采用模块式消化、全自动凯氏定氮仪测定食品中蛋白质
海能仪器凯氏定氮法测定豆乳中的蛋白质含量
海能仪器：凯氏定氮法测定豆乳中的蛋白质含量1前言豆乳是黄豆加水、磨成汁后再煮熟的饮料。
豆乳饮料营养非常丰富，且易于消化吸收，它是数百种天然植物中最受营养学家推荐的食物。
本文参照《GB5009.5-2016食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》标准，对某品牌浓香豆乳进行蛋白质含量的测定。
2仪器与试剂2.1仪器K1160全自动凯氏定氮仪，SH420F石墨消解仪，分析天平。
2.2试剂硫酸（分析纯），催化剂片（分析纯无水硫酸钾3g和分析纯无水硫酸铜0.2g），20g/L 硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，40%氢氧化钠。
3实验方法3.1取样称取样品3.0g（精确值0.1mg）左右，加入消化管。
加入混合催化剂3gK2SO4、0.2gCuSO4，加入10mL浓硫酸。
3.3消解利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨炉上，盖上排气罩，连接废气吸收系统，消化过程采用曲线升温模式，设定消解参数如表1：表1消解参数设置3.4测试将消化管放置于凯氏定氮仪上，定氮仪参数设置如表2：表2定氮仪参数设置4测试结果4.1实验结果名称样品重量g氮含量%蛋白质含量%平均值%RSD%豆乳3.11710.4887 3.05413.05920.133.05040.4901 3.06323.10460.4899 3.06173.17450.4892 3.0578阶段温度/℃保持/min备注120020不加排废罩，挥发水分223020335020442090硼酸稀释水碱液蒸馏量蛋白系数蒸汽流量滴定酸25mL30mL40mL5min 6.25100%0.1169mol/L4.2结论通过实验数据可以看出，测定该豆乳样品的粗蛋白平均值为3.0592%。
豆乳样品包装袋上营养成分表中蛋白质标示值为3.0g/100g，样品测定的蛋白质平均值符合《GB28050-2011食品安全国家标准预包装食品营养标签通则》要求的食品中蛋白质的允许误差范围≧80%标示值。
食品中蛋白质凯氏定氮法测定比较
蛋白质测定涉及企业生产和监督 检测众多领域。本次测验用凯氏定氮 法检测，在操作过程中总结出两仪器 方 法 的 适 用 条 件 及 操 作 事 项， 以 便 在 检 测 工 作 中 更 好 的 掌 握 蛋 白 质 的 检测。 1 检测试剂
所 需 试 剂 均 为 分 析 纯， 检 测 用 水 为 实 验 室 合 格 水。 混 合 催 化 剂（ 硫 酸 铜和硫酸钾），硼酸溶液（20 g/L）， 溴 甲 酚 绿 指 示 剂（10 g/L）， 甲 基 红 指 示（10g/L）， 亚 甲 基 蓝 指 示 剂 （10 g/L）， 氢 氧 化 钠（400 g/L）， 硫酸，甲基红溴甲酚绿混合指示液。 （0.050 mol/L）硫酸标准滴定溶液。 2 检测用设备
事项
7.2 凯氏定氮法操作时的注意事项
混匀的固体 0.5 g 左右、半固体 2 g
操作时注意仪器整体装置的密闭
左右、液体摇晃均匀 10 g 左右。这样 性，水蒸气烧瓶要做空蒸试验，保证
的结果比较稳定。开始时控制火力，
（下转 149 页）
147 Apr. 2021 CHINA FOOD SAFETY
测试。连续做空白测试，结果一致后， 6 结果比较
仪器稳定即可连续测试，空白结果最
以 奶 粉 为 例， 两 种 方 法 的 检 测 结
大值减去最小值小于 0.05 mL 时，仪 果见表 1。 表 1 两种方法的检测结果表
编号和方法
称取样品 质量 /g
蛋白质含量检测 结果 （/ g/100g）
质控样 浓度值
连接好 加甲基红指示剂 3 滴和硫酸 1 mL，使 蒸馏水显酸性，加热蒸馏瓶内的水保 持沸腾。
打 开 装 置 冷 凝 水， 接 收 瓶 加 入 10.0 mL 硼酸溶液及 3 滴混合滴定指 示液。接收瓶放在冷凝管的下端插入
全自动凯氏定氮仪测定食品中蛋白质分析
