Trizol提取DNA - 360文档中心

TRIzol法同时提取RNA,DNA,蛋白质

TRIzol法同时提取RNA,,蛋白质TRIzol法同时提取RNA,,TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。

TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\\．TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。

在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。

取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可回收；用异丙醇沉淀有机相可回收。

TRIzol试剂可用于小量样品（50-100mg组织、5×106细胞）也适用于大量样品（≥1g组织、>107细胞）。

对人，动物，植物组织，细菌均适用，可同时处理大量不同样品，整个提取过程在一小时内即可完成。

分离的总RNA无和污染，可用于Northern Blot，dot blot，ployA筛选，体外翻译，RNase保护分析和分子克隆。

在用于RT-PCR时如果两条引物存在于一个单一外显子内，建议用无RNase的DNaseⅠ处理RNA样品，避免出现假阳性。

共纯化的可用作标准，比较不同样品RNA的得率，也可用于PCR和酶切。

可用于Western Blotting。

规格：100ml 黄色透明液体储存条件：2-8℃避光保存12个月注意：请勿直接接触皮肤或吞咽，以免灼伤。

如接触皮肤应立即用洗涤剂和大量水冲洗。

忌用乙醇擦洗，乙醇会加重灼伤程度。

预防RNase污染注意事项：1.经常更换新手套，皮肤上常带有的细菌，霉菌可能成为RNase的来源。

2.使用灭过菌的RNA专用塑料制品避免交叉污染。

3.RNA在TRIzol试剂中时不会被RNase污染，但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。

玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料制品可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，高压灭菌，即可去除RNase。

trizol提DNA

trizol提DNA准备试剂：乙醇0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇） 75%乙醇8mM NaOH操作步骤：1. 样品加氯仿分层后，移去上层水相，用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。

每使用1mlTRIzol加0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3分钟，2～8℃不超过2000×g离心5分钟。

2. 移去上清，（如需分离蛋白质，可保留，进一步操作见后）用含10%乙醇的0.1M柠檬酸钠洗涤DNA沉淀。

每用1mlTRIzol加入1ml柠檬酸钠，室温放置30分钟，2～8℃2000×g 离心5分钟，弃上清，重复一次。

3. 用75%乙醇再洗一遍DNA沉淀，每用1ml TRIzol加入1.5～2 ml75%乙醇，室温放置10～20分钟（不时颠倒混合）2～8℃2000×g离心5分钟，弃上清。

4. 室温放置晾干DNA 5～15分钟，用8mM NaOH溶解DNA。

从50～70mg组织或107细胞中分离的DNA溶于300～600μl 8mM NaOH，DNA的浓度通常为0.2～0.3μg/μl。

提取的DNA 沉淀不易溶于水和Tris缓冲液中，建议用弱碱溶解，8mMNaOH的pH值为9，溶解DNA后可用TE，HEPES调节pH。

从某些样品（尤其是组织）中提取的DNA中可能包含一些胶状不溶物可>12000×g离心10分钟除去。

注意事项：1. DNA在中间层和有机相中时可在2～8℃保存过夜。

2.DNA沉淀在75%乙醇中2～8℃可保存几个月。

3.DNA在8mM NaOH溶液中4℃可放置过夜，如长期保存需用HEPES调节pH至7～8并且加EDTA至1mM，可置于4℃或-20℃长期保存。

trizol提DNA常见问题分析1.得率低：A.样品匀浆和裂解的不彻底。

B.最终得到的DNA沉淀没有完全溶解。

2.A260/A280<1.70 ：A. 检测吸光度时，RNA样品没有溶于水，而溶于了TE中。

B.酚除去的不彻底，可用0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇）再洗一遍DNA沉淀。

Trizol法提取细胞中RNA及逆转录合成cDNA

Trizol法提RNA试剂及材料：Trizol（3号冰箱 4℃ 3层）、三氯甲烷、异丙醇（以上二者在有机厨）、75%乙醇（按DEPC水:无水乙醇=1：3配制）、DEPC水（以上二者在3号冰箱—20℃3层）、肺动脉平滑肌细胞仪器：4℃离心机、移液枪、Nano drip 2000(微量紫外分光光度仪)、管、200μl EP管、EP管插板、冰盒准备：1、配制DEPC水：取一个500ml蓝盖瓶，用去离子水洗涤，加入超纯水500ml,想瓶中加入DEPC母液,震荡摇匀，在通风厨内常温过夜，灭活RNA酶，第二天将瓶子盖拧松，高温高压消毒灭菌（121℃，30min）,消毒后分装在管中，4℃保存。

