凝胶色谱
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凝胶色谱的分离效果的因素
色谱柱填料的孔径大小及其粒径分布均匀性 流动相 色谱柱高度和直径 个人操作
Gel Chromatography
填料的孔径大小及其粒径分布均匀性
孔径太小，待测物不易流出，分析时间长，展宽严重 。 孔径太大则很可能导致组分分不开 。 在做凝胶色谱时，需要先大致估计下待分析物的分子量，然后选择 合适的柱子，如果不知道粒径，可先用大孔径的先试试，接着再用 小粒径的以达到更高的精度。市售的柱子上都有该柱适用的分子量 范围，一般选待测物分子量在色谱柱的最大分子量的20%-80%宜。
Gel Chromatography
个人操作影响
这点在全手动操作的柱色谱中影响较大，对半自动的则影响较小。 主要要注意加样时一定注意保证样品各组分在同一个“起跑线” 上“起跑”.
Gel Chromatography
相关注意事项
凝胶色谱中的凝胶采用合成葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶 、琼脂糖凝 胶等有机凝胶，这些有机凝胶的胶质软，机械强度低，填料的粒度一般 用37-75 μ。色谱柱长12尺以上，柱径7.8毫米，流速通常用1毫升/分。 在这些条件下，一次实验时间往往需要三小时。加快流速会降低分离效 率，因为凝胶色谱是一个由扩散控制的分离过程，高分子在溶液中扩散 较慢，这就必然使流速受到一定限制。最终导致凝胶色谱的处理量小， 时间长，分离效果不佳；分子尺寸相同的混合物（如异构体的混合物） 不易分开。
Gel Chromatography
流动相影响
凝胶色谱中流动相的影响不像别的色谱（如反相or离子色谱） 那么明显。其中主要影响的是流动相的流速，一般流速越大， 出峰越快，但分离效果可能不是很好。
Gel Chromatography
色谱柱的高度和直径影响
一般来说，色谱柱越长，样品组分分的越开，但过长时会消耗 太多的溶剂，而且柱展宽等也容易变的严重。色谱柱直径太大 时，样品沿径向的分布容易不均匀，容易出现柱中心处比柱四 周跑的快，从而增加了展宽。
且该填料也在相关实验中证实：其分离度要比一些有机凝胶要好，而且该填料也表现出很好的机械强 度，稳定性和保持着很好的抗压能力，相比时间上也缩短了不少。
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检测方法的研究
检测方法也是色谱学研究的热点之一，人们不断更新检测器的灵敏度， 使色谱分析能够更灵敏地进行分析。 人们还将其他光谱的技术引入色谱，在分离化合物的同时即行测定化合 物的结构。 色谱检测器的发展还伴随着数据处理技术的发展，检测获得的数据随即 进行计算处理，使试验者获得更多信息。 如今又很多应用了，例如凝胶色谱净化浓缩联用仪在毒物分析中的应用； 利用凝胶渗透色谱-激光光散射联用技术(GPC-MALLS)测定医用高分子材料 的分子量及分子量的分布；凝胶色谱与紫外吸收分析仪联用技术分离青霉 素G中抗原性高分子杂质等等，相信凝胶色谱联用技术会越来越广泛的得 到应用。
Gel Chromatography
参考文献： [1] 白颖, 李建伟. 凝胶色谱法测定高聚物的平均分子量及分子量分布 [J]. 塑料科技, 2007,(04) [2] 衣学飞, 张涛, 张艳丽, 李义君. 凝胶色谱法测定BOPP分子量及其 分布[J]. 炼油与化工, 2007,(02) [3] 陈建华, 王均甫, 宋兰英, 陈同军. 凝胶色谱法测定顺丁橡胶平均 分子量及其分布的研究[J]. 色谱, 1998,(02) [4] 陶澍, 武会先, 张宗敏. 水生腐殖酸分子量分布研究——Ⅰ.串联凝 胶色谱法测定水生腐殖酸分子量分布[J]. 环境科学学报, 1990,(01) [5] 陈贤苓, 雷中方. 凝胶色谱法测定木素的分子量分布[J]. 实验室研 究与探索, 1993,(04) [6] 成跃祖. 用TI-59型计算机计算高聚物凝胶色谱的积分分子量分布 [J]. 石油炼制与化工, 1992,(05) [7] 刘咏梅.凝胶渗透色谱在农药残留分析中的应用[D]. 北京化工大 学,2004
影响凝胶色谱的分离的因素及 其改进方法
吴承志 张宁 封树林 孙振鹏
Gel Chromatography
凝胶色谱的定义
凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发展起来的一种 快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不 需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法 又称分子排阻色谱法。
Gel Chromatography
凝胶色谱的主要用途范围
常用的凝胶为交联聚 苯乙烯凝胶，洗脱溶 剂为四氢呋喃等
凝胶色谱法主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分 子质量分布测试。凝胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂主要是水。用 于有机溶剂中可溶的高聚物 (聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基 丙烯酸甲酯等)相对分子质量分布分析及分离，同时根据所用凝胶填 料不同，可分离油溶性和水溶性物质，分离相对分子质量的范围从几 百万到100以下。
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改进方法
最近凝胶色谱的大量研究工作仍是多方面的，其中仪器、 填料、检测方法的研究、以及色谱理论等方面的进展是 和整个液体色谱的进展相关的。
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填料改进方法
填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小， 柱压越大，柱压的增加限制了粒度小于3um的填料应用。在相同选择性 条件下，提高柱效可提高分离度，但不是唯一的因素。 凝胶色谱填料合成技术的进展主要在下面四个方面：填料的微球化、窄 粒度分布多孔硅微球的合成成功、小孔径多孔硅微球合成成功以及新的 硅微球表面化学改性的发展。这些新发展的无机凝胶填料机械强度高， 粒径小，可达到较高的柱效，孔容大，分离范围广，使用寿命长等优 点.
