雌激素受体α短发夹RNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌干细胞的影响

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雌激素受体α短发夹RNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌干细胞的影响

雌激素受体α短发夹RNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌干细胞的影响杜佩云;程龙;姜丽娜;陈立涵;林佳佳;叶棋浓;苏金为【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2015(026)003【摘要】目的:构建特异抑制雌激素受体α(ERα)基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,检测其对ERα的干扰效果,并探讨其对MCF7细胞中乳腺癌干细胞含量的影响.方法:以人的ERα核酸序列为靶标,根据shRNA设计原则设计并化学合成特异的shRNA序列,经退火处理后与pSIH-H1质粒连接,转化大肠杆菌DHSα后挑取单克隆并测序;将该克隆进行病毒包装并感染乳腺癌MCF7细胞,用嘌呤霉素进行筛选,最终得到稳定克隆;收取细胞,用Western印迹和qRT-PCR检测ERα在mRNA及蛋白水平上的变化,流式细胞术检测敲低ERα能否影响MCF7乳腺癌干细胞的含量.结果:经测序分析表明目标shRNA序列成功插入载体,qRT-PCR检测稳定克隆,发现该shRNA能有效抑制目的基因的mRNA转录水平,同时Western印迹检测发现内源性ERα量明显下降;流式细胞术检测发现ERα敲低的MCF7稳定克隆中雌激素诱导的乳腺癌干细胞含量上升的现象被明显抑制.结论:设计并构建的抑制ERα的shRNA能够有效抑制ERα的表达,并下调MCF7细胞中乳腺癌干细胞的含量,为研究ERα在乳腺癌干细胞中的功能及机制奠定了实验基础.【总页数】4页(P325-328)【作者】杜佩云;程龙;姜丽娜;陈立涵;林佳佳;叶棋浓;苏金为【作者单位】福建农林大学生命科学学院,福建福州350002;军事医学科学院生物工程研究所,北京100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京100850;福建农林大学生命科学学院,福建福州350002【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.雌激素受体α高表达慢病毒载体对根尖牙乳头干细胞成牙／成骨分化的影响 [J], 卢亚蝶;闫明;于金华2.雌激素受体α-shRNA慢病毒载体对根尖牙乳头干细胞成牙/成骨向分化的影响[J], 马姝;闫明;吴锦涛;王子露;张光东;于金华3.靶向活化转录因子6的短发夹RNA重组腺病毒载体构建及对猪瓣膜间质细胞增殖与凋亡的影响 [J], 田军;刘晓红;韩林4.钙网织蛋白-短发夹RNA慢病毒载体构建及其对喉鳞状细胞癌细胞Hep-2中钙网织蛋白表达的影响 [J], 高树峰;杨明福;张克辉;游龙贵;王富华;王心涛;刘遗斌;罗冬;蔡云香5.HGF基因重组腺病毒载体构建及其转染对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和迁移的影响 [J], 罗晓红;曾雯;巨容因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

雌激素受体对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的影响研究

372018.05基础研究雌激素受体对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的影响研究李　扬烟台毓璜顶医院山东省烟台市 264000【摘　要】目的：通过使用三氧化二砷（As 2O 3）诱导雌激素受体（estrogen receptor，ER）的再次表达，通过对乳腺癌细胞生长曲线的研究来探讨ER 在阴性乳腺发展过程中的作用。

方法：本研究以ER 阴性的人乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象，采用免疫组化、生长曲线检测法等生物学方法来检测ER 在阴性乳腺癌发展过程中的作用。

结果：以MCF-7作为阳性对照，免疫组化结果显示，As 2O 3可以诱导ER 的再次产生。

进一步观测MDA-MB-231细胞的生长曲线，发现ER 可明显抑制其生长，与对照组相比，有显著性差异（P<0.05）。

结论：ER 的再表达可抑制阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长。

【关键词】乳腺癌；雌激素受体（ER）；肿瘤生长乳腺癌（breast cancer ）是女性人群中常见的恶性肿瘤，严重危害着女性健康。

在中国，乳腺癌已经占到了各种恶性肿瘤的10%左右，而且随着生活环境的改变，发病率也呈逐年上升的趋势[1]。

越来越多的研究证实，雌激素在女性乳腺癌发展过程中有关键性作用，显示乳腺癌的发展具有雌激素依赖性。

雌激素主要通过雌激素受体（ER ）发挥作用，与乳腺癌的生长密切相关，ER 的表达量过低可促进乳腺癌细胞的增殖、转移，甚至抑制乳腺癌细胞的凋亡[2]。

其可作为评估乳腺癌治疗的激素依赖性和预测内分泌治疗效果的分子标志物。

目前临床上，对于ER 阳性的乳腺癌的；后者的破坏作用是通过激活补体等间接实现的[3]。

临床报道关于Graves 病伴HT 的报道较多，患者往往因病理变化和临床表现的影响，让人以为Graves 病和HT 是同一种疾病的不同方面，而实际上，二者是不同的疾病[4]。

甲亢患者TGAb 、TPOAb 、TSAb 阳性率较高，TGAb 属于多克隆抗体，有多种生理功能，和自身免疫性甲状腺疾病的发病有紧密的联系[5]。

微小RNA调控雌激素受体α在乳腺癌中表达的研究进展

ＴｈｅｒｅｓｅａｒｃｈａｄｖａｎｃｅｉｎｍｉｃｒｏＲＮＡｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ
ｉｎｔｈｅｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ
ｕｓｅｄａｓｔｈｅｔａｒｇｅｔｐｏｉｎｔｓｏｆＥＲａｍＲＮＡａｎｄｄｉｒｅｃｔｌｙｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥＲｕ．Ｄｅｅｐｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ＡＢＳＴＲＡＣＴＥｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ０【（ＥＲａ）ｉｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅｔｈｅｒａｐｙ．ＭｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）ｅｘｅｒｔｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｏｆｔｈｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＳｏｍｅｍｉＲＮＡｓｃａｎｂｅ
ｎｅｗｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｉｎｔｈｅｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｔｈｅｔａｒｇｅｔｅｄｔｈｅｒａｐｙ．Ｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗｓｕｍｍａｒｉｚｅｓｔｈｅｒｅｌａｔｅｄｒｅｓｅａｒｃｈｔｈａｔｔｈｅ