蛋 白质是 食品当中的主 要营养成 分之一 ， 属于分子 结构复 杂的含氮有机化合 物。 主要 的 构成要素 包括 氮基酸 以及肽键 。 在当前 的技术 条 件支持 下， 食品当中蛋 白质含量 的测 定方法 有以下几种类型： 其一为 甲醛滴定法 其二为电 流法 、 其三 为紫外 分光 光度法 、 其四为双 缩脲 法。 但 以上检测 方法在实 际应 用中均 存在不 同 程 度上 的缺 陷， 或操 作步骤 过于 繁琐 ， 可行性 不 高， 或相 关设 备仪 器的投入 资金 过大 ， 或操 作反应 时 间较 长， 或数 据 缺乏精 确性优 势。 故 而需要 对食品中的蛋 白质分析 方法进行合理 的 改 进。 文 章即在 对食品当中蛋白质成分 进行检 测 的过程 当中应 用全 自 动凯 氏定氮仪 。 现针对 相关操作 方法进行如下概括 。
１ ． ２ 方法 在应 用 全 自动凯 氏 定氮仪 对 食 品中蛋 白 质成 分 进行 分析 的过 程 当中， 具 体 的操 作 方 法为 ： １ ） 准 备分析 对象 。 本 次使用 全 自 动凯氏
实验三 凯氏定氮法测量奶粉中蛋白质含量
实验三 凯氏定氮法测量奶粉中蛋白质含量一、实验目的1、学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理2、学会全自动凯氏定氮仪的操作，包括样品的消化处理，蒸馏，滴定以及蛋白质含量的计算等二、实验原理蛋白质是含氮的化合物，食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以蛋白质换算系数，得到蛋白质含量。
由于食品中除了蛋白质意外还有其它含氮的物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。
三、实验仪器与试剂1、仪器消解仪，全自动凯氏定氮仪2、试剂浓硫酸，消解片硼酸（40g/L ），氢氧化钠（350g/L ），蒸馏水0.01mol/L 盐酸标准溶液，0.1%甲基红乙醇溶液， 0.1%溴甲酚绿乙醇溶液奶粉四、实验步骤1、样品消化称取两份奶粉（0.5g ）,加入15mL 浓硫酸和一片消化片根据设定的程序进行消解2、样品的吸收和蒸馏消化后的样品冷却后，用全自动凯氏定氮仪进行吸收和蒸馏，馏出液为蓝色或蓝绿色3、样品滴定以0.01mol/L 盐酸标准溶液滴定至浅灰色或者淡红色五、结果计算 100101000140.0⨯⨯⨯⨯⨯=F m c V x X 为样品中蛋白质的含量，g/100g; V 为样品滴定消耗盐酸标准溶液体积， mL; c 为盐酸标准溶液浓度，mol/L; 0.014为1.0 mL 盐酸标准滴定溶液滴定溶液相当的氮的质量，g; m 为样品的质量，F为换算为蛋白质的系数，乳制品为6.38。
六、思考题1、预习凯氏定氮法测定蛋白质的原理2、蒸馏时为什么要加入氢氧化钠溶液，加入量对测定结果有何影响？3、实验过程中，影响准确性的因素有哪些？。
凯氏定氮法测定蛋白质原理及操作
一、概述蛋白质是生命活动中不可或缺的重要物质，其含量的测定在生物化学研究和食品加工领域具有重要意义。
针对蛋白质含量的测定方法有许多种，其中凯氏定氮法是一种经典且常用的测定方法，本文将就凯氏定氮法测定蛋白质的原理及操作进行详细介绍。
二、凯氏定氮法原理1. 基本原理凯氏定氮法是通过测定样品中氨基氮的含量来间接测定蛋白质含量的方法。
蛋白质是由氨基酸构成的，而氨基酸中含有氮元素，故可以通过测定样品中氮元素的含量来推算出样品中蛋白质的含量。
2. 操作步骤（1）样品的预处理：将待测样品进行适当的预处理，通常是将样品中的有机物燃烧成气体，从而将其中的氮元素转化为氮气。
（2）氮气的收集：收集样品燃烧产生的氮气，通常是通过化学吸收剂的吸收来将氮气纯化。
（3）氮气的测定：将纯化后的氮气进行定量测定，得出氮气的含量。
（4）蛋白质含量的计算：根据氮气的含量，通过一定的计算公式来推算出样品中蛋白质的含量。
三、凯氏定氮法操作注意事项1. 样品的选择选择代表性好的样品进行测定，避免样品中含有其他干扰物质，影响测定结果的准确性。
2. 仪器的使用严格按照仪器的操作说明进行操作，保证测定过程的准确性和精确度。
3. 数据的处理对测定得到的数据进行严格的处理，计算过程中不应出现错误，以确保蛋白质含量的测定结果准确可靠。
四、凯氏定氮法测定蛋白质的优缺点1. 优点（1）测定范围广：凯氏定氮法可以适用于各种类型的样品，包括食品、饲料、生物组织等。
（2）测定结果可靠：经过严格的样品预处理和操作步骤，测定结果具有较高的准确性和精确度。
2. 缺点（1）操作繁琐：凯氏定氮法的操作步骤相对繁琐，需要较长的操作时间。
（2）不适用于含氮杂质的样品：如果样品中含有其他氮元素化合物的干扰物质，则可能影响凯氏定氮法的测定结果。
五、结语凯氏定氮法作为一种经典且常用的蛋白质测定方法，其原理和操作步骤相对简单明了，但需要严格遵守操作规范，以确保测定结果的准确性和可靠性。
