6-流动相

离子色谱常见问题及对策

离子色谱常见问题及对策离子色谱(HPIC)仪作为一种有效分离检测离子的分析仪器,在水质分析实验中已广泛应用。

这种高效分离痕量离子的检测仪具有分析速度快、检测灵敏度高、选择性好,并且可同时检测多种离子的优点。

【离子色谱的特点】不同的操作者都可得到好的样品分析重现性；经过稀释、过滤后可以测定多种样品；多价态可氧化元素（NO2﹣&NO3﹣，SO32-&SO42-等）；不同价态离子（Fe3+&Fe2+,Cr3+&Cr6+等）；可单独测定某种离子（通常为同时测定）。

应用领域广泛离子色谱常见问题类型 A. 压力异常（偏高、波动）； B. 漏液； C. 保留时间漂移； D. 基线问题（漂移、噪声）； E. 峰形异常。

一、常见故障排除及原因分析－压力异常现象：无压力，流动相不流动可能原因1、保险丝断或电源问题2、柱塞杆折断3、泵头内有空气或流动相不足4、单向阀损坏或单向阀上粘附固体颗粒5、漏液6、压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力) 现象：压力持续偏高或不断上升1、流速设定过高2、保护柱或色谱柱筛板堵塞3、流动相使用不当或有缓冲盐析出4、色谱柱选择不当5、进样阀损坏或堵塞6、线路过滤器堵塞7、管路拧的过紧堵塞现象：压力持续偏低1、流速设定过低2、色谱柱选择不当3、柱温过高4、系统漏液现象：压力波动可能原因1、泵头中有气泡2、单向阀损坏3、柱塞密封圈损坏4、脱气不充分5、系统漏液6、使用了梯度洗脱－漏液接头处漏液1、接头处松动2、接头磨损3、部件不匹配泵漏液1、单向阀松动2、泵密封损坏3、排液阀损坏4、接头松动（不要拧的太紧）进样阀漏液可能原因1、转子密封损坏2、定量环堵塞3、进样口密封松动4、进样针尺寸不合适5、废液管产生虹吸6、废液管堵塞检测器漏液可能原因1、手紧接头处漏液2、废液管堵塞3、流通池堵塞－保留时间漂移可能原因1、柱温或室温变化2、流动相组分变化3、色谱柱没有平衡4、流速变化5、泵中有气泡6、流动相选择不当－基线问题基线漂移可能原因1、温度波动2、流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的试剂) 3、电导池被污染或有气泡4、流动相配比不当或流速变化5、柱子平衡（约30－60min）6、流动相污染，变质或由低品质试剂配成7、样品中有强保留的物质以馒头样峰被洗出基线噪声（规则的）可能原因1、流动相、泵、检测器中有气泡2、有地方漏液3、流动相混和不均匀4、温度影响（环境温度波动太大）5、其他电子设备的影响基线噪声（不规则的）可能原因1、流动相污染、变质或由低质溶剂配成2、有地方漏液3、流动相各溶剂不相溶或混和不均匀4、电导池污染5、电导池内有毛刺6、系统内有气泡－峰形异常前沿峰、拖尾峰可能原因1、柱塞板堵塞2、色谱柱塌陷3、柱外效应4、干扰峰5、平衡不足或不合适6、重金属污染7、样品溶剂选择不当8、样品过载9、柱温过低分叉峰可能原因1、保护柱或分析柱污染2、样品溶剂不溶于流动相峰展宽进样体积过大流动相粘度过高检测池体积过大保留时间过长柱外体积过大样品过载峰变形可能原因1、样品过载2、样品溶剂选择不当鬼峰1、进样阀残余峰2、样品中未知物3、柱未平衡4、水污染—离子分离度不好原因分析一:淋洗液浓度选择不当。

酚类化合物的测定液相色谱分析法

酚类化合物的测定----液相色谱分析法1 范围1.1 本法规定了液相色谱法测定水中苯酚、4-硝基酚、3-甲基酚、2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚和五氯酚。

1.2 本法适用于生活饮用水、地下水和地表水中苯酚、4-硝基酚、3-甲基酚、2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚和五氯酚的测定。

