高效液相色谱法测定黄连炮制品中6种生物碱的含量

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HPLC法测定黄连药材及其炮制品中六种生物碱的含量

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈一０．２５ｍｏｌ・Ｌ乙酸铵和８ｍｍｏｌ・Ｌ十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）水溶液
（氨水调节ｐＨ９．３）（３６：６４）为洗脱剂，流速１ｍＬ・ｍｉｎ～，检测波长２７０ｎｍ，柱温３５℃ 。结果：盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的线性范围依次为０．００６９６ — ０．２３３、０．００４７５ — ０．１５２、０．００３３０ — ０．５２８、０．００６３１ — １．０１０、０．００４７１ — ０．７５３、０．０１７８－２．８８４ｇ・ｍＬ～；力口样回收率依
用的结果，如黄连中小檗碱具有较强的抗炎作用，
但是，黄连水提液的最低抑菌能力要强于小檗碱，
指标成分的种类，更有利于黄连及其炮制品的质量控制。
１仪器与试药岛津ＬＣ一２０Ａ型液相色谱仪；ＫＱ５２００型超声波
３．成都中医药大学中药学院
成都
６１００７２；４．太极集团有限公司重庆
４０１１４７）
摘
要：目的：测定黄连药材及其炮制品中盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、

不同炮制方法对黄连有效成分的影响研究

不同炮制方法对黄连有效成分的影响研究作者：闫丽丽来源：《农业科技与装备》2020年第01期摘要：黄连在临床上一般使用其炮制品，不同的炮制方法会对黄连中有效成分产生一定的影响。

在查阅、收集国内相关文献资料基础上，分析不同炮制方法对黄连中有效成分的影响，以期为进一步开展黄连研究提供参考。

关键词：黄连;炮制方法;有效成分;影响中图分类号：R282.2 文献标识码：A 文章编号：1674-1161（2020）01-0058-02黄连为毛茛科植物黄连（Coptischinensis Franch）、三角叶黄连（Coptis deltoideaC.Y.Cheng et Hsiao.）或云连（Coptis teeta Wall.）的干燥根茎，其性寒、味苦，具有清热燥湿、泻火解毒的功效。

黄连苦寒较甚，临床上一般使用其炮制品，常用的炮制方法有姜汁炮制、醋汁炮制、蓃汁炮制和猪胆汁炮制等。

黄连的有效成分主要是生物碱类成分、微量元素等，不同的炮制方法对黄连的有效成分存在一定的影响。

综述不同炮制方法对黄连有效成分含量的影响，旨在为黄连规范化加工生产提供科学依据。

1 不同炮制方法对黄连中生物碱类成分的影响1.1 姜汁炮制贠亚波等人利用辅料姜汁炮制黄连，采用高效液相色谱法测定其中表小檗碱、盐酸小檗碱、格兰地新、盐酸药根碱、非洲防己碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀等7种成分的含量，考察姜汁炮制对黄连中生物碱含量对影响。

结果表明：该测定方法准确度高、重复性好;用姜汁炮制后，黄连中格兰地新、盐酸药根碱和盐酸巴马汀含量显著提高（P钟凌云等人建立姜制黄连炮制前后的“谱—效—性”关系，分析不同姜汁炮制对黄连中生物碱类成分（盐酸药根碱、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、表小檗碱）的影响。

采用灰色关联度分析法转换不同姜汁炮制黄连的药性、药效参数，对姜制黄连的指纹图谱共有峰峰面积分别与药效指标、药性指标进行关联分析。

结果表明：姜制黄连炮制前后的指纹图谱共有峰均为9个;从4种成分的含量来看，生姜汁制黄连均高于生黄连和干姜汁制黄连;从盐酸巴马汀的峰面积来看，干姜汁制黄连低于生黄连和生姜汁制黄连;生姜汁制黄连抑制金黄色葡萄球菌、止呕、抑制胃黏膜损伤的作用较强，而干姜汁制黄连抑制白色念珠菌和改善胃肠动力的作用较强，且其降低寒性的作用优于生姜汁制黄连。

黄连HPLC数字化指纹图谱研究及7种生物碱含量测定

黄连HPLC数字化指纹图谱研究及7种生物碱含量测定一、本文概述本文旨在通过高效液相色谱（HPLC）技术对黄连的数字化指纹图谱进行深入研究，并精确测定其中7种主要生物碱的含量。

