羊抗鸡酶标二抗用于鹅血清抗体检测的研究

家禽饲养中的免疫抗体检测技术

家禽饲养中的免疫抗体检测技术概述家禽养殖产业作为我国重要的农业产业之一，具有庞大的市场需求和经济潜力。

饲养过程中，免疫抗体检测技术的应用对保障家禽健康成长、防控疾病具有重要意义。

本文将从免疫抗体检测技术的基本原理、免疫抗体检测的方法以及技术在家禽饲养中的应用等方面进行阐述。

第一部分免疫抗体检测技术的基本原理免疫抗体检测的基本原理是通过检测目标抗原与免疫抗体之间的特异性结合反应，来确定目标抗体或抗原的存在与数量。

常用的免疫抗体检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光免疫分析法（FIA）和免疫电泳等。

第二部分免疫抗体检测的方法1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验是一种常用的免疫抗体检测方法，其基本原理是利用酶标记物与抗原或抗体之间的特异性结合，通过酶的催化作用来检测目标物质的存在与数量。

ELISA方法具有高效、灵敏、快速的优点，广泛应用于家禽饲养中免疫抗体的检测。

2. 荧光免疫分析法（FIA）荧光免疫分析法是一种利用荧光染料与抗原或抗体结合，通过荧光信号的检测来确定目标物质的存在与数量的方法。

相比于传统的免疫抗体检测方法，FIA具有更高的灵敏度和特异性，能够实现快速、准确地检测家禽饲养中的免疫抗体。

3. 免疫电泳免疫电泳是一种基于电泳原理的免疫抗体检测方法，其特点是可以同时检测多种抗体或抗原。

通过将样品中的抗体或抗原与电泳进行结合，通过电泳过程中的分离来检测目标物质的存在与数量。

免疫电泳方法具有高效、可定量、可扩展等优点，在家禽饲养中的免疫抗体检测中得到了广泛应用。

第三部分免疫抗体检测技术在家禽饲养中的应用1. 疾病预防与控制通过免疫抗体检测技术，可以对家禽养殖过程中的常见病毒、细菌等疾病进行有效的预防与控制。

及时检测家禽体内的免疫抗体水平，有助于及早发现家禽的免疫状态，采取相应的预防措施，减少疾病的传播和发生。

2. 饲养管理与优化免疫抗体检测技术可以为家禽饲养提供科学的依据，通过检测家禽养殖环境中的免疫抗体情况，评估家禽的健康状况，指导饲养管理与优化。

WB检测抗体如何选择(下)

WB检测抗体如何选择WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。

例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。

二抗选择要考虑的问题有：①对单抗类一抗，二抗需与一抗的类别或亚类相匹配（多抗类一抗主要是IgG类免疫球蛋白故相应二抗就是抗IgG F(ab’)2二抗，避免各种Ig保守结构域导致的交叉反应。

然而各种Ig仍具有保守的轻链结构域，因此还是有一定程度的交叉反应。

WB检测之内参抗体Western Blot检测方法不仅能检测靶蛋白存在与否，还能比较不同条件下或者不同组织中靶蛋白的相对表达量，可作为蛋白表达水平最直接的证据。

在WB实验中有众多不确定因素影响靶蛋白表达水平的测定，如方法学本身性质、操作误差等。

为准确衡量靶蛋白表达水平，需要精确一致的上样量，使用内参的意义即是保证上样量的一致。

内参即内部参照（Internal Control），对哺乳动物细胞一般指管家基因的表达蛋白(Housekeeping Proteins)。

此类蛋白在各组织和细胞中的表达相对恒定，可作为检测蛋白表达水平变化的参照物。

当内参条带亮度基本一致时，基本可以确定上样量是一致的，通常采用比较靶蛋白和内参蛋白条带亮度比值来进行相对定量。

WB实验中涉及到的蛋白-抗体结合是一个复杂的活性生物大分子间的相互作用，众多因素都会影响实验的结果。

例如时间、温度、浓度、离子强度等，在实验设计时就需要有严谨的对照方案，通过对照就容易判断问题所在，严谨的WB实验中需要设立蛋白分子量标准、空白载体对照、未诱导对照、已知量标准物正对照和内参。