1.3 本法的最低检测质量浓度：取水样1.0L，固相萃取后溶剂洗脱，定容1.0mL，进样体积40μL，最低检测质量浓度（μg/L）见下表。

最低检测质量浓度酚类苯酚4-硝基酚3-甲基酚2，4-二氯酚2，4，6-三氯酚五氯酚Sp i，μg/L 0.16 0.032 0.15 0.093 0.14 0.072 0.61 0.12 0.56 0.35 0.54 0.272 原理用固相小柱吸附水中酚类化合物，然后用溶剂洗脱，经氮吹气浓缩至一定体积后，用反相高压液相色谱法分析。

在反相色谱柱上以甲醇/（水+乙酸）为流动相把经预处理的酚类化合物分离，用二极阵列检测器或紫外检测器，测定各种酚的峰高或峰面积，以外标法定量。

3 试剂3.1 流动相3.1.1 甲醇：HPLC级，经0.22μm滤膜过滤。

3.1.2 高纯水：经0.22μm滤膜过滤。

3.2 标准物酚类标准储备液各组分浓度（μg/mL）苯酚2004-硝基酚503-甲基酚2002，4-二氯酚2002，4，6-三氯酚200五氯酚2003.3 四氢呋喃：重蒸馏。

3.4 正己烷：重蒸馏。

3.5 硫酸：0.5mol/L。

3.6 冰乙酸。

3.7 无水亚硫酸钠。

4 仪器4.1 高效液相色谱仪：可编程紫外检测器。

4.2 微量注射器：50μL、100μL。

4.3 色谱柱：C18或C8柱。

4.4 化学工作站。

4.5 尖底浓缩瓶：10ml具刻度。

4.6 富集柱。

5 样品5.1 水样采集及贮存方法：样品应贮于棕色玻璃瓶中避光，用硫酸调pH至＜2，冷冻保存，应尽快过柱，检测。

5.2 样品的预处理5.2.1 富集柱的活化：首先用10~15ml甲醇活化，再用30ml纯水活化，然后浸在纯水。

固相萃取-高效液相色谱质谱法测定有机肥中18种抗生素残留

流速（ｍＬ／ｍｉｎ）
０．４０．４０．４０．４０．４０．４０．４０．４０．４
流动相百分比（％）
Ａ
Ｂ
５
９５
５
９５
２０
８０
２０
８０
３０
７０
７０
３０
７０
３０
５
９５
５
９５
— １４８—
江苏农业科学２０２１年第４９卷第１１期
１．６质谱条件
剂温度为３５０℃；脱溶剂气流速为６５０Ｌ／ｈ；毛细管
１９８５（４）：３４．
食与食品工业，２００３（４）：１５－１７，３５．
［２０］韩金香，胡培松，焦桂爱，等．稻米蒸煮食味品质及其仪器分析
［１６］王新俊，曾晓芳，赵德刚．贵州地方水稻品种品质性状及其相关
的研究现状［Ｊ］．中国稻米，２００９（２）：１－４．
分析［Ｊ］．种子，２０１３，３２（９）：７０－７４．
准确称取２．０ｇ碾磨过筛后的有机肥样品于５０ｍＬ离心管中，加入５ｍＬＮａ２ＥＤＴＡ－Ｍｃｌｌｖａｌｉｎｅ缓冲液（ｐＨ值４．０），涡旋混匀，再加入１８ｍＬ乙腈、２ｍＬ乙酸，涡旋振荡２０ｍｉｎ后４０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，获得含待测抗生素的上清液。取ＯａｓｉｓＰＲｉＭＥＨＬＢ固相萃取柱（吸附剂质量为６０ｍｇ，柱管体积为３ｍＬ），将２ｍＬ上清液过固相萃取柱，保持约１滴／ｓ的流速，准确量取１ｍＬ流出液，过０．２μｍ滤膜，获得经固相萃取净化的上机测试液。１．５色谱条件
残留检测相关研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｘｋ＠ｇｈｓ．ｃｎ。
《有机肥料中土霉素、四环素、金霉素与强力霉素的
櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄

流动相对色谱峰形及保留值的影响

? 中性茶碱维生素c 非那西丁卡马西平硝苯地平地西泮阿昔洛维
? 有的药物在结构上同时含有酸性、碱性基团 , 却表现出不同色谱行为。如环丙氟呱酸和氨甲苯酸呈碱性 , 丙谷胺为酸性 , 而氟呱酸却类似中性。磺胺类药物多为中性或呈弱碱性。
? 一般来说 , 碱性药物的保留值对 pH值的敏感性差异较大 , 保留值大的药物对 pH值的敏感性较大 , 碱性药物对 pH值敏感性在 pH>4 时显著增加 , 如酮康哇和益康哇。所以当分离碱性或酸性药物采用的流动相 pH值在4左右时 , 要特别给予注意, 以免影响分离度和峰序的改变 , 如环丙沙星与氟哌啶 , 地卡因与普罗帕酮等在一之间发生峰序倒置。
所谓的促溶效应(chaotropic effect) ,被测物与盐相互作用, 离子化
的被测物相互间的排斥作用减弱 , 从而显著地影响被测物在固定
相上的吸附行为; 在制备色谱系统中或被测物浓度较高时, 流动相
中
应
含
有
足
量
的
缓
冲盐以改善色谱峰形和分离效果。
? 色谱柱的饱和容量可随缓冲盐的单价阳离子 (如Na + 、 NH4+ 、K+ 、Cs+ ) 直径的增加而降低, 选用Na+ , 色谱柱的饱和容量相对较高。
? 解离的化合物在固定相表面的相互排斥作用以及较难渗透进入疏水性的固定相中也是可能的原因，采用反相高效液相分离可解离的(尤其是碱性的) 化合物时色谱柱易于过载, 甚至低达 10ng 的碱性化合物也可使常规色谱柱的表观柱效明显降低; 减少进样量则可改善色谱峰形并使表观柱效显著增加;过载效应可随着流动相的离子强度的增加而逐渐减弱。
甲醇∶ NH4H2PO4(0.025M) =55∶45

气相色谱

在一定温度下，组分在两相之间分配达到平衡时的浓度（g· mL-1）比称为分配系数，以K表示。待测组分在固定相和流动相之间发生的吸附，脱附或溶解，挥发的过程叫做分配过程。
组分在固定相中的浓度组分在流动相中浓度 Cs K Cm K
（分配系数是色谱分析的依据）
分配系数K是由组分及固定液的热力学性质决定的，随柱温，柱压变化，与柱中气相、液相的体积无关。当K=1时，组分在固定相和流动相中浓度相等；当K>1时，组分在固定相中的浓度大于在流动相中的浓度；当K<1时，组分在固定相中的浓度小于在流动相中的浓度。
（2-11）
1 1 m 1 k 1 S mM
组分和流动相通过长度为L的色谱柱所需时间分别
L tR us
(2 13)
tM
L u
(2 14 )
推导：t R t M (1 k )
' tR tM tR k tM tM
(2 15) (2 16 )
k可由实验测得。
死时间（dead time） tm 指不被固定相吸附或溶解的气体（如空气、甲烷）从进样开始到柱后出现浓度最大值时所需时间。保留时间（retention time）tR 指被测样品从进样开始到柱后出现浓度最大值时所需的时间O’B。调整保留时间（adjusted retention time）tR’ tR’=tR-tm 某组分由于溶解或吸附与固定相，比不溶解或不被吸附的组分在色谱柱中多滞留的时间。
图12.2 色谱流出曲线
（1）基线（base line）
当色谱柱中没有组分进入检测器时，在实验操作条件下，反应检测器系统噪声随时间变化的线称为基线。（2）保留值（retention value）

资料整理6-ba的基本情况

资料整理6-ba的基本情况1.⾖芽质量安全的关键影响因素分析及对策：1.1 ⽬前情况：本⽂做了⼤量的实验，进⾏数据分析，讨论得出了研究结果，⼀是运⽤⽓相⾊谱-质谱技术开展了⾖芽中农药残留的检测分析⼯作，结果表明⾖芽中马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷、久效磷、甲胺磷、氧化乐果等农残合格率100%。

