Sevag法脱蛋白-多糖提取

Sevag+酶法除玉米须多糖中蛋白质工艺的研究

Sevag+酶法除玉米须多糖中蛋白质工艺的研究【摘要】目的：本论文是关于玉米须多糖的脱蛋白工艺研究。

方法：实验以脱蛋白率和多糖剩余率及由此计算所得的综合评分为指标，采用Sevag+酶法脱蛋白。

结果：确定最佳脱蛋白条件酶底比0.25%，温度50℃，振荡时间8min，脱蛋白次数2次。

最终多糖纯度提高为37.77%,损失率为5.16%。

结论：本法可作为玉米须多糖的脱蛋白的工艺方法。

【关键词】玉米须多糖；sevag；木瓜蛋白酶；脱蛋白玉米须(Stigma maydis)是禾本科植物玉蜀黍的花柱和柱头，味淡、性平，有利尿、平肝、利胆等功效，用于治疗糖尿病、黄疸、麻疹等症,具有良好的市场开发前景及科研价值。

由于单纯的Sevag方法脱蛋白要想达到理想的效果需要进行脱蛋白的次数较多，造成多糖的浪费，[1]单纯的木瓜蛋白酶处理后期酶解将产生游离蛋白质，[2]故本课题探讨玉米须多糖sevag+酶法除蛋白工艺方法，[3]未见文献报道，以便为玉米须资源高效开发利用提供基础理论资料。

1. 实验条件1.1 实验原料：松原玉米须1.2 实验仪器与设备循环水多用真空泵 SHB－ⅢA型：郑州长城科工贸有限公司；台式离心机 LDZ5-2型：北京医用离心机有限公司；紫外可见分光光度计 752型：山东高密彩虹分析仪器有限公司；恒温水浴锅W2－100S型：余姚新波仪表公司；真空干燥箱 DZF-6020：上海一恒科技有限公司。

1.3 实验药品与试剂氯仿（AR）：天津市大茂化学试剂厂；苯酚（AR）：天津市瑞金特化学品有限公司；浓硫酸（AR）：哈尔滨化工化学试剂厂;正丁醇(AR): 天津市大茂化学试剂厂.2. 实验步骤及方法2.1 方法学研究实验2.1.1 葡萄糖标准曲线依上述测定法测得吸光度值，得到回归方程为:A=5.945x-0.0377,r=0.9995。

