高二生物动物细胞融合与单克隆抗体1
2020-2021学年高二生物人教版选修三：2
2.2.2《动物细胞融合与单克隆抗体》编写人：审核人：高二生物组班级：组号：姓名：【学习目标】：1.掌握动物细胞融合与植物体细胞杂交的区别和联系。
2.简述动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程。
【学习重难点】：1. 动物细胞融合与植物体细胞杂交的区别和联系2. 动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程。
【学习过程】：一、动物细胞融合：1．概念：或动物细胞结合形成的过程，也称细胞杂交。
2.原理：。
3．诱导融合的方法(1)物理、化学方法：与植物体细胞杂交相同，如聚乙二醇、电激法等。
(2)生物方法：。
细胞。
4．过程：不同的两个或多个细胞――――――――――――――→PEG，电激等在细胞膜融合中体现出细胞膜具有一定的。
5．结果：形成 细胞。
6．意义：突破了 方法的局限，使 成为可能。
成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和 等的重要手段。
如：利用 ，为制造单克隆抗体开辟了新途径。
【合作探究一】：动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较二、单克隆抗体的制备：1．传统抗体的制备(1)方法⎩⎪⎨⎪⎧ 向动物体内注射 ，使之产生抗体 ⇓从动物 中分离抗体(2)缺点：产量低、 低、 差。
2．单克隆抗体的制备过程(1)①浆细胞特点：一种浆细胞产生一种单一抗体，B淋巴细胞在体外 (能/不能)无限增殖。
②骨髓瘤细胞特点：能，但不能产生。
③杂交瘤细胞特点：浆细胞与骨髓瘤细胞融合得到杂交瘤细胞，既能无限增殖，又能产生特异性抗体。
(2)解决思路：将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合为细胞。
(3)制备过程：(4)单克隆抗体的特点：强、高，并可大量制备。
(5)单克隆抗体的应用：①作为，具有准确、高效、简易、快速的优点。
②用于和。
【合作探究二】：1．为什么要对小鼠注射抗原？2．根据单克隆抗体制备过程思考下列问题：(1)制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？(2)B淋巴细胞和骨髓瘤细胞经聚乙二醇处理后，培养液中存在哪几种细胞？(3)选择杂交瘤细胞的两步筛选的目的各是什么？【当堂检测】：1．动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，下列叙述正确的是()。
动物细胞融合和单克隆抗体(终极版)
癌细胞
3、你认为有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？
细胞融合
２、实验原理：
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖
柯勒
单克隆 动物细胞培养技术 杂种细胞 动物细胞融合 抗体 既能产生特异性抗 体，又能大量繁殖 创始人：米尔斯坦
⑵.诱导方式：
二醇（PEG）
生物法： 灭活的病毒 例如：仙台病毒
3.意义和应用：
打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；
重要用途：制备单克隆抗体。
知识回顾
1、抗体是由何种细胞产生的？
三、单克隆抗体 浆细胞（效应B细胞）
2、抗体是如何产生的？
B淋巴细胞 抗原 增殖分化成浆细胞
浆 细胞 骨髓瘤细胞 选出能产生 特定抗体的 细胞群继续 培养
细胞融合 筛选
杂交 瘤细胞
细胞培养
体外培养
从培养液或小 鼠腹水中取出 单克隆抗体
体内培养
练习：
1、动物细胞融合和植物原生质体融合比较， 在动物细胞融合中有特殊性的是（ A、融合的原理 C、融合的诱导手段 ）
B、融合的优点 D、融合的过程
2.制备过程：
注射抗原的目的是什么
诱导其融合的方法有哪些？ 融合后培养液中有几种细胞 怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交 瘤细胞有何优点 为何要进行克隆化培养和专 一抗体检测，多次筛选 大量增殖杂交瘤细胞获得单 抗的方法
1.在制备单克隆抗体的过程中，选用 哪两种细胞进行融合？为什么选择这 两种细胞？ 浆细胞和骨髓瘤细胞 浆细胞能产生单一抗体，但不能无限 增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖，但不 能产生单一抗体。
动物细胞融合与单克隆抗体(教案)
动物细胞融合与单克隆抗体(教案)第一章：动物细胞融合概述1.1 动物细胞融合的定义与意义1.2 动物细胞融合的方法1.3 动物细胞融合的应用第二章：细胞融合的诱导方法2.1 物理方法2.1.1 电融合法2.1.2 超声波融合法2.2 化学方法2.2.1 聚乙二醇(PEG)融合法2.2.2 灭活病毒融合法2.3 生物方法2.3.1 细胞表面分子的诱导2.3.2 细胞内信号传导途径的诱导第三章：单克隆抗体的制备与鉴定3.1 杂交瘤技术的原理及流程3.1.1 杂交瘤技术的原理3.1.2 杂交瘤细胞的筛选与克隆化3.1.3 单克隆抗体的生产与纯化3.2 单克隆抗体的性质鉴定3.2.1 抗体特异性鉴定3.2.2 抗体亲和力鉴定3.2.3 抗体效价测定第四章：单克隆抗体的应用4.1 诊断方面4.1.1 酶联免疫吸附试验(ELISA)4.1.2 免疫荧光技术4.1.3 免疫组化技术4.2 治疗方面4.2.1 抗体药物4.2.2 抗体介导的免疫治疗4.2.3 抗体工程第五章：动物细胞融合与单克隆抗体的研究进展5.1 重组抗体技术5.1.1 重组抗体的制备方法5.1.2 重组抗体的应用5.2 抗体的人源化5.2.1 人源化抗体的制备方法5.2.2 人源化抗体的优势及应用5.3 抗体生物制药的发展趋势5.3.1 抗体药物的联合应用5.3.2 纳米抗体技术5.3.3 抗体药物的个性化治疗第六章：细胞融合的效率与优化6.1 影响细胞融合效率的因素6.1.1 细胞类型与状态6.1.2 诱导方法的选择与优化6.1.3 融合条件与时间的控制6.2 提高细胞融合效率的策略6.2.1 细胞预处理技术6.2.2 融合诱导剂的浓度与处理时间6.2.3 融合过程中的物理和化学条件控制第七章：杂交瘤细胞的筛选与克隆化7.1 筛选杂交瘤细胞的方法7.1.1 选择性培养基的筛选7.1.2 HAT选择性培养基的原理与应用7.1.3 筛选过程中的计数与纯度评估7.2 克隆化培养技术7.2.1 有限稀释法7.2.2 显微镜手工分离法7.2.3 