培养基及无菌操作(一)导学

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导学案

阜宁县第一高级中学高二年级生物学科导学案第1课微生物的实验室培养主备人：张海龙审核人：程玉荣第1课时（总第7课时）一、学习目标1.了解有关培养基的基础知识，掌握无菌操作技术的有关内容。

2.了解消毒和灭菌常用的方法及二者的区别。

二、重点难点：配置培养基无菌技术微生物接种三、自主学习（一）、培养基1．概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基质叫培养基。

可分为培养基和培养基。

2．营养构成：各种培养基一般都含有、、和，此外还要满足微生物生长对、以及的要求。

3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌时需将培养基PH调至、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供条件。

〖思考1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？【补充1】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。

氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。

含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。

总结：按培养基的物理性质、化学性质和用途分类（二）、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：(1)获得纯净培养物的关键是，具体操作如下：1．对实验操作的、操作者的和进行。

2．将用于微生物培养的、和等器具进行。

3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行。

4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。

(2)消毒和灭菌1．消毒是指。

常用的方法有、、消毒法。

2．灭菌是指。

常用的方法有：、、灭菌。

分别适用于那些用具？四、合作探究〖思考2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？〖思考4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是；随后关闭排气阀继续加热，气压升至，温度为，并维持min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至时打开锅盖，其目的是防止五、检测提升1．下列有关培养基的叙述正确的是……( )A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌2.不同培养基的具体配方不同，但一般都含( )A．碳源、磷酸盐和维生素 B．氮源和维生素C．水、碳源、氮源和无机盐 D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素3．获得纯净培养物的关键是……………( )A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 B．接种纯种细菌 C．适宜环境条件下培养 D．防止外来杂菌的入侵4．下列常用的无菌操作中错误的是……( )A．用酒精擦拭双手 B．用氯气消毒水源c．实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭5．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( )A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板6．有关倒平板的操作错误的是…………( )A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 c．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上 D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置7．有关平板划线操作正确的是…………( )A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞c．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可D．最后将平板倒置，放人工培养箱中培养8．作为自养生物唯一碳源的是（）A糖类 B 石油 C 二氧化碳 D 花生粉饼9．涂布平板操作需要用到………………( )A．接种环、滴管、酒精灯 B．接种环、移液管、酒精灯C．涂布器、移液管、酒精灯 D．涂布器、接种环、酒精灯阜宁县第一高级中学高二年级生物学科导学案第1课微生物的实验室培养主备人：张海龙审核人：程玉荣第2课时（总第8课时）一、学习目标1.学会以大肠杆菌为材料进行微生物培养与分离纯化的方法。

无菌技术的操作流程

无菌技术的操作流程一、无菌技术的基本原理无菌技术是通过消灭或抑制微生物的生长繁殖，从而保证实验环境或产品的无菌状态。

其基本原理包括：采用无菌材料和设备、严格控制操作环境、采取无菌操作方法、使用无菌培养基和培养条件、进行无菌检测等。

二、无菌技术的操作步骤（一）准备无菌材料无菌技术的第一步是准备无菌材料，包括培养基、培养皿、试管、移液器、培养瓶等。

这些材料要经过高温高压灭菌，确保其无菌状态。

（二）准备无菌操作环境无菌技术的操作环境也需要保持无菌。

首先要进行有效的空气净化，关闭门窗，打开洁净工作台或灭菌柜。

然后在工作区域内进行彻底的清洁消毒，使用酒精或其他消毒剂擦拭操作台面、手套箱和实验器具。

（三）无菌操作方法无菌技术的核心是无菌操作方法。

首先要正确佩戴手套和口罩，以避免人员对实验环境的污染。

然后进行手部消毒，使用酒精或其他消毒剂彻底清洁双手。

在进行无菌操作时，要注意避免接触非无菌物品，尽量保持双手不离开工作区域。

（四）制备无菌培养基制备无菌培养基是进行微生物培养的重要步骤。

首先要准备好所需的培养基成分，然后按照一定比例将其溶解在适量的蒸馏水中。

接下来将培养基装入试管或培养瓶中，用高温高压灭菌器对其进行灭菌处理。

（五）接种微生物接种微生物是进行无菌培养的关键步骤。

首先要选择合适的接种方法，常用的有平板接种法、斜面接种法和液体接种法等。

然后将待接种的微生物用无菌技术转移到培养基上，注意避免污染。

（六）培养微生物接种微生物后，要进行培养以促进其生长繁殖。

培养条件包括适宜的温度、湿度和光照等因素。

在培养过程中，要避免对培养基的污染，定期观察和记录微生物的生长情况。

（七）无菌检测无菌技术的最后一步是进行无菌检测，以确认实验环境或产品的无菌状态。

常用的无菌检测方法有菌落计数法、涂布法和生物指示剂法等。

通过这些方法，可以判断培养基是否受到污染，进而采取相应的措施。

三、无菌技术的注意事项（一）注意个人卫生在进行无菌操作时，要注意个人卫生，佩戴手套和口罩，保持双手的清洁，并避免对实验环境的污染。

无菌操作技术讲义(一)(二)