线性范围为0.06-0.14 mg/mL。

2.1.2 标准牛血清白蛋白曲线标准蛋白质量（mg）做横坐标，吸光度（A）作为纵坐标，得到回归方程：=xy；线性范围为0.12-0.25 mg/mL。

sevage除蛋白的原理

sevage除蛋白的原理
Sevage方法，又称为溶剂萃取法，是一种常用的除蛋白方法。

其基本原理是通过在有机溶剂中溶解蛋白质，从而使其与水分离。

不同于传统的沉淀法或者超滤法，Sevage方法不会破坏蛋白质的性质，因此得到的蛋白质较纯，更适合后续的分离和检测。

Sevage方法的操作步骤主要包括溶解蛋白、分离、再结晶等几个步骤。

下面将分别介绍。

1.溶解蛋白
首先需要将蛋白质样品加入到有机溶剂中，常见的有机溶剂包括甲醇、氯仿等。

同时在样品中加入盐类，如氯化钠、硫酸铵等，以提高蛋白质的溶解度。

在此过程中，需要注意的是，溶剂的用量要充分搅拌均匀，一般情况下可以利用超声波加速样品中蛋白的溶解。

2.分离蛋白
在样品中加入了有机溶剂后，蛋白质会与溶剂中的水相分离。

此时，通过离心或者过滤等方式，将蛋白质与水相分离，从而得到蛋白质所在的有机相溶液。

需要注意的是，分离后的有机相溶液不应含有任何悬浮物，否则会影响后续的实验结果。

3.再结晶
得到蛋白质所在的有机相溶液后，需要使用一定的方法将蛋白质分离出来。

常用的方法有两种：一种是使有机溶液蒸干，从而得到固态的蛋白质样品；另一种方法是在有机相溶液中加入另一种能够使得蛋白质从有机相溶液中析出的溶剂，如乙醇、微量醚等。

这样即可得到纯净的蛋白质样品。

总之，Sevage方法是一种比较简单易行且可靠的蛋白质提取方法，得到的蛋白质质量较高，并且方法操作相对简单。

但是，该方法也存在一些局限性，如无法应用于高分子量的蛋白质提取，有机溶液的剧毒性也需要引起注意。

多糖提取分离的基本流程

(1)硫酸-蒽酮试剂的配制
称取0. 1g蒽酮至容量瓶中，加少量浓硫酸，搅拌使其溶解，加浓硫酸至50ml摇匀，得0.2%的硫酸-蒽酮试剂，尽量现配先用，也可放4摄氏度冷藏备用，若颜色变绿，则说明已变质不能使用。
(2)方法
馏分隔管检测，每管取0.5ml，在冰浴中加入2ml硫酸-蒽酮试剂，然后在沸水中煮10~15min, 自来水冷却，放至室温。
(3)紫外检测
主要看610nm出吸收值，合并馏分。
(五)凝胶G进一步纯化
通常采用G-100或G-200不断进效液相凝胶柱进行检测
<2>洗脱
样品浓度在20mg/ml左右。先用水洗脱，再用NaCl梯度洗脱，小试时的梯度应密集一些，0.05, 0.1, 0.3, 0.5mol/L洗脱，每瓶8ml, 10min左右一瓶即可。根据紫外检测的结果，再进行梯度的修改。
< 3>合并流分
硫酸-蒽酮法结合紫外检测
(四)离子交换纤维素(DEAE-纤维素)进行初步分离
一般选用DE-52型离子交换纤维素
<1 >柱的预处理
加蒸馏水浸泡过夜，期间换几次水，每次除去细小颗粒，，用0.5mol/LHCl溶液浸泡1~2h, 蒸馏水漂洗至中性;再用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1~2h, 蒸馏水漂洗至中性。
(一)提取
水提得到的粗多糖水溶液，加入95%乙醇使含醇量达80%，4摄氏度静置过夜，多糖析出。减压抽滤，用95%乙醇洗至上清液无色，挥干醇。
(二)除蛋白
这是至关重要的一步，由于蛋白是大分子，它的存在会干扰多糖的纯化。一般选用sevage法萃取或离心，多糖浓度为1mg/ml, 氯仿-正丁醇比例通常在3:1~5:1之间，变性的蛋白质一般在两相交界处产生一条白色的带。建议进行小试，确定最佳比例，同时确定除蛋白的次数，如果含量较多建议八次以上，含量较少的话四到五次即可。

钝顶螺旋藻多糖sevage法脱蛋白工艺的研究

2
内蒙古石油G．r - ．
2011年第10期
破壁，然后用98％的工业酒精按1：8的比例( 藻粉：
酒精) 65℃脚旨．2次，抽滤后残渣65℃烘干后按20；
1的水料比80℃浸提8 h，抽滤弃去残渣后得多糖提取液，用旋转蒸发仪将其浓缩至原体积的1／3备用。
1．4多糖含量的测定
苯酚一硫酸法‘¨] ，标准曲线见图 1。 1．5蛋白含量的测定
3
4
5
筑谤歪了醇体积磁
豳3氯仿正丁醇体积比对脱蛋白效果的影响
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2
3
Seva ge斌翻添燕量结
图4 Sevage试剂添加量对脱蛋白效果的影响
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20
30
40
振摇时间／r ai n
毯5振摇时闫对脱蛋白效鬃静影响
2．4脱蛋白次数对螺旋藻多糖脱蛋白效果的影响
表2
溉交试验结莱与分析
注：鲞试验采甩综合加权评分法，权熏来数均为 o．5，分别把两项中薰太番辱稳每定为100分，各号袋等式辞务：蓉奢蟹分=《筵蛋鸯睾7§筑00)*100" 筑s +( 多耱奢量／91．oo) -l OO-o．5
由图4结果可见，随着Sevage 试剂添加量不断加大，蛋白脱除率反而逐渐下降，而多糖损失率变化
2011年第10期
穆文静等钝顶螺旋藻多糖Seva ge 法脱蛋白工艺的研究
3
不大，鼠均低于l o％。Se vage试剂的添加量是多糖提取液体积的1倍时脱蛋白效果最好，其蛋白脱除率为27．9％，分别较2倍、3倍添加量时蹇7。9％、21． 6％，不同添加量的脱蛋自结果相比藏异显著( P< 0．05) 。 2。3振砖阕对螺旋藻多糖脱蛋白效果酶影响

多糖提取方案(7月)