内参使用方法1.标记内参：酶标的内参抗体可避免二抗结合总蛋白中某些免疫球蛋白产生的杂带，使用时只需在二抗孵育时加入酶标内参抗体，按照正常操作即可。

第二抗体

第二抗体是能和抗体结合的，即抗体的抗体。

主要用于检测抗体的存在。

二抗在免疫学实验中起着举足轻重的作用。

如何选择二抗二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，BioTNT能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要需要从下面几个方面考虑：【二抗产品分类】按照标记分：有HRP、AP、生物素等标记二抗，FITC、TRITC、Rhodamine、Cy3/5、Dylight等荧光二抗；按照检测物种分，有抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛，以及多种细菌类二抗；另外，还有IgG、IgA、IgM以及IgG（Fc）、IgG（ab’）2等不同类型抗体。

BioTNT二抗的选择：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。

即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。

BioTNT能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。

【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。

这通常是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。

其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。

如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

酶标二抗的原理

酶标二抗的原理酶标二抗是一种常用的免疫学实验技术，用于检测和定量分析特定抗原或抗体的存在。

它的基本原理是利用抗原与抗体之间的特异性结合来实现信号放大和检测的目的。

酶标二抗技术通常包括以下几个步骤：包被抗原、孵育一抗、孵育二抗、底物反应和信号检测。

1. 包被抗原在酶标二抗实验中，首先需要将目标抗原包被到固相载体上，通常是将抗原溶液加入到微孔板的孔中，使其在孔中吸附或共价结合。

固相载体可以是多孔板、磁珠等，其目的是使抗原固定在一个固定的位置上，方便后续的实验操作。

2. 孵育一抗孵育一抗是将样品中的待测物（抗原或抗体）加入到包被抗原的微孔中，使其与包被抗原发生特异性结合。

一抗可以是抗原特异性的抗体或待测物中的抗体。

在孵育的过程中，一抗与包被抗原结合形成免疫复合物。

3. 孵育二抗孵育二抗是将与一抗结合的二抗加入到微孔中，使其与一抗发生特异性结合。

二抗通常是针对一抗的抗体，可以是动物来源的抗体，如兔抗小鼠IgG。

二抗的特点是能够与一抗结合形成免疫复合物，同时具有特定的标记物，如酶或荧光素。

4. 底物反应在孵育二抗后，需要加入适当的底物来进行底物反应。

底物是一种能够与酶结合并产生可测量信号的物质。

常用的底物是染色底物，如TMB（3,3’,5,5’-四甲基联苯胺）或ABTS（2,2’-联氨基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)）。

底物与酶发生反应后，会产生显色或发光的产物。

5. 信号检测底物反应产生的显色或发光产物可以通过光密度测量或荧光强度测量来进行信号检测。

光密度测量通常使用酶标仪，荧光强度测量则使用荧光分析仪。

通过测量信号的强度，可以定量分析待测物的浓度或存在程度。

酶标二抗的原理是基于抗原与抗体之间的特异性结合，利用二抗的特异性与标记物的特性，实现对待测物的检测和定量分析。

该技术具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。

WB检测抗体如何选择(下)

WB检测抗体如何选择WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。

例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。

二抗选择要考虑的问题有：①对单抗类一抗，二抗需与一抗的类别或亚类相匹配（多抗类一抗主要是IgG类免疫球蛋白故相应二抗就是抗IgG F(ab’)2二抗，避免各种Ig保守结构域导致的交叉反应。