黄连作为一种重要的中药材，具有清热解毒、燥湿止痢等功效，被广泛应用于中医临床。

其药效与其中的生物碱类成分密切相关，因此对黄连中生物碱的深入研究对于评价黄连质量、指导药材合理使用及优化生产工艺具有重要意义。

本研究将通过HPLC技术的精确分析，构建黄连的数字化指纹图谱，明确各生物碱在黄连中的含量，为黄连的质量控制提供科学依据。

本文还将探讨黄连中生物碱含量与其药效之间的关系，为黄连的药效评价和药物研发提供新的思路和方法。

二、材料与方法黄连药材购自全国各地具有代表性的药材市场，并经专家鉴定确保其质量。

甲醇、乙腈等色谱纯试剂购自公司，磷酸等分析纯试剂购自公司。

7种生物碱标准品（小檗碱、黄连碱、巴马汀、药根碱、表小檗碱、非洲防己碱、木兰花碱）购自公司，纯度均大于98%。

高效液相色谱仪（HPLC，型号：）配备二极管阵列检测器（DAD）及化学工作站；电子分析天平（精度：01mg）；超声波清洗器；旋转蒸发仪；离心机等。

将黄连药材粉碎成细粉，过目筛。

精密称取粉末适量，加入甲醇，于室温下超声提取分钟，离心后取上清液，用甲醇定容至一定体积，得黄连提取液。

色谱柱为C18柱（mm×mm，μm）；流动相为乙腈-磷酸水溶液（梯度洗脱）；检测波长设定为nm；柱温为℃；进样量为μL；流速为mL/min。

将黄连提取液按设定的色谱条件进行HPLC分析，记录色谱图。

采用相似度评价软件对所得色谱图进行预处理和相似度计算，构建黄连的HPLC数字化指纹图谱。

精密称取7种生物碱标准品适量，分别用甲醇溶解并定容至不同浓度，按设定的色谱条件进行HPLC分析，记录峰面积。

以峰面积为纵坐标，生物碱浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。

将黄连提取液按设定的色谱条件进行HPLC分析，根据标准曲线计算各生物碱的含量。

HPLC测定不同产地黄连中6种生物碱的含量

ｗａｓ
ｆｏｕｎｄａｍｏｎｇｔｈｅｔｅｓｔｅｄｓａｍｐｌｅＳ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ
Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄ
ａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｌｅ
Ｇａｔｒｏｒｒｈｉｚｉｎｅ，Ｃｏｌｕｍｂａｍｉｎｅ，Ｅｐｉｂｅｒｂｅｒｉｎｅ，Ｃｏｐｔｉｓｉｎｅ，ＰａｌｍａｔｉｎｅａｎｄＢｅｒｂｅｒｉｎｅＣｈｉｎｅｎｓｉｓＦｒａｎｃｈ．Ｉｔ
ｃａｎ
ｉｎＣｏｐｔｄｓ
ｂｅｔｔｅｒｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅ
ｑｕａｌｉｔｙｏｆ
Ｃｏｐｔｉｓ
ＣｈｉｎｅｎｓｉｓＦｒａｎｃｈ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］
ＣｏｐｔｉｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓＦｒａｎｃｈ：
Ｇａｔｒｏｒｒｈｉｚｉｎｅ：Ｃｏｌｕｍｂａｍｉｎｅ：Ｅｐｉｂｅｒｂｅｒｉｎｅ：
Ｃｏｐｔｉｓｉｎｅ：Ｐａｌｍａｔｉｎｅ：Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ：ＲＰ～ＨＰＬＣ
黄连为毛莨科植物黄连ＣｏｐｔｉｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓＦｒａｎｃｈ．、三角叶黄连￡ｄｅｌｔｏｉｄｅａＣ．Ｙ．ＣｈｅｎｇｅｔＨｓｉａｏ、云南黄连ＣｏｐｔｉｓｔｅｅｔａＷａｌｌ．的干燥根茎。药材依次习称“味连”、“雅连”、“云连”…。主要有效成分为生物碱类化合物拉’，其中小檗碱（ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ）含量最高，此外还有表小檗碱
２．３供试品溶液的制各取黄连粉末样品（过１００目筛）约０
１
ｇ，精密称定，置１５０
１２
全国第一届曲用植物化学与中药新曲研发技术创新研时会
２方法与结果
２．１色谱条件Ｘｔｉｍａｔｅ”ｃ。。色潜柱（４
６Ⅲｍ×２５０ｍｍ，５
ｕ口）；流动柑＾相３０
ｍｍｏ
Ｊ・Ｌ。
碳酸氢铵水镕液（害有０７％氨水、０１％兰乙胺），Ｂ相乙腈，线性梯度洗脱程序为０‘１５ｍ㈨１０％’２５％Ｂ：１５、２５３０％、４５％Ｂ；流速１ｍ１．・ｍ１ｎ‘；检测渡长２７０ｎｍ，托温为３０℃ ｕＬ。进样量１０在上述色谱条件下，盐酸曲根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸袁小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸Ｂ马汀、盐酸小檗碱理论塔扳数均不低于１００００。分离度投拖尾用子均苻舍音量测定要求。对照６＾及样品（峨眉地区味连）ＩＩＰＬＣ田见图１。

高效液相色谱-串联质谱法测定食品中的5种生物碱含量

Analysis and Testing 分析检测
Байду номын сангаас
1 材料与方法
1.1 材料与试剂甲醇、乙腈：美国 Thermo 公司生产；超纯水由
Millipore 超纯水系统制备。罂粟碱、那可丁标准品：纯度 99.9%，美国 CATO 公司生产；可待因标准品：纯度 96.9%，中国食品药品检定研究院生产；蒂巴因、吗啡、吗啡 -D3、可待因 -D3 标准品（液体）：纯度 99%，规格 1 mg·mL-1，Sigma 公司生产。 1.2 仪器与设备
摘要：建立高效液相色谱 - 三重四极杆串联质谱检测食品中 5 种生物碱含量的方法，采用 Phenomenex Kinetex C18 柱（2.1 mm×100 mm，2.6 μm），0.1% 甲酸乙腈 -5 mmol·L-1 乙酸铵作为流动相，梯度洗脱。优化色谱条件后，得到罂粟碱、那可丁、蒂巴因的检出限为 2.5 μg·kg-1，定量限为 7.5 μg·kg-1；吗啡、可待因的检出限为 12 μg·kg-1，定量限为 36 μg·kg-1。平均回收率为 84.2% ～ 96.0%，精密度为 3.2% ～ 6.8%。该方法准确、易操作，可用于食品中生物碱的批量检测。
关键词：高效液相色谱 - 串联质谱；多反应监测；生物碱 Abstract：Established an HPLC-MS/MS method to detect the content of five alkaloids in food, using Phenomenex Kinetex C18 column (2.1 mm×100 mm, 2.6 μm), 0.1% formic acid acetonitrile-5 mmol·L-1 ammonium acetate as the mobile phase, Gradient elution. After optimizing the chromatographic conditions, the detection limit of papaverine, narcotin, and thebaine was 2.5 μg·kg-1, and the limit of quantification was 7.5 μg·kg-1; the detection limits of morphine and codeine were 12 μg·kg-1, the limit of quantification is 36 μg·kg-1. The average recovery rate is 84.2% ～ 96.0%, and the precision is 3.2% ～ 6.8%. The method is accurate and easy to operate, and can be used for batch detection of alkaloids in food. Keywords：HPLC-MS/MS; multiple reaction monitoring; alkaloids 中图分类号：TS207.3

HPLC法测定不同产地黄连饮片中生物碱的含量

HPLC法测定不同产地黄连饮片中生物碱的含量罗文汇;李养学;胥爱丽;孙冬梅【摘要】目的考察不同产地黄连饮片中生物碱的含量.方法采用高效液相色谱法测定不同产地黄连饮片中表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱4种生物碱的含量,以乙腈-0.1%磷酸溶液(50:50)(每100Ll加十二烷基磺酸钠0.1g)为流动相,Agilent ZORBAx Eclipse XDB C18柱(4.6mm×250mm,5μm)为固定相,流速为1.0L/min,柱温为35℃,检测波长为345nm.结果盐酸小檗碱在0.096～0.480 μg范围内呈线性关系,回收率为97.95%,RSD为1.03%.结论本法测定黄连饮片中4种生物碱含量简单、快速、准确、重现性好,符合含量测定建立的要求,可以为判断黄连饮片质量的方法之一.【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2010(008)030【总页数】2页(P223-224)【关键词】黄连饮片;表小檗碱;黄连碱;巴马汀;小檗碱;高效液相色谱法【作者】罗文汇;李养学;胥爱丽;孙冬梅【作者单位】广东省中医研究所,510095【正文语种】中文【中图分类】R282.710.3黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Fanch.、三角叶黄连Coptis deltoideaC.Y.Cheng et Hsiao或云连Coptis teeta Wall.的干燥根茎。

具有清热燥湿，泻火解毒的功效，用于湿热痞满，呕吐吞酸，泻痢，黄疸，高热神昏，心火亢盛，心烦不寐，心悸不宁，血热吐衄，目赤，牙痛，消渴，痈肿疔疮；外治湿疹，湿疮，耳道流脓。

黄连有效成分为多种生物碱[1]。

本文采用高效液相色谱法以盐酸小檗碱为对照，分别计算表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量，比较了8个产地黄连饮片，为更好的控制黄连饮片质量提供了依据。

1 仪器与试药Agilent 1200高效液相色谱仪（美国）；Mettler-Toledo XS205DU电子分析天平（瑞士）；Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱。

HPLC法测定黄连中生物碱的含量

HPLC法测定黄连中生物碱的含量作者：毛英王欢游仙丹等来源：《农业开发与装备》 2016年第1期毛英1，王欢2，游仙丹1，刘思1，连琰1*（1.怀化学院化学与材料工程学院，湖南怀化 418000；2.湖南大学化学化工学院，湖南长沙 410083）摘要：目的：研究中药材黄连中生物碱的HPLC测定方法。