雌激素受体对乳腺癌细胞耐药及增殖凋亡作用的研究

雌激素受体对乳腺癌细胞耐药及增殖凋亡作用的研究一、本文概述乳腺癌作为全球女性最常见的恶性肿瘤之一，其治疗策略一直受到广泛的关注和研究。

在乳腺癌的治疗过程中，化疗药物的应用对于控制病情、提高患者生存率具有重要意义。

然而，乳腺癌细胞对化疗药物的耐药性问题一直是困扰临床治疗的难题。

近年来，随着分子生物学的深入发展，越来越多的研究表明，雌激素受体（ER）与乳腺癌细胞耐药及增殖凋亡过程之间存在密切关联。

因此，本文旨在深入探讨雌激素受体对乳腺癌细胞耐药及增殖凋亡作用的影响机制，以期为乳腺癌的精准治疗提供新的思路和方法。

本文首先将对雌激素受体在乳腺癌细胞中的表达及其调控机制进行阐述，明确雌激素受体与乳腺癌细胞耐药性的关系。

接着，通过综述相关文献和实验数据，分析雌激素受体对乳腺癌细胞增殖和凋亡过程的影响，探讨其可能的作用机制。

结合当前乳腺癌治疗的临床实践，对雌激素受体在乳腺癌治疗中的应用前景进行展望，以期为乳腺癌的个体化治疗提供新的理论依据和实践指导。

二、雌激素受体与乳腺癌细胞耐药性的关系乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发生、发展与雌激素的作用密切相关。

雌激素通过与乳腺癌细胞上的雌激素受体（ER）结合，调控细胞的生长、分化和凋亡。

因此，ER在乳腺癌的发生、发展中起着至关重要的作用。

近年来，随着乳腺癌治疗的不断进步，乳腺癌细胞的耐药性逐渐成为临床治疗的难题。

研究表明，ER与乳腺癌细胞的耐药性之间存在密切的关系。

ER阳性的乳腺癌细胞通常对内分泌治疗敏感，如抗雌激素药物他莫昔芬（Tamoxifen）和芳香化酶抑制剂等。

然而，部分ER阳性乳腺癌细胞在治疗过程中会出现耐药性，导致治疗效果不佳。

这种耐药性的产生可能与ER的表达水平、ER的变异、ER信号通路的改变等多种因素有关。

ER的表达水平可能影响乳腺癌细胞的耐药性。

高表达的ER通常意味着乳腺癌细胞对内分泌治疗的敏感性更高。

然而，随着ER表达的增加，乳腺癌细胞也可能通过上调其他生长因子受体的表达，如胰岛素样生长因子受体（IGF-1R）和表皮生长因子受体（EGFR），从而绕过ER信号通路，产生耐药性。

慢病毒介导雌激素受体β在乳腺癌细胞中的高表达抑制上皮细胞间质转化相关基因的表达

慢病毒介导雌激素受体β在乳腺癌细胞中的高表达抑制上皮细胞间质转化相关基因的表达李玮妮;陈立涵;程龙;付洁;林亚红;刘婕;张浩;叶棋浓【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2013(000)005【摘要】目的：：建立稳定高表达雌激素受体β（ERβ）蛋白表达的乳腺癌ZR75-1细胞株，检测其对上皮细胞间质转化（EMT）相关基因的影响。

方法：将编码人ERβ的cDNA序列插入慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro，将其与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞后收集病毒上清，感染乳腺癌ZR75-1细胞，经嘌呤霉素筛选后获得稳定高表达含Myc标签的人ERβ的混合细胞集落，以及作为对照组整合有对照慢病毒载体pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro的混合细胞集落，提取细胞蛋白，用Myc抗体检测Myc-E Rβ融合蛋白的表达，同时检测EMT相关基因Snail、E-Cadherin、N-Cadherin的表达水平和GSK-3β的磷酸化水平。

结果：建立了稳定高表达Myc-ERβ融合蛋白的乳腺癌细胞株，和对照组相比，Myc-ERβ高表达抑制EMT相关蛋白N-cadherin和Snail的表达，增强E-cadherin分子的表达，抑制GSK-3β磷酸化水平。

结论：建立了Myc-ERβ高表达的乳腺癌细胞株，发现ERβ高表达抑制EMT相关分子的表达，为深入研究ERβ分子在乳腺癌中调控EMT的机制奠定了基础。

%Objective: To construct a breast cancer ZR75-1 cell line stably overexpressing estrogen receptorβ(ERβ)and detect its effects on the expression of epithelial-mesenchymal transition(EMT)associated genes. Methods: Cloning ERβ cDNA into the lentivirus vector pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro,which was then packaged withaccessary plasmids into lentivirus in 293T cells. After infected with lentivirus and selected by puromycin, mixed ZR75-1 colonies stably expressing Myc-ERβ were obtained and the fusion Myc-ERβ expression was detected by Western blot. Meanwhile, the expression of EMT associated protein such as Snail, E-Cadherin, N-Cadherin and GSK-3β in ERβ overexpression ZR75-1 cells was compared with that in vector control cells. Results: N-cadherin and Snail expression was decreased and E-cadherin increased in ERβ overexpressing cells, Moreover, ERβ overexpression may decrease the GSK-3β phophorylation level. Conclusion: Breast cancer cell line overexpression ERβ was successfully constructed and ERβ overexpression may regulate t he expression of several protein involved in EMT, which has established a good foundation for further study of the mechanism of the regulation of EMT by ERβ in breast cancer cells.【总页数】4页(P624-627)【作者】李玮妮;陈立涵;程龙;付洁;林亚红;刘婕;张浩;叶棋浓【作者单位】军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.miR-221调控PTEN/Akt信号介导人胶质瘤耐药细胞上皮间质转化相关基因的表达 [J], 谢强;黄作平;闫雍容;李锋;钟雪云2.上皮细胞间质样转化相关基因在胃癌组织中的表达及其相互关系 [J], 陶洋;王梅;顾红兵;彭秀娟;赵崇晖;徐会涛;陈瑜;钱晖3.miR-27b在雌激素受体阳性的乳腺癌细胞上皮间质转化及他莫昔芬耐药中的调控机制 [J], 李秀楠;吴玉梅;刘爱蕙;唐欣4.环状GMP-AMP合成酶高表达对乳腺癌细胞上皮间质转化的影响 [J], 张晓金;张文霞;朱吉玲;罗文盼5.抑制血清应答因子表达影响转化生长因子β1介导的食管癌上皮细胞-间质转化的作用研究 [J], 何喜;王志强;林韬;胡万宁;张明明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