多糖提取方案方案一：热水侵提法材料5g→以1：10v加蒸馏水90℃回流4h→8000r/min,10min离心→沉淀重复三次→合并上清浓缩（抽滤，蒸发）→sevag去蛋白（正丁醇：氯仿=4：1，sevag:滤液=1：5，分液漏斗中反复进行，直到分界面处无白色混悬）→8000r/min离心10min→上清浓缩（抽滤，蒸发）→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案二：水提醇沉法材料5g→加10ML 85%乙醇回流2h(一次)→以1：10v加蒸馏水90℃回流4h→8000r/min,10min离心→沉淀（重复3次）→合并上清浓缩（抽滤，蒸发）→以1：5v加95%乙醇，4℃，静置24h→8000r/min离心→沉淀分别用无水乙醇，丙酮，乙醚抽洗（重复3次）→sevag去蛋白（正丁醇：氯仿=4：1，sevag:滤液=1：5，分液漏斗中反复进行，直到分界面处无白色混悬）→8000r/min离心10min→上清浓缩（抽滤，蒸发）→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案三：酶+热水侵提材料5g→以1：10v加蒸馏水，调节pH=6.0→加入1%复合酶，50℃水浴1h→90℃回流4h →8000r/min,10min离心→沉淀（重复3次）→合并上清浓缩（抽滤，蒸发）→sevag去蛋白（正丁醇：氯仿=4：1，sevag:滤液=1：5，分液漏斗中反复进行，直到分界面处无白色混悬）→8000r/min离心10min→上清浓缩（抽滤，蒸发）→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案四：微波辅助法材料5g→以1：10v加蒸馏水→微波低火，3min→90℃回流4h→8000r/min,10min离心→沉淀（重复3次）→合并上清浓缩（抽滤，蒸发）→sevag去蛋白（正丁醇：氯仿=4：1，sevag:滤液=1：5，分液漏斗中反复进行，直到分界面处无白色混悬）→8000r/min离心10min→上清浓缩（抽滤，蒸发）→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案五：超声波辅助法材料5g→以1：10v加蒸馏水→超声波600w，20min→90℃回流4h→8000r/min,10min离心→沉淀（重复3次）→合并上清浓缩（抽滤，蒸发）→sevag去蛋白（正丁醇：氯仿=4：1，sevag:滤液=1：5，分液漏斗中反复进行，直到分界面处无白色混悬）→8000r/min离心10min→上清浓缩（抽滤，蒸发）→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案六：高浓度酸预处理法20mg材料→加2ml，90%的甲酸溶液，混匀，→100℃沸水浴2h→旋转蒸发3次以除去甲酸→加6mol./L盐酸10ml，真空封管，置于80℃，水浴2.5h→调pH至中性6.5-7.0→用磷酸缓冲液(pH=7.0)定容50ml方案七：碱提取法材料5g→以1：10v加0.5mol/lNaOH水溶液→4℃中提取，离心取上清→用36%乙酸中和地白的胶状沉淀→用水洗涤得到多糖→浓缩（抽滤，蒸发）→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案八：盐提+水提+碱提+酸提材料5g→乙酸乙酯，丙酮索氏提取4h,去脂→1:10v，0.9%NaCl水溶液过夜→均浆，离心，重复3次，该上清为PC1→残渣于高压锅中120℃热水提30min，重复3次→上清过DEAE-Sephadex(A-50),柱，分别用磷酸缓冲液和1mol/Lnacl水溶液淋洗多糖PC2和酸性多糖PC2-A→0.5mol/lNaOH水溶液于4℃从以上残渣中提取上清，用36%乙酸中和地白的胶状沉淀→用水洗涤得到多糖PC3→残渣用88%甲酸提取后用水沉淀得到多糖PC4→分别测多糖的含量。

植物多糖提取液的几种脱蛋白方法的比较分析

2004年8月第27卷第8期重庆大学学报Journal of Chongqing UniversityAug.2004V ol.27　N o.8 文章编号:1000-582X(2004)08-0057-03植物多糖提取液的几种脱蛋白方法的比较分析Ξ李知敏,王伯初,周　菁,彭　亮(重庆大学生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室,重庆　400030)摘　要:多糖对肿瘤、病毒、心血管等方面具有独特的生物活性,且细胞毒性很低,因此多糖的分离及纯化一直是一个很有意义的研究课题。

实验以多糖损失率和脱蛋白率(r)为衡量指标,通过对几种脱蛋白方法的比较,优化出植物多糖提取液的脱蛋白方法,为多糖的纯化提供了一定的参考。

选用了3种较为常见的方法:三氯乙酸法、盐酸法及沙维积法(Sevag法)对植物多糖提取液进行脱蛋白处理。

三氯乙酸法、盐酸法及Sevag法的脱蛋白率分别为46.1%、72.5%和42.3%,多糖损失率分别为6.1%、15.1%和14.3%。

盐酸法脱蛋白率高,但它的多糖损失率较高;三氯乙酸法较温和,但除蛋白效率不高;Sevag法的脱蛋白效果不及前两种方法。

关键词:多糖;提取液;脱蛋白;比较中图分类号:Q-331文献标识码:A 糖类又称为碳水化合物,是植物光合作用的初生产物,是一类最丰富的天然产物,除了作为植物的贮藏养料和骨架之外,还通过它们进行合成了植物中的绝大部分成分[1]。

多糖在植物体内广泛存在,并且含量较高[2]。

20世纪50年代末对真菌多糖的抗癌效果的发现使人们开始了多糖系列的化学研究。

日本从20世纪60年代开始研究担子菌多糖的药物活性,并开发了一些有名的药物;中国对多糖的研究始于20世纪70年代,且发展很快。

到目前为止,人们发现多糖对肿瘤、病毒、心血管、抗衰老等方面有独特的生物活性[3-15],并且已有300多种多糖类化合物从天然产物中被提取出来,其中从中药中获得的水溶性多糖最为重要[3]。

