液相色谱维护基础知识
最全的液相色谱知识（包括原理,维护,基础操作,处理方法）
最全的液相色谱知识（包括原理,维护,基础操作,处理方法）最全的液相色谱知识（包括原理，维护，基础操作，处理方法）L、基线漂移原因和解决方法1、柱温波动。
（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。
通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。
）解决方法：控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图2、流动相不均匀。
（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。
）解决方法：使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。
流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。
3、流通池被污染或有气体解决方法：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。
如有需要，可以用1N的硝酸。
（不要用盐酸）4、检测器出口阻塞。
（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）解决方法：取出阻塞物或换管子。
参考检测器手册更换流通池窗。
5、流动相配比不当或流速变化解决方法：更改配比或流速。
为避免问题可定期检查流动相组成及流速。
6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时解决方法：用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成解决方法：检查流动相的组成。
使用高品质的化学试剂及HPLC 级的溶剂8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。
解决方法：使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。
9、使用循环溶剂，但检测器未调整。
解决方法：重新设定基线。
当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。
10、检测器没有设定在最大吸收波长处。
解决方法：将波长调整至最大吸收波长处M、基线噪音（规则的）原因解决方法1、在流动相、检测器或泵中有空气解决方法：流动相脱气。
冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。
2、漏液解决方法：检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。
如有必要，更换泵密封。
岛津液相维护基本知识
×
向阀并做超声波浴清洗
检查（更换）并清洗线 × 路过滤器
检查（更换）并清洗吸 滤头
更换排液阀
泵组件润滑
保险丝更换
×
×
×
请咨询岛津各办事处维修部
×
LC-20AD 各部件定期检查和维护清单
检查/维护项目
6个月 1年
2年
3年
备注
更换柱塞密封圈
×
清洗并检查（更换）柱塞
×
检查（更换）膜片
×
更换柱塞时同时更换
再用水洗至中性。
压力传感器 流动相
线路过滤器
过滤器的更换
❖ 如果清洗无法解决故障，需要更换线路过滤器。
旧过滤器的取出
❖ 新型号线路过滤器
新过滤器的安装
部件号：228-35871-99
混合器
混合器不同体积的连接方法
混合器故障处理
常见故障：堵塞 混合器堵塞往往是由于混合
器过滤组件堵塞引起的。
处理方法： 按图中结构卸下过滤组件，
注意：超声波清洗时开口端向上放置。
柱塞密封圈
柱塞密封圈
LC-20AD LC-20AB LC-10ADvp
部件号228-35146
取下和安装 柱塞密封圈工具
柱塞密封圈
LC-20AT LC-10ATvp
部件号：228-35145
柱塞密封圈故障处理
密封圈
故障：密封圈磨损导致密封不良 现象：系统压力波动大或漏液 措施：更换密封圈
岛津液相色谱仪 维护基础知识
日常维护
目的：维持仪器处于正常运作状态，有效的降低仪器发生故障的 频率，延长仪器的使用寿命。
准备工作： ❖ 使用&维护日志 ❖ 设备的耗材和备件 ❖ 维护工具盒 ❖ 试剂（甲醇、异丙醇、稀硝酸等） ❖ 超声波清洗机
最全的液相色谱知识 整理
最全的液相色谱知识（包括原理，维护，基础操作，处理方法）流动相a、流动相对样品具有一定的溶解能力b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
c、流动相的黏度要尽量小d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
1.流动相必须用HPLC级的试剂.2.流动相过滤后要用超声波脱气.脱气后应该恢复到湿温后使用.3.长时间不使用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存.4.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器.流动相对样品有适当的溶解度，但不与样品发生化学反应，也不与固定液互溶；流动相的纯度要高（至少分析纯）、粘度要小，以免带进杂质和组分在流动相中扩散系数下降；流动相应与所用检测器相匹配，不应对组分检测产生干扰作用。
对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。
当选用最佳流速时，分析时间可能延长。
可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。
因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。
种被污染的溶剂如用于HPLC 系统，可能造成柱效降低。
贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。
磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要贮存。
如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。
容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。
因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子无此现象。
一、为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性请按照以下注意事项操作：1、防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何杂质都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。
高效液相色谱培训(HPLC使用与维护)
UV Spectrum of Eluents with 0.1% TFA Against HPLC Grade H2O Blank
H20 with 0.1% TFA
50% ACN with 0.1% TFA
210.00
220.00
230.00
240.00
250.00 nm
260.00
270.00
缓冲盐、离子对试剂、胺改性剂也会有影响
即峰高与基线噪音的比值（S/N）
10 mL
5 min
60 sec
强溶剂
单向阀
故障：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好 表现：系统压力波动大 措施： 打开排液阀，以异丙醇为流动相输液 拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗
线路过滤器
流动相
线路过滤器 压力传感器
在不好的色谱系统中，第一个峰则消失在基线噪音中。
色谱柱吸附未被洗脱成分时，柱效将明显下降，选合适的溶剂进行洗净。
进液处的砂芯过滤头要经常清洗；
五个小肽的5ng进样，好的色谱系统非常容易鉴别出所有峰。
分子筛色谱柱：用纯水清洗10个柱体积，保存在5%叠氮化钠水溶液中。
普通分析型液相色谱的滞后体积为2~4ml
280.00
290.00
溶剂混合的基线噪音
色谱条件
色谱柱： C18, 5 µm, 3.9x150mm at 35ºC.