雌激素受体α的生物学特性及其与疾病的关系

雌激素受体α的生物学特性及其与疾病的关系雌激素是女性生殖系统发育和维持的重要激素，它通过与受体结合发挥作用。

雌激素受体α(ERα)是一种核受体，主要存在于乳腺、子宫、卵巢、脊髓等组织中，具有重要的生物学特性。

本文将探讨ERα的生物学特性及其与疾病的关系。

1. ERα基础结构和功能ERα是一种转录因子，具有DNA结合和调节转录的能力。

其基础结构包括两个结构域：DNA结合结构域(DBD)和激素结合结构域(LBD)。

DBD是ERα的DNA结合位点，与DNA序列特异性结合，激活或抑制下游基因的转录。

LBD则是ERα与雌激素结合的位点，雌激素与LBD结合后，ERα就能转移到细胞核，结合到DNA上，启动或终止基因的转录。

除此之外，ERα还能与多种共同激活因子(Coactivator)和共同抑制因子(Corepressor)结合，这些因子调控ERα的转录活性。

其中，共同激活因子可以增强ERα受体的转录活性，进一步影响细胞增殖、分化等基本生命过程。

共同抑制因子也能对ERα发挥否定调控作用，影响细胞生长、分化和代谢过程。

2. ERα与乳腺癌的关系ERα在乳腺癌的发生和发展中起着重要作用。

乳腺癌细胞中，往往能检测到ERα的存在，而它在细胞内的作用则不同。

几乎所有的情况下，ERα的功能是抑制癌细胞增殖，激活凋亡途径，从而抑制肿瘤发生的进程。

但一旦ERα功能遭到破坏，或者某些激素在特定情况下与ERα结合，那么ERα可能会失去抑制癌细胞增殖的作用，反而通过某些机制促进肿瘤发生。

发现乳腺癌中ERα的状态可以帮助医生选择最合适的治疗方法。

如果患者乳腺癌细胞上的ERα结构完整，那么激素治疗是一种有效的方法。

因激素治疗可以直接影响ERα，在肿瘤细胞内引入新的合规行为，使肿瘤抑制化。

但是如果肿瘤细胞没有ERα，那么激素治疗就没有作用。

3. ERα与心血管疾病的关系除了乳腺癌外，ERα还与心血管疾病存在关系。

大量证据表明，ERα在心血管系统中的作用是保护性的。

TOX3基因RNAi慢病毒载体的构建及对乳腺癌ZR-75-1细胞增殖的影响

TOX3基因RNAi慢病毒载体的构建及对乳腺癌ZR-75-1细胞增殖的影响韩翠翠;刘立琨;王玉春;杨莹;刘吉成;周忠光【摘要】旨在构建TOX3基因RNAi慢病毒载体并观察其对人乳腺癌ZR-75-1细胞增殖能力的影响.针对TOX3基因设计干扰靶序列,构建载体,测序正确后进行慢病毒包装及滴度测定.转染ZR-75-1细胞,荧光显微镜下观察表达GFP的细胞数目,实时荧光定量PCR及Western blot实验验证转染后ZR-75-1细胞中TOX3 mRNA 和蛋白的表达.MTT及平板单克隆实验检测TOX3对ZR-75-1细胞增殖能力的影响.结果显示,各组载体序列正确,病毒滴度均>2×108 TU/mL,表达GFP细胞数目均可达95％以上.各干扰组TOX3 mRNA及蛋白表达水平均降低,其中TOX3-shRNA-3组干扰效果最佳,转染后ZR-75-1细胞的增殖和单克隆形成能力下降.成功构建TOX3基因的RNAi慢病毒载体,沉默TOX3后ZR-75-1细胞的增殖能力下降.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2019(035)007【总页数】7页(P141-147)【关键词】TOX3基因;慢病毒载体;RNA干扰;ZR-75-1细胞【作者】韩翠翠;刘立琨;王玉春;杨莹;刘吉成;周忠光【作者单位】齐齐哈尔医学院药学院,齐齐哈尔 161006;黑龙江中医药大学基础医学院,哈尔滨 150040;齐齐哈尔医学院医药科学研究院,齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔医学院药学院,齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔医学院药学院,齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔医学院医药科学研究院,齐齐哈尔 161006;黑龙江中医药大学基础医学院,哈尔滨150040【正文语种】中文TOX高迁移率蛋白盒家族成员（TOX highmobility box protein group family member3，TOX3）基因为高迁移率蛋白（High mobility group，HMG）家族成员之一。

短发夹RNA沉默YAP表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

王琪邓志华
【摘要】目的本实验通过短发夹ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）抑制Ｙｅｓ相关蛋白（ＹＡＰ）基因的表达，并观察其对肝
癌细胞ＳＭＭＣ．７７２１的增殖、凋亡和周期影响。方法以人ＹＡＰｍＲＮＡ编码区中的４条序列作为ＲＮＡ干扰靶
ｏｎｄＨｏｓｐｉｔａｌｆＳｏｈａｎｘＭｅｄｉｃｏｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ０３０ｏｏ１．Ｃｈｉｎａ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｉｔｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｓｈＲＮＡｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ・ｉｎｄｕｃｅｄＹｅｓ — ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ（ＹＡＰ）
ｓｈＲＮＡ．ＹＡＰ一２组与ｓｈＲＮＡ．ＹＡＰ－４组ＹＡＰｍＲＮＡ表达明显降低，在ＳＭＭＣ．７７２１中ｓｈＲＮＡ．ＹＡＰ．２组与ｓｈＲＮＡ．
ＹＡＰＭ组的ＹＡＰｍＲＮＡ及蛋白表达水平分别为（０．８７１ ± ０．０８１，０．１０６￣０．０１３）和（１．０１０￣０．０９７，０．１９２＋０．０１３）。与未
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｎｐｏｌｒｉｆｅｒａｔｉｏｎ。ａｐｏｐｔｏｈｕｍａｎＳＭＭＣ．７７２１ｃｅｌｌｌｉｎｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓｅｅｕｋａｒｙｏｔｉｅｅｘ．