2、新鲜标本的保存（备用于RNA提取）：取新鲜标本，先放入液氮中，然后冻存于-80℃。

3、动物组织提RNA前处理：用PBS冲洗干净后，按50-100mg加入1ml Trizol，用电动匀浆器或者一次性研磨杵充分匀浆，最好在冰上进行。

注：均质50-100 毫克组织样本需要 1 毫升的TRIzol 试剂，使用特富龙玻璃®或强力均质机（Polytron, or Tekmar's TISSUMIZER® TISSUMIZER ®或相当的仪器）。

均质时样本体积不应超过TRIzol 试剂体积的10％。

b. 单层细胞直接在培养皿中裂解细胞，厘米直径的皿中加入TRIzol 试剂1 毫升，并通过抽吸几次促进细胞裂解。

TRIzol 试剂的添加量基于培养的面积而不是细胞的数目（每10 平方厘米加入1 毫升）。

TRIzol 试剂量不足可能会导致分离出的RNA 有DNA 的污染。

步骤：1.将处理完的35mm细胞皿从细胞培养箱中取出，用预冷的 PBS 清洗 1-2 次，迅速加入已经预冷的Trizol液1ml，室温孵5分钟。

2.收集标本悬浮于 EP管内，加入200ul三氯甲烷，用手上下震荡15秒，使之充分混匀成乳状，室温孵育3分钟。

Trizol提取RNA_DNA_PR步骤

Trizol提取RNA、DNA、蛋白质步骤1st step RNA的提取一、材料食管癌组织。

二、设备研钵，冷冻台式高速离心机，低温冰箱，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。

三、试剂耗材1、无RNA酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃2小时）装蒸馏水(去离子水或MilliQ 的高纯水更好)，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。

2、75%乙醇：用DEPC处理水配制75%乙醇，（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。

3、trizol4、氯仿5、手套、帽子、口罩6、1ml、100ul、10ul枪头、1.5ml和200ul EP管（DEPC处理过的）7、液氮8、甲醛1.2 DEPC水配制的3 M，pH5.2 的NaAc：在80 mL DEPC水中溶解40.8 克NaAc.3H20（Amresco公司），用冰乙酸调pH至5.2，定容到100 mL。

1.3 10×甲醛变性胶缓冲液[10×FA（formaldehyde agarose）gel buffer：200 mM的MOPs，50 mM的NaAc，10 mM的EDTA]：称6.8 克NaAc.3H20，溶于400 mL DEPC处理过的去离子水中，然后加20.9 克MOPs溶解，再加1.86 克EDTA二水二钠，用1 M灭菌的NaOH调pH至7.0（约用NaOH 40 mL）加DEPC处理过的水定容到500 mL，棕色瓶中室温避光保存。

1.4 5×加样缓冲液（5×loading buffer）：先配水饱和的溴酚兰液，在一只1.5 mL 离心管中加入约0.1 mg 溴酚兰，加入 1 mL DEPC 水溶解，充分振荡溶解，离心，可见离心管底部有溴酚兰粉末剩余，上层液体即水饱和的溴酚兰液。

加入以下各种成分：4.00 mL 10×FA gel buffer3.84 mL 甲酰胺2.00 mL 100%的甘油720.00 μL 37%（约12.3 M）的甲醛80.00 μL 0.5 M 的EDTA（pH8.0）16.00 μL 水饱和的溴酚兰（若颜色太淡，可以加40 μL）100.00 μL DEPC 水分装1.5 mL 离心管，除常用的4℃保存外，其余-20℃保存。

Trizol提取RNA_DNA_PR步骤

Trizol提取RNA、DNA、蛋白质步骤1st step RNA的提取一、材料食管癌组织。

二、设备研钵，冷冻台式高速离心机，低温冰箱，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。

三、试剂耗材1、无RNA酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃2小时）装蒸馏水(去离子水或MilliQ 的高纯水更好)，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。

2、75%乙醇：用DEPC处理水配制75%乙醇，（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。

3、trizol4、氯仿5、手套、帽子、口罩6、1ml、100ul、10ul枪头、1.5ml和200ul EP管（DEPC处理过的）7、液氮8、甲醛1.2 DEPC水配制的3 M，pH5.2 的NaAc：在80 mL DEPC水中溶解40.8 克NaAc.3H20（Amresco公司），用冰乙酸调pH至5.2，定容到100 mL。