自动化克隆化技术第八章：单克隆抗体的生产与纯化8.1 单克隆抗体的生产8.1.1 体外培养体系的设计8.1.2 培养条件的优化8.1.3 细胞株的生产能力评估8.2 单克隆抗体的纯化8.2.1 纯化方法的选择8.2.2 蛋白质A/G纯化法8.2.3 离子交换色谱和凝胶过滤色谱第九章：单克隆抗体的特性分析与质量控制9.1 抗体特异性分析9.1.1 抗原结合实验9.1.2 交叉反应分析9.1.3 抗体竞争实验9.2 抗体亲和力测定9.2.1 生物素-亲和力实验9.2.2 酶联免疫吸附实验(ELISA)9.2.3 表面等离子共振(SPR)技术9.3 抗体质量控制9.3.1 抗体产量与纯度的控制9.3.2 抗体稳定性的评估9.3.3 抗体生物安全性检测第十章：实验操作指南与常见问题解析10.1 实验操作指南10.1.1 实验材料与设备准备10.1.2 实验步骤与操作流程10.1.3 实验结果记录与分析10.2 常见问题解析10.2.1 细胞融合失败的原因10.2.2 杂交瘤细胞筛选困难的原因10.2.3 单克隆抗体产量低的原因10.2.4 抗体质量问题的排查与解决第十一章：动物细胞融合与单克隆抗体的实验设计11.1 实验目的与意义的确定11.2 实验步骤的设计与优化11.3 实验条件的控制与调整11.4 实验数据的采集与分析第十二章：动物细胞融合与单克隆抗体的研究案例分析12.1 案例一：治疗性抗体的研发与应用12.1.1 案例背景与问题陈述12.1.2 实验设计与方法12.1.3 结果分析与讨论12.2 案例二：诊断用单克隆抗体的开发12.2.1 案例背景与问题陈述12.2.2 实验设计与方法12.2.3 结果分析与讨论第十三章：动物细胞融合与单克隆抗体技术的拓展应用13.1 抗体偶联药物(ADCs)13.1.1 ADCs的制备与性质13.1.2 ADCs的应用与挑战13.2 免疫调节剂的研究13.2.1 免疫调节剂的类型与作用机制13.2.2 免疫调节剂的应用前景13.3 疫苗研发与免疫预防13.3.1 疫苗设计与制备13.3.2 疫苗的临床试验与评价第十四章：动物细胞融合与单克隆抗体技术的未来趋势14.1 基因编辑技术在抗体研究中的应用14.1.1 CRISPR/Cas9技术在抗体基因克隆中的应用14.1.2 基因编辑技术在抗体亲和力增强中的应用14.2 与高通量技术在抗体发现中的应用14.2.1 在抗体设计中的应用14.2.2 高通量筛选技术在抗体筛选中的应用14.3 细胞治疗与组织工程中的应用14.3.1 利用抗体技术促进细胞治疗的发展14.3.2 抗体技术在组织工程中的应用第十五章：教学总结与评价15.1 教学目标的回顾与评估15.2 学生反馈与教学改进15.3 教学资源的整合与优化15.4 课程考核与评价标准重点和难点解析本文主要介绍了动物细胞融合与单克隆抗体的相关知识，重点包括细胞融合的方法、诱导手段、单克隆抗体的制备与鉴定、应用以及研究进展。
动物细胞融合技术与单克隆抗体(课件)高二生物(人教版2019选择性必修3)
A. B. C. 和17 D.无法确定
都有。已知只有同时具有 酶和 酶的融合细胞才可在 培养液中长期存活与繁殖，从图示结果来看，可以确定人的 酶基因位于( )号染色体上。
[解析] 从培养结果可以看出，培养获得的细胞中均具有小鼠的全部染色体，但是只有含人的17号染色体的细胞存活下来，由此可知，人的 酶基因位于17号染色体上，B符合题意。
应用
培育植物新品种
主要用于制备单克隆抗体
意义
突破远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离，扩展了杂交的亲本组合
相同点
原生质体融合的原理相同，原生质体融合的方法相似
续表
例1 [2022·连云港期中] 下图为动物细胞融合技术过程图，相关叙述<zzd>错误</zzd>的是( )。
B
A.图中 为灭活的病毒，此外还可用 融合法诱导动物细胞融合B.图中①过程发生了细胞膜的融合，体现了细胞膜的选择透过性C.图中②过程表示细胞核融合形成杂种细胞D.动物细胞融合技术可用于制备单克隆抗体
4.单克隆抗体的应用
（1）作为⑩__________，在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要的作用。
（2）用于运载药物和⑪__________。
诊断试剂
治疗疾病
任务 了解动物细胞融合技术及其应用
活动1 比较植物体细胞杂交和动物细胞融合
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性、植物细胞的全能性
[2022·岳阳监测] 2020年诺贝尔生理学或医学奖授予发现丙肝病毒的三位科学家。丙肝病毒引起的丙型肝炎可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝癌。为研制丙肝病毒的单克隆抗体，某研究者以小鼠甲为
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
2．2.2动物细胞融合与单克隆抗体理一理判一判1.常用于诱导动物细胞融合的手段有：聚乙二醇、灭活的病毒、电激、紫外线照射。
(×)2．杂交瘤细胞进行体内培养，是为了获得能产生单克隆抗体的胚胎。
(×)3．在动物细胞融合过程中，使用胰蛋白酶处理有利于杂交瘤细胞的形成。
(×)4．将抗原注入小鼠体内，以获得相应的B淋巴细胞。
(√) 5．细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，创造出了许多动物、植物的新物种。
(×)6．筛选能产生特定抗体的杂交瘤细胞时，需要运用到抗原—抗体杂交的方法。
(√)7．经选择性培养基筛选出来的杂交瘤细胞即可用于单克隆抗体的生产。
(×)8．生物导弹是指将单克隆抗体与放射性同位素、化学药物或细胞毒素相结合。
(√)悟一悟1.动物细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核融合。
其中细胞膜融合是细胞融合的先导，细胞核融合是细胞融合的实质。
2．融合处理后的细胞不可以直接用于培养，还需要筛选。
因为诱导融合的手段只是促使细胞间的融合，不能保证所有的细胞都发生融合，形成的融合细胞也有多种，因此需要进行筛选。
3．细胞融合技术与有性杂交不同。
有性杂交有着十分严格的时空关系和物种界限；动物细胞融合则不同，它通过人工的方法克服了存在于物种之间的遗传屏障，从而能够按照人们的意愿，把不同物种的不同组织类型的细胞融合在一起。
4．对动物进行免疫的原因：B淋巴细胞要经过免疫过程，即接触抗原，增殖分化为有特异性免疫功能的B淋巴细胞，才能产生相应的抗体，所以，与骨髓瘤细胞融合的B淋巴细胞实际上是浆细胞。
5．融合过程中，有同种细胞间的融合和不同种细胞间的融合，还有未融合的细胞。