流动相： A: 0.1% TFA in Water. B: 0.1% TFA in Acetonitrile.
梯度： 5 - 40% B in 35 min. 流速： 1.0 mL/min. 样品： 水（10 µL inj. vol.） 检测： 214 nm
pH变化值 0.1
高效液相色谱仪的维护和保养
高效液相色谱仪的维护和保养高效液相色谱仪是一种复杂的的分析设备，需要定期进行维护和保养，以确保其长期稳定运行和准确结果。
以下是一些建议的维护和保养步骤：
1、定期清洗系统：定期清洗系统可以清除色谱柱和流路中的残留物质，包括流动相、样品和清洗液。
这可以防止堵塞和污染，并保持系统的清洁和高效。
2、定期更换流动相：流动相是高效液相色谱仪运行的关键组成部分。
建议定期更换流动相，以避免其变质或受到污染。
3、定期检查和更换泵密封垫：泵密封垫是防止流动相泄漏的关键部件。
建议定期检查和更换泵密封垫，以避免其磨损或老化。
4、定期校准系统：定期校准系统可以确保色谱仪的准确性和重复性。
建议定期进行校准，并使用已知的标准物质进行校准。
5、定期检查和更换流路配件：流路配件是高效液相色谱仪的重要组成部分，需要定期检查和更换。
例如，过滤器、单向阀、密封圈等都需要定期更换或修理。
6、保持电源和仪器连接稳定：保持电源和仪器连接稳定可以避免仪器故障和数据失真。
建议使用UPS电源，并定期检查电缆和接口是否松动或损坏。
7、定期进行软件和硬件更新：高效液相色谱仪需要进行软件和硬件更新以保持其最新状态和功能。
建议定期检查和更新软
件和硬件。
总之，高效液相色谱仪的维护和保养是非常重要的的工作，需要专业人员进行定期维护和保养。
建议用户根据自身的实际情况，制定一个合理的维护和保养计划，并严格执行。
液相色谱仪的使用维护
液相色谱仪的使用维护一、液相色谱仪的使用1.仪器启动前的准备工作在使用液相色谱仪前，首先需要确保仪器所需的电源和空气源已经接通，并检查仪器的进样针、柱室和检测器等部件是否干净且无异常。
2.色谱柱的选择和准备根据分析需求选择合适的色谱柱，并进行合适的条件预处理，例如，如果使用反相色谱柱，则需要进行常用的反相柱活化步骤。
3.峰面积校正和质量控制在每次分析之前，应该对色谱仪进行系统初始校准，包括峰面积校正、流量校正等，以确保后续分析结果的准确性。
同时，建议每次分析前进行质量控制实验，通过引入标准物质来验证色谱分析结果的准确性和可靠性。
4.进样操作和条件设置进样操作是液相色谱仪中非常重要的一步，要确保进样针和进样器的清洁，并注意样品的适宜体积和浓度，避免超载或稀释不足的情况。
在设置条件时，需要根据样品的性质、分析目的和柱子的特性进行合理的选择，如使用适当的流动相组成、流速等条件。
5.合理调整检测器参数根据分析的物质特性合理调整检测器的参数，如波长、流量、灵敏度等，以保证信号与噪声的合理分离，从而获得准确可靠的结果。
6.数据记录和分析在完成分析后，应将数据记录下来，并进行相关的分析处理。
合理整理和存档数据有利于后续结果的复查和评估。
二、液相色谱仪的维护1.仪器的日常维护定期（如每周）对液相色谱仪进行外部的清洁和检查，包括仪器表面、进样针、色谱柱、检测器等部件。
同时，应及时更换进样针和色谱柱，避免样品残留在柱子内导致污染。
2.进样器的维护对进样器进行定期的清洗和校正，保持针头的锐利和清洁，避免样品交叉污染。
3.流体传输和泵系统的维护定期检查和更换液相泵和传输管路中的密封件，确保流体传输的可靠性和精确性。
此外，要定期排除管路和泵内部的气泡。
4.温度控制系统的维护保持色谱仪运行的适宜温度，避免因温度波动而引起的分析误差。
定期检查和维护恒温器和冷却系统的工作状态，确保温度控制系统的稳定性和准确性。
5.仪器的校准和质量控制定期对液相色谱仪进行全面的校准和质量控制，以保证仪器的准确性和可靠性。
液相色谱系统的日常维护及注意事项
液相色谱系统的日常维护及注意事项液相色谱系统的日常维护及注意事项（之一）仪器安装条件与注意事项1、安装本仪器的实验台应水平、稳固、并具有足够的放置空间。
避免在具有腐蚀性气体、大量灰尘或能产生强磁场的地方安装本仪器，否则将会影响仪器的正常运转及缩短仪器的使用寿命。
2、由于仪器所用溶剂是易燃并且有毒，故安装设备的房间应通风良好，应具有向外排风的装置，否则可能引起中毒或身体不适，也可能会引起火灾。
3、应安装四个以上三芯电源插座（220V，5～10A），必须具有专门的接地线（注意，绝不能将电源线的中线作为接地线），并确保输出电源的电压稳定，否则会导致仪器的不正常运作。
如果实验室无专用接地线，一般可用φ15～20mm的铜棒打入地下1～1.5米，用φ1.2mm左右的塑胶单股导线连接到电源插座的接地端。
4、如果实验室电压不稳定，应使用稳压器等必要设备，使电源电压稳定。
5、实验室的室温应控制在15℃～30℃范围内，并且波动要小；湿度在45～80%范围内。
6、由空调或其他设备产生的气流不要直吹仪器，避免光线直射及振动。
仪器的启动顺序：先开高压恒流泵和紫外检测器，待紫外检测器自检完毕，回到默认波长254nm后，再开计算机及打开工作站软件。