1.3 10×甲醛变性胶缓冲液[10×FA（formaldehyde agarose）gel buffer：200 mM的MOPs，50 mM的NaAc，10 mM的EDTA]：称6.8 克NaAc.3H20，溶于400 mL DEPC处理过的去离子水中，然后加20.9 克MOPs溶解，再加1.86 克EDTA二水二钠，用1 M灭菌的NaOH调pH至7.0（约用NaOH 40 mL）加DEPC处理过的水定容到500 mL，棕色瓶中室温避光保存。

1.4 5×加样缓冲液（5×loading buffer）：先配水饱和的溴酚兰液，在一只1.5 mL 离心管中加入约0.1 mg 溴酚兰，加入 1 mL DEPC 水溶解，充分振荡溶解，离心，可见离心管底部有溴酚兰粉末剩余，上层液体即水饱和的溴酚兰液。

加入以下各种成分：4.00 mL 10×FA gel buffer3.84 mL 甲酰胺2.00 mL 100%的甘油720.00 μL 37%（约12.3 M）的甲醛80.00 μL 0.5 M 的EDTA（pH8.0）16.00 μL 水饱和的溴酚兰（若颜色太淡，可以加40 μL）100.00 μL DEPC 水分装1.5 mL 离心管，除常用的4℃保存外，其余-20℃保存。

Trizol法提取细胞中RNA及逆转录合成cDNA

Trizol法提RNA试剂及材料：Trizol（3号冰箱4℃3层）、三氯甲烷、异丙醇（以上二者在有机厨）、75%乙醇（按DEPC水:无水乙醇=1：3配制）、DEPC水（以上二者在3号冰箱—20℃3层）、肺动脉平滑肌细胞仪器：4℃离心机、移液枪、Nano drip 2000(微量紫外分光光度仪)、1.5mlEP 管、200μl EP管、EP管插板、冰盒准备：1、配制DEPC水：取一个500ml蓝盖瓶，用去离子水洗涤，加入超纯水500ml,想瓶中加入DEPC母液0.5ml,震荡摇匀，在通风厨内常温过夜，灭活RNA酶，第二天将瓶子盖拧松，高温高压消毒灭菌（121℃，30min）,消毒后分装在1.5mlEP 管中，4℃保存。

2、新鲜标本的保存（备用于RNA提取）：取新鲜标本，先放入液氮中，然后冻存于-80℃。

3、动物组织提RNA前处理：用PBS冲洗干净后，按50-100mg加入1ml Trizol，用电动匀浆器或者一次性研磨杵充分匀浆，最好在冰上进行。

注：均质50-100 毫克组织样本需要 1 毫升的TRIzol 试剂，使用特富龙玻璃®或强力均质机（Polytron, or Tekmar's TISSUMIZER® TISSUMIZER ®或相当的仪器）。