无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制实验目的：1、掌握实验用器皿的清洗、包扎方法2、了解常用的灭菌方法—干热灭菌、湿热灭菌、紫外线灭菌及化学灭菌3、掌握培养基的配制一、实验用器皿的清洗及洗涤液的配制实验中所使用的玻璃仪器及塑料器皿清洁与否，直接影响实验结果，往往由于器皿的不清洁或被污染而导致较大的实验误差，甚至会出现相反的实验结果。

因此，实验用器皿洗涤清洁工作是十分重要的基本操作，是做好实验的前提及实验成败的关键之一。

1、洗涤液的种类及配制（1）0.5%去垢剂溶液（常用洗涤液）。

去垢剂是能使蛋白质变性的一类化学物。

去垢剂(表面活性剂)是一类即具有亲水基又具有疏水基的物质，一般具有乳化、分散、和增溶作用，可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型，中性去垢剂在蛋白提取钟应用的较多。

[生化]去垢剂（detergent）A．中性去垢剂又称非离子表面活性剂，对蛋白质的变性作用影响较少，宜于蛋白质或酶提取之用。

一般市售中性去垢剂有聚乙二醇类，如PEG200；多元醇类表面活性剂，如山梨醇、司盘类和吐温类；聚氧乙烯脂肪醇醚，如苄泽类、平平加类；聚氧乙烯烷基苯酚醚，如Igepal CO、乳化剂OP、Triton、Pluronic(用作消泡剂、润湿剂、增溶剂)、泡敌。

中性去垢剂作用后可通过Sephadex LH-50柱除去；也可直接上DEAE-Sephadex柱层析分离目的蛋白，不必先除去去垢剂。

B．阴离子去垢剂常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠。

前者可促进核蛋白的溶解，将核酸释放出来，并对核酸酶有一定抑制作用，常用于核酸的提取。

C．阳离子去垢剂如洁尔灭、新洁尔灭、CTAB、CPC、ZEPH、克菌定、消毒净（TMPB）、杜灭芬等，消毒灭菌类居多。

D．天然表面活性剂又称为生物表面活性剂，包括种类较为广泛，如各种树胶（阿拉伯胶、杏胶、桃胶、果胶）、明胶、皂甙、卵磷脂、豆磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、胆甾醇、胆酸类、多糖类（如环糊精）等。

高中生物专题2 课题1 第1课时培养基和无菌技术练习(含解析)新人教版高二选修1生物试题

第1课时培养基和无菌技术题型一培养基成分及种类分析1．不同培养基的具体配方不同，但所有培养基都含有( )A．碳源、磷酸盐和维生素B．氮源和维生素C．水、碳源、氮源和无机盐D．水、碳源、氮源和氧气答案 C解析虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐。

在某些特定培养基中需要维生素等特殊营养物质或氧气等。

2．下列叙述正确的是( )A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个菌体答案 A解析按物理状态不同，培养基可分为液体培养基、半固体培养基、固体培养基，按用途不同，培养基又可分为选择培养基和鉴别培养基，B错误；固体培养基由于添加了凝固剂琼脂，所以即使加入少量水也不可能制成液体培养基，C错误；单个菌体是肉眼看不见的，由同种微生物的众多菌体构成的菌落是肉眼可以看见的，D错误。

3．不同的微生物对营养物质的需求不同。

下列叙述正确的是( )A．配制培养基时都应该加糖类作为碳源B．同一种物质不可能既作碳源又作氮源C．碳源物质一定也是微生物生长所需能源物质D．氮源物质为该微生物提供必要的氮元素答案 D解析不同的微生物对碳源的要求不同，如自养型微生物不需糖类作碳源，A错误；对异养微生物来说，蛋白胨既是碳源，又是氮源，B错误；以糖类等有机碳作碳源时，碳源物质往往也是能源物质，以CO2等无机碳作碳源物质时，碳源物质不是能源物质，C错误；氮源物质在微生物培养中的主要作用是为微生物提供氮元素，D正确。

题型二无菌操作4．关于灭菌和消毒的理解，不正确的是( )A．灭菌是指杀灭物体内外一切微生物，包括芽孢和孢子B．实验者的双手用酒精消毒C．接种环用灼烧法灭菌D．常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌和紫外线照射等答案 D解析灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)，A 正确；实验者的双手用酒精消毒，B正确；金属接种工具常用灼烧灭菌法灭菌，C正确；微生物的培养过程中常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等，紫外线照射属于消毒方法，D错误。

