粉应付破壁灵芝孢子粉。

【贮藏】密封，避光、置阴凉干燥处。

起草说明
【名称】由于本品属于近年来研究使用的品种，古代本草未见相关记载。

本品原药材中文名称，安徽省中药材标准（皖Q/WS-04-2000）收载为“灵芝孢子”；内蒙古自治区中药材标准收载为“灵芝孢子粉”。

《黑龙江省中药饮片炮制规范》2012年版，本品饮片名称为“灵芝孢子粉”。

《浙江省中药饮片炮制规范》2015年版，本品饮片名称为“灵芝孢子粉”。

我省在生产、销售及使用时，均采用“灵芝孢子粉”，作为饮片名称。

综上所述，此次标准制定暂将本品中文名定为“灵芝孢子粉”。

汉语拼音定为“Lingzhibaozifen”。

本品拉丁名，根据饮片拉丁名命名原则，参照《中国药典》2015年一部饮片命名原则，并结合各省市发布的灵芝孢子粉饮片标准，暂将其定名为“GANODERMA SPORE”。

【本草考证】灵芝作为传统中医习用药材，最早见于《神农本草经》，并根据颜色不同将其分成“赤芝、黑芝、青芝、白芝、黄芝、紫芝”六种。

《本草经集注》曰：“此六芝皆仙草之类，俗所稀见，族种甚多，形色环异”。

《本草纲目》曰：“芝类甚多，亦有花实者，本草惟以六芝标名，然其种属不可不识”。

另外《本草纲目》还引《抱朴子》云：“芝有石芝、木芝、草芝、肉芝、菌芝，凡数百种也”。

据此可以推测我国古代本草中记载的芝，种类比较复杂，不仅是菌类之芝。

根据《本草经集注》对赤芝的记载推测，赤芝的代表种可能是多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum（Leyss.ex Fanch）Karst.，而紫芝的代表种可能是多孔菌科真菌紫芝Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang。

【来源】本次标准研究工作收集的灵芝孢子粉和破壁灵芝孢子粉样品，均为赤芝的干燥成熟孢子，未收集到来源于紫芝的灵芝孢子粉样品。

另外，根据生产企业介绍，目前我省所产灵芝孢子粉，均来源于赤芝，故此次标准制定暂不将紫芝作为本品来源载入标准。

【原植物】菌盖木栓质，半圆形或肾形，直
径10～20cm，厚约 1.5～2cm，表面棕黄色或红褐
色，边缘渐趋淡黄色，有同心环纹，微皱或平滑，
具亮漆样光泽。

菌肉由无数菌管组成，白色至浅
棕色，近菌管处淡褐色。

菌柄圆柱形，侧生或偏
生，偶有中生，长10～19cm，直径约1.5～4cm，
红褐色，有漆样光泽。

见图1。

图1赤芝【采收与加工】灵芝弹射孢子时采收，除去杂质，干燥。

【炮制】根据饮片实际生产情况，参考《浙江省中药饮片炮制规范》2015年版，《四川省中药饮片炮制规范》2015年版、《黑龙江省中药饮片炮制规范》2012年版等拟订灵芝孢子粉和破壁灵芝孢子粉饮片炮制方法为“灵芝孢子粉除去杂质。

破壁灵芝孢子粉取灵芝孢子粉，采用物理方法，如挤压、碾磨、剪切及气流粉碎等方式将孢子壁破碎。

过筛，干燥。

”
【产地】主产于安徽、浙江、福建等地，多为人工栽培。

【成分】灵芝孢子粉的化学成分有多种，主要有油脂类、三萜类、多糖类、核苷类、呋喃类衍生物、甾醇类、生物碱类、多肽氨基酸类等，其中油脂类、三萜类、多糖类具有明显的药理活性。

【性状】灵芝孢子粉性状描述，参考查阅到的饮片标准及相关研究资料，其颜色范围基本属于棕色系偏浅，再结合10批灵芝孢子粉样品实物性状，将本品性状描述为“黄棕色的粉末”；将本品摊开，嗅其气味，本品未具有易察觉的气味，口尝也未具有易察觉的味道，故性状描述为“气微，味淡。