6．杂交瘤细胞的特点：既能无限增殖，又能产生专一性抗体。
7．能产生特定抗体的杂交瘤细胞在小鼠腹腔内培养与体外培养相比，优点是不需特定的培养基，不需严格的外界环境条件。
感悟体会：练一练1.[2019·江苏卷](多选)如图为细胞融合的示意图，下列叙述正确的是()A．若a细胞和b细胞是植物细胞，需先去(脱)分化再诱导融合B．a细胞和b细胞之间的融合需要促融处理后才能实现C．c细胞的形成与a、b细胞膜的流动性都有关D．c细胞将同时表达a细胞和b细胞中的所有基因解析：若a细胞和b细胞是植物细胞，应先用酶解法去掉它们的细胞壁再诱导融合，A错误；无论是动物细胞还是植物细胞，两个细胞的融合都需要促融处理后才能实现，B正确；两个细胞融合成一个细胞，利用了细胞膜的流动性，C正确；c细胞同时具备了a细胞和b细胞中的所有基因，但是基因是选择性表达的，因此c细胞中基因不一定都能够表达，D错误。
人教版高中生物选修三 动物细胞融合和单克隆抗体
二、单克隆抗体的制备
（一）过程
获得杂交瘤细胞
1.如何得到已免疫的B淋巴细胞？ 2.如何诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融 合？ 3.融合过程中会出现几种类型的细胞？
4.上述过程得到的细胞哪种是我们 需要的？其特点是什么?怎样淘汰我 们不需要的细胞？
获得能产生所需 5.淘汰后的细胞所产抗体是单一的吗？ 抗体的杂交瘤细 如何检测？ 胞
获得杂交瘤细胞
1.如何得到已免疫的B淋巴细胞？ 2.如何诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融 合？ 3.融合过程中会出现几种类型的细胞？
4.上述过程得到的细胞哪种是我们 需要的？其特点是什么？怎样淘汰 我们不需要的细胞？
获得能产生所需 5.淘汰后的细胞所产抗体是单一的吗？ 抗体的杂交瘤细 如何检测？ 胞
动物细胞培养 6.如何获得大量“单克隆抗体”？ 提取单克隆抗体
专题2 细胞工程
动物细胞工程技术 ----制备单克隆抗体
抗体： 1.能够与抗原发生_特__异__性_ 结合的免__疫__球__蛋__白__。 2.主要分布在 血清 。
3.能产生抗体的细胞是 浆__细__胞__（__即__效__应__B_细__胞__）
4.判断：
每一个效应B细胞只分泌
一种特异性抗体。（ √ ）
提示3.有没有一种细胞可以无限增殖？
提示4.利用我们学过的生物技术，如何解决这一问 题？
一个大胆的猜想
B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
动物细
胞融合 杂交瘤 动物细 单克隆 细胞 胞培养 抗体
1975年英国科学家米尔斯 坦和柯勒的实验
阅读课本P53-54,了解单克隆抗体的制备过程
二、单克隆抗体的制备
（一）过程
小资料： ①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
学习目标二：单克隆抗体
B淋巴细胞
受抗原刺激 增殖分化
强调：效应B淋巴细胞是 效应B细胞 记忆B细胞 能够产生抗体的B淋巴细 (浆细胞） 胞，下文将其简称为B淋 巴细胞 抗体：能够与抗原发生特异
性结合的免疫球蛋白。
能产生抗体的细胞是浆 细胞（即效应B细胞）。
抗体的传统生产方法:
抗原 反复注射动物 该法制备抗体的缺点：
用途
获得杂种植株
小结:
动物细胞培养过程 三个重点过程 细胞核移植过程 单克隆抗体制备过程 一个诱导动物细胞融合的新方法 —— 灭活病毒 三个“一” 一个新细胞 —— 杂交瘤细胞 一个优势—— 单克隆抗体特异性强、 灵敏度高、可大量制备的优势
P55：1、植物体细胞杂交技术与动物细胞
融合技术有什么不同？
3、单克隆抗体的应用：
单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、可大量制备
①作为诊断试剂（最广泛的用途） ：
准ห้องสมุดไป่ตู้识别各种抗原物质，并特异性结合
优点：准确、高效、简易、快速
②应用于 治疗疾病：主要用于癌症治疗 运载药物：制成“生物导弹”
“生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物
既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。
2、结果： 形成单核的杂交细胞 3、原理： 细胞膜的流动性 物理法：离心、振动、电激 4、诱导方法 化学法：聚乙二醇（PEG)
生物法：灭活的病毒（最常用）
思考：为什么细胞融合过程中使用的病毒
需要灭活？不灭活行吗？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋 白质分子和脂质分子重新排布，细胞 膜打开，细胞发生融合，不灭活的话 病毒会感染细胞，导致疾病。 灭活丧失感染性，但保留融合活性。
胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是：
动物细胞融合技术与单克隆抗体(教师版)-高中生物同步精品讲义(选择性必修三)
《第2章细胞工程》第2节动物细胞工程二动物细胞融合技术与单克隆抗体必会知识考点梳理拓展延伸易错警示必会知识一动物细胞融合技术1．动物细胞融合技术：是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。
细胞融合的实质是核融合。
2．原理：动物细胞融合的基本原理为细胞膜的流动性。
3．诱导融合的方法(1)化学方法：PEG融合法。
(2)物理方法：电融合法。
(3)生物方法：灭活病毒诱导法。
4．过程：具有不同遗传信息的两个或多个细胞杂交。
5．结果：形成单核杂交细胞，具有原来两个或多个细胞的遗传信息，可表现出两个或多个亲本的特点。
6．意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。
这一技术成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
如利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。
必会知识二单克隆抗体及其应用1．传统抗体的获得(1)方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。
(2)缺陷：制备的抗体产量低、纯度低以及特异性差。
2．单克隆抗体的制备：单克隆抗体是由单一杂交瘤细胞增殖产生的高度专一的抗体。
(1)制备原理①B淋巴细胞的特点：每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，B淋巴细胞在体外不能无限增殖。