方法：采用BDS Hypersil C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；以乙腈、0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液（50：50）（每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0）为流动相；检测波长为345nm；流速：1.0ml·min-1；柱温：30℃；进样量：20μL。

结果：盐酸小檗碱在0.3～1.2μg范围内呈良好的线性关系，R2＝0.9935（n＝5），加样回收实验的平均回收率达到100.41%，RSD＝1.2%（n＝9）。

结论：该方法简便、准确、重现性好，可用于黄连药材中生物碱含量的控制方法。

关键词：高效液相色谱法；黄连；生物碱；药理研究；盐酸小檗碱0 引言黄连为多年生毛茛科草本植物[1-2]，药用部分主要取自黄连、三角叶黄连、峨嵋山野连或云连的根茎[3]。

野生黄连主要产于四川、云南、湖北，现今多采用荫棚栽培。

秋季采挖，除去须根和泥沙，干燥。

黄连作为临床常用药物，用于治疗湿热痞满、呕吐吞酸、泻痢、黄疸、高热神昏、心火亢盛、心烦不寐、血热吐衄、目赤、牙痛、消渴、痈肿疔疮；外治湿疹、湿疮、耳道流脓等[4]。

此外，黄连还具有很多药理作用譬如：抗病毒作用、抗阿米巴作用、抗炎、抗腹泻作用、对心血管作用、降血糖作用、降血脂作用、抗氧化作用、对血液系统的影响、抗溃疡作用[5-6]。

由于黄连的种类与炮制方法都非常多，地理分布也比较广泛，因此作为药材它们的质量不易控制。

黄连的主要药用成份生物碱的含量的准确测定对评价不同产地黄连与质量监控具有重要意义。

高效液相色谱同时检测不同类型烟叶中的多种生物碱含量

高效液相色谱同时检测不同类型烟叶中的多种生物碱含量作者：林雨晟金洪石张皓楠金江华郭伟李玉娥赵铭钦刘鹏飞来源：《中国烟草科学》2021年第03期摘要：为快捷准确地测定烟叶中生物碱的含量，本研究通过优化提取条件，建立了测定烟草中烟碱、新烟草碱、假木贼碱和降烟碱的高效液相色谱检测方法。

优化后的检测步骤为：干烟叶和5%甲醇的料液比为100 mg/20 mL，在25 ℃下振荡提取30 min，色谱条件：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相A（90%水+10%甲醇，pH 6.8，0.15%醋酸钠），流动相B（90%甲醇+10%水，pH 3.8）。

烟碱在0.1～50 μg/mL、其余3种在0.005～2 μg/mL的范围内，4种生物碱均具有较好的线性关系（R2>0.99）;烟碱检出限为0.000 65 μg/mL，平均回收率100.79%，RSD 3.11%;新烟草碱检出限0.088 4 μg/mL，平均回收率98.53%，RSD 3.75%;假木贼碱检出限0.034 8 μg/mL，平均回收率98.70%，RSD 3.63%;降烟碱检出限0.150 9 μg/mL，平均回收率101.33%，RSD 4.61%。

对4种不同类型烟叶共11个不同样品进行检测验证，检测结果可靠。

该方法前处理简单快捷，灵敏度高，重复性较好，可以满足烟草样品中4种生物碱的检测要求。

关键词：烟草;烟碱;新烟草碱;假木贼碱;降烟碱;液相色谱法Abstract： In order to quickly and accurately determine the content of alkaloids in tobacco leaves， the extraction conditions were optimized， and a method for the determination of nicotine，anatabine， anabasine and nornicotine contents in tobacco by HPLC was established. The optimized detection steps are as follows： 100 mg/20 mL solid-liquid ratio， 5% methanol was extracted by oscillation at 25 ℃ for 30 min， the chromatographic conditions were C18 column （250 mm×4.6 mm，5 μm）， mobile phase A （90% water +10% methanol， pH 6.8， 0.15% sodium acetate）， mobile phase B （90% methanol +10% water， pH 3.8）. Nicotine was in the range of 0.1-50 μg/mL and the other three alkaloids were in the range of 0.005-2 μg/mL， with the standard curves of the four alkaloids all havig good linear relationship （R2 > 0.99）. The limits of detection （LOD） of nicotine were 0.000 65 μg/mL， and the average recoveries were 100.79%， RSD3.11%; the LOD of anatabine were 0.088 4 μg/mL， and the average recoveries were 98.53%， RSD 3.75%; the LOD of anabasine were 0.034 8 μg/mL， and the average recoveries were 98.70%，RSD3.63%; the LOD of nor nicotine were 0.150 9 μg/mL， and the average recoveries were101.33%， RSD 4.61%. A total of 11 different samples of 4 different types of tobacco leaves were tested， and the results were reliable. The method is simple and fast， sensitive and repeatable， and can meet the requirements of detecting four alkaloids in tobacco samples.Keywords： tobacco; nicotine; anatabine; anabasine; nornicotine; HPLC生物碱是一类存在于植物体中的特殊的含氮有机物，是植物体随外界环境变化合成的次生代谢产物，一般具有特殊的生理活性，如抗炎、镇痛和成瘾性[1]。

谈一测多评法测定黄连及其炮制品中6 种生物碱

谈一测多评法测定黄连及其炮制品中6种生物碱本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载本文档（有偿下载），另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意！黄连为毛茛科(Ranunculaceae)黄连属CoptisSalisb.植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C. Y. Cheng et Hsiao 或云连Coptis teeta Wall. 的加工品，据文献报道，其化学成分主要为生物碱类物质。

黄连的广泛利用与其所含各种生物碱的药理作用有密切的关系，且研究表明，黄连的药理作用并不是某单一生物碱作用的结果，如黄连中小檗碱具有较强的抗炎作用，但是黄连水提液的最低抑菌能力要强于小檗碱，说明黄连中含有其他抗菌或对抗菌有协同作用的成分。

所以，只有对其主要的多个生物碱(如小檗碱、黄连碱、非洲防己碱、表小檗碱、巴马汀等)的质量分数进行全面控制，才能保证药材的质量。

但对照品来源限制了多个生物碱的含量控制。

有研究者提出了一测多评的多指标质控模式，即在多指标质量控制时，利用中药有效成分内在函数关系和比例关系，以药材中对照品廉价易得的典型成分为内标，建立该成分与其他成分间的相对校正因子，再通过校正因子同步计算出其他成分的量。

在方法实施时，可在只有一个对照品的情况下，实现这些成分的同步测定，并成功应用于薄荷，五味子，白芷、丹参、赤芍、淫羊藿、连翘、黄芩、黄连、人参和枳实等药材的质量控制，以及热毒宁注射液、复方丹参、清开灵注射液等中成药的质量控制。

