RNA提取步骤
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
1. 组织样品：称取20mg-50mg 样品，使用液氮研磨或者匀浆器匀浆，加入RNA-Solv ® Reagent裂解
2. 室温静置2-3 分钟。
3. 加入200µl 氯仿(氯仿的使用量为1/5 RNA-Solv ® Reagent 的使用量），涡旋混匀15 秒，冰浴10
分钟。
4. 4℃，12,000×g 离心15min。
5. 小心转移不大于80%的水相层至新的离心管，加入1/3 倍体积的无水乙醇，涡旋混匀15 秒。
6. 将HiBind RNA 结合柱套在2ml 离心管中，转移不大于700µl 混合液至HiBind RNA 结合柱中。
室温下10,000×g 离心1 分钟，弃滤液。
7. 重复步骤六，直至所有的混合液全部离心，结合到HiBind RNA 结合柱上。
8. 将HiBind RNA 结合柱套在新的2ml 离心管中，加300µl RNA Wash Buffer I 至HiBind RNA 结合柱中，10,000×g 离心1 分钟，弃滤液；
9. （选做）DNase I 消化:
a. 配制DNase I(Digestion Buffer, 73.5µl; RNase-Free DNase I,1.5µl),混匀。
b. 将上述75µl DNase I 溶液转移至HiBind RNA 结合柱膜的正中央，不要将消化液转移至柱子内
壁。
c. 室温静置15 分钟。
10. 将HiBind RNA 结合柱套在同一个2ml 离心管中，加入400µl RNA Wash Buffer I 洗涤，如做了DNase I 消化，需室温静置 5 分钟，10,000×g 离心1 分钟，弃滤液。
11. 将HiBind RNA 结合柱套在同一个2ml 离心管中，加入500µl RNA Wash Buffer II 洗涤，10,000×g 离心 1 分钟，弃滤液。
12. 重复步骤11 一次，＞10,000xg 离心空甩2min 干燥HiBind RNA 结合柱基质。
13. 将HiBind RNA 结合柱套在干净的1.5ml 离心管中，加30-50µl DEPC Water，室温静置2min。≥10,000xg 离心1min 洗脱RNA。