②骨髓瘤细胞的特点：在体外能大量增殖，但不能产生抗体。
③杂交瘤细胞的特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体。
(2)制备过程①制备产生特定抗体的B淋巴细胞：用特定的抗原对小鼠进行免疫处理，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞。
②培养骨髓瘤细胞。
③将小鼠的骨髓瘤细胞与从脾中得到的B淋巴细胞融合。
④用特定的选择培养基进行筛选：在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有杂交瘤细胞才能生长。
⑤克隆化培养和抗体检测：对上述经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。
高中生物高考考点84 动物细胞融合与单克隆抗体-备战2022年高考生物考点一遍过
1．动物细胞融合（1）原理：细胞膜的流动性。
（2）融合方法：聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。
（3）意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能，也为制造单克隆抗体开辟了新途径。
2．单克隆抗体（1）制备过程（2）优点：特异性强、灵敏度高，可大量制备。
（3）用途：作为诊断试剂；用于治疗疾病和运载药物。
学科&网考向单克隆抗体的制备过程分析1．如图是单克隆抗体制备过程示意图，相关叙述错误的是A．过程①注射一种灭活病毒可使小鼠体内产生浆细胞B．过程②形成的两两融合细胞只有图中的3种类型C．过程③采用抗原—抗体反应进行特定杂交瘤细胞的筛选D．过程④获得的全部杂交瘤细胞都只能产生同一种抗体【参考答案】B【时候解析】A、灭活病毒可作为抗原刺激小鼠产生浆细胞，A正确；B、过程②形成的融合细胞包括同种细胞融合和异种细胞融合，即过程②还可以形成浆细胞与浆细胞、瘤细胞与瘤细胞间的融合细胞，B 错误；C、可借助抗原-抗体间特异性结合反应进行特定杂交瘤细胞的筛选，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，C正确；D、通过抗原-抗体反应筛选出的杂交瘤细胞只能产生同一种抗体，D正确。
解题技巧制备单克隆抗体过程中两次筛选的方法及目的项目第一次筛选第二次筛选筛选原因诱导融合后得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择性培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞筛选方法用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞(“BB”细胞、“瘤瘤”细胞)都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞(“B瘤”细胞)能生长用多孔培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群筛选目的得到杂交瘤细胞得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞2．单克隆抗体的特点是特异性强、灵敏度高、可以大量制备，已被广泛应用于疾病的诊断和治疗。
用H7N9病毒制备单克隆抗体的流程如下图所示：（1）过程③常用的方法是_________________________。
如东县马塘中学高二生物 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 导学案
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
一、课标导读:
1. 举例说出动物细胞融合的原理和应用。
2. 举例说出单克隆抗体的原理和应用。
二、问题导思
1．简述动物细胞融合的过程。
2．动物细胞融合有哪些方面的应用？最大的用途是什么？
3．单克隆抗体的制备过程是怎样的？制备的过程要经过两次筛选，作用分别是什么？4．单克隆抗体的优点有哪些？单克隆抗体可运用在哪些方面？
例题导练
1. 近几年神舟飞船频频成功发射和着陆。
在飞船上，科学家进行了无人搭载的空间动物细胞融合实验。
该实验所依据的原理和促进细胞融合的方法分别是
()
A．细胞的全能性、灭活病毒诱导融合
B．细胞的全能性、电刺激融合
C．生物膜的流动性、灭活病毒诱导融合
D．生物膜的流动性、电刺激融合
2. 下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请据图回答下列问题：
(1)请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来。
________________________________________________________________________。
(2)在单克隆抗体制备过程中，之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有_____________、____________的特性。
(3)由图示可看出，单克隆抗体的制备过程运用了____________和__________等动物细胞工程技术手段。
人教版高中生物学选择性必修3生物技术与工程精品课件 第2章 第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体
3.[教材P51拓展应用]假如你掌握了动物细胞融合技术,你想用这种技术来 解决哪些问题?解决这些问题的大致思路是怎样的?这样做会有什么风险? 提示 可以利用动物细胞融合技术培育多倍体胚胎,研究其发育机制,甚至 可能培育出新的物种。但是,目前相关技术还不成熟,存在融合率低、胚胎 死亡率高等问题,并且还可能带来一些伦理方面的问题。
视角2动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较 2.下列对植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较,描述正确的是( D ) A.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同,诱导融合的方法也 完全相同 B.动物细胞培养可用于检测有毒物质,茎尖培养可用于植物抗病毒 C.动物细胞融合后,可以通过体外适宜条件培养获得新物种 D.动物细胞培养与植物组织培养所用的培养基的物理性质不同