⼆是运⽤液相⾊谱-质谱联⽤技术开展了⾖芽中的添加剂指标的检测分析⼯作，该⽅法采⽤有机溶剂盐析提取⽬标物和质谱负模式检测技术，有效提取⽬标物，去除杂质⼲扰，适合于市场样品实际检测，经检测6-苄基腺嘌呤与4-氯苯氧⼄酸钠合格率分别为96.4%和76.7%。

三是运⽤原⼦荧光和微波消解前处理技术开展了⾖芽中总砷的检测分析⼯作，经对市场35 个⾖芽样品的实际检测，结果表明合格率为100%，未检出总砷超标的⾖芽样品。

四是运⽤紫外可见分光光度法检测分析了⾖芽中亚硝酸盐和亚硫酸盐的含量情况，其中亚硝酸盐合格率89.7%、亚硫酸盐合格率为53.2%，这两项指标是影响上市⾖芽质量的主要因素，同时，从不同单位⾖芽产品的检测结果来看，⼩作坊⽣产企业⾖芽合格率整体较低，安全隐患较⼤，⽽品牌⾖芽的质量相对较好。

综合分析各实验数据，本⽂找出了影响⾖芽质量安全的主要指标，为⽣产质量管理、市场执法监督、群众放⼼消费提供了数据⽀持。

1.2 ⽣产引⼊的污染物及危害1.2.1 ⽣长调节剂的概述（主要作⽤、限制⽤量、物理性质、化学性质、作⽤机理、毒理范围）6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧⼄酸钠俗称AB 粉，是⾖芽⽣产使⽤的2 个主要添加剂，主要作⽤是促进⾖芽⽣长、抑制长根，提⾼产量。

国家标准GB2760《⾷品添加剂使⽤卫⽣标准》规定⾖芽中4-氯苯氧⼄酸钠残留量⼩于 1.0mg/kg、6 苄基腺嘌呤残留量⼩于0.2mg/kg。

6-苄基腺嘌呤（6-Benzylaminopurne）分⼦式C12H11N5，相对分⼦质量225.25。

⽩⾊微针状结晶或类⽩⾊粉末，难溶于⽔，可溶于酸、碱，在酸性、碱性条件下均稳定。

TSKgelPWxl系列色谱柱介绍

分离范围（道尔顿） < 3,000 < 40,000
2,000 - 300,000 4,000 - 800,000 40,000 - 8,000,000 1,000 - 8,000,000
< 3,000 40,000 - 8,000,000
表 3 TSKgel PW 系列色谱柱与 PWXL 系列色谱柱最小理论塔板数的比较
TSKgel G2500PW 规格色谱柱几乎与大孔径规格色谱柱具有相同的化学性质，并且可以与大孔径色
谱柱结合使用。另外，TSKgel G2500PW 色谱柱与 TSKgel G2000PW 色谱柱具有几乎相同的校准曲线。但应当指出的是，TSKgel G2500PW 色谱柱对小分子的分离在一定程度上不如 TSKgel G2000PW。（4）TSKgel G-Oligo-PW 色谱柱简介
分离报告 No.037
水性尺寸排阻色谱柱简介： TSKgel PWXL 系列
目录
1. 简介
1
2. TSKgel PWXL 色谱柱的特点
1
3. TSKgel PWXL 色谱柱的基本特性
5
3-1 流速对理论塔板数的影响
5
3-2 离子特性
5
3-3 疏水性
6
3-4 对温度的稳定性
7
ห้องสมุดไป่ตู้
3-5 溶剂互溶性
8
4. 色谱柱的选择
等级
TSKgel G2500PW TSKgel G3000PW TSKgel G4000PW TSKgel G5000PW TSKgel G6000PW TSKgel GMPW
TSKgel PW 系列
7.5mm ID × 60cm
7.5mm ID ×30cm

柱子、流动相注意事项

HPLC使用注意事项及HPLC柱子使用经验之谈HPLC使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um 或更细的膜过滤)。