SEVAG法去除白及多糖中蛋白的研究

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０２
由试验数据可知，次振摇时问为３ｎ时，问加每０时
后将水相与氯仿相分开。２２３取３ｍ水相溶液置于比色皿中，７１．．ｌ用５紫
效能。近年来又发现了白及具有抗肿瘤的作用因此对自及有效成分进行研究，开发其在医学上的应用价值是很有意义的。对白及多糖的研究就是其中之一。要对白及多糖的结构、成等项目进行组测定分析，须先将白及粗多糖进行纯化。但粗多糖中含有游离蛋白，响多糖的分离提纯，此在提影因纯前需将游离蛋白除去。Ｓｖｇ法是去除游离蛋白ｅａ的有效方法。在白及粗多糖溶液中加入氯仿一正丁醇混合溶液进行充分振摇，游离蛋白变性成为将的。 …本文采用Ｓｖｇ法对白及粗多糖中的游离蛋ｅａ号臼白进行去除，发现经过一次氯仿一正丁醇溶液处理后的多糖溶液中的含有游离蛋白，而去除中所用的氯仿相中经检测含有一定量口多糖。针对所发现的／一拉的问题，通过各种条件的试验并对结果进行分析，找出了Ｓｖｇ法在自及多糖游离蛋白去除的实际ｅａ应用条件。

Sevag法脱蛋白-多糖提取

《多糖提取（Sevag法去蛋白）》
1、实验原理介绍：
Sevag法是去除游离蛋白的有效方法。

在粗多糖溶液中加入氯仿—正丁醇混合溶液进行充分振摇,将游离蛋白变性成为不溶性物质,经离心分离去除,可达到去除的目的。

2、实验方法及步骤
具体操作可以按下述操作试一试：取粗多糖溶液4 ml ,氯仿—正丁醇(预先配制成体积比为4∶1混合液)溶液1ml,置于具塞试管中,充分振摇30min后,经离心机离心1min,然后将水相与氯仿相分开。

将水相再加入相当于其体积的氯仿—正丁醇溶液,重复上述过程,共计重复三次。

多糖溶液体积较大时也可以采用分液漏斗，人工进行剧烈振荡后直接分离，注意振荡强度与分离效率关系很大。

操作过程中蛋白质多出现在两相界面处。

3、实验结果及讨论
1、需要取上清液重复加入sevage试剂我重复了十一次每次振摇15分在紫外测250－280没有吸收峰才可确定除净了蛋白。

2、Sevag法较为温和，对多糖的结构影响不大，但效率较低，往往重复五次以上才能达到理想效果。

考虑较为剧烈但效率更高的三氯乙酸法除蛋白。

3、糖蛋白不是那么容易除干净的，通常大量取多糖溶液(5%)按，用三角瓶在摇床上摇2h再放离心管里离心，得到水层再重复,如果蛋白含量多的话,除一两个星期的.直到震荡后水层上不再有白色泡茉为止。

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石斛多糖提取工艺的研究

石斛多糖提取工艺的研究目的:对石斛多糖提取工艺进行优化。

方法:比较不同浸提温度、时间和除蛋白方法对多糖得率的影响,优化工艺。

结果:石斛多糖最佳提取工艺条件为90℃水浸提3～4 h,料水体积比为1∶50,采用Sevag法脱蛋白,样品-Sevag溶液=1∶1、氯仿-正丁醇=10∶2.5,提取时间为30 min。

结论:此方法提取石斛多糖得率高,为理想的提取条件。

[Abstract] Objective: To study optimum extracted-conditions of polysaccharide in Denderobiun. Methods: The most yield of polysaccharide was gotten which volume ratio of dendrobium to water, distilling temperaturethe and method of isolating protein were used. Results: The effects was best when volume ratio of dendrobium to water was 1∶50, distilling at 90 ℃for 3-4 hours, isolating protein by seveg method in the mixture composed of 50% sample and 50% sevag solution, the ratio of chloroform and n-butano was 10∶2.5, the extraction technology was 30 min. Conclusion: The extraction method is perfect because the most yield of polysacchareide is gotten.[Key words] Dendrobium; Polysaccharide; Extraction technology石斛属植物具有很高的药用价值。