均质时样本体积不应超过TRIzol 试剂体积的10％。

b. 单层细胞直接在培养皿中裂解细胞，3.5 厘米直径的皿中加入TRIzol 试剂1 毫升，并通过抽吸几次促进细胞裂解。

TRIzol 试剂的添加量基于培养的面积而不是细胞的数目（每10 平方厘米加入1 毫升）。

TRIzol 试剂量不足可能会导致分离出的RNA 有DNA 的污染。

步骤：1.将处理完的35mm细胞皿从细胞培养箱中取出，用预冷的PBS 清洗1-2 次，迅速加入已经预冷的Trizol液1ml，室温孵5分钟。

2.收集标本悬浮于1.5ml EP管内，加入200ul三氯甲烷，用手上下震荡15秒，使之充分混匀成乳状，室温孵育3分钟。

trizol成分

trizol成分Trizol是一种广泛用于药学和生物学领域的化学试剂，最初用于从细胞和组织中提取RNA，后来逐渐被用于DNA和蛋白质的提取。

Trizol由多个成分组成，包括酚、异硫氰酸盐砜和氯仿。

下面将详细介绍这些成分及其在Trizol中的作用。

第一个成分是酚。

酚是一种疏水性有机化合物，具有一定的抗氧化性能。

在Trizol中，酚主要用于离体细胞和组织的裂解和去蛋白化。

酚的疏水性能使其能够与细胞膜脂质相互作用，破坏细胞膜，从而释放细胞内的核酸、蛋白质和其他细胞成分。

第二个成分是异硫氰酸盐砜。

异硫氰酸盐砜是一种亲水性有机化合物，具有相对较强的还原性。

在Trizol中，异硫氰酸盐砜主要用于从细胞和组织中提取DNA和RNA。

与酚结合后，异硫氰酸盐砜能够破坏细胞核膜和线粒体膜，释放细胞核和线粒体内的DNA和RNA。

此外，异硫氰酸盐砜还具有还原性，在提取过程中可以保护核酸免受氧化损伤。

第三个成分是氯仿。

氯仿是一种有机氯化合物，具有较强的脂溶性和挥发性。

在Trizol中，氯仿主要用作有机溶剂，用于提取DNA和RNA分离出的有机相。

氯仿的脂溶性使其能够与异硫氰酸盐砜和酚形成两相体系，从而有效地分离核酸和蛋白质。

此外，氯仿的挥发性也有助于溶液中有机相的脱水和浓缩。

除了上述主要成分外，Trizol中还包含盐酸、EDTA和蒸馏水等辅助成分。

盐酸主要用于调节Trizol溶液的pH值，使其适合DNA和RNA的提取。

EDTA是一种螯合剂，能够与金属离子形成络合物，从而避免金属离子对核酸的损伤。

蒸馏水则用于稀释和调节Trizol溶液的浓度。

总结起来，Trizol是一种广泛应用于生物学和药学领域的化学试剂，主要用于DNA和RNA的提取。

其主要成分包括酚、异硫氰酸盐砜和氯仿，通过破坏细胞膜、释放细胞内核酸，并通过两相体系分离核酸和蛋白质。

辅助成分包括盐酸、EDTA 和蒸馏水，用于调节pH值、防止金属离子损伤和稀释溶液。

trizol裂解液成分

trizol裂解液成分
Trizol裂解液是一种广泛应用于生物实验的试剂，主要用于提取total RNA 和DNA。

它的使用方法简单，提取效果显著，被广大科研工作者所青睐。

那么，Trizol裂解液的成分是什么？它又是如何发挥作用的？下面我们将详细介绍Trizol裂解液的成分及其在实验中的应用。

Trizol裂解液的主要成分包括：异丙醇、氯仿、柠檬酸钠、糖类、酚类等。

这些成分在裂解液中各自发挥着特定的作用。

异丙醇和氯仿主要用于破碎细胞膜和细胞器，释放细胞内的核酸；柠檬酸钠和糖类则可以稳定核酸，防止其降解；酚类化合物具有抗氧化作用，可以保护实验过程中核酸的完整性。

Trizol裂解液在生物实验中的应用非常广泛。

无论是对植物组织、动物组织，还是微生物组织，都可以取得良好的提取效果。

在使用Trizol裂解液时，要注意以下几点：
1.实验操作过程中，要严格遵守试剂说明书，确保实验结果的准确性。

2.由于Trizol裂解液具有较强的裂解能力，操作时要尽量避免接触到眼睛和皮肤，以免对人体造成伤害。

3.在提取RNA时，最后一个步骤是加入70%的乙醇进行洗涤，以去除残留的DNA。

这一步非常重要，否则可能会影响RNA的纯度。

4.实验废弃物要妥善处理，遵守实验室废弃物处理规定，以防对环境造成污染。

总之，Trizol裂解液作为一种优秀的生物实验试剂，凭借其高效的提取能力和简单的操作方法，赢得了科研工作者的信赖。

了解其成分和应用注意事
项，能够帮助我们更好地利用Trizol裂解液，提高实验效率和成果。

TRIZOL用法

TRIZOL（invitrogen life techologies）一．RNA提取1.-80o C取标本2.取组织3.液氮中陶瓷研钵研磨，组织呈粉状时转移到预先称重的5毫升的塑料离心管中，离心管需要DEPC水处理后，灭菌。