2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。

3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。

对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。

5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。

6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。

7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。

8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。

清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。

9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。

10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。

11.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。

12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。

更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

高效液相色谱常见故障的断定及解决诊状可能的原因解决方法(一)保留时间变化1.柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够用》25mmol/L的缓冲液4.柱污染每天冲洗柱5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命采用保护柱(二)保留时间缩短1.流速增加检查泵,重新设定流速2.样品超载降低样品量3.键合相流失流动相PH值保持在3"7.5检查柱的方向4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加柱恒温(三)保留时间延长1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化3.键合相流失同前(二)34.流动相组成变化同前(二)45.温度降低同前(二)5(四) 出现肩峰或分*1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏更换进样器转子(五)鬼峰1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物处理样品3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(六) 基线噪声1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4 同前(四)45.同前(四)3 5.同前(四)36.死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽1.进样体积过大同(四)12.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载进小浓度小体积样品液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。

六氟异丙醇做凝胶渗透色谱流动相时的k,a值

一、概述六氟异丙醇（HFIP）是一种常用的溶剂，具有良好的流体性能和溶解性能。

它被广泛应用于色谱分析中，特别是在凝胶渗透色谱（GPC）中作为流动相。

在GPC分析中，参数k和a值是评价六氟异丙醇流动相性能的关键指标。

二、六氟异丙醇的物理性质1. 分子结构：六氟异丙醇的分子式为C3HF6O，是一种具有氟原子取代的异丙醇。

其化学结构稳定，具有良好的溶解性和稳定性。

2. 流体性能：六氟异丙醇在常温下呈无色透明液体，在室温下也能保持流动性，适合作为色谱流动相使用。

3. 溶解性能：六氟异丙醇具有较强的溶解能力，能有效溶解大多数有机物。

三、六氟异丙醇在GPC中的应用1. 良好的分离效果：六氟异丙醇作为GPC流动相时，能有效分离高聚物和低聚物，提高分析分辨率。

2. 高灵敏度：六氟异丙醇的溶解性能和流体性能使得GPC分析具有较高的灵敏度和准确性。

3. 广泛适用性：六氟异丙醇适用于多种类型的样品，包括聚合物、生物大分子等。

四、六氟异丙醇流动相中的k和a值的意义1. k值：k值是衡量六氟异丙醇在GPC中分离效果的重要参数，它反映了溶剂对不同聚合物的溶解能力，是评价分析系统性能的重要指标。

2. a值：a值是用来表征色谱柱对流动相的亲和性和排斥性的参数，它对应着流动相在色谱柱内的传质过程和色谱分离效果。

五、影响六氟异丙醇流动相k和a值的因素1. 流动相浓度：六氟异丙醇的浓度会直接影响k值和a值，一般来说，随着浓度的增加，k值会增大，a值会减小。

2. 温度：温度对六氟异丙醇的流体性能有一定影响，当温度升高时，k 值会减小，a值可能会有所增加。

3. 流动相pH值：流动相的pH值会影响溶解性能和亲和性，从而影响k和a值的大小。

六、六氟异丙醇流动相中k和a值的测定方法1. 色谱分析法：通过色谱仪对流动相中的样品进行分析，得出k和a 值。

2. 质谱分析法：利用质谱仪对流动相的组分进行分析，进而推算出k和a值。

七、结论六氟异丙醇作为GPC流动相时，k和a值是衡量其性能的重要参数，其值的大小对分析效果具有重要影响。

高效液相流动相的选择

高效液相流动相的选择 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020高效液相色谱流动相选择流动相1.流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。

流动相选择1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。

2：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。

这是一个聪明而又省力的办法。

调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。

3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。

选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。

低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。

碱性流动相不能用于硅胶柱系统。

酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。

②纯度。

色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

③必须与检测器匹配。

使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。

当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

④粘度要低(应<2cp)。

高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。

最好选择沸点在100℃以下的流动相。

⑤对样品的溶解度要适宜。

如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。

⑥样品易于回收。

应选用挥发性溶剂。

流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。

液相色谱仪常用操作步骤

液相色谱仪常用操作步骤1)．首先对流动相进行过滤，根据需要选择不同的滤膜，一般为有机系和水系，常用的孔径为0.22um和0.45um。

2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

3)．正常情况下，仪器首先用甲醇冲洗10-20分钟，然后再进入测试用流动相(如流动相为缓冲试剂，则要二次重蒸水冲洗10-20分钟，直至色谱柱中有机相冲净为止) 。