凯氏自动定氮仪的使用注意事项
凯氏自动定氮仪使用注意事项蛋白质是生命的物质基础，是生命活动的主要承担者。
没有蛋白质就没有生命。
测定食品中蛋白含量，对评价食品的营养价值，合理开发利用食品资源、提高产品质量、优化食品配方及生产过程控制均具有极其重要的意义。
而蛋白质测定最常用的方法就是凯氏定氮法，随着时代的进步和科学技术的发展，托普云农凯氏自动定氮仪能够很好的适应检测工作的需要，不仅高效安全，性价比也很高，型号众多，如今已经在众多领域内得到了应用。
下面是凯氏自动定氮仪使用注意事项、功能特点及技术参数。
一、凯氏自动定氮仪介绍：凯氏自动定氮仪采用国际通用的凯氏定氮法对粮食、饲料、食品、土壤、乳制品、饮料等多样化样品进行蒸馏，几分钟内即可完成，可实现一键式自动添加试剂、自动蒸馏分离样品、自动终止蒸馏。
二、使用凯氏自动定氮仪注意事项：1．仪器应避免安装在阳光直射及过冷、过热或潮湿的地方，通风要好，应有良好的散热条件。
2．仪器前部槽皿中若积有液体，应经常擦净。
3．长期使用后，在加热器上会结有水垢，它将影响加热效率。
4．仪器不能通电时，应检查仪器的电源线是否插好，保险丝是否烧坏；三、凯氏自动定氮仪功能特点：1、6英寸液晶显示屏，汉字菜单，人机对话，操作简单易懂；2、过程控制可采用手动、自动两种模式，随意切换，碱液、硼酸吸收液自动定量加注；3、可存储10组实验程序（用户可自主设置），并可任意调取使用，满足用户的不同需求；4、可任意设置蒸馏时间，蒸馏结束自动报警；5、可实现对蒸馏器及管路的超温超压的测量和保护；6、故障自动检测及声光报警系统智能化设计；7、广泛使用不锈钢等耐腐蚀材料可延长仪器的使用寿命。
四、凯氏自动定氮仪技术参数：。
食品蛋白质测定中凯氏定氮法凯氮测定回收率试验
4.3当三角瓶内溶液达到150 mL左右时，降低定氮仪的接收台，使定氮仪蒸馏出口导管脱离接收液液面。用蒸馏水冲洗蒸馏出口导管，再蒸馏1min后，停止蒸馏。
4.4用硫酸标准滴定溶液滴定，记下滴定体积。
100.7
17
20.35
15
14.993
99.95
18
20.36
15
15.001
100.0
19
20
27.10
20
20.004
100.0
0.07%
20
27.20（舍）
20
20.078
100.4
21
27.12
20
20.018
100.1
22
27.10
20
20.004
100.0
注：表中数据按4d法取舍
计算样液中氮含量时以吸取样品体积为0mL作为空白v0。
4.5同时做空白实验一个。
5．结果计算
v0=0.05ml，v1=4.38ml，v2=4.39ml
0.09690×（4.38-0.05）×0.01401
N1%= ———————————————×100=20.97
0.5607×25/500
0.09690×（4.38-0.05）×0.01401
N2%= ———————————————×100=21.02
10
6.90
5
5.0102
100.2
11
10
13.60
10
9.9833
99.83
0.74%
12
用凯氏定氮法测定食品中的蛋白质含量
溶液呈蓝色，不生成褐色的氢氧化铜沉淀。所以，加入的氢氧
化钠必须过量，并且动作还要迅速，以防止氨的流失。
４．７ 蒸气发生瓶内的水装至 ２／３ 体积并且保持酸性（在蒸气
发生瓶内的水中加入稀硫酸，使之呈酸性，内加甲基橙指示
剂数滴，水应呈橙红色，如变黄时，应该补加酸），以防止在碱
性条件水中游离氨蒸出，使结果偏大。
按图安装好微量定氮蒸馏装置。于水蒸气发生瓶内装水 至 ２／３ 容积处，加甲基橙指示剂数滴及硫酸数毫升，以保持水 呈酸性，加入数粒玻璃珠。在接受瓶中加入 １０ｍｌ ４０ｇ／ｌ 硼酸及 ２ 滴混合指示剂，将冷凝管下端插入液面以下。准确吸取消化 液 １０ｍｌ 于反应管内，经漏斗再加入 １０ｍｌ 氢氧化钠溶液，用 少量蒸馏水冲洗漏斗，夹好漏斗夹并水封，加热煮沸水蒸气 发生瓶内的水进行蒸馏。指示剂变绿色后继续蒸馏 １０ｍｉｎ，将 冷凝管尖端提离液面继续蒸 １ｍｉｎ。 ２．１．３ 滴定
３．１０６ ６．７８１ ５．７２０ ３．６４５ １５．７２０ ４５．４０１ １．１３０ １．２７４
３．１０３ ７．２０２ ６．３４２ ４．４７１ １６．７３３ ４８．４０９ １．１９２ １．５０１
３．１５５ ７．２４５ ６．３４１ ４．４６５ １６．２７４ ４９．４１５ １．２０４ １．５９４
凯氏定氮仪对不同物质蛋白质的测定试验