微小RNA调控雌激素受体α在乳腺癌中表达的研究进展

微小RNA调控雌激素受体α在乳腺癌中表达的研究进展作者：胡朝洲史永照来源：《上海医药》2015年第08期摘要雌激素受体α（estrogen receptor α，ERα）与乳腺癌细胞的增殖、浸润及对内分泌治疗敏感性密切相关。

微小RNA（miRNA）具基因表达调控作用。

某些miRNA可以ERαmRNA 为靶点，直接调控ERα的表达。

深入研究这些调控ERα表达的miRNA在乳腺癌发生、发展中的作用及机制，有助于为乳腺癌的治疗特别是靶向治疗提供新的策略。

本文对乳腺癌中miRNA直接靶向调控ERα表达的相关研究进行综述。

关键词乳腺癌微小RNA 雌激素受体α 基因表达中图分类号：R737.9 文献标识码：A 文章编号：1006-1533（2015）08-The research advance in microRNA regulating the expression of estrogen receptor α in the breast cancerHU Chaozhou， SHI Yongzhao（Shanghai Fifth People’s Hospital of Fudan University， Shanghai 200240， China）ABSTRACT Estrogen receptor α （ERα） is closely related to the breast cancer cell proliferation， invasion and sensitivity to endocrine therapy. MicroRNA （miRNA） exerts an important function in regulating of the gene expression. Some miRNAs can be used as the target points of ERα mRNA and directly regulate the expression of ERα. Deep study of the function and mechanism of miRNA which regulated ERα expression in the occurren ce and development of the breast cancer will be helpful for finding the new strategies in the breast cancer treatment， especially the targeted therapy. This review summarizes the related research that the miRNA directly targeted and regulated the expressio n of ERα in the breast cancer.KEY WORDS breast cancer； miRNA；estrogen receptor α； gene expression雌激素受体（ER）是核受体蛋白超家族的重要成员，属于配体激活的转录因子，包括α、β两种亚型。

雌激素受体α的翻译后修饰与乳腺癌

雌激素受体α的翻译后修饰与乳腺癌赵锋;韩琳;伍会健【期刊名称】《生理科学进展》【年(卷),期】2012(043)003【摘要】雌激素受体α(estrogen receptor α,ERα)在乳腺癌的发生及发展过程中起着非常重要的调控作用,被认为是乳腺癌治疗途径中最合适的靶点.蛋白质翻译后修饰(post-translational modification,PTM)能调节蛋白质活性、相互作用以及亚细胞定位等,在生命体内扮演重要角色.在乳腺肿瘤发生和发展过程中,常常伴随着异常的ERα的PTM,表明PTM在该过程中发挥了重要的调节作用.本综述将就ERα的PTM与乳腺癌之间的联系做一介绍.【总页数】5页(P226-230)【作者】赵锋;韩琳;伍会健【作者单位】大连理工大学生命科学与技术学院,大连,116024;大连理工大学生命科学与技术学院,大连,116024;大连理工大学生命科学与技术学院,大连,116024【正文语种】中文【中图分类】R730【相关文献】1.乳腺癌雌激素受体阳性细胞对雌激素受体阴性细胞增殖的影响 [J], 沈娜;宋海平;赵月;郭辉;赵向旺;姜冉;何文山;黄韬2.三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌临床病理特征差异及与雌激素受体β和表皮生长因子受体表达的关系 [J], 袁礼;吴焕文;任新瑜;梁智勇3.三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌的临床病理特征差异及与雌激素受体β和表皮生长因子受体表达的关系分析 [J], 谢佳4.lncRNA-TTC39A-AS1通过调控雌激素受体靶基因促进雌激素受体阳性乳腺癌细胞生长增殖 [J], 张君娜5.胞核雌激素受体分析对判断乳腺癌、卵巢癌组织雌激素受体状态的临床意义 [J], 卢汉平;高锦辉;桂治宁;吴乃允因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

GHSR1a shRNA慢病毒载体的构建及其对体内直肠癌生长和凋亡的影响

GHSR1a shRNA慢病毒载体的构建及其对体内直肠癌生长和凋亡的影响目的探討GHSR1a shRNA慢病毒载体的构建及其对体内直肠癌生长和凋亡的影响。

方法构建特异性靶向GHSR1a基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体；通过慢病毒感染建立稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞（KD）、阴性对照细胞（NC）及空白对照细胞（BC），RT-PCR检测GHSR1a mRNA在细胞中的表达；建立裸鼠直肠癌SW480细胞皮下移植瘤模型，实验结束后处死裸鼠并测量各组裸鼠肿瘤重量；免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67的阳性表达，TUNEL法检测细胞凋亡。

结果在体外实验中，通过荧光表达情况及流式细胞学结果表明成功建立稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞；SW480细胞感染GHSR1a shRNA后，KD组细胞中GHSR1a mRNA的表达明显高于BC组或NC组（P＜0.001）；在体内实验中，KD组裸鼠直肠癌皮下移植瘤重量明显低于BC组或NC组（P=0.011）；KD组移植瘤细胞凋亡指数明显高于BC组或NC组（P＜0.001），同时Ki-67在KD组移植瘤细胞中的阳性表达显著低于BC组或NC组（P＜0.001）。

结论成功建立稳定感染GHSR1a shRNA 的直肠癌SW480细胞，沉默GHSR1a后对体内人直肠癌细胞生长有明显抑制作用，并促进细胞凋亡，表明GHSR1a基因有可能成为新的直肠癌治疗作用靶点。