4)．一般情况下，流动相冲洗20-30分钟后，仪器方可稳定，最重要的是仪器基线走后，方可进样测试。

5)．同时进两针标样，将其结果相比较，其结果的比值在0.98-1.02之间后，就可以正式进行样品的测试了。

6)．样品测试结束后，就要进行色谱仪及色谱柱的清洗和维护。

如流动相为缓冲试剂，同样也要用重蒸水清洗10-20分钟，方可用有机相进行保护，否则，有损色谱柱。

7)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。

8)．填写登记本，由负责人签字。

注意事项：1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。

脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。

3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。

4)．压力不能太大，最好不要超过150kgf/cm2 .5). 因为缓冲试剂遇有机溶剂，会结晶，有损色谱柱，所以，每次由有机相变流动相或流动相变有机相均需用蒸馏水清洗。

气相色谱仪操作规程一载气钢瓶的使用规程1 钢瓶必须分类保管，直立因定，远离热源，避免暴晒及强烈震动，氢气室内存放量不得超过二瓶。

2 氧气瓶及专用工具严禁与油类接触。

3 钢瓶上的氧气表要专用，安装时螺扣要上紧。

4 操作时严禁敲打，发现漏气须立即修好。

5 用后气瓶的剩余残压不应少于980 kPa。

6 氢气压力表系反螺纹，安装拆卸时应注意防止损坏螺纹。

二减压阀的使用及注意事项器仪表同1在气相色谱分析中，钢瓶供气压力在9.8-14.7 MPa。

2 减压阀与钢瓶配套使用，不同气体钢瓶所用的减压阀是不同的。

固体相流动相的要求

固体相流动相的要求一、固体相与流动相的定义与特点1. 固体相的定义与特点固体相是指物质在常温、常压下保持其形态不变的状态。

固体具有坚硬、稳定和不可压缩的特点，其分子之间存在着强大的相互作用力，使得固体的形状和结构相对稳定。

2. 流动相的定义与特点流动相是指物质在一定条件下可以流动的状态。

在流动相中，分子之间的相互作用力较弱，使得物质能够在外界作用下发生形状和位置的变化。

二、固体相流动相的要求1. 固体相流动相的定义固体相流动相是指在特定条件下具有固体相和流动相共存的物质状态。

在这种状态下，物质中的一部分是固体相，具有固体的性质，另一部分是流动相，具有流体的性质。

2. 液固共存的条件液固共存是固体相流动相存在的基本条件。

固体相和流动相之间需要达到一种平衡状态，使得它们能够相互转化和相互影响。

2.1 温度和压力条件液固共存的条件首先是一定的温度和压力条件。

不同物质的液固共存条件是不同的，具体需要根据物质的特性进行研究和确定。

2.2 相变过程液固共存的过程中，液体和固体之间发生相变，这是液固共存的关键过程。

在相变过程中，液体变为固体或固体变为液体，相变温度和相变压力是确定液固共存条件的重要参数。

3. 固体相流动相的要求固体相流动相需要满足以下要求：3.1 固体相的稳定性在固体相流动相中，固体相需要保持其形态和结构的稳定性。

即使在流动相的作用下，固体相的形状和结构也不能发生明显的变化，以保持物质的特性和功能。

3.2 流动相的流动性流动相需要具有足够的流动性，能够在一定条件下形成流动状态。

流动相的流动性取决于其分子之间的相互作用力和外界的作用力，这些因素需要在设计和制造液固共存的材料时进行考虑。

3.3 维持液固平衡固体相流动相需要保持液固平衡状态，即流动相和固体相之间的相互作用力要适度，能够保持物质的稳定性和功能。

3.4 实现固体相和流动相的转化固体相流动相是一个动态平衡过程，需要实现固体相和流动相之间的相互转化。

分离分析重点

1. 什么是分离科学?分离科学是研究被分离组分在空间移动和再分布的宏观和微观变化规律的一门学科，也可以说是研究分离、浓集和纯化物质的科学。

2. Giddings提出分离方法的依据是什么? Giddings提出的分离方法的分类是基于迁移和平衡。

他认为迁移有两个控制因素：（1）化学势能（），它既控制了相对的迁移又控制了平衡的状态；（2）流（flow）这可以是气体流也可以是液体流或超临界流体流。

由于化学势能和流的作用才能形成分离过程。

3．简述微波加热与萃取原理。

微波萃取原理：在微波辐射过程中. 微波产生的电磁场作用下，极性分子从原来的随机分布状态转向按照电磁场的极性排列取向，并随着交变电磁场的变化而变化，这一过程致使分子的运动和相互磨擦从而产生热量。