”见图2。

破壁灵芝孢子粉性状描述，参考查阅到的饮片标准及相关研究资料，其颜色范围基本属于褐色系偏浅，再结合10批破壁灵芝孢子粉样品实物性状，将本品性状描述为“棕褐色的粉末”；将本品摊开，嗅其气味，本品未具有易察觉的气味，口尝多数样品也未具有易察觉的味道，少数样
品略有苦味，故性状描述为“气微，味淡或微苦。

”见图3。

图2灵芝孢子粉图3破壁灵芝孢子粉【鉴别】（1）显微鉴别灵芝孢子粉为黄棕色的粉末，置显微镜下观察：孢子褐色，呈卵形，长6～11μm，宽4～7μm，顶端平截或钝圆形，孢子壁双层，外壁平滑、透明，内壁淡褐色或近褐色。

见图4。

破壁灵芝孢子粉为棕褐色的粉末，置显微镜下观察：不规则褐色块状物，偶见完整孢子。

见图5。

由于本品破壁后显微特征不明显，故暂不将其显微特征收入标准中。

图4灵芝孢子粉图5破壁灵芝孢子粉（2）薄层色谱鉴别由于灵芝孢子粉和破壁灵芝孢子粉价格较高，市场上存在一些伪品和掺杂现象，而仅从外观性状上看，肉眼很难区分，有鉴于此，研究建立了以灵芝孢子粉对照药材为对照的薄层色谱鉴别。

见图6、7。

S12345678910
图6灵芝孢子粉TLC图
薄层板来源：硅胶G薄层板（默克公司）温度：17℃；湿度：54％
S、灵芝孢子对照药材
1、灵芝孢子粉（批号：YP-LZBZF-01-001）
2、灵芝孢子粉（批号：YP-LZBZF-01-002）
3、灵芝孢子粉（批号：YP-LZBZF-01-003）
4、灵芝孢子粉（批号：YP-LZBZF-01-004）
5、灵芝孢子粉（批号：YP-LZBZF-01-005）
6、灵芝孢子粉（批号：YP-LZBZF-01-006）
7、灵芝孢子粉（批号：YP-LZBZF-01-007）8、灵芝孢子粉（批号：YP-LZBZF-01-008）
9、灵芝孢子粉（批号：YP-LZBZF-01-009）10、灵芝孢子粉（批号：YP-LZBZF-01-010）
S12345678910
图7破壁灵芝孢子粉TLC图
薄层板来源：硅胶G薄层板（默克公司）温度：17℃；湿度：54％
S、灵芝孢子对照药材
1、破壁灵芝孢子粉（批号：YP-PBLZBZF-01-001）；
2、破壁灵芝孢子粉（批号：YP-PBLZBZF-01-002）
3、破壁灵芝孢子粉（批号：YP-PBLZBZF-01-003）；
4、破壁灵芝孢子粉（批号：YP-PBLZBZF-01-004）
5、破壁灵芝孢子粉（批号：YP-PBLZBZF-01-005）；
6、破壁灵芝孢子粉（批号：YP-PBLZBZF-01-006）
7、破壁灵芝孢子粉（批号：YP-PBLZBZF-01-007）；
8、破壁灵芝孢子粉（批号：YP-PBLZBZF-01-008）
9、破壁灵芝孢子粉（批号：YP-PBLZBZF-01-009）；10、破壁灵芝孢子粉（批号：YP-PBLZBZF-01-010）
【检查】杂质本品来源确切，为多孔菌科真菌赤芝的干燥成熟孢子；采收加工过程简单，从客观上说混入其他杂质的可能性较小。