凯氏定氮仪对不同物质蛋白质的测定试验凯氏定氮仪是实验室的常用设备，一般专用于食品、乳制品、饲料、农副产品等的蛋白质的测定。
其中蒸馏部分是定氮仪的主要功能，本文通过对这部分的改进和利用，扩展了定氮仪新的新用途，发挥一机多用，让我们更方便、快捷的用于检测那些原本使用传统方法来检测的项目。
如：挥发性盐基氮、亚硫酸盐、酒精、甲醛、挥发性酸、氨态氮以及精油、香精香料的萃取等。
文章中还通过对比，汇总出凯氏法、直接蒸馏法测定各项目步骤和选用的各种试剂、指示剂。
凯氏定氮仪是通过测定样品中氮的含量从而计算蛋白质含量的仪器，这种方法是由丹麦化学家凯耶达尔（Johan Kjeldahl）1883年发明的。
可以测定种子、粮食、乳制品、饲料、饮料、土壤、农副产品中的蛋白质以及化工、制药行业的有机氮、化妆品中的尿素含量、环境分析的总氮等等。
其中很重要的一步就是蒸馏，本文正是利用定氮仪的这部分装置，汇总出能够利用蒸馏法检测的项目，为凯氏定氮仪扩展了新的用途。
蒸馏装置是通过热蒸气对样品蒸馏，将反应后的蒸气进行冷凝收集，然后滴定计算。
对全自动定氮仪我们只需要利用直接蒸馏功能，将馏出液通过旁路收集到锥形吸收瓶里即可。
对半自动定氮仪（不含滴定功能）直接就可使用。
所以我们用这种方法省去样品消化过程，直接用于检测挥发性盐基氮、亚硫酸盐、酒精含量、甲醛、挥发性酸、肥料中的氨态氮以及香精香料的萃取等。
1 挥发性盐基总氮的测定挥发性盐基总氮是肉食品新鲜度的一个主要指标，动物性食品（如：肉、鱼类）由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质（三甲胺和二甲胺），可引起食物中毒。
此类物质具有挥发性，在弱碱（氧化镁）性下能与水蒸气一起蒸馏，将氮转化成氨，用硼酸吸收，标准酸HCL 滴定。
计算出挥发性盐基总氮量。
我国食品卫生标准中规定，当鱼类挥发性盐基氮的含量达到30mg/100g 时，即认为是变质。
另外，在饲料工业的发酵过程，由于蛋白质分解而产生一些易挥发的含氮物质，这时挥发性盐基氮含量会升高。
全自动凯氏定氮仪测定食品中蛋白质_蒋江虹
全自动凯氏定氮仪测定食品中蛋白质蒋江虹、革丽亚、麦 琦（武汉市疾病预防控制中心 武汉 430022）摘 要：2300型全自动凯氏定氮仪测定食品中蛋白质的含量，与经典凯氏定氮方法比较，测定结果令人满意。
该方法方便快速，准确度和精密度高。
关键词：消化炉全自动凯氏定氮仪蛋白质蛋白质是生命的物质基础，是构成人体及动植物细胞组织重要成分。
蛋白质在人体内有构成新生组织及制造体内氧化还原所需的酶和激素等生命基础物质的用途及作用。
食品中的蛋白质含量的多少，不仅表示食品的质量，而且也关系着人体健康，因此食品中对蛋白质的含量有一定规定。
食品蛋白质含量测定方法常有，凯氏定氮法、酚试剂法、双缩脲法、及紫外吸收法等。
但存在操作比较繁琐、费时或费力。
目前我们采用的是基尔特克（DIGESTOR.2006）消化装置,全自动凯氏定氮仪测定食品中的蛋白质。
它不仅省时省力、而且数据准确可靠，便于检测和分析研究。
下面谈谈我们使用该仪器的一点体会。
1.材料与方法1.1 仪器与试剂1.1.1 2300型全自动凯氏定氮仪(瑞典FOSS.TECATOR公司生产)。
1.1.2 样品消化炉(瑞典FOSS TECATOR.DIGESTOR.2006型)。
1.1.3 400g/L氢氧化钠溶液，称取4000g氢氧化钠溶于10L水。
1.1.4 0.1042mol/L盐酸标准液。
1.1.5含溴甲酚绿和甲基红的1%硼酸吸收液。
取100g硼酸溶于10L蒸馏水添加7:10甲基红、溴甲酚绿混合指示剂约28ml（根据实际情况酌情处理）1.1.6 基尔特催化片（每片含3.3gk2so4+0.4gCuso4.5H2O）1.1.7 浓硫酸（GR或AR）。
1.2 样品制备称量1.2.1 固体样品:将样品磨细均匀称取0.2-2.0g。
1.2.2 半固体样品糊状样品:摇匀称取0.5-2.0g。
(*对含糖量较高、水分多样品先放入消化管在120C0消化器蒸至近干后消化。
防止发泡、爬壁、粘贴现象。
全自动凯氏定氮仪测定大米蛋白质