仪器关闭顺序：先按泵停止，关闭氘灯，退出工作站软件，然后再关仪器。
仪器应由专人负责，如果使用人员不固定，请准备《仪器使用登记本》，以明确使用情况，及时处理和保养。
液相色谱系统的日常维护及注意事项（之二）流动相使用的注意事项必须使用HPLC级或相当于该级别的流动相，并要先经0.45µm薄膜过滤。
过滤后的流动相必须经过充分脱气，以除去其中溶解的气体（如02），如不脱气易产生气泡，增加基线噪声，造成灵敏度下降，甚至无法分析。
几种脱气方法比较：1、氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好但成本高。
2、加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。
3、抽真空脱气法：易抽走有机相。
最全的液相色谱知识 整理要点
最全的液相色谱知识（包括原理，维护，基础操作，处理方法）流动相a、流动相对样品具有一定的溶解能力b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
c、流动相的黏度要尽量小d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
1.流动相必须用HPLC级的试剂.2.流动相过滤后要用超声波脱气.脱气后应该恢复到湿温后使用.3.长时间不使用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存.4.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器.流动相对样品有适当的溶解度，但不与样品发生化学反应，也不与固定液互溶；流动相的纯度要高（至少分析纯）、粘度要小，以免带进杂质和组分在流动相中扩散系数下降；流动相应与所用检测器相匹配，不应对组分检测产生干扰作用。
对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。
当选用最佳流速时，分析时间可能延长。
可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。
因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。
种被污染的溶剂如用于HPLC 系统，可能造成柱效降低。
贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。
磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要贮存。
如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。
容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。
因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子无此现象。
一、为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性请按照以下注意事项操作：1、防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何杂质都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。
HPLC(液相色谱)常识及疑难详解(附实际操作图解)
1 液相色谱基础知识1.1 液相色谱名词术语Mobile phase：流动相，在色谱柱中存在着相对运动的两相，一相为固定相，一相为流动相。
流动相是指在色谱过程中载带样品（组分）向前移动的那一相。
Stationary phase：固定相，柱色谱或平板色谱中既起分离作用又不移动的那一相。
Gradient elution: 梯度洗脱,一个分析周期中，按一定程序不断改变流动相的浓度配比, 使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。
Detection wavelength：检测波长，retention time：保留时间，被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间Peak:峰Peak Base：峰基线，经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。
一般应平行于时间轴Peak Height：峰高，色谱峰顶点至峰底的距离。