此时交变电磁场的场能转化为介质内的热动能，使介质温度不断升高，这就是微波加热的基本原理。

4．简述超声萃取分离法原理。

超声波在传递过程中存在着的正负压强交变周期，在正相位时，对介质分子产生挤压，增加介质原来的密度；负相位时，介质分子稀散，介质密度减小。

超声波并不能使样品内的分子产生极化，而是在溶剂和样品之间产生声波空化作用，导致溶剂内气泡的形成、增长和爆破压缩，从而使固体样品分散，增大样品与萃取溶剂之间的接触面积，提高目标物从固相转移到液相的传质速率。

5．简述超临界萃取分离法原理。

（1）超临界流体萃取分离法是利用超临界流体做萃取剂在两相之间进行的一种萃取方法。

（2）超临界流体是介于气液之间的一种物态，它只能在物质的温度和压力超过临界点时才能存在。

（3）超临界流体的密度大，与液体相仿，所以它与溶质分子的作用力很强，很容易溶解其他物质。

（4）另一方面，它的粘度较小，接近气体，传质速率很高；加上表面张力小，容易渗透固体颗粒，保持较大的流速，使萃取过程在高效、快速、经济的条件下完成。

6．简述固相萃取步骤。

(1)柱预处理 (2)上样或吸附 (3)淋洗:除去干扰杂质 (4)洗脱:分析物的洗脱和收集7．什么是分子印迹技术？就是仿照抗体的形成机理，在模板分子周围形成一个高度交联的刚性高分子，除去模板分子后在聚合物的网络结构中留下具有结合能力的反应基团，对模板客体分子表现高度的选择性识别性能。

正相色谱中流动相的选择质子接受体：乙醚或甲基叔丁基醚质子给予体：氯仿
偶极溶剂：二氯甲烷
1-氯丁烷，异丙醚、二氯甲烷、四氢呋喃呋喃、、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、乙腈中等极性：二氯甲烷二氯甲烷、、氯仿、乙醚、异丙醚、乙酸乙酯、甲基叔丁基醚极性：四氢呋喃、乙腈、异丙醇、甲醇、水改性剂
己烷、庚烷正相键合相色
谱己烷、庚烷正相液液分配
色谱
戊烷、己烷、庚烷硅胶、氧化铝
等吸附剂的液
固色谱
主体正相色谱类型
改变多元混合溶剂中强洗脱溶剂组成对分离选择性的影响。