然而各种Ig仍具有保守的轻链结构域，因此还是有一定程度的交叉反应。

WB检测之内参抗体Western Blot检测方法不仅能检测靶蛋白存在与否，还能比较不同条件下或者不同组织中靶蛋白的相对表达量，可作为蛋白表达水平最直接的证据。

在WB实验中有众多不确定因素影响靶蛋白表达水平的测定，如方法学本身性质、操作误差等。

为准确衡量靶蛋白表达水平，需要精确一致的上样量，使用内参的意义即是保证上样量的一致。

内参即内部参照（Internal Control），对哺乳动物细胞一般指管家基因的表达蛋白(Housekeeping Proteins)。

此类蛋白在各组织和细胞中的表达相对恒定，可作为检测蛋白表达水平变化的参照物。

当内参条带亮度基本一致时，基本可以确定上样量是一致的，通常采用比较靶蛋白和内参蛋白条带亮度比值来进行相对定量。

WB实验中涉及到的蛋白-抗体结合是一个复杂的活性生物大分子间的相互作用，众多因素都会影响实验的结果。

例如时间、温度、浓度、离子强度等，在实验设计时就需要有严谨的对照方案，通过对照就容易判断问题所在，严谨的WB实验中需要设立蛋白分子量标准、空白载体对照、未诱导对照、已知量标准物正对照和内参。

内参使用方法1.标记内参：酶标的内参抗体可避免二抗结合总蛋白中某些免疫球蛋白产生的杂带，使用时只需在二抗孵育时加入酶标内参抗体，按照正常操作即可。

酶联免疫吸附实验的原理及分类

酶联免疫吸附实验的原理及分类酶联免疫吸附实验的原理及分类如下原理：将抗原包被在固相载体上，加入待测样本形成固相抗原-受检抗体复合物；经温育洗涤后，加入酶标二抗，常用羊抗人IgG，在固相上即形成固相抗原-待测抗体-酶标抗抗体复合物，加入底物后根据显色的深浅确定待测抗体含量。

多用于检测IgG类型抗体。

分类如下1.间接法：最常用的方法，属非竞争性结合试验。

原理：将抗原包被在固相载体上，加入待测样本形成固相抗原-受检抗体复合物；经温育洗涤后，加入酶标二抗，常用羊抗人IgG，在固相上即形成固相抗原-待测抗体-酶标抗抗体复合物，加入底物后根据显色的深浅确定待测抗体含量。

多用于检测IgG类型抗体。

2.双抗原夹心法此法可检测各类抗体，因此双抗原夹心法的灵敏度和特异性要高于间接法。

其原理及操作步骤类似双抗体夹心法，也可采用一步法。

由于机体产生抗体IgG的效价有限，一般不会出现钩状效应。

临床上乙型肝炎表面抗体的测定常用此法。

3.竞争法一般抗体检测是较少采用，当相应抗原材料中含有与抗人IgG 反应的物质，而且不易得到足够的纯化抗原或抗原的结合特异性不稳定时，可采用这种方法测定抗体，目前临床运用较多的是乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）和乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）的检测。

竞争抗体与待测抗体的特异性及亲和力越接近，则测定的可靠性越强。

4.捕获法又称反向间接法主要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定，最常用的是病原体急性感染诊断中的IgM型抗体。

原理：先将针对IgM的二抗包被于固相载体，加入待测标本，其中IgM类抗体可被固相抗体捕获，再加入特异性抗原，其与固相上捕获的IgM抗体结合后，加入酶标记特异性抗原的抗体，形成固相二抗-IgM-抗原-酶标记抗体复合物，加底物显色后，即可对待测标本中IgM是否存在及含量进行测定。

影响elisa结果的若干内源性干扰因素

内源性干扰因素一般包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体、因使用鼠抗体治疗或诊断诱导的抗鼠Ig抗体、交叉反应物质等。

在日常的临床血清(浆)标本中，有相当比例不同程度的含有上述各种干扰物质，从而导致测定结果的假阳性。

1.类风湿因子(rheumatoid factors,RF)在类风湿患者、其他疾病以及正常人血清中,常含有较高或不同浓度的RF，RF一般为TgM型，亦有IgG和IgA型，RF具有与变性IgG产生非特异结合的特点，因为在elisa测定中，其可与固相上包被的特异抗体IgG以及随后加入的酶标的特异抗体IgG结合，从而出现假阳性结果。