Peak Width：峰宽，色谱峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点间的距离Peak Width at Half Height：半峰高宽Peak Area：峰面积Tailing Peak: 后沿较前沿平缓的不对称峰Leading Peak:前沿较后沿平缓的不对称峰Ghost Peak: 假峰，并非由试样所产生的峰Baseline Drift:基线漂移Baseline Noise:基线噪音Band Broadening:组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象. 1.2 流动相1.2.1 流动相类型正相液相色谱流动相：一般正相色谱固定相极性大于流动相极性，采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。
常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等），极性小的组分先出柱。
反相液相色谱流动相：一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。
液相色谱仪的使用与维护
液相色谱仪的使用与维护液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，用于分离、检测和定量分析化学物质。
下面我将从使用和维护两个方面来回答你的问题。
一、使用液相色谱仪：1. 样品准备，首先，需要准备好待测样品，并根据需要选择适当的溶剂进行溶解。
确保样品的浓度适中，以避免进样量过大或过小。
2. 仪器设置，根据分析要求，设置合适的流速、柱温和检测器参数。
确保流速适宜，以保证分离效果和分析速度；柱温的选择要考虑样品的性质和分离要求；检测器参数的设置要根据待测物的特性进行调整。
3. 进样与分离，将样品通过进样器引入色谱柱中，控制好进样量和进样速度。
根据样品的特性和分离要求，选择合适的色谱柱和流动相进行分离。
在分离过程中，注意监控色谱图的变化，以确保分离效果和峰形。
4. 数据分析与结果解释，根据检测器输出的信号，进行数据分析和结果解释。
可以使用色谱软件进行峰面积计算、峰识别和定量分析。
根据分析目的，对结果进行解释和评估。
二、维护液相色谱仪：1. 定期保养，按照仪器的操作手册，定期进行保养和维护工作。
包括清洁色谱柱、更换流动相和进样器的零件、检查和校准检测器等。
保持仪器的良好状态，以确保准确可靠的分析结果。
2. 储存条件，在使用完毕后，要储存好色谱柱和溶剂，避免受到湿气和光线的影响。
色谱柱应放置在干燥的环境中，避免柱内残留物的积累和柱效的降低。
3. 检测器维护，定期检查和校准检测器，确保其正常工作。
根据仪器要求，定期更换检测器的灯管、流动相流量计等关键零部件，以保证检测器的灵敏度和稳定性。
4. 质量控制，定期进行质量控制实验，检查仪器的性能和分析结果的准确性。
可以使用标准物质进行校准和验证，以确保仪器的准确性和可靠性。
总结起来，使用液相色谱仪需要准备样品、设置仪器参数、进行进样与分离、数据分析与结果解释。
维护液相色谱仪需要定期保养、储存、检测器维护和质量控制。
这些措施能够确保液相色谱仪的正常运行和准确分析。
高效液相色谱培训(HPLC使用与维护)
常见故障排除
流动相不流动
检查泵密封圈是否磨损或损坏， 管路是否堵塞，流动相是否足够。
峰形异常
检查进样器是否堵塞，色谱柱是否 受损或污染，检测器是否正常工作。
基线漂移
检查流动相是否纯净，检测器是否 正常工作，仪器是否处于良好状态。
仪器保养与校准
01
02
03
定期校准
按照厂商推荐的时间间隔 和校准方法，对HPLC进 行校准，以确保仪器性能 和测量精度。
详细描述
HPLC技术在化学领域中广泛应用于有机化合物、无机化合物的分离和测定。在生物领域，HPLC用于 蛋白质、核酸等生物大分子的分离和纯化。在医学领域，HPLC用于药物分析、临床检验、毒物分析 等方面，为医学研究和诊断提供重要的技术支持。
HPLC的优点与局限性
总结词
HPLC具有高分离效能、高灵敏度、高选 择性等优点，但也存在一些局限性，如 对样品的前处理要求高、对流动相的纯 度要求高等。
考察学员在遇到问题时能否迅速、准确地 判断并采取有效措施解决问题。
实践操作与考核经验分享
严格遵守操作规程
在实践操作过程中，务必遵循正确的操 作规程和安全规范，确保实验结果的准
确性和可靠性。
团队协作与沟通
积极参与团队协作，与团队成员保持 良好的沟通，共同解决问题，提高工
作效率。
充分准备与复习
在考核前，充分复习理论知识，熟悉 实验操作流程和仪器设备的使用方法。
HPLC仪器操作流程
准备工作
检查仪器各部件是否正常，流动相是否充足 ，确保电源和气源连接正常。
流动相制备
根据实验要求配制流动相，并进行过滤和脱气 。
仪器启动
打开电源和气源，启动仪器，进行系统冲洗和平 衡。
常用液相色谱柱使用与维护保养
常用液相色谱柱使用与维护保养液相色谱柱是分离和分析中常用的仪器配件之一，它的使用和维护保养对于实验结果的准确性和可靠性有着至关重要的作用。
本文将介绍常用液相色谱柱的使用和维护保养方法。
一、液相色谱柱的使用方法1.准备工作：在使用前，需要对液相色谱柱进行准备工作。