Sevag法脱鹿药多糖蛋白工艺条件优化

Sevag法脱鹿药多糖蛋白工艺条件优化赵淑杰;郑丽宁;路飘飘;洪波;杨利民;韩忠明【摘要】To optimize the technology of removing protein from crude polysaccharide of Smilacina japonica.The Sevag method was used remove the protein, bovine serum albumin as the standard test protein content, glucose as the standard test polysaccharide content.The effect of removing protein according to the index of the removal protein rate, the polysaccharide retention rate and comprehensive score, through orthogonal experiment study the ratio of chloroform and nbutyl alcohol, the ratio of polysaccharide solution and Sevag solution, oscillation time, elution times and so on.The optimizing parameters for the removing protein of Smilacina japonica polysaccharide were chloroform∶butanol=4∶1, polysaccharide solution∶ Sevag reagent =2∶1, 6 times, 15 min of each time.According to the comprehensive evaluation, the significant factors are the oscillation time and the frequency.This optimum technology of Sevag method to removing protein is stable, and the method is simple and effective.It can improve the purity of polysaccharide.%为了优化Sevag法脱鹿药粗多糖蛋白工艺条件,以牛血清白蛋白为标准品测定蛋白质含量,以葡萄糖为标准品测定多糖含量,以蛋白质脱除率、多糖保留率及综合评分为指标,通过正交试验考察氯仿与正丁醇的比例、多糖液与Sevag液的比例、振荡时间、洗脱次数四因素对脱蛋白效果的影响,确定鹿药多糖脱蛋白的最佳工艺条件.结果表明Sevag法脱鹿药多糖蛋白的最佳条件为氯仿∶正丁醇=4∶1,多糖溶液(2 mg/mL)∶Sev ag试剂=2∶1,振荡时间15 min,洗脱6次,从综合评分来看,主要的影响因素是脱蛋白次数和振荡时间.Sevag法脱鹿药多糖蛋白的方法简便,工艺稳定且可有效提高多糖的纯度.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2017(051)004【总页数】5页(P25-29)【关键词】鹿药;多糖;Sevag法;脱蛋白;工艺优化【作者】赵淑杰;郑丽宁;路飘飘;洪波;杨利民;韩忠明【作者单位】吉林农业大学资源与环境学院,长春 130118;吉林农业大学资源与环境学院,长春 130118;吉林农业大学资源与环境学院,长春 130118;吉林农业大学资源与环境学院,长春 130118;吉林农业大学中药材学院,长春 130118;吉林农业大学中药材学院,长春 130118【正文语种】中文【中图分类】R284.1多糖为人体必需的生物大分子之一，在细胞识别、生物体受精、生长发育、神经系统和免疫系统衡态的维持等方面都起着重要作用［1］。

三角帆蚌多糖的微波辅助提取及脱蛋白工艺

三角帆蚌多糖的微波辅助提取及脱蛋白工艺乔德亮;孙传伯;何晓梅;韦传宝;朱旺生【摘要】运用微波辅助处理、热水浸提、乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白的方法提取制备三角帆蚌多糖.在单因素实验基础上,运用正交实验对三角帆蚌多糖微波辅助提取及Sevag法脱蛋白的工艺参数进行优化.结果显示:三角帆蚌多糖微波辅助提取的最优条件为:水料比15 mL/g、提取温度50℃、微波处理时间150 s、微波功率1080W.在此条件下,多糖的提取得率为4.06％.三角帆蚌多糖Sevag法脱蛋白的最优参数组合为:正丁醇与氯仿体积比0.20、正丁醇-氯仿混合液用量占多糖溶液的体积百分比20％、脱蛋白振摇时间10 min、脱蛋白次数8次.在此条件下,多糖的蛋白去除率、多糖保留率分别是52.24％和65.13％.【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2014(026)006【总页数】8页(P902-908,925)【关键词】三角帆蚌;多糖;微波;提取;脱蛋白【作者】乔德亮;孙传伯;何晓梅;韦传宝;朱旺生【作者单位】皖西学院生物与制药工程学院;皖西学院农业工程设计与技术服务中心,六安237012;皖西学院生物与制药工程学院;皖西学院生物与制药工程学院;皖西学院生物与制药工程学院;皖西学院生物与制药工程学院;皖西学院农业工程设计与技术服务中心,六安237012【正文语种】中文【中图分类】TS201.1多糖乃生物体内重要的生理活性物质之一。

多糖提取时采用常规的“水提醇沉”法，所需提取温度较高、提取时间较长，而且提取得率也较低。

微波辅助提取可以提高多糖的提取得率，此法是高效提取多糖的技术措施之一，已被广泛应用于多糖的提取中［1，2］。

多糖提取过程中一般需要进行脱蛋白处理，脱蛋白的方法主要有Sevag 法、三氯乙酸法以及蛋白酶法等，Sevag 法因其具有反应条件温和、几乎不破坏多糖结构等优点而被广泛采用［3，4］。

三角帆蚌(Hyriopsis cumingii Lea)俗称三角蚌、珍珠蚌等，为我国特有的淡水贝类，也是我国最主要的珍珠养殖母蚌之一，其养殖业已分布浙江、安徽、湖北、湖南、江苏、江西、福建等多个省份。

Sevag法去除白及多糖中蛋白的研究

Sevag法去除白及多糖中蛋白的研究3齐慧玲1,魏绍云1,王继伦1,高波2,鲁格2,苏同芳2(1.天津市职工化工学院　天津　3002212.南开大学分子生物学研究所　天津　300071)摘要:本文采用Sevag法对白及多糖中的游离蛋白进行去除,并根据不同条件时的去除效果进行分析,找出了Sevag法在白及多糖游离蛋白去除中的实际应用条件。

关键词:Sevag法、白及多糖、游离蛋白、吸光度中图分类号:T Q028.3 文献标识码:B 文章编号:1008-1267(2000)03-0020-02Ξ1　前言白及是一种药材,具有收敛止血,消肿生肌的效能。