称重，得组织100mg4.加入TRIZOL 1.5ml（-60 o C—-70o C下，可存放1个月）5.室温保温5min6.加入氯仿0.3ml，盖紧手震动混匀15s7.室温2-3min8.4 o C，12000g 15min9.取上清约0.8ml，转移到1.5ml离心管中，管子处理同上，去净上清的中下层液体用于DNA和蛋白质的提取10.加异丙醇0.7ml，混匀，室温下10min11.4 o C，10000g 10min12.弃上清，加1.4ml 75%乙醇（以DEPC处理灭菌水配制）混匀13.4 o C，7000g 5min14.弃上清，室温干燥5min15.DEPC处理灭菌纯水100μl溶解，-70 o C保存二．DNA提取1.去净上清的中下层液体约0.6ml，加入100%乙醇0.45ml，混匀2.室温下2-3min3.4 o C，5000g 5min4.去除液体，可保留用为蛋白提取5.加入0.1M柠檬酸钠75%乙醇溶液洗涤1.4ml DNA沉淀，室温下30分钟，间断混匀6.4 o C，2000g 5min7.重复洗涤一次8.加入0.1M柠檬酸钠75%乙醇溶液洗涤1.4ml DNA沉淀，室温下15分钟，间断混匀9.4 o C，2000g 5min10.室温下干燥5-15min11.在300-600μl 8mM NaOH中溶解，DNA浓度约为0.2-0.3 μg/ μl12.若有不溶物，12000g 10min13.上清可以在4 o C存放过夜14.长时间保存需要用HEPES加1mM EDTA调整pH至7-8。

三．蛋白质提取1.转移上清到5ml的离心管中，大约体积为1ml2.加入2.3ml异丙醇（1.5ml/mlTRIZOL），室温下保温10min3.4 o C，12000g 10min4.加入3ml（2ml/mlTRIZOL）含0.3M盐酸胍的95%乙醇，室温下20min5.4 o C，7500g 5min6.重复洗涤3次7.加入2ml乙醇，室温下20min8.4 o C，7500g 5min9.真空干燥蛋白沉淀5－10min，1%SDS溶解10.完全溶解需要在50 o C保温，不溶物可4 o C 10000g 10min离心去除11.上清转移至新管，可用于Western blotting或－20o C存放。

TRIzol法同时提取RNA,DNA,蛋白质

TRIzol法同时提取RNA,DNA,蛋白质TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。

TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质．TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。

在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。

取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可回收DNA；用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。

TRIzol试剂可用于小量样品（50-100mg组织、5×106细胞）也适用于大量样品（≥1g组织、>107细胞）。

对人，动物，植物组织，细菌均适用，可同时处理大量不同样品，整个提取过程在一小时内即可完成。

分离的总RNA无蛋白质和DNA污染，可用于Northern Blot，dot blot，ployA筛选，体外翻译，RNase保护分析和分子克隆。

在用于RT-PCR时如果两条引物存在于一个单一外显子内，建议用无RNase的DNaseⅠ处理RNA样品，避免出现假阳性。

共纯化的DNA可用作标准，比较不同样品RNA的得率，也可用于PCR 和酶切。

蛋白质可用于Western Blotting。

规格：100ml 黄色透明液体储存条件：2-8℃避光保存12个月注意：请勿直接接触皮肤或吞咽，以免灼伤。

如接触皮肤应立即用洗涤剂和大量水冲洗。

忌用乙醇擦洗，乙醇会加重灼伤程度。

预防RNase污染注意事项：1.经常更换新手套，皮肤上常带有的细菌，霉菌可能成为RNase的来源。

2.使用灭过菌的RNA专用塑料制品避免交叉污染。

3.RNA在TRIzol试剂中时不会被RNase污染，但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。

玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料制品可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，高压灭菌，即可去除RNase。

改良TRIzol法同步提取血液RNA和DNA

ｗａｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈａｔｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＴＲＩＺＯｌｍｅｔｈｏｄ．ＲｅｓｕｉｔｓＴｈｅＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙｔｈｉｓ
ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＴＲＩＺＯ１ｍｅｔｈｏｄ．ｔｈｅｖａｌｕｅｓｏｆｐＨｏｆｔｈｅｉｎｔｅｒｐｈａｓｅｐｈａｓｅａｎｄｏｒｇａｎｉｃｐｈａｓｅｗｅｒｅａｄｊｕｓｔｅｄ．ＴｈｅＤＮＡｗａｓｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄｗｉｔｈｅｔｈａｎｏｌａｎｄｐｕｒｉｉｆｅｄｗｉｍＤＮＡＩＯｓｙｓｔｅｍ．ＴｈｅｐｕｒｉｉｆｅｄＤＮＡｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｉｎｑｕａｌｉｔｙａｎｄｑｕａｎｔｉｙ．Ａｓｔｔｈｅｔｅｍｐｌａｔｅ．ｉｔｗａｓａｍｐｌｉｉｆｅｄａｎｄｔｙｐｅｄｂｙＰＣＲ．ＳＴＲ．Ｔｈｅｄａｔａ
法。方法使用传统ＴＲＩｚｏｌ法将含有总ＲＮＡ的水相移除，调节中间层和有机相的ｐＨ值，乙醇沉淀ＤＮＡ，
运用ＤＮＡＩＱＭＴｓｙｓｔｅｍ试剂盒纯化ＤＮＡ检测ＤＮＡ纯度和质量浓度，并以之为模板进行ＰＣＲ — ＳＴＲ分型。与传统ＴＲＩｚ０１法提取的基因组ＤＮＡ进行比较。结果改良ＴＲＩｚｏｌ法提取的基因组ＤＮＡ较传统ＴＲＩｚｏｌ法