首先，检查柱的外观是否完好无损，如果发现任何损坏或污染，应立即更换。
其次，检查柱装置是否牢固，连接是否紧密。
最后，将固定相和移动相装入柱中，确保固定相充分均匀地填充在柱内。
2.柱的条件调节：根据实验需要，调节液相色谱柱的柱温、流速和柱压等参数。
在调节柱温时，应注意避免温度过高或过低对柱的损害。
调节流速时，应根据样品性质和分离效果选择合适的流速。
控制柱压时，要确保柱内压力稳定在可接受范围内，避免超过柱的承压能力。
3.样品进样：将待测样品注入进样口或进样器中，注意避免空气进入柱，避免对柱的污染。
可以选择外部进样或直接进样的方法，具体方法根据实验要求和样品性质进行选择。
4.运行柱：在启动液相色谱仪前，先将柱进行预冲洗。
预洗液可以选择与移动相相同的溶剂。
启动液相色谱仪后，根据实验要求设定好运行条件，开始进行实验。
在实验过程中，要及时观察色谱图的变化，根据实验需要调节柱温、流速等参数。
5.柱的保存：在柱使用完毕后，将固定相充分冲洗干净，保证柱内固定相的干燥和保存。
然后，将柱装入保护柱架中，避免碰撞和损坏。
柱的保管环境要保持清洁、干燥、避光和稳定的温度。
二、液相色谱柱的维护保养方法1.柱的清洗：在使用液相色谱柱之前，需要先清洗柱以去除可能存在的污染物。
清洗方法包括预洗和后洗。
预洗可以选择与移动相相同的溶剂，将溶剂通过柱时，将固定相表面的杂质冲洗掉。
后洗可以选择与前一个样品不同的溶剂，将固定相和样品残留物进行清洗。
2.避免柱的干燥：柱在使用过程中，应尽量避免柱的干燥，因为柱的干燥会对固定相造成损害。
在柱停用时，应及时用溶剂进行冲洗并封存起来，以保持柱内的湿润状态。
【液相色谱】液相色谱仪的使用维护 液相色谱维护和修理保养
【液相色谱】液相色谱仪的使用维护液相色谱维护和修理保养液相色谱仪使用完毕后还需要保养吗？答案是确定的；液相色谱仪作为试验室常见的一款仪器，不仅在使用时注意维护，在使用完毕后更要注意保养：1、短期停机在完成一天工作以后，都要停机等第二天再连续工作，则可按以下步骤停机。
A）关闭二次仪表（记录仪、积分仪或色谱工作站）。
B）关闭检测器电源（同时切断柱箱温度检测器的电源）。
C）停止恒流泵工作，然后切断其电源。
D）用二次蒸馏水冲洗进样阀的进样孔（在“LOAD”和“INJECT”两个位置）。
E）切断试验室工作电源，加满盛液瓶中的流动相，待第二天使用。
F）将仪器罩上防尘罩。
2、长期停机液相色谱仪数周或数月暂不使用，这时除按《短期停机》的A）～D）步骤处理外，还须完成以下步骤：A）拆下恒流泵的流动相盛液瓶，换上色谱柱指定的保护试剂（例：甲醇、去离子水等），开启泵数分钟（流速0.5mL/min～1.5mL/min）后停泵。
B）从系统中拆下色谱柱，用专用的密封螺帽将柱管两端密封后保存。
C）用一般φ1.6导管替代分别柱联结。
D）用二次蒸馏水或去离子水输入输液泵，开启泵，流量1mL/min～2mL/min，冲洗泵体、进样阀、检测器流通池数分钟，在冲洗过程切换六通阀数次，使定量管得到清洗。
E）拆除替代柱的导管、泵输入端和出口的导管和流通池输入、输出口导管，分别用螺帽密封输液泵出口和流通池输入、输出口。
F）拨下总电源接线板的插头，贮存好专用的流动相和样品，用干布擦洗仪器，罩上防尘罩。
G）检测器存放地点应干燥。
高效液相色谱仪（HPLC）是分析试验室常用的测试仪器之一，其应用越来越广泛。
此种仪器在使用过程中，难免会显现各种各样的问题，并将直接影响到所测数据的精准性和仪器的正常工作。
液相色谱柱怎么安装？液相色谱柱是一种用于液体色谱分析仪器,其结构紧要有：a、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。
柱接头接受低死体积结构，柱接头是两端螺纹组件，一端是为7/16英寸外螺纹，另一端是3/16英寸的内螺纹（国内外已规范化）。
液相色谱基础知识
液 相 色 谱 柱 的 维 护 保 养
色 不 色 法 谱 相 谱 测 柱 的 品 种 繁 多 ， 性 能 各 异 ， 测 定 方 法 也 各 同 柱 均 附 有 使 用 说 明 书 ， 可 按 说 明 书 所 述 方 定
液 相 色 谱 柱 和 维 护 保 养
当 获 得 一 个 色 谱 图 后 ， 可 计 算 出 柱 效 。 柱 效 反 应 的 是 整 个 色 谱 系 统 的 性 能 ， 并 非 仅 仅 是 色 谱 柱 的 性 能 。
液 相 色 谱 柱 检 测 器 的 维 护 保 养
防 止 检 测 器 故 障 的 措 施 1、 在 第 一 次 使 用 检 测 器 前 ， 仔 细 阅 读 操 作 说 明 ， 按 操 作 规 程 操 作 。 2、 使 用 纯 试 剂 和 HPLC级 溶 剂 3、 使 用 缓 冲 液 或 其 他 盐 类 溶 液 后 ， 用 流 动 相 （ 水 替 代 缓 冲 液 ） 清 洗 系 统
液 相 色 谱 柱 的 维 护 保 养
4、 随 着 有 机 溶 剂 加 入 量 的 增 加 ， 缓 冲 溶 液 中 可 能 有 盐 析 出 5、 不 要 使 用 能 与 键 合 相 或 硅 胶 发 生 化 学 反 应 的 流 动 相 6、 压 力 限 定 为 最 大 限 度 延 长 柱 寿 命 ， 操 作 压 力 应 最 小