近年来又发现了白及具有抗肿瘤的作用。

因此对白及有效成分进行研究,开发其在医学上的应用价值是很有意义的。

对白及多糖的研究就是其中之一。

要对白及多糖的结构、组成等项目进行测定分析,须先将白及粗多糖进行纯化。

但粗多糖中含有游离蛋白,影响多糖的分离提纯,因此在提纯前需将游离蛋白除去。

Sevag法是去除游离蛋白的有效方法。

在白及粗多糖溶液中加入氯仿—正丁醇混合溶液进行充分振摇,将游离蛋白变性成为不溶性物质,经离心分离去除,可达到去除的目的。

[1]本文采用Sevag法对白及粗多糖中的游离蛋白进行去除,发现经过一次氯仿—正丁醇溶液处理后的多糖溶液中的含有游离蛋白,而去除中所用的氯仿相中经检测含有一定量的多糖。

针对所发现的问题,通过各种条件的试验并对结果进行分析,找出了Sevag法在白及多糖游离蛋白去除的实际应用条件。

2　实验2.1　仪器及试剂800型离心沉淀器(4000r/min,济南市医疗器械厂)、751G型紫外分光光度计(上海分析仪器厂)。

白及粗多糖(南开大学分子生物学研究所提供)、氯仿(AR,天津市化学试剂一厂)、正丁醇(AR,天津天泰精细化学品有限公司进口分装)。

2.2　实验步骤2.2.1　准确称取白及粗多糖样品0.0370g,室温下加入少量去离子水溶解,转置于25ml容量瓶中稀释至刻度,摇匀。

酶-Sevag法除酸浆果实多糖蛋白工艺的研究

酶-Sevag法除酸浆果实多糖蛋白工艺的研究徐丹鸿;王爽;林道鹏【摘要】[目的]优化木瓜蛋白酶-Sevag法去除酸浆(Physalis alkekengi L.)果实多糖中蛋白质的工艺条件.[方法]以蛋白脱除率和多糖保留率为指标,通过对酶解温度、时间、pH及酶添加量进行单因素试验及L9(34)正交试验确定酶解条件,并结合Sevag试剂除蛋白.[结果]各因素对酶解法脱酸浆果多糖液蛋白的影响程度大小依次为:酶解温度、酶解时间、pH、酶添加量.在酶解温度60℃、酶解时间2.0h、pH 6.0、酶添加量2.5％条件下,粗多糖液蛋白脱除率为62.07％,多糖保留率为93.16％.原料经酶处理后,可使游离蛋白和部分与多糖结合的蛋白质被水解,再经Sevag试剂(氯仿∶正丁醇为4∶1)处理2次,蛋白质脱除率为81.65％,多糖保留率为89.43％,可达到较理想的脱蛋白质效果和较高的粗多糖保留率.[结论]采用酶和Sevag试剂相结合的方法除酸浆果多糖中的蛋白质,效果良好,操作简单,可为酸浆果多糖的纯化提供理论依据,但其对多糖结构和生物活性的影响还有待于进一步研究.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2016(000)004【总页数】4页(P113-115,132)【关键词】酸浆果多糖;脱蛋白;木瓜蛋白酶;Sevag法【作者】徐丹鸿;王爽;林道鹏【作者单位】黑龙江生态工程职业学院,黑龙江哈尔滨150025;黑龙江生态工程职业学院,黑龙江哈尔滨150025;黑龙江生态工程职业学院,黑龙江哈尔滨150025【正文语种】中文【中图分类】S509.9酸浆(Physalis alkekengi L.)在我国分布广泛，尤其是在东北地区，具有对气候适应性强，耐寒、耐旱，易于人工栽培等特点，其全草皆可入药，是我国医书中记载的一种常用中药[1]。

关于酸浆果实中的活性成分，已有学者对酸浆果实的多糖进行了分析和测定[2-3]，但从天然动植物中提取的多糖，常与蛋白形成糖蛋白复合物，使蛋白质的脱除比较困难，因此脱蛋白是多糖制备过程中一个重要的环节[4]。