Abstract：Objective To investigate the therapeutic effects of lentivirus-mediated shRNA targeting of Growth Hormone Secretagogue Receptor 1a （GHSR1a）in rectal cancer cell line SW480 in vivo. Methods Human GHSR1a sequence was used for the design of shRNA targeting GHSR1a，which was then introduced to lentivirus，followed by transfection into SW480 cells. Real time quantitative PCR （RT-PCR）was performed to detect the mRNA expression of GHSR1a in rectal cancer cells. In vivo studies，the stable silencing GHSR1a in SW480 xenografts in nude mice were established. After the mice were sacrificed and weighted，immunohistochemistry （IHC）was used to detect the positive expression of Ki-67 in the tumors. TUNEL test kit was used to explore cellular apoptosis in the tumor tissues. Results In vitro study，the tumor-specic lentivirus mediated shRNA targeting GHSR1a gene and GHSR1a knockdown SW480 cells were successfully constructed by fluorescence and flow-cytometry. After transfection with GHSR1a shRNA，the mRNA level of GHSR1a was markedly inhibited in SW480 cells compared with the blank control （BC）or negative control （NC），the difference was statistically significant （P < 0.001）. In vivo results demonstrated that down-regulation of GHSR1a in SW480 cells significantly decreased the expression of Ki-67 in tumor tissues （P < 0.001），leading to a marked reduction in tumor weight in comparison to BC or NC tumors （P = 0.011）. In addition，apoptosis occurred more frequently in the GHSR1a shRNA transfection group than in control groups （P < 0.001）. Conclusion Down-regulation of GHSR1a by shRNA technology can effectively inhibit proliferation and promote apoptosis of SW480 cells in vivo，silencing GHSR1a expression could become a novel therapeutic strategy for rectaladenocarcinoma prevention and treatment in the future.Key words：Rectal cancer；GHSR1a；shRNA生长激素促泌剂受体（Growth Hormone Secretagogue Receptors，GHSRs）作为脑肠肽激素（ghrelin）的内源性受体，在机体中可产生广泛的生物学效应[1]。

维生素D_3靶控雌激素受体α表达载体的构建及其对乳腺癌作用的研究

维生素D_3靶控雌激素受体α表达载体的构建及其对乳腺癌作用的研究郎海滨;糜漫天【期刊名称】《免疫学杂志》【年(卷),期】2006(22)2【摘要】目的构建受1α,25二羟维生素D3调控的雌激素受体α表达载体(VDRE-Tk-ERα),并观察其对雌激素受体阴性乳腺癌细胞的增殖抑制效应。

方法利用PCR 法得到含有4个拷贝VDRE和Tk启动子的序列并用其替换掉雌激素受体α载体的CMV启动子从而得到VDRE-Tk-ERα表达载体。

利用脂质体法将其转染入雌激素受体阴性乳腺癌细胞中并利用MTT法观察其对乳腺癌细胞的抑制效应。

结果一定剂量的1α,25二羟维生素D3能够通过VDRE调控下游报告基因的表达,同时在加入他莫西芬后能够显著抑制转染了VDRE-Tk-ERα表达载体的雌激素受体阴性乳腺癌细胞的增殖活性。

结论通过该方法能够显著恢复和增强雌激素受体阴性乳腺癌细胞对他莫西芬和1α,25二羟维生素D3的化疗敏感性。

【总页数】4页(P155-157)【关键词】1α,25二羟维生素D3;维生素D3反应元件;ERα;他莫西芬;MDA-MB-231细胞【作者】郎海滨;糜漫天【作者单位】第三军医大学预防医学院营养与食品卫生学教研室【正文语种】中文【中图分类】R392.12【相关文献】1.维生素D在来曲唑干预绝经后雌激素受体阳性乳腺癌患者中的作用及临床意义[J], 牛福勇;李福荣2.乳腺癌雌激素受体β不同亚型表达载体的构建及其转录活性分析 [J], 关鑫;程龙;邹大阳;廉攀峰;王超;叶棋浓3.lncRNA-TTC39A-AS1通过调控雌激素受体靶基因促进雌激素受体阳性乳腺癌细胞生长增殖 [J], 张君娜4.1,25二羟维生素D_3联合他莫西芬对转染VDRE-Tk-ERα表达载体的MDA-MB-231细胞周期和凋亡的影响 [J], 郎海滨;糜漫天5.1～14日龄北京鸭维生素D_3和25-羟维生素D_3需要量的研究 [J], 石文标;侯水生;谢明;黄苇;喻俊英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

短发夹RNA载体稳定抑制端粒相关蛋白TERF2IP1表达的HCT116细胞的构建

短发夹RNA载体稳定抑制端粒相关蛋白TERF2IP1表达的HCT116细胞的构建廉沈沂;孟麟;杨永勇;寿成超【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2015(026)006【摘要】目的:构建针对TERF2IP1基因的短发夹RNA (shRNA)表达载体,在HCT116细胞中鉴定该载体对TERF2IP1基因的干扰效果.方法:设计针对TERF2IP1基因的shRNA序列,将其克隆至pGPHI/Hygro载体中,瞬时转染HCT116细胞48 h后,用400 mg/mL的潮霉素筛选抗性克隆,获得阳性单克隆细胞株;分别提取细胞总RNA和蛋白,进行RT-PCR和Western印迹,检测TERF2IP1的表达水平.结果:构建了4对针对TERF2IP1基因的shRNA表达载体,通过潮霉素筛选获得稳定干扰TERF2IP1基因的HCT116细胞系,实时定量PCR和Western 印迹实验均证实潮霉素筛选后,HCT116细胞中TERF2IP1的表达水平明显降低.结论:构建了4对人TERF2IP1基因的shRNA表达载体,获得4株分别针对TERF2IP1基因不同位点的稳定干扰HCT116细胞株.【总页数】4页(P790-793)【作者】廉沈沂;孟麟;杨永勇;寿成超【作者单位】北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学实验室,恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,北京100142;北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学实验室,恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,北京100142;北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学实验室,恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,北京100142;北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学实验室,恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,北京100142【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.hTERT-siRNA表达载体的构建及对MCF-7细胞生长、端粒酶活性的抑制作用[J], 张志宏;曾永秋;税青林;田强;黄燕;赵小平2.以siRNA表达载体稳定抑制缝隙连接蛋白43表达的睾丸间质细胞和睾丸支持细胞系的建立 [J], 郑素平;洪晓婷;王琴;陶亮3.短发夹RNA慢病毒载体稳定抑制NLRP3表达的HepG2细胞的构建 [J], 孙晓雅;韩庆旺;宋晓艳;何文俊;郝好杰;韩为东;母义明4.LRP16短发夹RNA慢病毒载体的构建及LRP16稳定抑制细胞的建立 [J], 王春萌;柏苗苗;伍志强;李小雷;李祥;梅倩;韩庆旺;韩为东5.钙网织蛋白-短发夹RNA慢病毒载体构建及其对喉鳞状细胞癌细胞Hep-2中钙网织蛋白表达的影响 [J], 高树峰;杨明福;张克辉;游龙贵;王富华;王心涛;刘遗斌;罗冬;蔡云香因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