trizol法组织DNARNA及蛋白提取方法

TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。

TRIzol试剂有多组分分离作用，与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。

在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。

取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可回收DNA；用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。

RNA的提取准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS（溶液均需用DEPC处理过的水配制）。

操作步骤：1. 匀浆处理：a.组织将组织在液氮中磨碎，每50～100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。

样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积（即3.5cm直径的培养板）加1ml，用移液器吸打几次。

TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。

TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c.细胞悬液离心收集细胞，每5～10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1mlTRIzol，反复吸打。

加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。

一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。

2.将匀浆样品在室温（15～30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

(我们是5分钟)4. 2-8℃10000×g离心15分钟。

样品分为三层：底层为黄色（我们见到的是红色）有机相，上层为无色水相和一个中间层。

RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

5. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。

如何用Trizol抽提DNA（没错是DNA！）

如何用Trizol抽提DNA（没错是DNA！）我叫林平之，是万事屋著名的NPC，大家应该都认识，我是莫愁师姐的师弟。

最近抽提RNA经常会用DNA污染，导致qPCR扩增出来都不对，真是烦人！咋办，问问看神师兄吧。

神师兄：好，看你辣么乖，今天就教你怎么用Trizol来抽提DNA 吧。

是的，你没看错，就是用Trizol来抽提DNA。

小林子：师兄，我读书少，但我听远房姑表姨妈家的大师姐曾经说过，Trizol是用来抽提RNA的……神师兄：少年人，我读书多，不会骗你的。

Trizol里面的主要成分是酚，和一些胍盐，异硫氰酸胍和盐酸胍。

Trizol中酚是用来破碎细胞的，而胍盐用来抑制各种酶的活性。

用Trizol将细胞裂解后，再用氯仿将蛋白质变性后，萃取分层，离心后，就会变成这样：当Trizol的pH＜7的时候，抽提过程中，DNA会分离到下层的有机相中。

这就是为什么一般Trizol都会使用水饱和酚，而DNA抽提时要用Tris饱和酚了。

好了，废话不多说了，我们要怎么样才能用Trizol来抽提DNA呢？由于Trizol是酸性的，抽提时DNA都会分布到下层的氯仿有机相里面。

那我们采用乙醇将DNA沉淀，就能将有机相中的DNA进行沉淀了。

接着，我们用含有柠檬酸钠的乙醇来洗几次沉淀，就能顺顺利利地抽提到DNA了。

Trizol能抽提DNA，那当然也能抽提蛋白咯。

蛋白的话，用异丙醇来沉淀就能抽提到蛋白了。

但这些并不重要，重要的是，我们在使用Trizol抽提RNA的时候，要怎么样避免DNA污染呢？刚才也说了，当Trizol中pH大于7的话，就会导致DNA溶解进水相。

也就是说你的样本中如果存在有强碱性的物质，就有可能导致DNA污染。

同样，样本中如果含有DMSO或者乙醇之类的有机溶剂的话，也会导致Trizol抽提RNA的时候，有Genomic DNA污染哦！所以还是要小心呢！好了，今天就策到这里吧。

Trizol法提取RNA、DNA及蛋白质

Trizol法提取RNA、DNA及蛋白质1、向组织或细胞中加入1ml TRIZOL，吹打混匀，室温静置5min；2、加入TRIZOL 1/5(200ul)氯仿，振荡混匀，室温静置3min，4°C 12000g离心15-20min；注：上层水相可以通过异丙醇沉淀RNA，中间层通过乙醇能使DNA沉淀析出，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白质。

RNA提取3、将上层水相转移到另一干净的EP管中，加入等体积异丙醇，混匀，室温放置10 minutes;4、4°C，然后离心12,000 g ，10 minutes，去上清留沉淀；5、加入1ml 75%乙醇（RNase-free）洗涤沉淀，votex 5s；6、4°C， 12,000 g ，离心10 minutes，去上清留沉淀；7、加入1ml无水乙醇洗涤，votex 5s ，4°C， 12,000 g ，离心10 minutes，去废液留沉淀；8、晾干；9、加入50ulRNase free ddH2O溶解；10、测浓度，-80℃保存。