铁皮石斛多糖Sevage法脱蛋白效果分析

铁皮石斛多糖Sevage法脱蛋白效果分析潘雪丰【摘要】Polysaccharides extracts from Dendrobium candidum Wall. ex Lindll were hydrolyzed with equimolar solutions of cellulase and pectinase. The efficiency of removing proteins from the polysaccharide extracts using a deproteinization Sevage method was inves-tigated in this study. The results showed that one time of sevage treatment resulted in removal of 21.9% of the protein, but also lost about 28.3% of the polysaccharides, from the sugar extracts. No significant increases in protein removal were observed with two or more sevage treatments, which adversely caused polysaccharide losses to 56.6%-62.1%. Therefore, we recommend that the depro-teinization Sevage method be applied only once during the protein removal process from the polysaccharide extracts.%采用纤维素酶与果胶酶等量混合酶解法提取铁皮石斛多糖,分析Sevage法脱多糖溶液蛋白效果. 结果表明,Sevage法脱多糖溶液蛋白1次,脱蛋白率为21.9%,多糖损失率为28.3%;脱蛋白2次或2次以上,脱蛋白率提高不明显,但多糖损失严重,损失率高达56.6%-62.1%. 因此,铁皮石斛多糖Sevage法脱除蛋白次数以1次为宜.【期刊名称】《亚热带农业研究》【年(卷),期】2015(011)004【总页数】4页(P258-261)【关键词】铁皮石斛;多糖;Sevage法;酶解法【作者】潘雪丰【作者单位】福建卫生职业技术学院药学系,福建福州350101【正文语种】中文【中图分类】R284.2铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall.ex Lindll)，属兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobbium)多年生附生型草本植物，主要分布于安徽、浙江、福建等地。

脱蛋白法和脱色法纯化珠子参多糖的工艺研究

脱蛋白法和脱色法纯化珠子参多糖的工艺研究刘小琴，陈涛，巩仔鹏*，唐金毅（三峡大学医学院，湖北宜昌 443002）摘要：目的优化珠子参粗多糖的纯化工艺。

方法主要对珠子参多糖提取中脱蛋白和脱色方法进行优化，从而得到最佳纯化工艺。

结果在30 ℃加入链酶蛋白酶和三氯乙酸于冰箱放置过夜，再采用Sevage 法共同除蛋白的方法效果最好；脱色则在30 ℃用7.5%~8%H 2O 2溶液最好。

结论本方法用于脱色及去除珠子参粗多糖中蛋白质成分切实可行，可作为纯化珠子参粗多糖的纯化手段之一。

关键词：珠子参粗多糖；脱蛋白；纯化中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2009)05-0050-04Studies on the Puri ﬁ cation Technology of Rhizoma Panzcis Majoris Polysaccharide by Deproteinization and Decolorization MethodsLIU Xiao-qin, CHEN Tao, GONG Zi-peng, TANG Jin-yi( Medical College, Three Gorges University, Yichang 443002, China )Abstract: Objective To optimize the purification technology of Rhizoma Panzcis Majoris crude polysaccharide. Methods The main purpose is to optimize the way of deproteinization and decolorization.Chiefly, we compares two methods which are Sevage and TCA, in order to find out the best way to optimize removing proteins. Secondly, we control one variable to get the best usage amount. Then, in order to ﬁ nd the best technology of decolorization we compare three decolored approachs as follows resin, hydrogen peroxide and absorbite. Conclusion Using Sevage and TCA together with pronase to remove proteins and using 7.5%~8% hydrogen peroxide to decolor is the best way to optimize puri ﬁ cation technology of Rhizoma Panzcis Majoris polysaccharide. Results The method can be used effectively to decolor and remove proteins from Rhizoma Panacis Majoris crude polysaccharide as well as an effective puri ﬁ cation method.Key words: Rhizoma Panzcis Majoris crude polysaccharide; deproteinization; puri ﬁ cation收稿日期：2008-12-31基金项目：湖北省自然科学基金资助项目，（NO. 2006ABA200）作者简介：刘小琴（1956-）女，副教授，主要从事天然产物的研究。

sevage法除蛋白的步骤

sevage法除蛋白的步骤Sevage 法呀，那可是在生物化学领域中挺常用的一种除蛋白的方法呢！咱就来好好聊聊这个。

首先呢，得把咱要处理的样本准备好呀，这就好比要烹饪一道美味佳肴，得先有新鲜的食材不是。

然后就是关键的步骤啦，把样本和Sevage 试剂混合起来。

这就像是一场特别的舞蹈，样本和试剂要配合得恰到好处才行。

接下来呀，就得好好地摇晃或者搅拌它们，让它们充分接触、反应。

你想想，就像两个好朋友见面，得好好聊聊，互相了解一下呀。

经过一段时间的反应后，就会看到一些奇妙的现象啦。

那些蛋白呀，就会被逐渐分离出来，就好像是从大部队中被揪出来的“捣蛋鬼”。

然后呢，把混合物静置一会儿，让它们自己安安静静地待着。

这时候，你就会发现，蛋白乖乖地沉淀在底部或者浮在上面了，这多神奇呀！就像是魔法一样，把蛋白给变出来了。

再接着，小心地把上面或者下面的部分分离出来，这可得仔细着点，别把好不容易分离出来的蛋白又给弄回去啦。

最后呀，得到的就是去除了蛋白的纯净样本啦，是不是感觉很有成就感呢！你说这 Sevage 法是不是很有意思呀？就像一个巧妙的魔术，能把蛋白变走。

但可别小瞧了这每一步哦，一步没做好，可能效果就大打折扣啦。

就像走路一样，一步一个脚印，稳稳当当的才能走到目的地。

在实际操作中，可得注意试剂的比例呀，多了少了可能都不行。

这就跟做菜放盐一样，放多了太咸，放少了没味道。

还有呀，搅拌的力度和时间也得把握好，不能太轻也不能太重，时间不能太长也不能太短。

总之呢，Sevage 法除蛋白虽然听起来有点复杂，但只要咱认真对待，每一步都用心去做，肯定能把蛋白除得干干净净的！让我们的实验顺顺利利的，得出准确可靠的结果呀！大家加油哦！。