尤其是在捕获法IgM型特异抗体的测定中表现最为明显，因为此时固相包被的抗体为抗人弘链抗体，IgM型RF的存在可使其大量结合于固相。

为避免RF对ELISA测定的干扰，通常可以采取下述措施：(1)稀释标本：这在判断急性病原体感染的特异IgM抗体如抗HAVIgM，抗HBclgM， TORCH的IgM 抗体检验等尤为有用。

因为急性感染时，血循环中特异的IgM抗体滴度通常很高，而RF滴度通常相对要低得多。

因此，在测定前对标本进行稀释，特异的IgM因高滴度存在仍可检出，而非特异的RF则会因为稀释变成非常低的滴度，从而对测定几乎不产生干扰。

现在，有些特异IgM检测elisa试剂盒不要求稀释标本，直接检测，这样虽然方便了实验室技术人员的操作，但容易出现假阳性结果，并且由于某些慢性感染，如HBV的感染，血循环中抗HBelgM可持续以一定的滴度存在，标本不做稀释即进行检测，即可出现阳性结果，从而失去抗HBclgM用于HBV急性感染的诊断价值。

因此，在临床实验室，一定要使用要求对标本做1:1000稀释的试剂盒进行检验，从而保证相应检测项目结果的可靠性及临床应用价值。

(2)改变酶标抗体：由于RF结合的是IgG的Fc片段，如果将待酶标的抗体的F，片段酶切夫除，仅留下具有特异结合功能的F(ab’)2部分标记酶，则在测定中即可避免RF的干扰。

中图分类号：S852723

中图分类号:S 852.723　文献标识码:A 文章编号:167324696(2008)0120020205柔嫩艾美球虫免疫与鸡盲肠扁桃体TNF 2α基因表达动态的关系王彩霞,徐　赓,王黎霞,安　健3(北京农学院动物科学技术系,北京　102206) 摘要:根据GenBank 上鸡β2actin 、TN F 2α的基因序列设计引物,应用逆转录2聚合酶链式反应(R T 2PCR )技术克隆获得了β2actin 和TN F 2α基因,采用β2actin 为内参的半定量方法检测TN F 2αmRNA 在鸡柔嫩艾美球虫免疫前后不同时间的表达情况,以探讨TN F 2α基因的表达动态与柔嫩艾美球虫免疫的关系。

结果显示,TN F 2α基因在两次免疫期间的表达量整体上呈现双峰模式,首免后第9d 达到一个高峰,二免后第7d 达到另一个高峰。

结果表明,TN F 2α在抗球虫感染中有一定的作用。

关键词:β2actin 基因;柔嫩艾美球虫;盲肠扁桃体;R T 2PCR ;TN F 2α基因R elationship bet w een Eimeria tenella immunity and kineticexpression of TNF 2αgene in chicken cecal tonsil WAN G Cai 2xia ,XU Geng ,WAN G Li 2xia ,AN Jian(De partment of A ni mal S cience and Technolog y ,B ei j ing College of A g riculture ,B ei j ing 102206,China ) Abstract :According to chicken β2actin and TN F 2αgene sequences in GenBank ,primers were de 2signed ,and t he gene sequences were amplified by reverse t ranscriptase 2polymerase chain reaction (R T 2PCR )f rom t he cecal tonsil of chicken experimentally immunized wit h Ei meri a tenell a .The exp ression le 2vel of TN F 2αmRNA at different time after immunization was detected by semi 2quantitative R T 2PCR wit h β2actin gene as internal reference to st udy t he relationship between E.tenell a immunizatio n and t he kineticexpression of TN F 2αgene in chicken cecal tonsil.The result s showed t hat t he level of expression of TN F 2αgene reached 1st peak on day 9po st 21st 2immunization ,and reached 2nd peak on day 7post 2booster 2immunization.It was concluded t hat TN F 2αhad some effect against E.tenell a infection.K ey w ords :β2actin gene ;Ei meri a tenell a ;cecal tonsil ;R T 2PCR ;t umor necrosis factor 2αgene 鸡球虫病是由艾美属球虫寄生于鸡小肠和盲肠上皮细胞引起的一类原虫病,对养鸡业的危害相当严重。