【流动相篇】做液相绕不过的6个要点

开发方法或方法验证时最重要的一步就是流动相的选择和比例的调整。

我想大家肯定都遇到过分离度不好或峰形不好的情况，大部分原因就是流动相没调好，那到底该怎么调，怎么选择呢？看完下文可能你就知道答案了。

01由强到弱一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。

02三倍规则每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。

这是一个聪明而又省力的办法。

调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。

03粗调转微调当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。

1、流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。

选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。

低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。

碱性流动相不能用于硅胶柱系统。

酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。

②纯度。

色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

③必须与检测器匹配。

使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。

当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

④粘度要低（应<2cp）。

高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。

最好选择沸点在100℃以下的流动相。

⑤对样品的溶解度要适宜。

如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。

⑥样品易于回收。

应选用挥发性溶剂。

2．流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。

HPLC法测定生姜配方颗粒中6-姜辣素的含量

HPLC法测定生姜配方颗粒中6-姜辣素的含量周记磊;韦红言;梁冰丽;陆东;郑宇;黄萍萍;吴家彬;温庆伟【摘要】目的:建立生姜配方颗粒中6-姜辣素的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,以Merck Lichrospher RP-18e (4.6×250mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-甲醇-水(40:5:55)为流动相,检测波长280nm,流速1.0 mL· min-1,柱温25 ℃.结果:6-姜辣素在0.24μg～1.90 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=1.0000),平均回收率为96.03％,RSD为0.69％(n=5).结论:该方法专属性强、快速、简便、重复性好,可用于生姜配方颗粒的质量控制.【期刊名称】《中药与临床》【年(卷),期】2013(004)005【总页数】3页(P6-7,19)【关键词】生姜配方颗粒;HPLC;6-姜辣素;含量测定【作者】周记磊;韦红言;梁冰丽;陆东;郑宇;黄萍萍;吴家彬;温庆伟【作者单位】培力南宁药业有限公司,广西南宁530007;培力南宁药业有限公司,广西南宁530007;培力南宁药业有限公司,广西南宁530007;培力南宁药业有限公司,广西南宁530007;培力南宁药业有限公司,广西南宁530007;培力南宁药业有限公司,广西南宁530007;培力南宁药业有限公司,广西南宁530007;培力南宁药业有限公司,广西南宁530007【正文语种】中文【中图分类】R283.6生姜来源于姜科植物姜Zingiberofficinale Rosc.的根茎[1]，系姜的新鲜根茎。

味辛、性微温，归肺、脾、胃经，具有解表散寒、温中止呕、化痰止咳的功效[2]。

主要用于治疗风寒感冒、胃寒呕吐、寒痰咳嗽[3]。

但因新鲜生姜储存较困难，故很多药房均无法向患者提供药用生姜。

中药配方颗粒是指在中医药理论指导下，采用现代生产工艺，以水作为提取溶媒，对药材饮片进行煎煮，过滤，浓缩，干燥，制粒等工序制备得到的提取物制剂[4]。

中国药科大学药物代谢动力学实验考查知识点整理

中国药科大学药物代谢动力学实验考查知识点整理中国药科大学药物代谢动力学实验考查知识点整理药物代谢动力学实验考查知识点整理第一部分：HPLC使用注意事项1、HPLC组成：泵、进样器、色谱柱、检测器、数据系统/积分仪2、反相色谱：分离机理：“反相色谱”固定相极性小于流动相极性常用流动相：乙腈、甲醇，水 3、色谱柱的分类：按填料：球形、无定形按含碳量：C18、C8按应用：分析柱、制备柱、预处理柱按粒径：150mm*,5μm等按填料类型：正相柱、反相柱、手性柱 4、键合相色谱柱的优缺点：优点：稳定不易流失；应用广泛，可使用多种溶剂；消除硅羟基的不良影响；缺点：pH得在3~8范围内5、C18柱的活化：90% 10% 90%的甲醇溶液1ml/min依次冲洗30min6、流动相：使用之前需超声脱气目的：色谱泵输液准确提高检测性能保护色谱柱流动相脱气的方法：加热，抽真空，超声，通惰性气体流动相组成：流动相配置：缓冲溶液现用现配，不要储存时间过长，避免pH值发生变化和成分分解，影响色谱分离的效果；有机溶液和缓冲液使用前均需经μm微孔滤膜过滤；流动相使用前脱气。

7、常用定量方法：外标法内标法内标物的要求：化学结构与待测品相似；样品中不存在；不与样品组分发生化学反应；保留值与待测值接近；浓度相当；与其他色谱峰分离好8、样品的预处理：目的：除杂质；浓缩微量成分；改善分离；保护色谱柱；提高检测灵敏度方法：高速离心，过滤，选择性沉淀，衍生反应；液固萃取、液液萃取沉淀蛋白的溶剂：有机溶剂：乙腈、甲醇强酸：三氯乙酸、过氯酸盐：50%硫酸铵、10%TCA 分析测定用试剂为色谱纯及以上，水为超纯水第二部分：实验设计1、考虑问题：动物种属、给药剂量、取血时间、采样量、血药浓度大概范围2、分析方法建立：色谱柱、流动相组成、柱温箱温度、样品处理方法、风量下限与标曲范围第三部分：实验相关条件与数据处理实验一：1、采血点设计一般原则为获得给药后的一个完整的血药浓度-时间曲线，采样时间点的设计应兼顾药物的吸收相、平衡相和消除相。