多糖的分离和纯化

一、多糖的分离和纯化多糖是极性极大的大分子化合物，提取时一般先将原料脱脂、脱色，然后用水、盐或稀碱水在不同温度下提取。

提取物浓缩后加沉淀剂(乙醇、丙酮等)离心沉淀，沉淀部分可反复多次离心沉淀，以除去部分水溶性色素等杂质。

1．除蛋白用水或稀碱提取的多糖常含有蛋白质，常用的除蛋白质的方法有Sevag 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法等。

前两种多用于微生物多糖，后者多用于植物多糖。

Sevag 法是经典的除蛋白质方法，复杂、费时，且样品损失较大。

冯建林等比较了Sevag 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法、硫酸铵法及木瓜蛋白酶复合酶法除蛋白的效果，从蛋白残留量和多糖的得率两方面评价．认为三氯乙酸法最好，但三氯乙酸仍不能完全除去蛋白，建议三氯乙酸法和Sevag 法结合使用。

2．脱色多糖中常含有一些色素(游离色素或结合色素)，根据其不同性质采取不同的去除方法。

常用的脱色方法有离子交换法、氧化法、金属络合物法、吸附法(纤维素、硅藻土、高岭土、活性炭等)。

D EA E一纤维素是目前最常用的脱色方法，通过离子交换柱不仅达到脱色目的，而且可以进行多糖的分离。

H2 O2：是一种氧化脱色剂，浓度不宜过高，宜在低温下进行，否则引起多糖的降解。

对于同时含有游离蛋白质和色素的多糖，可通过生成金属络合物的方法同时除去蛋白和色素，即加入费林试剂生成不溶性络合物，经分离后用阴离子交换树脂分解络合物。

吸附脱色法也常用，如通过活性炭、高岭土、硅藻土柱达到脱色的目的。

3．多糖的分级采用一般方法提取的多糖，通常是多糖的混合物，即是多分散性的，其不均一性表现在化学组成、聚合度、分子形状等的不同。

分级可以达到纯化的目的，可按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级(如按电荷性质分级的电泳、离子交换层析等)。

(1)分级沉淀利用分子大小和溶解度不同进行分离，常用的有两种方法，即有机溶剂沉淀法和季铵盐或硫酸铵法。

去除蛋白质的方法

去除蛋白质的方法常用的去除多糖中蛋白质的方法有：Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法，这些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白质沉淀，其中Sevag方法脱蛋白效果较好，它是用氯仿：戊醇或丁醇，以4：1比例混合，加到样品中振摇，使样品中的蛋白质变性成不溶状态，用离心法除去。

Sevage 法：利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点，将提取液与Sevage试剂[氯仿：正丁醇=5：1（V/V）]5：1 混合，振荡，离心，变性后的蛋白质介于提取液与Sevage 试剂交界处。

此法的优点是条件温和，不会引起多糖的变性。

三氯醋酸法于样品液中加入适量的三氯醋酸，混匀后静置过夜，离心过滤弃去滤渣，收集滤液，测定糖浓度和蛋白质浓度"这个比例其实都行，没有绝对的对错。

你就选择1：4 震荡时间自己决定，应为如果你要拖干净的话，也可以多次每次时间短啊，这个和时间长次数少效果是一样的。

离心好！并且告诉你样品稍微多准备点，如果你的样品蛋白质含量高，你去蛋白次数过多的话，你的样品会在反复的转移中损失很大。

顺便带上手套，口罩，这个东西是蛋白质变性，弄到你手上最多吊点皮（如果你不在乎）气味很刺激。

化学实验都是和毒品打交道，尽量注意安全卫生。

中药固体制剂是现代中药制剂的主要形式,而经过提取分离制成的中药全浸膏固体制剂皆具有不同程度的吸潮性,吸潮后导致中药制剂外观颜色变深、结块、变软、流动性降低、甚至霉变,从而影响药品的质量和疗效,给生产和储存带来困难。

因此,中药制剂的吸潮问题一直是制药工作中较为普遍的难题。

在实际生产中,因制剂的提取和精制工艺不便改动, 通常以筛选辅料的种类和用量来降低制剂的吸湿性。

本论文从辅料防潮入手,以有效组分防潮为研究对象,探索其在吸湿中药中应用的适宜性。

前期实验提取了黄芪、柴胡、人参中的多糖和皂苷组分,分别比较三者多糖和皂苷的吸湿性,发现多糖较皂苷易吸湿,并且以黄芪多糖吸湿最为严重,故选择黄芪多糖为本实验组分防潮的研究对象。