如何选择二抗

二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。

即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。

艾美捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。

【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。

这通常是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。

其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。

如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。

艾美捷能为您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特异性只结合IgM的Anti IgM （mu）Antibody、IgA的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE的Anti IgE （epsilon）Antibody等。

【二抗的种属来源】一般来说，不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。

百菌清人工抗原的合成及多克隆抗血清的制备

百菌清人工抗原的合成及多克隆抗血清的制备王玲玲;职爱民;胡骁飞;邓瑞广;侯玉泽;张改平【摘要】将百菌清(CTN)进行化学修饰后引入羟基活性基团,合成具有半抗原结构特征的百菌清衍生物(CTN-OH)；采用N,N羰基二咪唑法(CDI)将CTN-OH与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成人工免疫抗原CTN-BSA和包被抗原CTN-OVA,用紫外分光光度法(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定；通过动物免疫试验获得鼠源多抗血清,并使用间接ELISA和阻断ELISA的方法对多抗血清进行鉴定.结果表明,半抗原CTN OH与载体蛋白偶联成功；受免3只小鼠的效价均达1∶12 800,且2号小鼠对CTN的IC5 0为93.593 μg/L,成功获得高效价、高敏感性、特异性强的鼠源多克隆抗血清,为CTN单克隆抗体制备及快速检测方法的建立奠定基础.【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2012(021)009【总页数】5页(P19-23)【关键词】百菌清;人工抗原;合成;多抗血清;ELISA【作者】王玲玲;职爱民;胡骁飞;邓瑞广;侯玉泽;张改平【作者单位】河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,郑州450002;河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳 471003;河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,郑州450002;河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,郑州450002;河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,郑州450002;河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳 471003;河南省农业科学院,农业部动物免疫学重点开放实验室,郑州450002【正文语种】中文【中图分类】X592百菌清（Chlorothalonil）是美国钻石制碱公司于1963年开发的一种非内吸性广谱有机氯杀菌剂，在国内外广泛应用。

主要用于防治蔬菜、果树、经济作物、粮食作物及各种绿化草坪等的真菌病害。

鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA中的应用

河南农业科学，2024，53（2）：128‐135Journal of Henan Agricultural Sciencesdoi:10.15933/ki.1004-3268.2024.02.014鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA 中的应用魏蔷1，李青梅1，金前跃1，宋亚鹏2，白怡霖3，张改平1，2（1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室，河南郑州450002；2.河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002；3.郑州大学农学院，河南郑州450001）摘要：为了制备针对鸡减蛋综合征病毒（EDSV ）的中和性单克隆抗体，首先纯化得到重组EDSV 纤维蛋白，经血凝试验（HA ）鉴定纤维蛋白的血凝活性，HA 效价为1∶27。

之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c 小鼠，免疫4次后，小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验（iELISA ）效价最高达到1∶409600，间接免疫荧光试验（IFA ）效价最高达到1∶12800。

取效价最高免疫小鼠脾细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞，结合iELISA 和IFA 检测，经过多轮亚克隆，最终成功获得了2株稳定分泌中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株9G12和10E11。