DNA提取3、将上层水相转移干净，这对分离DNA很关键；4、加入300ul无水乙醇/1ml TRIZOL，颠倒混匀，室温静置3min；5、4°C，2,000 g ，离心5 minutes；6、转移上清液，用于蛋白提取；7、加入1ml柠檬酸钠/无水乙醇（0.1M柠檬酸钠10%乙醇，pH8.5）洗涤，室温孵育30min（不时轻轻颠倒混匀）；8、4°C， 2,000 g ，离心5 minutes，去废液留沉淀；9、重复步骤7和8；10、加入1ml 75%乙醇洗涤沉淀，室温孵育10-20min（不时轻轻颠倒混匀）；11、4°C， 2,000 g ，离心5minutes，去上清留沉淀；12、无水乙醇洗涤，votex 5s，4°C， 2,000 g ，离心10 minutes；13、晾干；14、加入50ul ddH2O或TE溶解，测浓度，冰箱保存。

CTAB法提取DNA、Trizol一步法提RNA及注意事项

CTAB法提取DNA及注意事项0.1g菌丝体（植物新鲜组织）+ CTAB+适量石英砂研磨－→混匀－→ 65℃水浴1 h－→ 冰浴10min－→ 离心取研磨液于1.5mL 离心管－→ +700μL苯酚，混匀（5~20min）－→ 离心15min(10,000r) －→取上清液三次－→ +500μL（等体积）氯仿，混匀5—10 min－→ +离心15min －→取200μL上清液2次－→ 400μL异丙醇（等体积）上下颠5次，静置15min,离心10min－→去溶液，+700μL70%乙醇－→摇晃、离心10min－→去溶液，倒扣于纸上至酒精及水分挥发完原理及注意事项：1、加CTAB研磨：这一步骤是使得细胞裂解，CTAB是离子型表面活性剂能溶解细胞膜及核膜蛋白，使核蛋白解聚、DNA游离。

（注意：若是用液氮研磨，则加CTAB前需将CTAB65℃预热，因为当环境温度低于15℃时，CTAB析出，加冰冷样品前需预热。

在液氮中研磨使材料易于破碎，减少酶的作用）2、水浴过程中每需10 min混匀一次，使样品裂解充分。

3、加氯仿：异戊醇（24:1），使蛋白质变性、抽提液分相，核酸水溶性强，离心可除去细胞碎片及大部分蛋白质。

4、取上清液（400微升，避免吸油层），RNA提取（提前分装75%乙醇-DEPC及DEPC水）Trizol一步法1. 100 mg 叶片，液氮研磨（进口2 mL 管）。