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仪器的改进发展
通过与其他仪器联用，解决凝胶色谱法测定高聚物分子量分布从相 对法向绝对法过渡 。原有的许多分子量测定方法，由于不能做到足够 灵敏的瞬时响应而未能成功地在凝胶色谱上应用。 Ouano用激光小角光散射仪(LALLS)来作分子量检测器得到比较好的 结果。实验数据不需要标定曲线， 也不必进行峰加宽改正。
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硅胶基质填料
以硅胶为基质的高效亲水凝胶色谱填料，多以甘油醚基( 即二醇基)进行硅胶的表面修饰 ，氨基、 咪唑基、尿素及取代尿素等也可作为其亲水基团 。为提高其表面的亲水性和生物相容性，将葡聚糖接 枝在硅胶表面，以分离蛋白质； 但使用最广泛的仍然是二醇基， 这与二醇基填料合成简单且生物相 容性好等特点不无关系。 以硅胶为基质的色谱填料因表面游离的硅羟基具有弱阳离子交换作用，对极性化合物和离子型化合 物都有一定的非特异性吸附，所以不能直接用作多肽和蛋白质分离分析用的凝胶过滤色谱填料，需要键 合亲水官能团才能成为亲水性凝胶过滤色谱填料。在亲水凝胶色谱中，多选用硅烷化试剂作为配基进行 修饰，以产生亲水性的二醇基，其反应如下
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凝胶色谱的分离效果的因素
色谱柱填料的孔径大小及其粒径分布均匀性 流动相 色谱柱高度和直径 个人操作
Gel Chromatography
填料的孔径大小及其粒径分布均匀性
孔径太小，待测物不易流出，分析时间长，展宽严重 。 孔径太大则很可能导致组分分不开 。 在做凝胶色谱时，需要先大致估计下待分析物的分子量，然后选择 合适的柱子，如果不知道粒径，可先用大孔径的先试试，接着再用 小粒径的以达到更高的精度。市售的柱子上都有该柱适用的分子量 范围，一般选待测物分子量在色谱柱的最大分子量的20%-80%宜。
Gel Chromatography
个人操作影响
这点在全手动操作的柱色谱中影响较大，对半自动的则影响较小。 主要要注意加样时一定注意保证样品各组分在同一个“起跑线” 上“起跑”.
Gel Chromatography
相关注意事项
凝胶色谱中的凝胶采用合成葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶 、琼脂糖凝 胶等有机凝胶，这些有机凝胶的胶质软，机械强度低，填料的粒度一般 用37-75 μ。色谱柱长12尺以上，柱径7.8毫米，流速通常用1毫升/分。 在这些条件下，一次实验时间往往需要三小时。加快流速会降低分离效 率，因为凝胶色谱是一个由扩散控制的分离过程，高分子在溶液中扩散 较慢，这就必然使流速受到一定限制。最终导致凝胶色谱的处理量小， 时间长，分离效果不佳；分子尺寸相同的混合物（如异构体的混合物） 不易分开。
Gel Chromatography
流动相影响
凝胶色谱中流动相的影响不像别的色谱（如反相or离子色谱） 那么明显。其中主要影响的是流动相的流速，一般流速越大， 出峰越快，但分离效果可能不是很好。
Gel Chromatography
色谱柱的高度和直径影响
一般来说，色谱柱越长，样品组分分的越开，但过长时会消耗 太多的溶剂，而且柱展宽等也容易变的严重。色谱柱直径太大 时，样品沿径向的分布容易不均匀，容易出现柱中心处比柱四 周跑的快，从而增加了展宽。
且该填料也在相关实验中证实：其分离度要比一些有机凝胶要好，而且该填料也表现出很好的机械强 度，稳定性和保持着很好的抗压能力，相比时间上也缩短了不少。
Gel Chromatography
检测方法的研究
检测方法也是色谱学研究的热点之一，人们不断更新检测器的灵敏度， 使色谱分析能够更灵敏地进行分析。 人们还将其他光谱的技术引入色谱，在分离化合物的同时即行测定化合 物的结构。 色谱检测器的发展还伴随着数据处理技术的发展，检测获得的数据随即 进行计算处理，使试验者获得更多信息。 如今又很多应用了，例如凝胶色谱净化浓缩联用仪在毒物分析中的应用； 利用凝胶渗透色谱-激光光散射联用技术(GPC-MALLS)测定医用高分子材料 的分子量及分子量的分布；凝胶色谱与紫外吸收分析仪联用技术分离青霉 素G中抗原性高分子杂质等等，相信凝胶色谱联用技术会越来越广泛的得 到应用。
Gel Chromatography