iELISA 结果显示，单克隆抗体9G12和10E11的腹水效价分别为1∶128000和1∶1020000；IFA 效价分别为1∶2000和1∶8000。

Western blot 检测结果显示，单克隆抗体9G12和10E11均不能识别变性的EDSV 纤维蛋白，表明二者识别纤维蛋白的构象型表位。

病毒中和试验结果表明，单克隆抗体9G12和10E11均具有中和活性，中和效价分别为1∶27和1∶24。

亚型鉴定表明，这2种单克隆抗体的轻链均为Kappa 型，重链均为IgG1亚型。

将基于单克隆抗体9G12和10E11建立的双抗体夹心ELISA 方法应用于临床检测EDSV 抗原，与荧光定量PCR 检测结果的符合率为91.7%。

动物检疫学考题及答案

名词解释1动物检疫按照国家法规对各种动物及其产品进行的疫病检查。

通过动物检疫，对可疑或已证实的疫病对象实行强制隔离，或作出适当处理，目的是防止动物传染病的传播，保障畜牧业生产和人民健康。

2国境检疫又称进出境检疫、口岸检疫。

包括进境检疫、出境检疫、过境检疫、携带及邮寄检疫和运输工具检疫。

3蓝舌病（BT）是由蓝舌病病毒一起反刍动物的一种急性、非接触性传染病。

以高热，口腔、鼻腔、胃肠道黏膜水肿、溃疡性炎症以及舌、齿龈充血、瘀血呈青紫色等为主要特征。

4炭疽是由炭疽杆菌引起的各种家禽、野生动物和人共患的一种急性、热性、败血性传染病。

以败血症变化、脾脏显著肿大、血液凝固不良、皮下和浆膜下有出血性胶样侵润为特征。

5猪瘟（CSF)是由猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性和高度致死性传染病。

以高热稽留和广泛性出血、梗死、坏死等为特征。

又被称为古典猪瘟或烂肠瘟。

6个体检疫个体检疫是指对群体检疫中检出的可疑病态动物进行系统的个体临诊检查。

其目的在于初步鉴定动物是否患病、是否为检疫对象，然后在根据需要进行必要的实验室检疫。

7马传染性贫血马传染性贫血病简称马传贫(EIA),由反录病毒科慢病毒亚科中的马传染性贫血病病毒引起的马、骡、驴传染病。

其特征主要为间歇性发烧、消瘦、进行性衰弱、贫血、出血和浮肿；在无烧期间则症状逐渐减轻或暂时消失。

8猪水疱病（SVD)是由猪水疱病病毒引起猪的一种传播迅速、流行性强、发病率高的急性接触性传染病。

以蹄、口、鼻镜和乳头周围皮肤出现水疱为特征。

9非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒引起的急性、高传染病性和高致死病性疾病，曾被称为东非猪瘟和疣猪病。

以高热、高死亡率、短病程、皮肤发绀和内脏器官广泛性出血为主要特征。

10非洲马瘟(AHS)是由非洲马瘟病毒引起马属动物的一种急性或亚急性传染病。

在临床上以发热、肺和皮下组织水肿及脏器出血为特征。

11牛瘟（RP)是由牛瘟病毒引起牛的一种急性、烈性、败血性、高度接触性传染病，又被称为东方牛疫或“烂肠瘟”、“胆胀瘟”、“百叶干”等俗名。

Westernblot一抗和二抗的选择

Westernblot一抗和二抗的选择抗体分类：根据重链恒定区的血清学类型，可将抗体分为IgM，IgG，IgA，IgD，IgE 五类，它们的重链分别为mu, gamma, alpha, delta, epsilon链。

在上述每一类别中，按重链构造上的变异又可分为几个亚类，例如人的IgG可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4四个亚类。

轻链分为两种类型，kappa链和lambda链，但每种抗体中只存在一种类型的轻链。

二抗：二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上面通常连有酶或荧光素等标签。

由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛，如western blot（通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质），ELISA（以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异性的蛋白质，尤其是相应的抗原或抗体），免疫组织化学（检测组织中的特异性抗原），免疫细胞化学（通过免疫学方法检测细胞的抗原组成），流式细胞术（通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞）及免疫沉淀（通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应抗原）。

二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体均具有特异性，因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用；此外，一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子，从而使信号大大增强，提高了实验灵敏度。

二，如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适的二抗广义上是指专门和进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，**捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。