但考虑到本品属于细小的孢子粉末，市场价格较高，在流通过程中难免一些不法商贩掺入一些肉眼难以分辨的杂质（如菌丝，淀粉粒等），故将显微法检查杂质项列入标准。

水分此次标准起草收集的10批灵芝孢子粉水分数据，最高值为8.9%，最低值为7.0%，平均值为8.3%。

鉴于本品属于灵芝的繁殖体，其萌发条件与水分含量密切相关，故结合测定数据，暂将本品水分规定为不得过9.0%。

10批破壁灵芝孢子粉水分数据，最高值为8.6%，最低值为3.4%，平均值为3.8（计算平均值时，将最高值8.3%，作为离群值，未代入计算）。

鉴于孢子破壁后，油脂类及多糖类成分从孢子细胞中释放出来，易吸潮霉变，故结合测定数据，暂将本品水分规定为不得过4.5%。

总灰分此次标准起草收集的10批灵芝孢子粉总灰分数据，最高值为1.5%，最低值为0.7%，平均值为1.1%。

鉴于本品采收加工特点，除去生理性灰分一般不易混入其他杂质，故结合测定数据，暂将本品总灰分规定为不得过1.5%。

10批破壁灵芝孢子粉水分数据，最高值为1.2%，最低值为0.7%，平均值为1.0。

鉴于本品采收加工特点，除去生理性灰分一般不易混入其他杂质，故结合测定数据，暂将本品总灰分规定为不得过1.5%。

酸不溶性灰分此次标准起草收集的10批灵芝孢子粉酸不溶性灰分数据，最高值为0.2%，最低值为0.1%，平均值为0.1%，样品中酸不溶性灰分较少。

鉴于上述总灰分检查项，已将总灰分控制为不得过1.5%，故暂不将酸不溶性灰分列入标准中。

10批破壁灵芝孢子粉酸不溶性灰分数据，最高值为0.2%，最低值为0.04%，平均值为0.1%，样品中酸不溶性灰分较少。

鉴于上述总灰分检查项，已将总灰分控制为不得过1.5%，故暂不将酸不溶性灰分列入标准中。

重金属及有害元素目前，灵芝孢子粉破壁多采用机械研磨的方式，在生产过程中，由于长时间接触金属表面，在很大程度上会导致引入重金属及有害元素的风险，故将破壁灵芝孢子粉中重金属及有害元素规定为：“铅不得过百万分之二；镉不得过千万分之五；砷不得过百万分之一；汞不得过千万分之一；铜不得过百万分之二十；铬不得过百万分之二；镍不得过百万分之一。

”
破壁率灵芝孢子粉破壁与否，人体对其功效成分吸收有直接影响。

由于灵芝孢子粉破壁技术需要花费较多的人力物力，且破壁与否仅从外观形状较难区分，因此，目前市场上经常出现一些未破壁或破壁不完全的灵芝孢子粉冒充破壁灵芝孢子粉的现象。

有鉴于此，参照相关技术标准
制定了破壁灵芝孢子粉破壁率的检查方法。

见图8、9。

图8
对照药材图9供试品过氧化值灵芝孢子粉破壁后，其所含的油脂类成分易氧化变质，影响品种内在质量，因此有必要在标准中列入过氧化值检查项。

10批破壁灵芝孢子粉水分数据，最高值为0.18，最低值为0.05，平均值为0.09。

根据样品实际情况，再结合测定数据，暂将本品过氧化值规定为不得过0.20。

微生物限度破壁灵芝孢子粉服用方式为开水冲服，故应参照中国药典2015年版四部散剂微生物限度检查测定，应符合规定。

【特征图谱】为了增加破壁灵芝孢子粉质量标准的专属性和可控性，建立特征图谱检测方法。

灵芝孢子粉的主要化学成分为油脂类。

针对此类成分，采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent SB C 18柱，5μm（250×4.6mm），建立了特征图谱的检测方法。

不同产地10批破壁灵芝孢子粉供
试品可以确定5个共有特征峰，分别是峰1、峰2、峰3、峰S 及峰4。

以参照物峰相应的峰为峰S，计算各峰与峰S 的相对保留时间，其相对保留时间分别为0.594（峰1），0.768（峰2）,0.807（峰3），1.000（峰S）及1.052（峰4），10批样品相对保留时间变异值在±5%范围内。