其中黄连药材的一测多评方法被《中国药典》2010 年版采用，但只对其中 4 种生物碱进行了控制。

同时测定黄连中6 种生物碱更有利于黄连药材质量的控制。

本研究采用一测多评的方法同时检测黄连中6 种生物碱的量，相较于《中国药典》方法增加指标成分的种类，不受对照品来源的限制，更有利于黄连及其炮制品的质量控制。

高效液相色谱法测定五味黄连丸中表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗

ｂｙｈｉｇｌｌ — ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＸＩＯＮＧＪｕ—ｌｉａｎｇ
（ＴｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈａｏｙａｎｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｓｈａｏｙａｎｇ４２２０００，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ）
ｃｌ８色谱柱（２５０ｍｍＸ４．６ｍｍ，５１ｘｍ），流动相：乙腈一０．１％磷酸溶液（５０：５０）（每ｌＯＯｍＬ加十二烷基磺酸钠０．１ｇ）；检测波长：
３４５ｎｍ；流速：１．ＯｍＬ／ｍｉｎ；柱温：室温。结果：表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱分别在０．４８９～１１．７３、０．９９２～２３．８１、１．０１４—
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｅｐｉｂｅｒｂｅｒｉｎｅ，ｃｏｐｔｉｓｉｎｅ，ｐａｌｍａｔｉｎｅ，ａｎｄｂｅｒｂｅｒｉｎｅｓｈｏｗｅｄａｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｐｅａｋａｒｅａａｎｄｃｏｎｃｅｎ —
２４．３５、２．０１７— ４８．４０１ｘｇ／ｍＬ峰面积与浓度之间呈良好线性关系；平均加样回收率分别为１００．１％、９８．３％、９９．４％、９９．４％，

6种黄连饮片中6种生物碱的RP—HPLC含量测定及与“治消渴”药效学的

6种黄连饮片中6种生物碱的RP—HPLC含量测定及与“治消渴”药效学的谱—效关系分析建立生品、姜炙、醋炙、酒蒸、酒炙、萸炙6種黃连饮片中6种生物碱（盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱）的含量测定方法，并结合药效学结果探索其与药效学研究结果及中医疗效之间的关系。

采用Welch XtimateTMC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，以0.1%三乙胺溶液（用碳酸氢铵和氨水调节pH 10）为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱（0～15 min，10%～25%B；15～25 min，25%～30%B；25～40 min，30%～45%B），流速1.0 mL·min-1，柱温30 ℃，检测波长270 nm。

6种生物碱分别在0.85～16.96 mg·L-1（r=0.999 7），1.25～24.96 mg·L-1（r=0.999 9），2.05～40.96 mg·L-1（r=0.999 9），3.65～72.96 mg·L-1（r=0.999 9），2.88～57.06 mg·L-1（r=0.999 8），13.25～264.96 mg·L-1（r=0.999 6）呈现良好的线性关系，平均加样回收率（n=9）分别为102.4%（RSD 1.2%），101.8%（RSD 1.3%），100.3%（RSD 1.8%），100.7%（RSD 1.8%），101.2%（RSD 1.5%），97.90%（RSD 2.0%）。

测定6种黄连饮片共36个批次的6种生物碱的平均质量分数分别为3.55，4.49，9.12，19.17，15.69，62.56 mg·g-1。

该文建立含量测定方法准确性高、重复性好，可用于6种黄连饮片中6种生物碱的含量测定。

采用主成分分析、分层聚类分析对含量测定及前期药效学研究结果进行数据分析，结果表明酒蒸、酒炙、萸炙3种黄连饮片与生品黄连饮片存在明显差异，酒蒸饮片与生品饮片具有最大的差异，其差异主要与血清甘油三酯（TG）、空腹血糖水平（FBG）有关，另外，盐酸非洲防己碱是6种生物碱成分中影响最大的生物碱成分。

高效液相色谱-串联质谱法测定食品中的5种生物碱含量

分析检测Analysis and Testingdoi:10.16736/41-1434/ts.2021.07.041高效液相色谱-串联质谱法测定食品中的5种生物碱含量Determination of Five Alkaloids in Food by HPLC-MS/MS◎ 贾琳斐，管　理，贾润芳，张　鑫，尹　静（咸阳市食品药品检验检测中心，陕西　咸阳　712000）JIA Linfei, GUAN Li, JIA Runfang, ZHANG Xin, YIN Jing(Xianyang Center for Food and Drug Control, Xianyang　712000, China)摘　要：建立高效液相色谱-三重四极杆串联质谱检测食品中5种生物碱含量的方法，采用Phenomenex Kinetex C18柱（2.1 mm×100 mm，2.6μm），0.1%甲酸乙腈-5 mmol·L-1乙酸铵作为流动相，梯度洗脱。

优化色谱条件后，得到罂粟碱、那可丁、蒂巴因的检出限为2.5μg·kg-1，定量限为7.5μg·kg-1；吗啡、可待因的检出限为12μg·kg-1，定量限为36μg·kg-1。

平均回收率为84.2%～96.0%，精密度为3.2%～6.8%。

该方法准确、易操作，可用于食品中生物碱的批量检测。

关键词：高效液相色谱-串联质谱；多反应监测；生物碱Abstract：Established an HPLC-MS/MS method to detect the content of five alkaloids in food, using Phenomenex Kinetex C18 column (2.1 mm×100 mm, 2.6μm), 0.1% formic acid acetonitrile-5 mmol·L-1 ammonium acetate as the mobile phase, Gradient elution. After optimizing the chromatographic conditions, the detection limit of papaverine, narcotin, and thebaine was 2.5μg·kg-1, and the limit of quantification was 7.5μg·kg-1; the detection limits of morphine and codeine were 12μg·kg-1, the limit of quantification is 36μg·kg-1. The average recovery rate is 84.2%～96.0%, and the precision is 3.2%～6.8%. The method is accurate and easy to operate, and can be used for batch detection of alkaloids in food.Keywords：HPLC-MS/MS; multiple reaction monitoring; alkaloids中图分类号：TS207.3罂粟壳为植物罂粟干燥后的成熟果壳，含有罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因等多种生物碱类物质[1]。