间接ELISA实验设计

一．间接 ELISA 检测方法的建立-----用方阵法确定抗原最佳工作浓度，阴、阳性血清最佳稀释度，酶标二抗最佳稀释度需要的试剂与器材：①纯化的病毒液②阳性（小鼠第三次免疫时的血清）和阴性血清（未免疫的阴性小鼠血清）③ 0.05mol/L 的碳酸盐缓冲溶液，PH=9.6④0.5% BSA 封闭液⑤PBST(PH=7.4,0.01mol/LPBS，0.05%Tween-20) 洗液⑥HRP 标记的羊抗鼠 IgG(HRP-IgG)⑦l2mol/LH2SO4终止液⑧底物显色液邻苯二胺(OPD、稀释液为柠檬酸缓冲液)⑨96孔酶联板，酶标仪用四个96孔板做实验，加入的羊抗鼠HRP-IgG稀释度分别为1：2000,1:4000,1:8000,1:16000.1.用 0.05mol/L 的碳酸盐缓冲溶液，PH=9.6，将病毒稀释成50 μg/mL、40 μg/mL、30 μg/mL、20 μg/mL、10 μg/mL、5 μg/mL 6 个浓度梯度，分别包被96孔酶联板 A~F 行，100μl/ 孔， 4 ℃ 放置过夜，次日，用洗液PBST(PH=7.4,0.01mol/LPBS，0.05%Tween-20) 洗板 3 次，每孔加入100μl 0.5% BSA 封闭液，37℃封闭 1 h，PBST 洗板 3 次；2.分别加入阳性和阴性血清，阳性血清和阴性血清分别做 1:100、1:200、1:400、1:800 和 1:1600 倍比稀释，37℃孵育 1 h，弃一抗，PBST 洗板 3 次；3.每孔加入100 μl 1:2000/1:4000/1:8000/1:16000 稀释的 HRP 标记的羊抗鼠 IgG(HRP-IgG)，37℃孵育 1 h，弃二抗，PBST 洗板 3 次后，每孔加入50μl底物显色液邻苯二胺(OPD、稀释液为柠檬酸缓冲液)，37℃避光显色 15 min 后，每孔加入50μl2mol/LH2SO4进行终止。

超强毒 IBDV VP2 基因原核表达及表达产物免疫原性

超强毒IBDV VP2基因原核表达及表达产物免疫原性的检测朱彩霞，朱瑞良*，刘冠华，翁立雪，马荣德，孙寅剑山东农业大学动物科技学院，山东泰安（271018）E-mail:zhurl@摘要：利用RT-PCR方法扩增IBDV的结构蛋白VP2基因，并将其克隆到表达载体PGEX-4T-3中，获得重组质粒命名为PGEX-VP2，经PCR、酶切和序列分析鉴定表明插入的位置、大小和读码框均正确。

SDS- PAGE电泳检测表明，经重组质粒PGEX-VP2转化、诱导的受体菌E. coli BL21(DE3)plysS能表达结构蛋白VP2基因，并以包涵体形式存在，约69KDa，表达的蛋白经纯化后，免疫6周龄BALB /c小鼠，ELISA分析表明制备的抗血清效价在1∶5120以上，Western blot分析表明VP2表达产物能与IBDV多克隆抗血清发生反应，从而证明超强毒IBDV VP2基因在原核中得到了表达、表达产物具有良好的免疫原性。

这为研究超强毒IBDV的免疫机理及基因工程亚单位疫苗的研制奠定了基础。

关键词：I BDV；VP2基因； E. coli BL21(DE3)plysS；表达；免疫原性0. 引言传染性法氏囊病( IBD)是一种危害幼鸡的急性、高度接触性、病毒性传染病[1]，除能引起3~6周龄的雏鸡发病和死亡之外，还可引起免疫抑制[2]。