携带人生存素基因短发夹RNA表达载体重组腺病毒的构建及其生物学作用

携带人生存素基因短发夹RNA表达载体重组腺病毒的构建及其生物学作用谢富华;王润秀;覃燕梅;李莉萍;梁念慈【期刊名称】《中国药理学与毒理学杂志》【年(卷),期】2008(22)6【摘要】目的构建携带人生存素(survivin)基因短发夹RNA(shRNA)表达载体的重组腺病毒.方法构建并筛选重组质粒pShuttle-survivin,将其与腺病毒骨架质粒共转染HEK-293细胞,经同源重组产生腺病毒;PCR鉴定并测定病毒滴度;β-半乳糖染色检测病毒对人乳腺癌细胞MCF-7的感染效率;流式细胞术、RT-PCR和Western免疫印迹法检测其生物学功能.结果经PCR鉴定重组腺病毒构建成功;48 h后感染率达75%以上;腺病毒感染MCF-7细胞后48 h,生存素mRNA和蛋白的表达均受到抑制;腺病毒感染MCF-7细胞后,细胞分裂受阻于G2/M 期,在48和72 h有凋亡峰出现.结论成功构建人生存素基因shRNA表达载体的重组腺病毒.【总页数】7页(P463-469)【作者】谢富华;王润秀;覃燕梅;李莉萍;梁念慈【作者单位】赣南医学院生物化学与分子生物学教研室;广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东,湛江,524023;赣南医学院第一附属医院肾内科,江西,赣州,341000;广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东,湛江,524023;广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东,湛江,524023;广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东,湛江,524023【正文语种】中文【中图分类】R965.2【相关文献】1.携带HGF基因的重组腺病毒表达载体的构建 [J], 刘薇薇;钟雪云;陈娟;刘移民;李素梅;余卫;陈嘉榆;张成;陈运贤;林琛莅2.携带CBP短发夹RNA基因腺病毒表达载体的构建 [J], 魏云杰;江洪;陈静;张静;徐昌武3.以AdMax载体系统构建携带HCV NS5B基因的重组腺病毒表达载体 [J], 孙士敏;徐斌;范红梅4.携带PTEN基因的重组腺病毒表达载体构建的研究 [J], 韦永琼;曾照芳5.携带Kringle 5基因重组腺病毒的构建及其对荷肺癌小鼠生存期的作用 [J], 刘岩;刘芳;叶迅;董继斌;陆琴;赵毅;李秋华;陈红专因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

甲状腺激素对乳腺癌细胞中雌激素受体α和甲状腺激素受体β的影响

甲状腺激素对乳腺癌细胞中雌激素受体α和甲状腺激素受体β的影响贲勇;杨冬;高磊;白春学【期刊名称】《中国癌症杂志》【年(卷),期】2007(17)12【摘要】背景与目的:目前,甲状腺激素对乳腺肿瘤的影响尚不明确.本实验目的是研究乳腺癌细胞系中雌激素受体α(ER-α)和甲状腺激素受体β(TR-β)的表达水平及相互关系,观察经甲状腺激素(T3)刺激后,激素受体表达水平的改变,探索受体表达水平改变的可能机制.方法:通过实时定量PCR(real time PCR)测定7株乳腺癌细胞系中ER-α和TR-β的mRNA水平,观察T3刺激对ER-α、TR-β和视黄醛衍生物X 受体α(RXR-α)的表达水平的调节,并测定T3作用后在SK-BR-3细胞中多个基因表达谱.结果:在SK-BR-3、MDA-MB-231和MDA-MB-435中ER-α和TR-β低水平表达,MCF7、BT20、BT474和T47D中ER-α和TR-β均高水平表达.受T3刺激后,ER-α(-)的细胞系中ER-α、TR-β和RXR-α表达都受到不同程度的上调,而在ER-α(+)的细胞系中未观察到该现象.SK-BR-3在T3刺激后,E2F1、转化生长因子(TGF)-β1R、TGF-β2R和人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达上调,TGF-β1和p21下调.结论:ER-α和TR-β的表达水平在乳腺癌细胞中密切相关,T3对乳腺癌细胞的影响与细胞内源性ER-α水平相关.【总页数】4页(P942-945)【作者】贲勇;杨冬;高磊;白春学【作者单位】复旦大学附属中山医院呼吸内科,上海,200032;复旦大学附属中山医院呼吸内科,上海,200032;复旦大学附属中山医院呼吸内科,上海,200032;复旦大学附属中山医院呼吸内科,上海,200032【正文语种】中文【中图分类】R737.9【相关文献】1.促甲状腺激素、甲状腺过氧化物酶抗体和促甲状腺激素受体抗体检测在甲状腺疾病中的应用价值 [J], 朱利国;浦洪波;武红玉;李跃松;陈永伟2.米非司酮配伍米索前列醇对蜕膜与绒毛雌激素受体-mRNA孕激素受体-mRNA 转录水平及雌激素受体孕激素受体表达的影响 [J], 彭敏;何福仙3.lncRNA-TTC39A-AS1通过调控雌激素受体靶基因促进雌激素受体阳性乳腺癌细胞生长增殖 [J], 张君娜4.甲状腺乳头状癌患者血清促甲状腺激素水平和组织促甲状腺激素受体检测的临床应用价值 [J], 王玲;王健;赵寅生;黄其峰;吴黎黎5.甲状腺激素缺乏对发育期大鼠脑甲状腺激素受体表达的影响 [J], 苏青;邢惠莉;左静南因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