HPLC法测定黄连药材及其炮制品中六种生物碱的含量

HPLC法测定黄连药材及其炮制品中六种生物碱的含量阳勇;罗维早;孙建彬;王欣;花雷;李隆云;覃瑶【摘要】An HPLC method to determine six alkaloids of the Coptidis for Chinese Pharmacopoeia of 2015 Edition was established through C18 column. The mobile phase was CH3CN-0.25 mol·L-1 NH4Ac (36:64) (containing 8 mmol·L-1 SDS and adjusting pH 9.3 with ammonia) at the flow rate of 1 mL·min-1, the detective wavelength was 270 nm and the column temperature was 35 oC. The linear ranges of jatrorrhizine hydrochloride, columbamine hydrochloride, epiberberine hydrochloride, coptisine hydrochloride, palmatine hydrochloride and berberine hydrochloride were 0.006 96-0.233, 0.004 75-0.152, 0.003 30-0.528, 0.006 31-1.010, 0.004 71-0.753, 0.017 8-2.884 μg·mL-1, respectively. The average recoveries were 99.65%, 98.59%, 98.49%, 98.66%, 98.64%, 98.63% and RSD were 0.03%、0.15%、0.21%、0.12%、0.28%、0.23%, respectively. The method is simple and accurate, and can be used to determine the contents of jatrorrhizine, columbamine, epiberberine, coptisine, palmatine and berberine in the Coptidis.%目的:测定黄连药材及其炮制品中盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量,制定2015年版《中国药典》中黄连及其炮制品的质量标准.方法:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.25 mol·L-1乙酸铵和8 mmol·L-1十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液(氨水调节pH 9.3)(36:64)为洗脱剂,流速1 mL·min-1,检测波长270 nm,柱温35℃.结果:盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的线性范围依次为0.006 96-0.233、0.004 75-0.152、0.003 30-0.528、0.006 31-1.010、0.004 71-0.753、0.017 8-2.884μg·mL-1;加样回收率依次为99.65%、98.59%、98.49%、98.66%、98.64%、98.63%,RSD依次为0.03%、0.15%、0.21%、0.12%、0.28%、0.23%.结论:该方法简便、准确、可靠,可作为2015年版《中国药典》(一部)黄连质量标准中的含量测定方法.【期刊名称】《世界科学技术-中医药现代化》【年(卷),期】2015(017)003【总页数】7页(P596-602)【关键词】黄连;HPLC;生物碱;含量测定【作者】阳勇;罗维早;孙建彬;王欣;花雷;李隆云;覃瑶【作者单位】重庆市中药研究院重庆 400065;重庆市中药研究院重庆 400065;重庆市中药研究院重庆 400065;第三军医大学大坪医院野战外科研究所药剂科重庆400042;重庆市中药研究院重庆 400065;成都中医药大学中药学院成都 610072;重庆市中药研究院重庆 400065;重庆市中药研究院重庆 400065;重庆市中药研究院重庆 400065;太极集团有限公司重庆 401147【正文语种】中文【中图分类】R284.1黄连为毛茛科植物黄连 Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C. Y. Cheng et Hsiao或云连Coptis teeta Wall. 的加工品[1]，其化学成分主要为生物碱类物质[2-5]。

测定黄连中5种生物碱含量的高效液相色谱法研究

测定黄连中5种生物碱含量的高效液相色谱法研究
应懿;何志红;周世文;汤建林;杨雪;王璐
【期刊名称】《第三军医大学学报》
【年(卷),期】2007(29)9
【摘要】提要:目的建立高效液相色谱法测定黄连中生物碱含量的方法。

方法色谱柱为C18柱(3.9mm×300mm,10μm),流动相为乙腈:0.05mol/L磷酸二氢钾(40∶60,内含0.015mol/L十二烷基磺酸钠),检测波长为345nm。

结果在以上色谱条件下,小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱和药根碱分离效果好。

结论方法灵敏度高,重现性好,可用于黄连等含小檗碱型生物碱中药材及制剂的质量控制。

【总页数】3页(P843-845)
【关键词】高效液相色谱法;黄连;生物碱;含量测定
【作者】应懿;何志红;周世文;汤建林;杨雪;王璐
【作者单位】第三军医大学新桥医院临床药理基地
【正文语种】中文
【中图分类】R282.71;R284.1
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定砖茶中儿茶素和生物碱含量的研究 [J], 李程程;梁丽娜;于光前
2.高效液相色谱法测定砖茶中儿茶素和生物碱含量的研究 [J], 李程程;梁丽娜;于光前;
3.反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中补阳还五汤总生物碱中川芎嗪的含量及药代动力学研究 [J], 贺福元;刘文龙;贺庆平;李博;邓凯文
4.反相高效液相色谱法的运用对黄连中三种生物碱的含量测定 [J], 何洪林
5.石蒜科生物碱的研究Ⅻ-薄层色谱鉴别石蒜生物碱和高效液相色谱法测定加兰他敏的含量 [J], 张俊梅;王明新;申雅维;马广恩;洪山海
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高效液相法测定黄连中盐酸小檗碱的含量

高效液相法测定黄连中盐酸小檗碱的含量
袁常青;邢亮
【期刊名称】《亚太传统医药》
【年(卷),期】2010(6)8
【摘要】目的:研究黄连所合成分盐酸小檗碱的HPLC测定方法.方法:采用BDS Hypersil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾(含0.5%三乙胺,用磷酸调节pH至3.0)(30:70);检测波长:254nm;流
速:1.0ml·min-1;柱温:室温;样品采用甲醇加热回流提取.结果:盐酸小檗碱在
0.2336～1.7520μg范围内呈良好的线性关系,R2=0.9997(n=6),平均回收率99.17%,RSD=1.8%(n=5).结论:该方法简便、准确、重现性好,可用于黄连药材中盐酸小檗碱含量的控制方法.
【总页数】3页(P32-34)
【作者】袁常青;邢亮
【作者单位】京东中美医院,北京101601;中美华医(河北)制药有限公司,河北三河065201
【正文语种】中文
【中图分类】R284
【相关文献】
1.高效液相法测定盐酸小檗碱片含量的不确定度评定 [J], 陈丽
2.高效液相法测定青黄膏盐酸小檗碱的含量 [J], 张云丽;张伟
3.高效液相法测定妇炎康胶囊中盐酸小檗碱的含量 [J], 郭晓鸿;曾凡红;欧阳吉德
4.高效液相荧光色谱法测定黄连上清片中盐酸小檗碱含量 [J], 陈娟
5.高效液相法测定黄连降糖片中盐酸小檗碱含量 [J], 张健;张蒙蒙
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HPLC法研究黄连中表小檗碱等五种生物碱的含量

HPLC法研究黄连中表小檗碱等五种生物碱的含量
向莉;李盾
【期刊名称】《成都中医药大学学报》
【年(卷),期】2004(27)2
【摘要】目的对黄连中的各种生物碱进行全面分析,以开发生药资源。

方法用反相高效液相色谱法分离并测定四川味连中各生物碱的含量。

结果五种生物碱分离良好,小檗碱、黄连碱、巴马亭、药根碱、表小檗碱的含量分别为4.56％、2.43％、1.86％、1.21％、1.17％。

结论在研究黄连属植物中生物碱时,分析小檗碱和占总生物碱含量一半左右的其它四种生物碱均非常有必要,可为黄连进行有效的品质评价提供理论依据。

【总页数】3页(P46-48)
【关键词】HPLC法;黄连;表小檗碱;生物碱;含量测定;反相高效液相色谱法
【作者】向莉;李盾
【作者单位】暨南大学医学院第二附属医院;深圳市人民医院药学部
【正文语种】中文
【中图分类】R282.71
【相关文献】
1.RP-HPLC法同时测定黄连中四种原小檗碱型生物碱的含量 [J], 袁久荣;魏英勤;袁浩;徐娟;容蓉
2.HPLC测定连栀矾溶液中表小檗碱、黄连碱、巴马汀和盐酸小檗碱的含量 [J],
袁学刚;王战国;胡慧玲;杨向东;邹亮;余腾江;刘巧
3.HPLC法测定黄连中3种原小檗碱型生物碱的研究 [J], 刘娜;管淑玉;徐鹏;杨然存;于阿娟
4.HPLC法测定黄连、黄柏及其中成药中小檗碱型生物碱的含量 [J], 赵陆华;蔡星瀛;董善士;林似兰;安登魁
5.HPLC法比较不同工艺制备的黄连解毒汤及日本汉方黄连解毒汤中的生物碱含量[J], 沈嘉;孙春梅;徐荣源;王颖
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HPLC法同时测定云连药材中6种生物碱的含量