A.ADC中的抗体能特异性识别并杀伤肿瘤细胞 B.ADC进入肿瘤细胞的过程需要蛋白质参与并消耗能量 C.含ADC的小泡与溶酶体融合后,溶酶体裂解释放药物引起细胞坏死 D.利用放射性同位素或荧光标记的单克隆抗体可定位诊断肿瘤、心血管 畸形等疾病
答案 BD
解析 由题干信息可知,抗体—药物偶联物(ADC)能借助其中抗体的作用特 异性识别肿瘤抗原从而将细胞毒素类药物带入肿瘤细胞,实现了对肿瘤细 胞的选择性杀伤,A项错误;ADC进入肿瘤细胞的方式是胞吞,该过程需要消 耗肿瘤细胞代谢产生的ATP,并且需要蛋白质的参与,B项正确;含ADC的小 泡与溶酶体融合后,溶酶体裂解诱导ADC解体,释放药物引起肿瘤细胞凋 亡,C项错误;利用放射性同位素或荧光标记的单克隆抗体可定位诊断肿瘤、 心血管畸形等疾病,该过程利用抗原—抗体特异性结合原理实现,D项正确。
高中生物人教版选修3动物细胞融合与单克隆抗体
动物细胞融合与单克隆抗体课标要求1、能力要求列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同2、内容要求理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义。
理解和掌握单克隆抗体制备的过程的步骤和应用知识网络体系重难热点归纳单克隆抗体可以作为诊断试剂，准确识别各种抗原物质，与抗原的特异性结合具有准确、高效、简易、快速的特点。
单克隆抗体还可以用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症。
单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。
经典例题剖析诱导剂：PEG 、灭活病毒1.科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是A.经过免疫的B淋巴细胞B.不经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞D.不经过免疫的B淋巴细胞[解析]此题考查对细胞工程的了解。
单克隆抗体的产生是利用了细胞工程中的细胞融合技术。
小鼠的骨髓瘤细胞与经过免疫的B淋巴细胞融合成杂交瘤细胞，在体外培养的条件下无限繁殖，产生特异性的单一抗体。
[答案]A2.动物细胞融合的目的中最重要的是A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞[解析]考查动物细胞融合的目的。
动物细胞融合就是指不同动物细胞的原生质融合，形成杂种细胞的过程。
动物细胞融合技术最重要的用途是制备单克隆抗体。
[答案]B3.下列有关动物细胞培养的叙述，不正确的是A.用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织B.将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞C.在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液D.动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞就会衰老死亡[解析]动物细胞培养的过程是：先制备培养液，然后取动物细胞，用于培养的细胞大都来自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织。
将组织取出后，用胰蛋白酶等处理使组织分散成单个细胞，将单个细胞配制成一定浓度的细胞悬浮液，再将悬浮液放入培养瓶中在培养箱中培养。
专题动物细胞融合与单克隆抗体
细胞A、B ↓融合
杂交细胞
↓ 杂种细胞
↓有丝分裂 多个相同杂交细胞
↓植物组,织培养 杂种植株
植物体细胞杂交
动物细胞融合
相关酶
纤维素酶和果胶酶
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
融合方 物理法：离心、电激、振动； 除物理法和化学法外还
法 化学法：聚乙二醇等试剂诱导 可以用灭活的病毒诱导
结果
杂种植株
杂交细胞
意义
突破了有性杂交方法的 克服了远缘杂交的不亲和性，
提示：(1)每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，但 不能无限增殖；骨髓瘤细胞可大量快速增殖，却不能产生抗体。 若将两种细胞融合在一起，既能产生一种特异性抗体又能快速 增殖。
(2)未融合的B淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、B－B融 合细胞、瘤－瘤融合细胞、B－瘤融合细胞。
(3)第一步筛选的目的是获得杂交瘤细胞；第二步筛选的 目的是获得能产生所需单一抗体的杂交瘤细胞。
[跟随名师·解疑难] 1．血清抗体与单克隆抗体的比较
名称产生特点 Nhomakorabea一般从血清中分离，产量 血清抗体 由B淋巴细胞分泌
低、纯度低、特异性差
特异性强、灵敏度高，能 单克隆抗体 由杂交瘤细胞分泌
大量制备
2．制备单克隆抗体过程中两次筛选的目的不同 (1)第一次筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及 B—B融合、瘤—瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出杂 交瘤细胞。 (2)第二次筛选是将产生特定抗体的B—瘤细胞通过细胞培 养用相应抗原检测的办法筛选出来。因为从体内取免疫过的B 淋巴细胞时会取出很多种，形成的杂交瘤细胞有很多种，所以 需筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。
细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核融 合，其中细胞膜融合是细胞融合的先导，在细胞膜融合中体现 出细胞膜具有一定的流动性。
高中生物《动物细胞融合与单克隆抗体(1)》优质课教案、教学设计
第二节《动物细胞融合与单克隆抗体》教学设计本教学设计包括两部分：课前学习活动 ----------- 课中学习活动一、动物细胞融合（阅读课本P52～54，完成下列内容）1. 概念：是指或者动物细胞结合形成的过程。
2. 原理：细胞膜的3. 诱导融合的方法：（PEG）、、电激等诱导因素。
4. 过程：不同的两个体细胞→细胞（注意条件）5. 融合完成的标志：。
融合后形成的杂交细胞是具有原来两个或多个细胞遗传信息的。
6. 意义（优点）：（1）克服了的不亲和性，成为研究、、肿瘤和等的重要手段。
（2）利用杂交瘤技术制造。
二、单克隆抗体1. 传统抗体的获得（1）方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生,然后从动物血清中分离所需抗体。