2. 加入1 mL左右（800 μL）Trizol抽提液，摇匀，静置5 min （室温）。

3. 按每mL Trizol提取液加入200 μL 氯仿，剧烈震荡15 s ，室温静置5 min （3 min）。

4. 1,2000 r ,4℃离心15 min （提前将离心机调至4℃，盖上盖子，按下short键）。

取400-500μL 上清液（1.5 mL进口），加入等体积（500-600μL）异丙醇，颠倒混匀，-20℃，20 min （可省）。

trizol法

trizol法
Trizol法是一种常用的分离和提取核酸的方法，它可以有效地分离和提取DNA、RNA和蛋白质。

Trizol法是由美国公司GIBCO BRL公司开发的，它是一种三步法，可以有效地分离和提取核酸。

Trizol法的第一步是细胞悬液的混合，将细胞悬液加入Trizol液中，然后混
合均匀，使细胞膜破裂，释放出细胞内的核酸。

第二步是沉淀提取，将混合液加入乙醇，使核酸沉淀，然后用离心机将沉淀物
收集，再用热水浴将沉淀物稀释，最后用离心机将沉淀物收集，得到提取的核酸。

第三步是提取液的清洗，将提取液加入苯乙醇，使蛋白质沉淀，然后用离心机
将沉淀物收集，再用热水浴将沉淀物稀释，最后用离心机将沉淀物收集，得到提取的核酸。

Trizol法是一种有效的分离和提取核酸的方法，它可以有效地分离和提取DNA、RNA和蛋白质，是研究基因的重要工具。

它的优点是简单、快速、高效，可以有效
地提取大量的核酸，是研究基因的重要工具。

TRIZOl提取组织DNA详细步骤

Trizol提组织DNA按照RNA 分离操作方案在完全移去水样层后，匀浆中的DNA 存在于中间层和苯酚层中也可以被分离出来。

在沉淀和多次洗脱后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。

用TRIZOL试剂从组织和培养细胞中完全回收的DNA 可以用来做样品中DNA 含量的测定。

同时抽提的基因组DNA 可以用于对Northern analysis的结果进行标准化，因为DNA 变异程度比总RNA 或组织重量要小。

[由于来源的不同，所得到的DNA 沉淀在进一步应用前可能需要额外的纯化步骤（例如苯酚抽提等等）。

实验所需但试剂未提供的物品：* 酒精、* 0.1 M柠檬酸钠（用10%酒精配制）、* 75%酒精、8 mM NaOH 如无例外，以下操作均应在15―30℃下完成。

组织：研磨组织，每50-100mg组织加0.75ml trizol1.DNA 的沉淀移除中间层上残余的水样层，用酒精从中间层和苯酚层中沉淀DNA 。

按最初匀浆化时每1 ml TRIZOL加0.3 ml的无水乙醇，反复颠倒来混合样品。

然后将样品置于15―30℃下2―3分钟，再在2―8℃下以不超过2,000×g的离心力离心5分钟沉淀DNA 。

小心移除水样层对抽提的DNA 的质量至关重要。

2.DNA 的洗脱移除离心后苯酚层中的上清液，如有必要，可以将其保留用于抽提蛋白。

用0.1 M柠檬酸钠（用10%酒精配制）洗涤DNA 沉淀两次。

按最初匀浆化时每1 ml TRIZOL加1 ml柠檬酸钠溶液。

每次洗涤时洗涤液要和DNA 沉淀在15―30℃下作用30分钟（期间周期性混匀）再在2―8℃下以2,000×g的离心力离心5分钟。

在两次洗涤完成后，用75%的酒精重悬DNA 沉淀（每1 ml TRIZOL加1.5―2 ml75%酒精），在15―30℃下放置10―20分钟（期间周期性混匀）然后再在2―8℃下以2,000×g的离心力离心5分钟。

用Trizol提取DNA,RNA及蛋白质的方法及注意事项

TRIZOL试剂警告：接触皮肤或误吞将导致中毒或灼伤。

接触皮肤之后立即用去垢剂和水冲洗。

若感到不适，请遵医嘱（可能的话出示标签）。

收到药品后，在室温下存储。

以已证明TRIZOL在常温下可稳定储存12个月。

说明：TRIZOL是一种从细胞和组织中提取总RNA的现用试剂。

该试剂是一种苯酚异硫氰酸酯单相溶液，它发展自Chomczynski 和Sacchi的RNA一步抽提法。

在细胞破碎和溶解细胞组分时，TRIZOL可以保持细胞匀浆或抽提物中RNA的完整性。

离心后加入氯仿，将溶液分为水相和有机相。

RNA只留在水相中。

转移水相后，用异丙醇沉淀回收RNA。

除去水相后，样品中的DNA和蛋白质也可以用后续沉淀方法回收。

用乙醇从相界面间沉淀DNA，异丙醇从有机相回收蛋白质。

DNA 的共纯化可能对样品间RNA产量的正常化有用。

这项提取技术对人、动物、植物或细菌来源的各种量的组织（低至50-100mg，高至≥1g）和细胞（低至5×106，高至＞107）都有良好的效果。

其简单的操作方法允许同时处理大量样品。

整个过程可在1小时内完成。

用TRIZOL提出的总RNA 不含蛋白质和DNA污染，可用来做Northern 电泳分析、斑点杂交、poly (A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。

在PCR和扩大DNA酶Ⅰ梯度分离中，建议使用一个内含子中的两个引物。

TRIZOL简化了各种类型的大分子及小分子RNA的分离。

例如，从鼠肝分离的RNA经琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色，显示出介于7到15kb的大分子RNA 条带,（由mRNA和hnRNA组成的）两个约5kb（28S）和2kb（18S）核糖体RNA 的条带，以及介于0.1到0.3kb（tRNA, 5S）的小分子RNA的条带。

所分离的RNA 稀释于TE时A260/A280之比大于等于1.8。

谨防RNase的污染：在提取中任何不正确的操作方法中都可能偶然引入RNase。

由于其活性难以抑制，因此只能直接避免其引入。