HPLC法同时测定云连药材中6种生物碱的含量潘正;高运玲;江生;范刚;张艺;曹纬国【期刊名称】《中国药房》【年(卷),期】2017(028)024【摘要】OBJECTIVE:To develop a method for simultaneous determinationof 6 alkaloids in Coptis teeta.METHODS:The determination was performed on XtimateTM C18 with mobile phase consisted of 30 mmol/L ammonium bicarbonate [containing 0.1％ triethylamine and 0.7％ ammonia-acetonitrile (gradient elution)] at the flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelength was set at 270 nm,the column temperature was 30 ℃,and the sample size was 10 μL.RESULTS:The linear ranges ofjateorrhizine,columbamine,epiberberine,coptisine,palmatine hydrochloride and berberine hydrochloride were 0.85-16.96 mg/L (r=0.999 9),1.25-24.96 mg/L(r=0.999 8),2.05-40.96 mg/L(r=0.999 9),3.65-72.96 mg/L(r=0.999 9),2.88-57.60 mg/L(r=0.999 9) and 13.25-264.96 mg/L(r=0.9999),respectively.RSDs of precision,stability and reproducibility tests were all lower than 3.0％.Recoveries were 97.14％-102.14％ (RSD=1.93％,n=6),97.00％-102.00％ (RSD=2.06％,n=6),98.18％-101.82 ％ (RSD=1.79％,n=6),96.15％-101.28％ (RSD=2.06％,n=6),96.88％-101.88％ (RSD=1.87％,n=6),99.31％-103.76％ (RSD=1.89％,n=6),respectively.CONCLUSIONS:The method is simple,accurate,stability and reproducible,and can be used for simultaneous determination of 6 alkaloids in Coptis teeta.%目的:建立同时测定云连药材中6种生物碱含量的方法.方法:色谱柱为XtimateTMC18,流动相为30 mmol/L碳酸氢铵溶液(含0.1％三乙胺和0.7％氨水)-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为270 nm,柱温为30℃,进样量为10μL.结果:药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的检测质量浓度线性范围分别为0.85～16.96 mg/L(r=0.999 9)、1.25～24.96 mg/L (r=0.999 8)、2.05～40.96 mg/L (r=0.999 9)、3.65～72.96 mg/L (r=0.999 9)、2.88～57.60mg/L(r=0.999 9)、13.25～264.96 mg/L(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜3.0％;加样回收率分别为97.14％～102.14％ (RSD=1.93％,n=6)、97.00％～102.00％ (RSD=2.06％,n=6)、98.18％～101.82％(RSD=1.79％,n=6)、96.15％～101.28％ (RSD=2.06％,n=6)、96.88％～101.88％(RSD=1.87％,n=6)、99.31％～103.76％ (RSD=1.89％,n=6).结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于云连药材中6种生物碱含量的同时测定.【总页数】4页(P3408-3411)【作者】潘正;高运玲;江生;范刚;张艺;曹纬国【作者单位】重庆医科大学中医药学院,重庆400016;重庆邮电大学生物学院,重庆400065;重庆市食品药品检验所,重庆401121;成都中医药大学民族药学院,成都611130;成都中医药大学民族药学院,成都611130;重庆医科大学中医药学院,重庆400016【正文语种】中文【中图分类】R917【相关文献】1.HPLC法测定藏药材铁棒锤、榜嘎中酯型生物碱的含量 [J], 陈燕;易进海;刘云华;德吉;扎西2.HPLC法测定延胡索药材中季胺型生物碱的含量 [J], 范斌;刘泓;杨亚莉3.HPLC法测定黄连药材及其炮制品中六种生物碱的含量 [J], 阳勇;罗维早;孙建彬;王欣;花雷;李隆云;覃瑶4.HPLC法测定藏药材铁棒锤、榜嘎中双酯型生物碱的含量 [J], 陈燕;易进海;刘云华;德吉扎西5.HPLC法同时测定延胡索药材中3种生物碱类成分的含量 [J], 郭明珠;姚洁纯因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

一测多评法测定不同味连饮片中6个生物碱类成分的含量

·1132··1134·值，图非洲防己碱（columbamine）　2.药根碱（jatrorrhizine）　3.表小檗碱epiberberine）　4.黄连碱（coptisine）　5.巴马汀（palmatine）　6.小檗berberine）　混合对照品（A）及样品（B）色谱图Fig. 1　Chromatograms of mixed reference substances（A）and sample（B）　味连不同饮片的制备［6］2.2.1　味连饮片　取味连药材，除去杂质，抢水洗净，润透后切薄片，干燥，筛去碎屑，即得。

2.2.2　姜味连饮片　取净味连饮片，加姜汁（每100 kg 味连，用生姜12.5 kg）拌匀，闷润，待姜汁被吸尽后，置炒制容器内，用文火加热炒干，取出、晾凉，筛去碎屑。

2.2.3　萸味连饮片　取净味连饮片，加吴茱萸煎汁（每100 kg味连，用吴茱萸10 kg）拌匀，闷润，待吴茱萸汁被吸尽后，置炒制容器内，用文火加热炒干，取出、晾凉，筛去碎屑。

　溶液的制备2.3.1　供试品溶液　取味连不同饮片粉末（过2筛）约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入醇-盐酸（100∶1）50 mL，密塞，称量，超声处（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称量，用甲醇补足减失的量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，续滤液，即得。

2.3.2　单一对照品溶液及混合对照品溶液　取非洲·1136·2.9条f=物峰面积，算非洲防己碱、·1138·参考文献［1［2。

HPLC法鉴定不同产地黄连饮片中含生物碱的研究

HPLC法鉴定不同产地黄连饮片中含生物碱的研究摘要】目的：研究高效液相色谱法（HPLC）在不同产地黄连饮片中生物碱检测中的价值。

方法：选择HPLC法分别检测各区域黄连中生物碱情况。

结果：不同区域黄连中小檗碱、黄连碱、表小檗碱、巴马汀生物碱以及总含量具有一定差别，其中四川洪雅县的黄连生物碱含量较高，而云南德钦县较低。

结论：HPLC在不同区域黄连生物碱的检验中效果显著，操作较为方便，具有一定重复性，鉴定结果的准确率较高，值得广泛推广及应用。

【关键词】生物碱；黄连；高效液相色谱法；饮片【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）21-0362-01黄连属于常见的中药饮片，具有泻火解毒、清热燥湿的功效，取得了较高的临床价值。