液 相 色 谱 柱 的 维 护 保 养
判 别 色 谱 柱 问 题 的 方 法 柱 压 升 高 是 否 伴 随 如 下 现 象 ： 1、 保 留 时 间 的 变 化 2、 色 谱 峰 型 的 变 化 3、 分 辨 率 是 否 变 差
液 相 色 谱 泵 的 维 护 保 养
要 保 持 泵 的 良 好 的 操 作 性 能 ， 必 须 维 护 系 统 的 清 洁 ， 保 证 溶 剂 和 试 剂 的 质 量 ， 对 流 动 相 进 行 过 滤 和 脱 气 。
岛津液相色谱维护培训-
接头
➢ 不锈钢接头 / 垫圈
主要用于输液泵、进样器的连接 ❖ 能承受 40Mpa以上压力 ❖ 一旦固定，垫圈不可再动
➢ PEEK接头
主要用于色谱柱、检测器的连接 ❖ 易于安装 ❖ 能承受 250 kgf/cm2压力 ❖ 容易产生死体积
➢ UHPLC 接头
注意点： 1、拆卸泵头前，柱塞杆复位
（P－SET） 2、新密封圈用异丙醇浸泡15min 后再安
装
柱塞杆
柱塞杆 LC-10ADvp用 部件号：228-35281-91
柱塞杆 LC-10ATvp用 部件号：228-35009-92
柱塞杆 LC-2019用 部件号：228-35281-93
柱塞杆 LC-20AD/LC-20AB用 部件号：228-35281-95
日常使用注意
有机溶剂的等级
❖ HPLC级 ❖ 优级纯 ❖ 分析纯
微量分析、梯度洗脱
都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒） 优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂 HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质
日常使用注意
水的等级
❖ 纯化水 ❖ 蒸馏水
吸 光 率
二、进样部分
1.手动进样器
❖ 自动进样器 ❖ 手动进样器(7725/7725i）
原理：（六通阀） 注入方式： 1）全量注入 2）部分注入
7725i手动进样阀
手动进样器的原理图
1定量环（标配20ul）
线路过滤器 （10Avp、20A） 部件号：228-48607-91
线路过滤器安装螺母 （10Avp、20A） 部件号：228-39082-91
液相色谱日常维护
VP
产品信息组
MAINTENANCE Press Func or VP
VP
维修信息组
VALIDATION Press Func or VP
VP
认证功能组
CALIBRATION Press Func or VP
校正功能组
PRODUCT INFO
设定 扫描起始波长
设定扫描终止波长
检测器参数设定
SCAN STEP Input 1 ~ 5 设定扫描波长步长
PLOT SPD 1: 1 2: 3 3: 10 nm/s
SPC PLOT Enter to Plot AUX RANGE Input 1 ~ 6
设定光谱输出速度
输出光谱图
设定积分仪输出端口 的量程
流速
最高压力
最低压力
输液泵辅助功能设定
0.000 FILE NUM Select File 0~9 选择文件
0.000 S－PROT 0: Clear 1: Set
0.000 MODE CHANG Enter to Change 0.000 P－SET 0: Clear 1: Set
设定系统保护
设定输液方式
降低柱压
保证检测稳定性
色谱柱
ODS柱的使用注意点：
1）柱压低于150kgf/cm2
2）柱温在40℃左右，最高使用温度为50℃
3）缓冲液PH使用范围为2～7
*硅胶在PH为3～4时稳定性最好 *碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。
返回
检测器
HPLC常用检测器：
紫外检测器（包括二极管阵列检测器） 示差折光检测器 蒸发光检测器
液相色谱维护基础知识共35页文档
密封圈
柱塞杆
泵头清洗管路
流动相
故障：密封圈磨损导致密封不 良
现象：系统压力波动大或漏液 措施：更换密封圈 注意点：
拆卸泵头前，柱塞杆复位 （P－SET）
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过滤器的更换
旧过滤器的取出
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新过滤器的安装
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排液阀漏液
• 故障：排液阀垫圈损伤或密封不良
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5）清洗应使用专用针口清洗器
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色谱柱的日常保养