全自动凯氏定氮仪测定大米蛋白质郭应时;曹小彦;邹杭君;郭明义;张威【摘要】The method of measuring rice protein with fully automatic Kieldahl azotometer by single-factor experiment and orthogonal experiment was investigated.It defines the best experiment conditions through examining such key factors as sample weight,additive a mount of sulfuric acid,digesting temperature and digesting time.The results showed that when the sample weight is 0.40 g,the added amount of sulfuric acid was 12 mL,digested at is 420 ℃ and for 50 min,the experimenta l effect was the best.The standard deviations of 6 determinations of 5 kinds of rice were 0.050 2～0.101 1,and the recoveries of nitrogen of urea were99.9％～ 100.5％.The ratios of protein obtained by semi-micro distillation method were between 1.023 4～1.079 4,and the time of determination could be shortened to 1 hours.The method was found stable and accurate.%研究全自动凯氏定氮仪测定大米蛋白质的方法,通过考查样品质量、硫酸添加量、消化温度、消化时间等关键因素,确定最佳试验条件.结果表明:当样品质量为0.40 g,硫酸添加量为12 mL,消化温度为420℃,消化时间为50 min时,5种大米蛋白质测定值(n=6)的标准偏差为0.050 2～0.101 1,尿素的氮回收率为99.9％～100.5％,该法与微量蒸馏法测定蛋白质结果的比值为1.023 4～1.079 4,测定时间缩短到1h.说明该方法稳定、准确、快速.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2017(033)011【总页数】5页(P67-71)【关键词】蛋白质;全自动凯氏定氮仪;样品质量;硫酸添加量;消化温度;消化时间【作者】郭应时;曹小彦;邹杭君;郭明义;张威【作者单位】广电计量检测[湖南]有限公司,湖南长沙410007;广电计量检测[湖南]有限公司,湖南长沙410007;广电计量检测[湖南]有限公司,湖南长沙410007;长春市食品药品监督管理局,吉林长春130000;广电计量检测[湖南]有限公司,湖南长沙410007【正文语种】中文目前已报道的蛋白质测定方法可分为两类：间接法和直接法。
凯氏定氮仪说明书
凯氏定氮仪说明书目录一、概述 ..................................................................... ..................... 1 二、主要性能 ..................................................................... .............. 2 三、仪器部件名称 ..................................................................... .. 3 四、仪器安装方法 ..................................................................... .. 4 五、使用操作 ..................................................................... ................... 5 六、样品的自动测试 ..................................................................... ...... 12 七、测试记录的查询 ..................................................................... ...... 