再加之近年来超强毒株的出现，使感染鸡发病率和死亡率都大大提高，更加引起家禽饲养者和研究者的高度重视。

传染性囊病病毒(IBDV)是传染性法氏囊病的致病因子，属于双RNA病毒科、禽双RNA 病毒属。

目前普遍认为IBDV具有5种蛋白质，即VP1、VP2、VP3、VP4和VP5。

其中VP2是主要的宿主保护性抗原，具有诱导宿主产生病毒中和抗体的能力，具有型特异性[3]。

近些年很多学者开展了IBDV的分子生物学的研究，有些学者已先后在大肠杆菌[4-5]、酵母菌[6-9]、痘病毒[10-11]、昆虫杆状病毒[12]、腺病毒[13]等表达系统中对VP2进行了表达，但是表达量都不大，尤其在原核表达系统中，因此本研究利用E. coli BL21(DE3)plysS感受态细胞，建立了表达体系，并以纯化的表达产物免疫小鼠，制备的免疫血清经ELISA检测其效价在1∶5120以上，Western blot分析表明表达产物能与IBDV多克隆抗血清发生反应，从而证明超强毒IBDV（vvIBDV VP2）基因在原核中得到了表达、表达产物具有良好的免疫原性。

鹅病的血清学检验

豳
资源育繁
鹅病的血清学检验
殷剑（重庆市长寿区凤城街道畜牧兽医站４０１２２０）
鹅病的血清学检验也是兽医临床工作中常采用的实验室
诊断技术。包括凝集试验、琼脂扩散试验、血凝试验和血凝感病毒等。对新分离的这些病毒材料，可用血凝试验和血凝抑制试验、血细胞吸附和吸附抑制试验、中和试验、空斑减
同时，用生理盐水做对照，以免由于细菌的白凝而判断错误。被Ａ — Ｆ多价０血清凝集者，依次用０４、０３、Ｏ１０、０７、
０８、０９、０２和Ｏ１１因子血清做凝集试验。视其被哪一群０因子血清所凝集，则确定被检沙门氏菌为该群的沙门氏菌。
抑制试验等。
１凝集试验
数试验和荧光抗体技术等方法加以鉴定。但迄今为止，血凝试验（ＨＡ）和血凝抑制试验（ＨＩ）仍是一种快速准确的传统
实验室手段。以鹅副黏病毒为例介绍血凝试验与血凝抑制试验的操作方法，使用的器材为Ｖ形９６孔血凝板。
于１８￣２２￣Ｃ中４５～６０ａｉｒｎ后观察结果。能够使鸡红细胞发生完
果，同时做阳性、阴性对照。结果判定：２ｍｉｎ内出现颗粒状
或块状凝集者为阳性反应：在２ｍｉｎ内不出现凝集者为阴性
反应。１．２凝集试验用于细菌的血清群和型的鉴定
原。根据检出的０和Ｈ抗原列出被检菌的抗原式．查对抗原表即可知被检菌为哪种沙门氏菌。例如，某一菌的０抗原为０１、０４、０５、０１２，而Ｈ抗原为ｉ：１，２，其抗原结构式为

Westernblot一抗和二抗的选择讲解学习

W e s t e r n b l o t一抗和二抗的选择Westernblot一抗和二抗的选择抗体分类：根据重链恒定区的血清学类型，可将抗体分为IgM，IgG，IgA，IgD，IgE 五类，它们的重链分别为mu, gamma, alpha, delta, epsilon链。

在上述每一类别中，按重链构造上的变异又可分为几个亚类，例如人的IgG可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4四个亚类。

轻链分为两种类型，kappa链和lambda链，但每种抗体中只存在一种类型的轻链。

二抗：二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上面通常连有酶或荧光素等标签。

由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛，如western blot（通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质），ELISA（以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异性的蛋白质，尤其是相应的抗原或抗体），免疫组织化学（检测组织中的特异性抗原），免疫细胞化学（通过免疫学方法检测细胞的抗原组成），流式细胞术（通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞）及免疫沉淀（通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应抗原）。

二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体均具有特异性，因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用；此外，一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子，从而使信号大大增强，提高了实验灵敏度。

二，如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适的二抗广义上是指专门和进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，**捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。