雌激素受体α在乳腺癌中的表达和调控机制研究

雌激素受体α在乳腺癌中的表达和调控机制研究乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤。

雌激素受体α（ERα）是乳腺癌发生、发展中的关键因素之一。

因此，了解ERα的表达和调控机制对于乳腺癌的治疗和预防有着重要的意义。

1. ERα的表达与乳腺癌ERα是乳腺癌中最为常见的激素受体，其在乳腺癌细胞中的表达水平与临床预后密切相关。

研究表明，ERα阳性乳腺癌的患者预后较好，化疗和内分泌治疗的有效性也较高。

而ERα阴性乳腺癌则预后不佳，治疗难度较大。

2. ERα的调控机制ERα在乳腺癌中的表达受到多种因素的调控。

其中，雌激素是最为重要的调节因子。

雌激素通过结合ERα，在乳腺上皮细胞中诱导基因转录，从而促进细胞增殖和分化。

但大量过度的雌激素刺激也会使得ERα表达过度和突变，从而产生恶性细胞。

除了雌激素，ERα的表达还受到多种信号通路、转录因子和非编码RNA的调节。

如细胞膜受体下游信号通路可以通过活化定位在胞内核内的转录因子或直接调节ERα的表达，从而影响其对雌激素的反应性和生物活性。

同时，非编码RNA也可以通过多种机制与ERα相互作用、调节其表达，影响细胞增殖和转移过程。

3. ERα与乳腺癌的治疗基于ERα在乳腺癌中的重要作用，目前乳腺癌的治疗策略中，内分泌治疗是一种重要的选择。

内分泌治疗通常使用抗雌激素药物，如生长抑素类药物和选择性雌激素受体调节剂（SERMs），以抑制雌激素信号通路的作用。

这样可以有效抑制肿瘤细胞的生长，减少复发和转移的风险。

因此，检测ERα的表达状态对于指导内分泌治疗的选择和预测预后非常重要。

4. ERα的研究与挑战如今，越来越多的研究致力于探究ERα的表达和调控机制，以及其在乳腺癌中的作用。

随着技术的进步，已经开发出了多种诱导和抑制ERα表达的药物，并在临床治疗中得到应用。

然而，ERα调控机制的复杂性和多样性，仍然是乳腺癌治疗领域面临的挑战之一。

未来需要进一步深入研究ERα的调控机制，寻找更为精准的ERα抑制或激活策略，提高乳腺癌治疗的效果和预后。

乳腺癌雌激素受体mRNA的变异剪切与Tamoxifen耐受

乳腺癌雌激素受体mRNA的变异剪切与Tamoxifen耐受张波;陈道达;王国斌;田元【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2003(032)001【摘要】目的通过检测不同来源乳腺癌雌激素受体mRNA水平的正常剪切和变异剪切,初步探讨人类乳腺癌ta-moxifen耐受和雌激素受体mRNA变异剪切的关系.方法利用RT-PCR技术检测临床正常乳腺、乳腺癌和乳腺癌ta-moxifen耐受组织中雌激素受体tuRNA的剪切条带,并予以比较.结果正常乳腺、乳腺癌和乳腺癌tamoxifen耐受组织中均有雌激素受体mRNA的正常剪切和变异剪切,其中1250 bp的变异剪切条带最多见,但乳腺癌tamoxifen耐受组织中的变异剪切条带较多,而乳腺癌MCF-7细胞系不存在变异剪切.结论 tamoxifen长期作用于乳腺癌组织可导致雌激素受体mRNA的多种变异剪切并影响雌激素受体的功能.【总页数】3页(P62-64)【作者】张波;陈道达;王国斌;田元【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科,武汉,430022【正文语种】中文【中图分类】R737.9;Q51【相关文献】1.雌激素受体β及其剪切变异体与乳腺癌他莫昔芬耐药的关系 [J], 邱万寿;李忠山;郝俊文2.人乳腺癌他莫昔芬耐受细胞株雌激素受体信号通路的初步研究 [J], 袁杰;杨丽;朱庆;杨光伦3.探究烟粉虱的高温耐受性与其mRNA剪切的关系 [J], 舒晓斌; 余昊4.探究烟粉虱的高温耐受性与其mRNA剪切的关系 [J], 舒晓斌; 余昊5.雌激素受体β及其剪切变异体表达与雌激素受体阻滞剂治疗耐药的关系 [J], 周艳;姜军;张毅;凡庆东;范林军;梁燕;徐鹰妮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

雌激素相关受体α调控癌细胞增殖的作用机制研究的开题报告

雌激素相关受体α调控癌细胞增殖的作用机制研究
的开题报告
一、研究背景
癌症是当今全球健康领域的一大难题，其中乳腺癌是常见的恶性肿瘤之一。

雌激素在乳腺癌的发生和发展中扮演着重要角色。

雌激素可以通过结合雌激素受体（ER）调节乳腺癌细胞的生长和增殖，而雌激素受体α（ERα）是乳腺癌中最常见的受体。

雌激素和ERα在许多乳腺癌中的表达水平明显增加，因此，研究雌激素和ERα在乳腺癌中的作用机制对于探索乳腺癌的发病，以及寻找治疗乳腺癌的靶点具有重要意义。

二、研究目的
本研究旨在探究ERα在调控雌激素诱导乳腺癌细胞增殖中的作用机制，并以此为基础发掘可作为乳腺癌治疗靶点的分子机制。

三、研究内容和方法
1.构建乳腺癌细胞系雌激素、ERα过表达和下调的模型；
2.检测雌激素和ERα对乳腺癌细胞增殖的影响；
3.借助RNA测序技术探究雌激素和ERα对乳腺癌细胞基因表达的影响；
4.利用生物信息学方法分析不同ially表达基因的生物学功能；
5.通过Western blot技术验证关键基因表达的变化，进一步研究其功能。