购买新柱后一定要仔细阅读说明书，确认柱的使用条件以及 清洗再生步骤，按照说明书条件测试色谱柱柱效，记录使用 压力
定期检测柱压和柱效 不同流动相之间转换时应注意溶剂的互溶性
确认样品不会在流动相中析出或带有固体不溶物，请使用 0.45um或0.2um的一次性滤膜过滤样品，或者进行前处理。
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混合器
混合器不同体积的连接方法
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混合器过滤组件
常见故障：堵塞
混合器堵塞往往是由于混合 器过滤组件堵塞引起的。
处理方法：
按图中结构卸下过滤组件， 5%稀硝酸或其他溶剂超生清 洗或更换新的组件
标准或半微量混合器用 部件号：228-18872-93
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进样口清洗器 手柄组件
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21ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
手动进样器
针头密封垫
操作注意点： 1）进样时，进样针应插到底
2）不使用时将针头留在进样器内
3）进样应使用液相色谱专用平头 弹簧 不锈钢套 进样针
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柱效低
解决方法 原因
色谱柱被污染
筛板堵塞 柱内死体积增加 1. 2. 3. 4. 正向冲洗色谱柱 反向冲洗色谱柱 超声清洗色谱柱筛板 柱内死体积增加，需更换新柱
日常使用注意点
1. 定期冲洗色谱柱 2. 防止机械震动和柱压急剧变化
3. 关注色谱柱柱效变化
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思考题
现象：在分析样品过程中，系统压力不断升高。 问题：如何确认压力升高的原因？
故障根源的确认：分段排除法 如果确认是由色谱柱引起的压力升高，应如何处理？ 在 实验过程中，如何避免这种情况出现？
例子：溶解样品的溶剂选择不当
建议使用流动相溶解样品，不要选择高溶解性的试剂
乙醇 作为溶剂
甲醇 作为溶剂 20 uL
Caffeine
20 uL
Caffeine
乙醇 作为溶剂
10 uL
Caffeine
注意：方法开发阶段，请 选择合适的进样量
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液相系统维护流程图
线路过滤器
单向阀
色谱柱 柱塞密封圈 手动进样器
检测器
吸滤头
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输液系统日常维护部件
标准或半微量混合器用 部件号：228-18872-93
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LC-20AT 各部件定期检查和维护清单
检查/维护项目 更换柱塞密封圈 清洗并检查（更换） 柱塞 更换清洗流路密封圈 检查（更换）辅助进 口单向阀并做超声波 浴清洗 检查（更换）主进口 单向阀并做超声波浴 清洗 检查（更换）并清洗 线路过滤器 检查（更换）并清洗 吸滤头 更换排液阀 泵组件润滑 保险丝更换
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线路过滤器
排液阀
压力传感器 故障：堵塞 现象：系统压力偏高 判断依据：关闭排液阀，断开出口管路， 设定流速1mL/min，如压力>0.3 MPa， 可以判定为线路过滤器堵塞。 措施：以异丙醇(或5％稀硝酸)为清洗剂， 超声波浴清洗。再用水洗至中性。
柱压过高
原因
微粒堵塞
解决方法
1. 正向冲洗色谱柱 2. 反向冲洗色谱柱 3. 超声清洗色谱柱筛板
不可逆吸附
细菌生长
日常使用注意点
1. 过滤流动相和样品
2. 恰当的样品前处理方法 3. 使用保护柱
4. 注意冲洗系统
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排液阀 清洗流路密封圈 柱塞 保险丝
柱塞密封圈 吸滤头
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主进口单向阀 线路过滤器
辅助进口单向阀
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管线选择
材料
不锈钢 特氟隆 (Teflon) 聚醚醚酮 (PEEK)
尺寸
不锈钢材质管路 0.1 mm I.D. x 1.6 mm O.D. PEEK材质管路
第四部分
维护基础知识
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日常维护