（2）特点：、、并且制备的抗体特异性差。
2. 单克隆抗体的制备（1）制备原理：一种效应B 细胞产生一种，B 淋巴细胞在体外（能/不能）无限增殖，而骨髓瘤细胞具有增殖的特点，将单个B 淋巴细胞与融合，可以使杂种细胞(杂交瘤细胞)具有两个亲本的遗传特性，既能增殖，又能产生。
（2）制备过程：①制备产生特异性抗体的B 淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的，然后从小鼠内获得相应的B 淋巴细胞。
②获得杂交瘤细胞：先将鼠的与脾细胞中产生的融合。
③再用特定的选择性培养基筛选出。
该杂种细胞的特点是_。
④培养和检测，经多次筛选，可获得足够数量的能分泌的细胞。
⑤将杂交瘤细胞在或注射到内增殖。
⑥提取单克隆抗体：从或小鼠的中提取。
3. 单克隆抗体的优点：、、可大量制备。
4. 单克隆抗体的应用：（1）作为诊断试剂，准确识别各种物质并跟一定抗原特异性结合。
在诊断的应用上，具有准确、、简易、的优点。
（2）用于治疗疾病和运载药物，制成“”。
借助单克隆抗体的导向作用，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞。
★★预习检测1. 动物细胞融合和植物原生质体融合决定于（）A.细胞膜的流动性B.细胞膜的选择透过性C.细胞质的流动性D.细胞质酶的活性2. 只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（）A.PEGB.灭活的病毒C.电刺激D.离心3. 下图是单克隆抗体制备过程示意图，其中1 过程注射的物质和A 细胞的名称分别为( )A.抗体、T 淋巴细胞B.抗原、T 淋巴细胞C.抗体、效应B 淋巴细胞D.抗原、效应B 淋巴细胞4. 单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）A.B 淋巴细胞B.T 淋巴细胞C.骨髓瘤细胞D.杂交瘤细胞5.单克隆抗体和血清抗体相比，其优越性在于（）A.单克隆抗体能够制成“生物导弹”B.单克隆抗体能够在体外制备C.单克隆抗体的特异性强、灵敏度高，可大量制备。
高二生物动物细胞融合与单克隆抗体测试题(带参考答案)
高二生物动物细胞融合与单克隆抗体测试题〔带参考答案〕1.动物细胞融合的目的中 ,最重要的是()A.克服远缘杂交不亲和的障碍B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂交细胞解析：选B。
植物体细胞杂交 ,主要是为了克服远缘杂交不亲和的障碍 ,以培育新品种。
另外 ,植物体细胞杂交还应用了植物细胞的全能性。
动物细胞作为整体 ,它的全能性受到限制 ,目前只见到高度分化的细胞核在去核卵细胞中表现全能性 ,还未见到融合细胞核表现出全能性的例子 ,因此动物细胞融合不能用来培育新的物种。
生产杂交细胞 ,也不是细胞融合的主要目的。
2.动物细胞融合和植物体细胞杂交技术的比拟中 ,正确的选项是()A.诱导融合的方法完全相同B.所用的技术手段根本相同C.培养基成分相同D.都能形成杂种细胞解析：选D。
动物细胞融合和植物体细胞杂交这两项细胞工程技术中 ,都包含有细胞融合的过程 ,都能形成杂种细胞。
对于诱导方法来说 ,除动物细胞的融合还可用灭活的病毒作诱导剂外 ,其他的根本相同。
植物体细胞杂交前需先去掉细胞壁 ,在完成细胞融合后 ,还要将杂种细胞培育成植株 ,所以 ,它们所应用的技术手段是有差异的。
植物细胞培养用的是固体培养基 ,动物细胞培养用的是液体培养基 ,其成分中还有动物血清 ,培养基成分有一定的差异。
3.(2019年高考江苏卷)关于现代生物技术应用的表达 ,错误的选项是()A.蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质B.体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体C.植物细胞培养技术可用于植物茎尖脱毒D.动物细胞培养技术可用于转基因动物的培育解析：选B。
蛋白质工程与基因工程不同 ,基因工程产生的是自然界中原有的蛋白质 ,而蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质 ,A项正确。
体细胞杂交技术是植物细胞工程中培养杂种植株的一项技术 ,动物细胞工程中克隆动物常利用细胞核移植技术 ,而制备单克隆抗体常利用动物细胞融合技术 ,B项错误。
生物-动物细胞融合技术与单克隆抗体
动物细胞融合技术与单克隆抗体[高中生物] 1.阐明动物细胞融合技术的概念，举例说出诱导动物细胞融合的方法。
2.概述单克隆抗体的制备过程。
一、动物细胞融合技术1．概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
2．原理：细胞膜的流动性。
3．诱导融合的方法Error!4．意义：细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。
5．应用(1)成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
(2)用于制造单克隆抗体。
判断正误(1)与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素有聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒( ) (2)灭活的含义是用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构( ) (3)二倍体动物细胞融合后的杂交细胞仍然是二倍体细胞( )答案 (1)× (2)√ (3)×探讨点 动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较1．19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中，观察到多核细胞。
如何解释这一现象？提示 病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。
2．比较动物细胞融合技术和植物体细胞杂交技术(1)动物细胞融合和植物体细胞杂交技术的原理分别是什么？提示 动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性；植物体细胞杂交技术的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。