17 八、仪器的日常保养 ..................................................................... ...... 18 九、仪器常见的故障及处理办法 ....................................................... 19 十、附则 ..................................................................... ................... 21 十一、注意事项...................................................................... . (21)一、概述1.应用凯氏定氮法是测定氮—蛋白质的经典方法。
食品中蛋白质含量测定(凯氏定氮法)
实验:食品中蛋白质含量测定（凯氏定氮法）一、目的与要求1、学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理。
2、掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。
二、实验原理蛋白质是含氮的化合物。
食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。
三、仪器与试剂（一）试剂（所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制）1、硫酸铜（CuSO4·5H20）2、硫酸钾3、浓硫酸（密度为1.8419g/L）4、2%硼酸溶液（20g/L）5、40%氢氧化钠溶液（400g/L）6、0.01mol/L盐酸标准滴定溶液。
7、混合指示试剂：0.1%甲基红乙醇溶液1份，与0.1%溴甲酚绿乙醇溶液5份临用时混合。
（二）仪器微量定氮蒸馏装置：如图3-所示。
图3-微量凯氏定氮装置1、电炉；2、水蒸气发生器（2L平底烧瓶）；3、螺旋夹a；4、小漏斗及棒状玻璃塞（样品入口处）；5、反应室；6、反应室外层；7、橡皮管及螺旋夹b；8、冷凝管；9、蒸馏液接收瓶。
四、实验步骤1、样品消化称取样品约0.3g（±0.001g），移入干燥的100mL凯氏定氮烧瓶中，加入0.2g硫酸铜和6g硫酸钾，稍摇匀后瓶口放一小漏斗，加入20mL浓硫酸，将瓶以450角斜支于有小孔的石棉网上，使用万用电炉，在通风橱中加热消化，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，继续加热0.5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷后，无损地转移到100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用，即为消化液。
一般消解温度都设在240度及240度以上，如果想快速消解可以适当提高温度甚至可以用最大温度进行消解试剂空白实验：取与样品消化相同的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定容至100mL，得试剂空白消化液。
凯氏定氮法测定食品中蛋白质的操作要点及注意事项、常见问题解答汇总！
凯氏定氮法测定食品中蛋白质的操作要点及注意事项、常见问题解答汇总！蛋白质被认为是构成生物体细胞组织的重要成分。
食物中的蛋白质是人体中氮的唯一来源，具有糖类和脂肪不可替代的作用。
含氮量是蛋白质区别于其他有机化合物的重要标志。
在检验食品中蛋白质时，通常是先检定出食品中的总氮量，然后乘以蛋白质换算系数，以此得到蛋白质含量。
凯氏定氮法由Kieldahl于1883年首先提出，至今仍被作为标准检验方法。
凯氏定氮法测定蛋白质分为样品消化、蒸馏、吸收和滴定过程。
原理向样品中加入浓硫酸和催化剂，充分混匀，然后加热消化分解，样中碳和氢被氧化成二氧化碳和水，其中的有机氮转化为硫酸铵。
碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。
样品消化浓硫酸具有脱水性和氧化性，可使有机物中的碳、氢被氧化为二氧化碳和水，蛋白质会分解为氨，然后氨与硫酸结合生成硫酸铵。
通常加入硫酸钾和硫酸铜作为催化剂来加快蛋白质分解。
硫酸钾可以提高溶液的沸点，一般情况下，纯硫酸的沸点在340 ℃左右，但是在添加硫酸钾后，可提高至400 ℃以上。
提高温度使有机物加快分解。