黄连的主要成分为生物碱，若能够准确掌握黄连中有效成分，选择疗效确切的鉴定方式在保证饮片质量中具有重要意义。

临床上常采取紫外分光光度计或者薄层扫描方式进行鉴定，虽然取得过一定检验价值，但效果并不明显[1]。

其中薄层扫描鉴定结果的准确性较低，而紫外分光光度计仅能够检出黄连中生物碱的总含量。

随着鉴定技术不断完善，临床认为采取HPLC法鉴定效果显著，不仅能够检出各生物碱含量，同时能够保证结果准确[2]。

因此本文展开研究，探讨HPLC法在不同区域黄连生物碱的检验中的价值，现作出如下报道。

1.资料与方法1.1 仪器与试剂日本日立公司生产的高效液相色谱仪器、色谱柱、超声波清洗器、电子分析天平、色谱数据工作站、乙腈色谱纯试剂、盐酸小檗碱以及双蒸水等。

1.2 方法将盐酸小檗碱判定为对照，按照HPLC法分别检测黄连中各生物碱含量。

1.3 色谱条件色谱柱为4.6mm*250mm，5um；流动相50:50的乙腈-0.1%磷酸液体，与0.1g/100ml的十二烷基磺酸钠混合，柱温设置为30℃，检验波长345nm，流速1.0ml/min。

1.4 配置溶液将100℃干燥后的盐酸小檗碱放入流动相中，浓度设置成240.6ug/ml；取0.1g黄连粉末，放置于锥形瓶中，加入流动相（80ml），采取超声处理，频率200W，功率40kHz，时间控制35min左右。