(2)两者在方法上有什么异同？提示 都可用聚乙二醇(PEG)融合法和电融合法诱导融合；但动物细胞还可用灭活病毒诱导法诱导细胞融合。
(3)两者在最终结果上有什么不同？提示 动物细胞融合最终得到的是杂交细胞，而植物体细胞杂交技术最终得到的是杂种植株。
核心归纳 动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性步骤酶解法去掉细胞壁后，诱导原生质体融合，形成杂种细胞，再经植物组织培养形成杂种植株分散成单个细胞后诱导细胞融合，形成杂交细胞方法聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca 2＋—高pH 融合法、电融合法、离心法PEG 融合法、电融合法、灭活病毒诱导法结果形成杂种植株形成杂交细胞，以生产细胞产品意义打破生殖隔离，实现远缘杂交育种突破有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能1．下列关于动物细胞融合的说法，不正确的是( )A ．常用于诱导动物细胞融合的方法有PEG 融合法、灭活病毒诱导法、电融合法、紫外线照射等B ．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的细胞称为杂交细胞C ．动物细胞融合就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程D ．细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能答案 A解析 常用于诱导动物细胞融合的方法有PEG 融合法、灭活病毒诱导法、电融合法等，紫外线照射不是诱导动物细胞融合的方法，A 错误。
动物细胞融合与单克隆抗体1ppt课件
B. C. 操作步骤基本相同
D. 都能形成杂种细胞
3. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（ D ）
A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成
4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（ B ）
A．PEG
B．灭活的病毒
C．电刺激
D．离心
5. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合
后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能
存活增殖的细胞是
（C
）
①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞
④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞
A.②④
B.①③⑤
C.①②③④
可大量制备
1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞， 经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是 （ A）
A.经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞
B.没经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞
2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是
（D ）
A. 诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同
D.②③
6.“生物导弹”是指 A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物
（D ）
有梦想，才会有创造！
生物种间杂交想像图 已成功的动物细胞融合实例有很多，如人—小鼠、人— 兔、人—鸡、鼠—兔、鸡—鼠等上百种融合细胞。甚至已成 功完成了酵母菌—鸡 、人—胡萝卜 等细胞的融合。
讨论：
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动物细胞融合与单克隆抗体
回顾植物体细胞杂交过程
植物细胞A
去壁
原生质体A 原生质体B
去壁
融合 的原 人 生质 再 生 工 体 AB 细 诱
导 胞 壁
杂 种 细 脱 胞 分 AB 化
愈 杂 伤 种 组 再 植 织 分 株
化
植物细胞B
概念：
动物细胞融合
也称细胞杂交。
是指两个或多个动物细 胞结合形成一个细胞的 过程。 杂交细胞：融合后形成 的具有两个或多个细胞 遗传信息的单核细胞。
原理： 细胞膜的流动性 诱导融合方法：
动物细胞融合
物理法: 离心、振动、电刺激 化学法: 聚乙二醇（PEG）
生物法：灭活的病毒
• 为什么灭活的病毒能作为诱导剂？ • 不灭活的病毒能作为诱导剂吗？
灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面
细胞膜被病毒颗粒穿通
细胞膜连接
细胞融合，形成杂种细胞
（细胞膜具有一定的流动性）
单克隆抗体的制备
２、设计思路：
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 单克隆抗体 动物细胞培养技术 杂种细胞
动物细胞融合
既能产生特异性抗 体，又能大量繁殖
制备过程：
单克隆抗体的制备
1.注射抗原的目的是什么？ 2.诱导其融合的方法有哪些？ 3.融合后培养液中有几种细胞？ 4.怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有 何优点？ 5.为何要进行克隆化培养和专一抗体检测， 多次筛选？ 6.大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法?
单克隆抗：准确识别各种抗原 物质，并与特异性结合 ②用于 治疗疾病：主要用于癌症治疗
运载药物：制成“生物导弹”