参考文献： [1] 白颖, 李建伟. 凝胶色谱法测定高聚物的平均分子量及分子量分布 [J]. 塑料科技, 2007,(04) [2] 衣学飞, 张涛, 张艳丽, 李义君. 凝胶色谱法测定BOPP分子量及其 分布[J]. 炼油与化工, 2007,(02) [3] 陈建华, 王均甫, 宋兰英, 陈同军. 凝胶色谱法测定顺丁橡胶平均 分子量及其分布的研究[J]. 色谱, 1998,(02) [4] 陶澍, 武会先, 张宗敏. 水生腐殖酸分子量分布研究——Ⅰ.串联凝 胶色谱法测定水生腐殖酸分子量分布[J]. 环境科学学报, 1990,(01) [5] 陈贤苓, 雷中方. 凝胶色谱法测定木素的分子量分布[J]. 实验室研 究与探索, 1993,(04) [6] 成跃祖. 用TI-59型计算机计算高聚物凝胶色谱的积分分子量分布 [J]. 石油炼制与化工, 1992,(05) [7] 刘咏梅.凝胶渗透色谱在农药残留分析中的应用[D]. 北京化工大 学,2004
影响凝胶色谱的分离的因素及 其改进方法
吴承志 张宁 封树林 孙振鹏
Gel Chromatography
凝胶色谱的定义
凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发展起来的一种 快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不 需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法 又称分子排阻色谱法。
Gel Chromatography
凝胶色谱的主要用途范围
常用的凝胶为交联聚 苯乙烯凝胶，洗脱溶 剂为四氢呋喃等
凝胶色谱法主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分 子质量分布测试。凝胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂主要是水。用 于有机溶剂中可溶的高聚物 (聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基 丙烯酸甲酯等)相对分子质量分布分析及分离，同时根据所用凝胶填 料不同，可分离油溶性和水溶性物质，分离相对分子质量的范围从几 百万到100以下。
Gel Chromatography
改进方法
最近凝胶色谱的大量研究工作仍是多方面的，其中仪器、 填料、检测方法的研究、以及色谱理论等方面的进展是 和整个液体色谱的进展相关的。
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填料改进方法
填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小， 柱压越大，柱压的增加限制了粒度小于3um的填料应用。在相同选择性 条件下，提高柱效可提高分离度，但不是唯一的因素。 凝胶色谱填料合成技术的进展主要在下面四个方面：填料的微球化、窄 粒度分布多孔硅微球的合成成功、小孔径多孔硅微球合成成功以及新的 硅微球表面化学改性的发展。这些新发展的无机凝胶填料机械强度高， 粒径小，可达到较高的柱效，孔容大，分离范围广，使用寿命长等优 点.
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仪器的改进发展
通过与其他仪器联用，解决凝胶色谱法测定高聚物分子量分布从相 对法向绝对法过渡 。原有的许多分子量测定方法，由于不能做到足够 灵敏的瞬时响应而未能成功地在凝胶色谱上应用。 Ouano用激光小角光散射仪(LALLS)来作分子量检测器得到比较好的 结果。实验数据不需要标定曲线， 也不必进行峰加宽改正。
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硅胶基质填料
以硅胶为基质的高效亲水凝胶色谱填料，多以甘油醚基( 即二醇基)进行硅胶的表面修饰 ，氨基、 咪唑基、尿素及取代尿素等也可作为其亲水基团 。为提高其表面的亲水性和生物相容性，将葡聚糖接 枝在硅胶表面，以分离蛋白质； 但使用最广泛的仍然是二醇基， 这与二醇基填料合成简单且生物相 容性好等特点不无关系。 以硅胶为基质的色谱填料因表面游离的硅羟基具有弱阳离子交换作用，对极性化合物和离子型化合 物都有一定的非特异性吸附，所以不能直接用作多肽和蛋白质分离分析用的凝胶过滤色谱填料，需要键 合亲水官能团才能成为亲水性凝胶过滤色谱填料。在亲水凝胶色谱中，多选用硅烷化试剂作为配基进行 修饰，以产生亲水性的二醇基，其反应如下
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