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ｏｆｔｈｅｂｅｒｂｅｒｉｎｅｉｎ１３．２４８ｐｇ．ｍＬ。。２６４．９６¨ｇ．ｍＬ～ｗａｓ０．９９９６．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓａｎｄ
ｉｔｓＲＳＤｗｅｒｅ１０２．４％（ＲＳＤ１．１７％）、１０１．８％（ＲＳＤ１．３０％）、１００．３％（ＲＳＤ１．７６％）、１００．７％（ＲＳＤ１．７５％）、
ｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆＣｏｐｔｉｓ（ｈｉｎｅｎｓｉｓＦｒａｎｃｈ．ｂｙＲＰ—ＨＰＬＣ．ＭＥＴＨＯＤＳ：ＡＸｔｉｍａｔｅＴＭＣ１８（４．６ｍｍＸ２５０ｍｍ，５ｕｍ）ｃｏｌｕｍｎｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｓｉｘａｌｋａｌｏｉｄｓｉｎｐｒｏｃｅｓｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆ６ｂｐｔｉｓＣｈｉｎｅｎｓｉｓ
Ｆｒａｎｃｈ．Ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗａｓｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ，０．１％ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ（ａｄｊｕｓｔＰＨａｓ１０．０ｗｉｔｈａｍｍｏｎｉｕｍｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅａｎｄａｍｍｏｎｉａ）ａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＡ：ＡｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＢ，ａｔｒａｔｅｌｍＬ．ｍｉｎ～．Ｔｈｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆｃｏｌｕｍｎｗａｓｓｅｔａｔ３０℃．ａｎｄｔｈｅｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓｓｅｔａｔ２７０ｎｍ．
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｆｏｒｓｉｘａｌｋａｌｏｉｄｓ（ｊａｔｒｏｒｒｈｉｚｉｎｅ，ｃｏｌｕｍｂａｍｉｎｅ，ｅｐｉｂｅｒｂｅｒｉｎｅ，ｃｏｐｔｉｓｉｎｅ，ｐａｌｍａｔｉｎｅ，ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ）ｉｎｐｒｏｃｅｓｓｅｄ
ＲＥＳＵＬＴＳ：Ｔｈｅ１ｉｎｅａｒｉｔｙｏｆｔｈｅｊａｔｒｏｒｒｈｉｚｉｎｅｉｎ０．８４８ｌＪｇ．ｍＬ１。１６．９６ｌＪｇ．ｍＬ～ｗａｓ０．９９９７：ｔｈａｔ
ｏｆｔｈｅｃｏｌｕｍｂａｍｉｎｅｉｎ１．２４８ＩＪｇ．ｍＬ１。２４．９６ＩＩｇ．ｍＬ～ｗａｓ０．９９９９：ｔｈａｔｏｆｔｈｅｅｐｉｂｅｒｂｅｒｉｎｅｉｎ
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱＲＰ——ＨＰＬＣ
ＺＨＥＮＧＨａｉ－ｊｉｅ‘，ＧＥＮＧＺｈｉ—ｐｅｎｇ’，ＭＥＮＧＸｉａｎ—ｌｉｉ，ＬＡＩＸｉａｎ—ｒｏｎｇ’，ＺｔｌＡＮＧＹｉ”ＬＵＯＷｅｉｚａｏ‘ （ＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１１１３７，Ｃｈｉｎａ；ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００６５．Ｃｈｉｎａ）
１０１．２％（ＲＳＤＩ．５３％）ａｎｄ９７．９％（ＲＳＤ１．９７％），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｆｏｒｔｈｅｓｉｘａｌｋａｌｏｉｄｓ．Ｔｈｅｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｉｅｓｗｅｒｅａｌｌｌｅｓｓｔｈａｎ２．Ｏ％，ａｎｄｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓｓｔａｂｌｅｉｎ１２
为１．７６％）、１００．７％（ＲＳＤ为１．７５％）、１０１．２％（ＲＳＤ为１．５３％）和９７．９％（ＲＳＤ为１．９７％）。样品噩复性
良好，在１２ｈ内稳定。结论：方法操作简便、确性高、稳定性好，可用于黄连各炮制品中６种生物
碱的含量测定。
关键词：黄连：炮制品：生物碱：ＨＰＬＣ：含量测定
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＳｉｘＡｌｋａｌｏｉｄｓｉｎｐｒｏｃｅｓｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆＣｏｐｔｉｓＣｈｉｎｅｎｓｉｓＦｒａｎｃｈｂｙ
表２：洗脱梯度表
时间
Ｂ
Ａ
０
１０
１００
全国第三届药用植物化学与中药新药研发技术创新研讨会
１５
２５
７５
２５
３０
７０
４０
４５
５５
４．２对照品溶液的制备分别精密称取盐酸药根碱、非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱适量置量瓶中，以盐酸一甲醇（１：１００）分别稀释至１．０６ｍｇ／ｍＬ、１．０４ｍｇ／ｍＬ、０．２５６ｍｇ／ｍＬ、０．４５６ｍｇ／ｍＬ、０．４８ｍｇ／ｍＬ、０．５５２ｍｇ／ｍＬ，做为储备液。分别吸取上述对照品储备液药根碱：０．４ｍＬ、非洲防己碱０．６ｍＬ、表小檗碱４ｍＬ、黄连碱４ｍＬ、巴马汀３ｍＬ、盐酸小檗碱１２ｍＬ，以盐酸甲醇定容至２５ｍＬ容量瓶中，作为混合对照品储备液。４．３供试品溶液的制各取本品粉末约０．１９，精密称定，置１５０ｍＬ锥形瓶中，精密加入盐酸甲醇（１：１００）５０ｍＬ，称定重量，超声处理（功率２００Ｗ，频率４０ｋＨｚ）３０分钟放冷，再称定重量，盐酸甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，过０．４５１１ｍ微孔滤膜，作为供试品溶液。４．４线性关系考察精密量取混合贮备液０．５ｍＬ、ｌｍＬ、２．５ｍＬ、５ｍＬ置１０ｒａｌ。量瓶中，加盐酸一甲醇（１：１００）稀释至刻度。分别精密吸各对照品溶液（含储备液）各ｌＯｕｌ，按上述色谱条件，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值。以峰面积积分值（Ｙ）为纵坐标，各生物碱浓度（１Ｉｇ／ｍＬ）（Ｘ）为横坐标进行线性回归，得６种小檗碱型生物碱回归方程。如表３。
黄连及其炮制品中生物碱的含量测定方法主要有薄层扫描法伫’、高效液相色谱法净科、紫外分光光度法Ⅲ博１。现今文献报道的高效液相测定黄连及其炮制品中生物碱含量的方法，仅是测定一种或少数几种生物碱的含量，未见同时测定六种主要生物碱含量的报道。本研究采用高效液相色谱法，同时对黄连中的６种生物碱进行含量测定，以探讨传统经典炮制方法对黄连生物碱含量的影响。
２．研究原料
黄连各炮制品（由成都中医大惠康药业有限公司提供）。如表ｌ表ｌ：黄连各炮制品表
３．仪器与试剂
日本岛津ＬＣ—ｌＯＡＴｖｐ高效液相色谱仪，ＳＰＤ－ＩＯＡｖｐ紫外检测器；Ｎ－２０００色谱数据工作站。ＣＱ－２５０型超声波清洗器（上海必能信公司），ＢＰ２１１Ｄ电子天平（德国Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）。
４．６稳定性试验
取精密度试验项下样品，分别于０ｈ，２ｈ，４ｈ，８ｈ，１２ｈ进样分析，记录峰面积，结果盐酸药根碱ＲＳＤ为０．２５％（ｒＦＳ）、非洲防己碱ＲＳＤ为１．７２％（ｎ：５）、表小檗碱ＲＳＤ为１．５７％（ｎ＝５）、黄连碱ＲＳＤ为１．３７％（刀匕５）、巴马汀ＲＳＤ为１．８４％（ｎ＝５），盐酸小檗碱ＲＳＤ为１．６２％（Ｊ『Ｆ５），表明供试品溶液在１２ｈ内基本稳定。
表３：六种生物碱标准曲线
由上表可知：各生物碱峰面积与其相应浓度（ｕｇ／ｍＬ）线形关系良好
４．５精密度试验
精密吸取对照品溶液１０Ｉｌ１，重复进样５次，依法测定各峰面积积分值，结果药根碱ＲＳＤ为１．１１％（ｎ＝５）、非洲防己碱ＲＳＤ为０．９６％（ｎ＝５）、表小檗碱ＲＳＤ为０．５３％（ｎ＝５）、黄连碱ＲＳＤ为１．８１％（ｎ＝５）、巴马汀ＲＳＤ为０．６１％（ｎ＝５）、盐酸小檗碱ＲＳＤ为０．６１％（ｎ＝５）。结果表明仪器精密度良好。
乙腈（Ｆｉｓｈｅｒ）；水为反渗透法纯净水，其他试剂均为分析纯。
４．试验方法与结果４．１色谱条件
色谱柱：采用十八烷基硅烷键合硅胶柱ＸｔｉｍａｔｅＴＭＣ。。（４．６ｍｍ×２５０咖，５Ｉｌｍ）。以Ｏ．１％三乙胺（碳酸氢铵，氨水调ＰＨ为１０）为流动相Ａ，乙腈为流动相Ｂ进行梯度洗脱（见表２）。检测波长为２７０ｎｉｌ］：流速为ｌｍＬ．ｍｉｎ～；柱温为３０＂Ｃ；理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于６０００，供试品色谱峰中其他杂质色谱峰与待测物质色谱峰的分离度应符合要求。
２．０４８ｌｌｇ．ｍＬ。’４０．９６ｕｇ．ｍＬ
１
ｗａｓ０．９９９９。Ｔｈａｔｏｆｔｈｅｃｏｐｔｉｓｉｎｅｉｎ３．６４８ｕｇ．ｍＬ
１。７２．９６
ｌｌｇ．ｍＬ—ｗａｓ０．９９９９：ｔｈａｔｏｆｔｈｅｐａｌｍａｔｉｎｅｉｎ２．８８ＩＪｇ．ｍＬ１’５７．６Ｕｇ．ｍＬ—ｗａｓ０．９９９８ａｎｄｔｈａｔ
盐酸药根碱照品：中国药品生物制品检定所提供，批号：０７３３－２０００５；非洲防己碱：重庆中药研究院提供，纯度＞９８％；盐酸表小檗碱：重庆中药研究院提供，纯度＞９８％；盐酸黄连碱：重庆中药研究院提供，纯度＞９８％；盐酸巴马汀：中国药品生物制品检定所提供，批号：１１０７３２－２００５０６；盐酸小檗碱：中国药品生物制品检定所提供，批号：ｌ１０７１３－２００６０９．
４．７重复性试验
取同一批号样品，按拟定的含量测定方法，平行制备供试品溶液，依法各测定峰面积积分值，计算含量。结果药根碱ＲＳＤ为１．３３％（ｎ＝６）、非洲防己碱ＲＳＤ为１．０６％（ｎ＝６）、表小檗碱ＲＳＤ为１．３０％
ＣｈｉｎｅｎｓｉｓＦｒａｎｃｈ．．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＣｏｐｔｉｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓＦｒａｎｃｈ：ｐｒｏｃｅｓｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔ：ａｌｋａｌｏｉｄｓ；ＨＰＬＣ：ｃｏｎｔｅｎｔ９９
全国第三届药用植物化学与中药新药研发技术创新研讨会
ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
１．引言
黄连系毛莨科植物黄连（ＣｏｐｔＹｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓＦｒａｎｃｈ．）、三角叶黄连（Ｃ出』ｔｏｉｄｅａＣ．Ｙ．ＣｈｅｎｇｅｔＨｓｉａｏ）、云连（ＣｏｐｔｉｓｔｅｅｔａＷａｌｌ．）的干燥根茎。《中华人民共和国药典》２００５版收载的黄连炮制品有酒黄连、姜黄连、萸黄连，临床习用的黄连炮制品尚有醋黄连、酒蒸黄连等…。
ｈ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｈａｓｇｏｏｄｓｔａｂｉＩｔｙ，ｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔ
ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｎｉｎｐｒｏｃｅｓｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆＣｏｐｔｉｓ
基金项目：国家“十一五”科技支撑计划项目（批准号：２００７ＢＡｌ４０８０５，２００７ＢＡｌ４０８０３）作者简介：郑海杰（１９８４～），男（汉族），硕士研究生，主要从事中药及民族药质量标准化研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｊｐｐｐｐｐ＠１６３．ｃｏｍ掌通讯作者：张艺，研究员，成都中医药大学民族医药学院院长。研究方向：中药及民族药系统开发研究。Ｔｅｌ：０２８—６ｉ８００２７４，Ｅｍａｉｌ：９００６ｚｍｙ＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