目的：维持仪器处于正常运作状态，有效的降低仪器 发生故障的频率，延长仪器的使用寿命。 准备工作： 使用&维护日志 设备的耗材和备件 维护工具盒 试剂（甲醇、异丙醇、稀硝酸等） 超声波清洗机
易于安装 能承受 25 MPa的压力
容易产生死体积
PEEK接头
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死体积
产生原因：由于管路连接不好产生的额外体积 死体积可能会引起分离度下降和重现性变差等问题
色谱柱
公螺母
死体积
管线材料
不锈钢 (可用于所有连接) 能承受几百MPa 压力 酸性或高浓度盐环境中易腐蚀 (尤其在pH小于2时) PEEK (可用于所有连接) 能承受高达 25 MPa压力 可在整个pH范围(pH 1-14)内使用 不适用高溶解性溶剂如三氯甲烷、四氢呋喃等 Teflon (用于柱后阻尼管、反应管和排液管) 化学惰性大 仅能承受 0.5 MPa压力
措施：用异丙醇（或5％稀硝酸）浸泡并进行超声波浴清洗， 再用蒸馏水清洗至中性
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LC-20AT
选配件支架
压力传感器 泵头固定座
泵头
辅助进口单向阀 主进口单向阀
LC-20AT
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色谱柱常见故障分类
柱压过高
不同色谱柱有差异
不同系统有差异 不同色谱条件有差异
柱效低 重复性差 回收率低甚至不出峰
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流动相
线路过滤器
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过滤器的更换
如果清洗无法解决故障，需要更换线路过滤器。
旧过滤器的取出
新过滤器的安装
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接头
不锈钢接头 / 垫圈 主要用于输液泵、进样器的管路连接 能承受 40 MPa以上的压力
垫圈 不锈钢接头
一旦固定，垫圈不可再动
PEEK接头
主要用于色谱柱、检测器的管路连接
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柱塞密封圈
柱塞密封圈 LC-20AD LC-20AB LC-10ADvp 部件号228-35146
取下和安装 柱塞密封圈工具
柱塞密封圈 LC-20AT LC-10ATvp 部件号：228-35145
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单向阀故障处理
故障：宝石球或球座受污导致密封不好
表现：系统压力波动大 措施： 1）打开排液阀，用泵输送或用注射针打入异丙醇进行清洗 2）拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波浴清洗
注意：超声波清洗时开口端向上放置。
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柱塞密封圈故障处理
故障：密封圈磨损导致密封不良
密封圈
现象：系统压力波动大或漏液
措施：更换密封圈 注意： 拆卸泵头前，必须将柱塞杆复 位（仪器面板上的P-SET界面）
柱塞杆
泵头清洗管路
流动相
LC-20AD
选配件支架 出口单向阀
压力传感器 泵头
泵头定座 进口单向阀 进液口
LC-20AD
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单向阀结构
注意：请不要分解阀心A和阀心B
重新组装后性能不被保证，输液可能不稳定
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不锈钢套
定子
4. 样品溶液pH小于10, 常用密封垫的 Vespel材质（适用pH<10）, 否则换 Tefzel或PEEK材质的密封垫（pH 0-14） 5. 不使用手动进样器时将针头留在进样 器内
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0.3 mm I.D. x 1.6 mm O.D.
0.5 mm I.D. x 1.6 mm O.D. 0.8 mm I.D. x 1.6 mm O.D.
0.13 mm I.D. x 1.6 mm O.D.
0.25 mm I.D. x 1.6 mm O.D.
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管线
好的连接
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差的连接
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