但是不能加入过多的硫酸钾，否则会因为温度过高，使生成的硫酸铵发生热分解成氨而造成损失。
硫酸铜除作为催化剂外，还可以指示消化终点的到达，有机物全部消化完全后，溶液呈现清澈的蓝绿色，硫酸铜还可以做蒸馏时碱性反应的指示剂。
蒸馏消化液中的硫酸铵在碱性环境下会转化成氨。
为防止水中微量的氨气受热逸出，影响测定结果，所以水蒸气发生器中的水要保持酸性。
硫酸铵是一种强酸弱碱盐，需要足够的碱液使结合态的氨完全反应并释放出来，这个过程中的氢氧化钠一定要过量，过量的氢氧化钠会与硫酸铜生成蓝色的氢氧化铜沉淀，氢氧化铜受热分解成黑色的氧化铜沉淀。
检验蒸馏是否完成，可用奈氏试纸法，NH4+或NH3遇奈氏试剂会反应生成棕红色的碘化汞铵化合物。
吸收加热蒸馏放出的氨可用硼酸溶液吸收，硼酸有吸收氨的作用，又因其呈微弱酸性，不影响下一步滴定时指示剂的变色反应。
凯式定氮(即食品中蛋白质营养学评价)讲义----
用凯式定氮法测定样品中的氮含量一、实验目的1、掌握凯氏定氮仪的使用方法；2、掌握凯氏定氮法测定样品总氮量的基本原理和操作；3、用凯氏定氮仪测定生物样品中氮的含量或粗蛋白的含量。
二、实验原理样品中含氮有机物经浓硫酸加热消化，硫酸使有机物脱水，然后有机物碳化生成碳，碳将硫酸还原为SO2，本身则变成CO2，SO2使N还原为NH3，本身则氧化为S2O3而消化过程中生成的H2，又加速了NH3的形成。
在反应过程中，生成的H2O和S2O3溢出，而NH3则与H2SO4结合成（NH4）2SO4存于溶液中，加和NaOH，并蒸馏，使NH3溢出，用H3BO3吸收后，用已知摩尔浓度的酸滴定，测出样品中的全氮含量，乘以氮与蛋白质的换算系数（大多数食物换算系数为6.25,乳制品为6.38,面粉为5.70），即为粗蛋白质的含量。
三、实验器材凯氏定氮系统（foss8200）：消化装置、蒸馏装置试剂配制均使用分析纯级试剂：浓硫酸、加化剂（K2SO4与CuSO4·5H2O质量比1：15混匀研磨经40目筛过滤而得）、40% 氢氧化钠、4% 硼酸、无水硫酸铵、0.05M 盐酸、混合指示剂（100毫克甲基红与500毫克溴甲酚绿分别溶于100毫升无水乙醇后以1：1比例混合而成）、无水碳酸钠、蒸馏水饱和硼酸：取6g硼酸加蒸馏水定容到100ml，加热溶解，待冷却后有结晶析出，说明溶液已饱和。
四、实验步骤㈠、样品制备使用适宜的实验室粉碎磨或粉碎机把样品粉碎。
称量0.6g样品到250ml的消化管中，精确到0.1mg。
㈡、消化用称量纸称好待测样品后，将称量纸把待测样品包裹严实一起放入消化管（防止待测样品撒在消化管壁），在消化管中加入6g加化剂，14ml浓硫酸。
轻轻的摇动，将样品浸湿。
打开消化装置电源，将消化管就位放好，盖上排废罩，打开水抽气泵或排废装置。
设置消化时间t = 60min，温度T = 420 o C。
消化60min后，将消化管连同排废罩一起取出，关闭消化电源，冷却15min。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
采用模块式消化、全自动凯氏定氮仪测定食品中蛋白质
王丹红l，周黎榕l，傅弘毅2，朱曙梅l
（1．福建出入境检验检疫局，福建，福州350001；2．马尾出入境检验检疫局，福建，福州350014）
蛋白质为复杂的含氮有机化合物，是各种氨基酸以肽键连接而成，各类食品的蛋白质含量很不均匀，蛋白质含量是评价食物营养价值的重要指标之一。
在食品中蛋白质含量测定方法中最常用最基本的方法是凯氏定氮法，在GB/T5009.5-2003中也将其定为法定检测方法，凯氏定氮法有常量凯氏氮法和微量凯氏定氮法。
采用经典的凯氏定氮法比较费时费力，采用模块式消化、全自动凯氏定氮仪测定食品中的蛋白质，该方法比经典法快速，且数据准确可靠。
1 材料与方法
1．1 仪器与试剂
1．1．1 主要仪器：Kjeltec TM 2300型全自动凯氏定氮仪，DS-20消化炉及排废装置(均为瑞典FOSS TECATOR公司生产)，样品磨，电子天平(准确至0.0001克)。
1．1．2 主要试剂：浓硫酸；硫酸钾；硫酸铜；盐酸标准溶液0.1027 mol/L；氢氧化钠溶液400g/L；1％溴甲酚绿和0.7％甲基红混合指示剂；1％硼酸吸收溶液；硫酸铵；蔗糖。
所用试剂均为优质品。
1．2 测定方法
称取适量样品放入消化管中，加入0.2g硫酸铜，6g硫酸钾及约12 mL浓硫酸慢慢摇动将样品浸湿。
把消化管放入已预热至42℃的加热模块中，将抽气泵打开到最大。
5 min后，关小抽气泵至酸雾刚好充满排废罩，在试管中形成冷凝环。