四、研究意义
该研究可为阐述ERα在调控乳腺癌细胞增殖方面的分子机制提供一定的实验依据，并探索可作为乳腺癌治疗靶点的分子机制，从而有望为早期诊断乳腺癌和基于靶向治疗提供一定的理论基础和实验依据。

雌激素受体α66与乳腺癌化疗耐药关系的研究的开题报告

雌激素受体α66与乳腺癌化疗耐药关系的研究的开
题报告
题目：雌激素受体α66与乳腺癌化疗耐药关系的研究
背景：乳腺癌是女性中最常见的肿瘤之一，化疗是其主要治疗手段之一。

然而，化疗后乳腺癌患者中有很多人会发生化疗耐药的情况，这给治疗工作带来了很大的挑战。

雌激素信号通路在乳腺癌的发生和发展中扮演着重要角色，而雌激素受体α（ERα）是其中最关键的分子之一。

最近的研究表明，ERα的某种变异体，即ERα66，与乳腺癌化疗耐药有密切的关系。

因此，研究ERα66与乳腺癌化疗耐药的关系，对于探究乳腺癌耐药机制、开发新的耐药逆转剂具有重要意义。

研究目的：探究ERα66与乳腺癌化疗耐药的关系，分析ERα66对乳腺癌化疗敏感性的影响，为乳腺癌耐药的预防和治疗提供理论基础。

研究方法：本研究选取乳腺癌化疗敏感和耐药细胞株，利用荧光定量PCR和Western blot等方法检测ERα66的表达水平。

利用细胞增殖实验和荧光显微镜观察细胞的增殖、凋亡及细胞周期的变化。

利用大规模药物筛选实验，探究ERα66影响乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性。

研究意义：通过本研究的结果，可以揭示ERα66参与乳腺癌化疗耐药机制的细节，为今后开发新的乳腺癌耐药逆转剂提供重要理论指导，也有望为临床上乳腺癌化疗耐药的治疗提供新的思路和方向。

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［摘要］目的：构建特异抑制雌激素受体ｅＬ（ＥＲａ）基因的短发夹ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）慢病毒表达载体，检测其对ＥＲａ的干扰
效果，并探讨其对ＭＣＦ７细胞中乳腺癌干细胞含量的影响。方法：以人的ＥＲ仅核酸序列为靶标，根据ｓｈＲＮＡ设计原则设计并化学合成特异的ｓｈＲＮＡ序列，经退火处理后与ｐＳＩＨ－Ｈ１质粒连接，转化大肠杆菌ＤＨ５ｏ￣后挑取单克隆并测序；将该克隆进行病毒包装并感染乳腺癌ＭＣＦ７细胞，用嘌呤霉素进行筛选，最终得到稳定克隆；收取细胞，用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹和ｑＲＴ — ＰＣＲ检测ＥＲｔｘ在ｍＲＮＡ及蛋白水平上的变化，流式细胞术检测敲低ＥＲａ能否影响ＭＣＦ７乳腺癌干细胞的含量。结果：经测序分析表明目标ｓｈＲＮＡ序列成功插入载体，ｑＲＴ－ＰＣＲ检测稳定克隆，发现该ｓｈＲＮＡ能有效抑制目的基因的ｍＲＮＡ转录水平，同时Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测发现内源性ＥＲａ量明显下降；流式细胞术检测发现ＥＲａ敲低的ＭＣＦ７稳定克隆中雌激素诱导的乳腺癌干细胞含量上升的现象被明显抑制。结论：设计并构建的抑制ＥＲａ的ｓｈＲＮＡ能够有效抑制ＥＲ０【的表达，并下调ＭＣＦ７细胞中乳腺癌干细胞的含量，为研究ＥＲａ在乳腺癌干细胞中的功能及机制奠定了实验基础。［关键词］雌激素受体ｏｔ；肿瘤干细胞；短发夹ＲＮＡ；流式细胞术［中图分类号］Ｑ７８［文献标识码］Ａ［文章编号］１００９－０００２（２０１５）０３ — ０３２５－０４
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｓｈＲＮＡｉｎｔｅｆｒｅｒｅｎｃｅｖｅｃｔｏｒｏｆｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｔｆ．（ＥＲａ）ｇｅｎｅ，ａｎｄｔｏｄｅ —
ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｉｃｆａｔｉｏｎｏｆＬｅｎｔｉｖｉｒａｌＩｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅＶｅｃｔｏｒｏｆ
ＥＲ０【ＧｅｎｅａｎｄｉｔｓＥｆｉｅｃｔｏｎＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＳｔｅｍＣｅｌｌｓ
研究报告
雌激素受体ｅＬ短发夹ＲＮＡ慢病毒载体的构建及其对乳腺癌干细胞的影响
杜佩云，程龙，姜丽娜，陈立涵，林佳佳，叶棋浓，苏金为
１．福建农林大学生命科学学院，福建福州３５０００２；２．军事医学科学院生物工程研究所，北京１００８５０
ｔｅｃｔｉｔｓｅｆｅｃｔｏｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｓｔｅｍｃｅｉｌｓ（ＢＣＳＣｓ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＢａｓｅｄｏｎｈｕｍａｎＥＲｏ．ｇ／ｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｔｈｅｓｐｅｃｉｉｆｃ
ＤＵＰｅｉ — ＹｕｎＣＨＥＮＧＬｏｎｇ。，ＪＩＡＮＧＬｉ — Ｎａ２，ＣＨＥＮＬｉ — Ｈａｒｔ２，ＬＩＮＪｉａ — Ｊｉａ。，ＹＥＱｉ — Ｎｏｎｇ２，ＳＵｆｉｎ — Ｗｅｉ
１．ＳｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＦｕｊｉａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００２；２．ＢｅｉｊｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００８５０；Ｃｈｉｎａ
Ｃｏ — ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｅｒｓ，ＹＥＱｉ — Ｎｏｎｇ，Ｅ — ｍａｉｌ：ｙｅｑｎ６６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ；ＳＵＪｉｎ — Ｗｅｉ，Ｅ — ｍａｉｌ：ｓｕｊｉｎｗｅｉ８＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｎｒ
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