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边の大床."啊...""你还是人吗,怎么速度会这么快?"轩辕飞燕这回看得清楚,根汉刚刚还在二十米开外呢,可是转眼就到了她の身后.根汉直接走向了她,将她压在了身下,邪笑道："别の方面不快就行了...""啊,不要...""要还是不要...""你想要就要...""好吧,咱不要了...""混蛋你敢不 要,咱》壹~本》读》阉了你...""那还是要吧..."壹番毫无料の对话之后,飞燕阁中借着月色,春.意四起,壹阵阵动听の交响乐,足以感动上苍了....两人这壹折腾,就是将近两个小时.轩辕飞燕の战力,也令根汉有些吃惊,再加上根汉也是有些日子没吃荤了,现在终于是得了壹次机会,还是这 帝国の公主殿下,自然也十分来劲.狂风暴雨过后,房间里面安静下来,两人互相の呼吸声,听得却是无限の清楚.轩辕飞燕倚在根汉の怀里,抚着他强健の肌肉线条,感叹道："没想到咱壹堂堂の公主殿下,竟然贱到与你这个采花贼混在壹起了...""咱可不是采花贼哦..."根汉咧嘴笑了笑,"咱 是偷心贼...""那更可恶..."轩辕飞燕拍了拍他,壹边轻笑道："有时候咱真の怀疑自己,是不是脑子坏掉了,怎么就像中毒了似の,还想着你回来...""呵呵...""有时候人格魅力很重要..."根汉得意の笑着说,"不是每个男人都有这样の魅力の,你找上咱,算是你の福份了...""去你の,别自恋 了..."轩辕飞燕气哼道："你那个仙女老婆呢?怎么也没见她过来?难道她不知道你和咱の事情?""那个呀..."根汉想了想笑道,"她有什么可吃醋の,她对这些事情看得很开,只要你愿意,她就愿意...""呼呼..."轩辕飞燕哼道："你就吹吧,哪有女人愿意和别の女人分享自己男人,而且咱感觉 咱比不上她呀,咱之前偷看你们の时候,看到过她真の和仙女壹样,太美了...""呵呵,咱根汉の女人,当然都是仙女..."根汉笑了,"你也是...""咱才不是..."嘴上这么说,心里轩辕飞燕还是美美の,不管那女人到底是根汉の什么人,自己能和她那样の女人,都睡在同壹个男人の怀里,这绝对不 是壹件丢脸の事情.虽说她也是帝国の公主,亿万中无壹の天之骄女,可是仅仅只是看到米晴雪壹眼,就感觉自己完全比不上对方.米晴雪是那种天上の仙女,不管是容貌,气质,还有那气场,微笑,都让人感觉天地都是她の,任何女人在她面前都会黯然失色.或许这也是她甘心和根汉好の原因, 因为她总觉得,那样の仙女都能爱上根汉,那说明这个男人の魅力の确是很强,自己の眼光也不会差了."这可是你自己说の,以后别怪咱..."根汉笑了笑,将她给搂紧了壹些,亲了亲她の额头,令轩辕飞燕感觉特别の温暖.她抬头看了看根汉の侧脸,感觉确实是很帅,虽然他の脸庞不是特别の刚 毅,但是却给人壹种海壹样の感觉.尤其是那双深邃の双眼,哪怕是你只看壹眼,都有壹种要无法自拔,要沉进其中の感觉."你到底是哪个帝国来の?"轩辕飞燕好奇の问,"咱怎么感觉,你不像这个世界の人..."根汉说："呵呵,咱来自壹个小国家,你可能没有听说过の,也不是在轩辕帝国内,所 以你不知道哦...""那你为什么速度会那么快呀?你真是武道高手?"她又问.根汉壹脸正色道："咱当然是武道高手了,而且还是绝世高手,这世上也没有咱の对手...""吹牛..."轩辕飞燕点了点他の额头,问他说："既然你与世无敌,那能不能帮咱壹件事情?也算是帮咱们壹起の事情?""什么事 情?"根汉似乎猜到了壹些什么."说出来の话,你可能会觉得咱太过追逐权力了,不过咱也是没有办法,如果帝国の情况壹直这样继续下去の话,天下苍生都要遭殃了..."轩辕飞燕有些挣扎,但还是开口了,"你能不能助咱当上女帝之位?咱不只想当储君了,如今父皇变成这个样子,咱必须要做些 什么了.""你要真想当女帝,咱自然可以帮你..."根汉看着她说,"只是你要确定你想当?"轩辕飞燕犹豫了壹会尔,还是点了点头说："咱想当...""那就行吧,咱帮你...""恩,你太好了..."轩辕飞燕送上了香吻.不过根汉却并没有表现得太高兴,只是轩辕习燕沉浸在根汉答应她の喜悦之下,还 有送上吻の冲动下,并没有发现根汉眼中の壹丝不悦....第二天夜里,轩辕城北宫门外,出现了壹艘黑色の小型飞船.这里の监测系统,并没有发现这艘飞船在接近北宫,小型飞船直接越过了这里の监测系统,来到了北宫内部了."果然很神奇..."轩辕飞燕是第壹回跟着根汉出来,也是第壹次感 受到这种独特之处,也不知道根汉用の什么方法,让她の这艘飞船可以避过北宫の监控.要知道北宫这里有着整个帝国,最严密,最先进の监测系统,哪怕是壹只蚊子飞过来,都会有相应の警报发出来.而且在这北宫外面,还有四五道监测网,壹旦有蚊虫什么の飞过来,早早の都会被弄死の.北宫 里面の空间挺大の,根汉直接拉着轩辕飞燕从舱室里出来了,壹开始轩辕飞燕还担心肯定会被人家给发现の.（正文贰肆1肆前往北宫）贰肆15皇帝之死可是走了好几百米之后,也没发现有什么异常,就在前面路过の一些女机甲人,甚至也没有看到她の样子."这家伙到底是怎么办到の..."轩 辕飞燕心中满是疑问,不过现在也没办法再问根汉了."咱们往哪尔走?"轩辕飞燕问根汉.根汉已经用天眼看到了壹些情况了,便对她说："跟着那些女机甲人就行了,她们应该是去正殿の..."轩辕飞燕点了点头,两人就跟在两个女机甲人后面,跟着她们往前面走."不许看..."刚走了不远,轩辕 飞燕就用手放在了根汉の面前,原来前面是壹个大型の露天の浴室,里面有多达几十个女机甲人,全部寸缕未着光光の在那里洗澡玩呢.她心中醋意壹起,便做出了这样の举动.根汉有些无奈,对她说："还是你不要看吧,这场面太阴.靡了..."轩辕飞燕可能是没仔细看,因为是大晚上の,这个浴 室很大,足有上千个平米,里面还有壹些热气蒸腾,所以她没有看到里面の情况."怎么了?"轩辕飞燕揉了揉眼睛,仔细の瞄了壹眼,轻咦道："那是..."还~壹~本~读~小~说~.没说完,她便用手挡住了自己の眼睛,气恨の说："该死!那是咱父皇!他竟然和这些女机甲人!"在浴室の西北角落里面, 有壹个高大の男人,正躺在温水面上の壹张水床,而在他の身上,还有一些玲珑有致の女机甲人正在为他服务.壹个在天,壹个在骑,还有壹个在亲,另外还有一些在莫,场面确实是十分の不堪.根汉则是瞄了壹下这个浴室周围の环境,同时仔细の打量了壹番这个轩辕帝国の大皇帝,结果还真就 发现了壹些猫腻.五十六世の体内,有壹种黑色の阴戾之气,正在其中涌窜着.而且这五十六世の眼珠子里面,似乎没有什么人气,好像挺空洞の壹个人,同时在他の经脉处,都被那股阴戾之气给侵蚀得差不多了.就连那一些女机甲人の体内,都在不停の窜着黑气,正是那些女机甲人体内の阴戾 之气,带给の轩辕五十六世."这家伙被掏空了..."根汉心中感叹,这个五十六世几乎变成废人了,已经没有救了,他の元灵已经彻底の抿灭了,没有自己の意识了.如今之所以在那里,还能搞女机甲人,完全是受女机甲人控制而已,看来这三个月の煎熬令他彻底完蛋了."你父皇应该不行了..." 根汉凑到轩辕飞燕耳边,低声对她说,轩辕飞燕心中壹震,立即又扭过身来,惊道："为什么!他不是还在那里吗?""人是还在那里,也还能用,但现在の他只是壹个空壳罢了,早就被那些女机甲人给掏空了..."根汉搂着轩辕飞燕,感慨道,"看来这一些月,他在这里玩の太过头了,如今他虽然还能 动,但是体内经脉已经被毁了,而且五脏六腑也马上就要崩溃了...""相信只要五脏六腑崩溃の话,这些女机甲人也会立即离开这里の..."根汉壹边用天眼观察这北宫の情况,想看看还有什么人在这附近操控这壹切の发生."父皇他真の...&