约60 min样品消化至透明蓝绿色液体，取出冷却至室温。
将消化管放入2300型自动凯氏定氮仪，关上安全门，待仪器自动蒸馏、滴定、计算并打印结果。
2 结果与讨论
2．1 精密度
取3种蛋白质含量不同的样品，每种样品平行测定6次，从测定结果可见，该仪器的精密度良好（见表1）。
表1 仪器精密度测定
样品名称蛋白质含量
(g/100g)
平均值
(g/100g)
相对标准差
(RSD%)
纯牛奶 3.18 3.17 3.20 3.19 3.18 3.18 3.18 0.34 大豆31.25 31.46 31.38 31.53 31.62 31.39 31.44 0.41 螺旋藻粉67.54 67.78 67.58 67.64 67.69 67.82 67.68 0.16
2．2 准确度
做数次氮回收率测定，检验操作过程和设备的准确性。
2．2．1 氮的损失：用0.12g硫酸铵和0.87g蔗糖的取样量，按样品准备步骤加入所有其他试剂，和样品分析一样的方法消化和蒸馏。
结果见表2，从表中可知平均回收率达99.5％。
表2 氮的回收率
次数硫酸铵量(g) 理论氮含量(%) 实测氮含量(%) 回收率(%)
1 0.1206 21.21 21.10 99.48
2 0.121
3 21.21 21.15 99.72
3 0.1223 21.21 21.09 99.43
4 0.1211 21.21 21.08 99.39
5 0.1228 21.21 21.11 99.53
2．2．2 蒸馏和滴定效率：采用0.12g硫酸铵和0.67g蔗糖的取样量，省略消化步骤，用2300型自动定氮仪测定其氮含量，测定5次，平均回收率大家100.4%。
2．2．3 消化效率：用0.1g盐酸赖氨酸和0.87g蔗糖的取样量，按样品准备步骤加入所有其他试剂，和样品分析一样的方法消化和蒸馏。
结果见表3，表中可知回收率达99％。
表3 消化效率
次数盐酸赖氨酸量(g) 理论氮含量(%) 实测氮含量(%) 回收率(%)
1 0.104
2 15.34 15.20 99.09
2 0.1049 15.34 15.21 99.15
3 0.1007 15.3
4 15.24 99.35
4 0.1024 15.34 15.19 99.02
5 0.1034 15.34 15.22 99.22
从这3个回收率可知，模块式消化、2300型全自动凯氏定氮仪有较高的准确度。
2．3 仪器法与经典法比较
2．3．1 两种消化系统的比较：从表3可以看出，对于同一样品和称样量，模块式消化系统比传统消化系统，每个样品蒸发而损失的酸从14.4 mL降低2.4 mL （按一样品两个重复计算，下同）。
酸用量减少一半，消化时间大大地缩短。
且采用模块式消化系统DS-20一次性可以消化20个样品，大大提高工作效率。
表4 两种消化系统的比较
项目传统消化系统模块式消化系统需用的酸总量(ml) 30.0 10
蒸发损失的酸(ml) 7.2 1.2
消煮时间2-3小时45-60分钟
加热控制无控温，单个加热带控温的模块式消化炉
2．3．2 两种方法测定结果比较：分别用两种方法测定螺旋藻、姬松茸、纯牛奶、皮蛋和盐渍鱼籽的蛋白质，结果见表5（表中结果均为两次测定的平均值）。
从表中可见，测定结果的误差均在允许范围内。
表5 两种方法测定食品蛋白质结果的比较
样品经典法(%) 仪器法(%) 2法偏差相对偏差(%) 螺旋藻粉71.25 71.69 0.44 0.31
姬松茸32.58 32.26 -0.32 0.49
纯牛奶 3.23 3.31 0.08 1.22
皮蛋13.12 13.36 0.24 0.91 盐渍鱼籽25.78 26.01 0.23 0.44
3 结论
采用模块式消化系统大大地缩短消化时间，节约酸的用量，操作简便；用自动定氮仪测定食品中蛋白质与经典法比较，结果令人满意，且大大提高了分析速度。
4 注意事项
●消化时应注意，样品消化液必须含有过量的硫酸，以防止氨的损失。
●消化时间要掌握好，时间过长会引起氨的损失；消化时间不够，消化不完全
也会导致总氮量偏低。
●对于高脂肪的物质（脂肪＞10％），所需酸的量要多2～3毫升，消化时间也
相应长一些；或加入酸后，隔夜再消化。
如果冒泡成问题，可以缓慢地加入
3 mL 30～35％过氧化氢来减少冒泡，待过氧化氢反应后才能进行下一步操
作。
●硫酸钾与硫酸用量的比值是消化成功的关键，它决定酸的沸点，也决定消化
所需的时间。
但比值不宜过大，一般比值为1:2。
比值过大，沸点太高，生成的硫酸氢铵就分解放出氨，使氮损失。