见图10、
11。

方法起草过程中，通过耐用性试验发现其他品牌的色谱柱较难达到分离要求。

见图12、13。

【含量测定】甘油三油酸酯破壁灵芝孢子粉灵芝孢子粉的化学成分有多种，主要有油脂类、三萜类、多糖类、核苷类、呋喃类衍生物、甾醇类、生物碱类、多肽氨基酸类等，其中油脂类、三萜类、多糖类具有明显的药理活性。

灵芝孢子粉经破壁后其所含油脂类成分能被人体较好地吸收利用，但同时灵芝孢子粉破壁后由于油脂类成分被释放出来，易氧化而变质。

故选择破壁灵芝孢子粉中油脂类主要成分甘油亚油酸作为含量测定指标，可以较好地控制本品的内在品质。

根据不同产地10批破壁灵芝孢子粉样品测定数据，将本品甘油三油酸酯含量限度定为：本品按干燥品计算，含甘油三油酸酯（C 57H 104O 6），不得少于3.5%。

图10甘油三油酸酯参照物色谱图
图11破壁灵芝孢子粉供试品色谱图
图12岛津VP-ODS C18柱5μm（250×4.6mm）供试品色谱图
图13Thermo Hypersil Gold C18柱5μm（250×4.6mm）供试品色谱图
多糖破壁灵芝孢子粉多糖作为灵芝孢子粉中主要活性成分，具有抗肿瘤、抗氧化自由基、抗衰老、提高免疫力等药理活性。

测定灵芝孢子粉中多糖含量对其活性成分分析和质量控制具有重要意义。

由于灵芝孢子粉所含多糖结构较为复杂，且目前对多糖含量测定方法多采用比色法，因此拟建立多糖总量含量测定方法。

根据不同产地10批破壁灵芝孢子粉样品测定数据，将本品多糖含量限度定为：本品按干燥品计算，含多糖以无水葡萄糖（C 6H 12O 6）计，不得少于1.0%。

【性味与归经】参照《中国药典》2015年版一部“灵芝”项下“性味与归经”、综合《中药大辞典》、《中华本草》、《浙江省中药饮片炮制规范》2015年版、《四川省中药饮片炮制规范》2015年版等拟订为“甘，平。

归心、肺、肝、肾经”。

【功能与主治】参照《中国药典》2015年版一部“灵芝”项下“功能与主治”、综合《中药大辞典》、《中华本草》、《浙江省中药饮片炮制规范》2015年版、《四川省中药饮片炮制规范》2015年版等拟订为“补气安神，止咳平喘，健脾和胃。

用于心神不宁，失眠心悸，肺虚咳喘，虚劳短气，不思饮食”。

【用法与用量】参照《中国药典》2015年版一部“灵芝”项下“用法与用量”、综合《中药大辞典》、《中华本草》、《浙江省中药饮片炮制规范》2015年版、《四川省中药饮片炮制规范》2015年版等拟订为“灵芝孢子粉6～12g，煎服；破壁灵芝孢子粉2～6g，开水冲服”。

【处方应付】写灵芝孢子粉应付灵芝孢子粉；写破壁灵芝孢子粉应付破壁灵芝孢子粉。

【贮藏】参照《中国药典》2015年版一部“灵芝”项下“贮藏”、综合《中药大辞典》、《中华本草》、《浙江省中药饮片炮制规范》2015年版、《四川省中药饮片炮制规范》2015年版等，并结合饮片贮藏实际情况，拟订为“密封，避光、置阴凉干燥处”。

起草单位：安徽省食品药品检验研究院
安徽金寨乔康药业有限公司起草人：班永生郭翠平
复核单位：安徽省食品药品检验研究院复核人：韩玲玲
审核单位：安徽省食品药品检验研究院审核人：张亚中鲁轮。