微生物培养及实验基本操作技术

微生物培养及实验基本操作技术一、培养基配制培养基是指人工配制的、适合于微生物生长繁殖或累积代谢产物所需的各种营养物的混合基质。

配制培养基是进行微生物检验工作的基础,甚至是任何与微生物有关工作的基础。

注意事項–灭菌锅的使用①加水盖过底部铁板—②放入东西—③关门—④調整溫度時間—⑤关紧泄压阀灭菌結束後，等压力降回零時才可打開門進入灭菌锅之物品，蓋子不可關太緊或太鬆拿滅菌後物品請記得帶耐熱手套培养基中的主要成分及其作用：营养物质：N源、C源、无机盐、生长因子、水常用的N源：蛋白胨、牛肉膏、肉浸汁、酵母膏常用的C源：糖、醇类物质（单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖；多糖：淀粉、纤维素、菊糖；醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油）水：用蒸馏水，不能用自来水凝固剂：琼脂、明胶、血清等抑制剂：1、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率2、种类：盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素指示剂1、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质和含氮化合物，产酸产碱的能力。

2、常用的指示剂：酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等。

培养基的类型：●根据培养基的物理状态来区分：1、液体培养基：主要用于增菌培养、鉴别性培养2、固体培养基：用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定3、半固体培养基：观察微生物的动力，有时用来保藏菌种4、脱水(商品)培荞基：脱水培养基也称为商品培养基、预制干燥培养基。

●将各种营养成分按比例配制完全,制成脱水的干粉状,装瓶出售;使用时只需按比例加人定量的水溶化、灭菌便可。

●根据培养基的用途来区分：➢增殖培养基选择培养基鉴别培养基1、增殖培养基：在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基称为增殖培养基。

无菌技术操作手册

无菌技术操作手册
前言
无菌技术是微生物学和生物制药学中的基础技术之一。

本操作
手册旨在向初学者介绍无菌技术的基本概念和操作方法，确保实验
室操作过程中的无菌环境，保证实验室实验的准确性和可靠性。

实验室准备
在进行无菌实验前，必须将实验室清洁卫生。

实验室清理包括
擦拭工作台面，清洗培养皿和培养管等实验器具。

在实验开始前，
必须进行消毒操作，包括工作台面、培养皿和培养管。

无菌技术操作步骤
第一步：穿戴实验室衣物
在进行任何实验工作之前，穿着适当的实验室衣服（包括实验服、实验鞋、手套等）。

务必将实验室衣物彻底清洗、烘干、消毒。

第二步：准备工作台
使用70%乙醇或1%双氧水进行消毒，擦拭实验台面时，应先从边缘开始，由外向内反复擦拭，这样可以保证台面的整体清洁。

第三步：准备培养皿和培养管
用消毒棉球沾取75%酒精，擦拭培养皿和培养管表面，在灯火下进行操作。

第四步：接种
将消毒过的工具取出，接种细菌。

第五步：封闭培养皿和培养管
将培养皿和培养管紧密地密封，防止细菌外来污染，放入培养箱或恒温培养箱中培养。

实验室注意事项
1. 实验器材必须在灯下进行操作，防止外界细菌的干扰。

2. 实验室内必须保持高度清洁，切勿将实验物品随意放置。

3. 实验过程中尽可能不将手伸入操作台内，若必须进行操作则需要在已清洗并消毒过的条件下操作。

以上为无菌技术操作手册的简要介绍，仅供参考。

在无菌实验的操作过程中，操作规范和操作规程必须严格遵守，以保证实验结果的准确性和可靠性。

培养基及无菌操作检测

培养基及无菌操作检测一、培养基培养基是用于培养和繁殖微生物的一种均质物质。

它提供了微生物生长所需的营养物质和环境条件。

培养基的种类繁多，根据不同的需求可以选择不同的培养基。

1.基本培养基：基本培养基可以支持大多数微生物的生长。

常见的基本培养基有葡萄糖琼脂培养基、肉汤培养基和大肠杆菌培养基等。

2. 选择性培养基：选择性培养基通过添加特定的抑制剂或诱导剂来选择性地培养其中一种或几种特定的微生物。

例如，大肠杆菌用MacConkey琼脂培养基，能选出革兰阴性菌。

3.差异培养基：差异培养基可以通过其中一种指示剂的变化来区分不同的微生物。

例如，革兰氏染色后，革兰阳性菌染成紫色，而革兰阴性菌染成红色，可以用来区分不同的菌株。

无菌操作检测是用于确保实验环境和实验物品的无菌状态，以避免微生物污染并保证实验结果的准确性和可靠性。

1.空气检测：空气中的微生物是实验室中最常见的污染源之一、可以使用空气采样器或空气意器进行采样，然后将采样物培养在琼脂培养基上，通过菌落计数或形态学鉴定，来检测空气中的微生物数量和种类。

2.高压蒸汽灭菌器检测：高压蒸汽灭菌器是常用的无菌操作设备，用于对实验器皿、培养基和试剂进行灭菌处理。

使用有色孢子检测器可以检测高压蒸汽灭菌器的灭菌效果，确认灭菌温度和时间是否达到标准要求。

3.培养基质量检测：培养基的质量直接关系到微生物的生长情况。

可以通过菌落计数法、倒置培养法、加试剂法等方法来测定培养基的质量，确保培养基无菌和营养成分的完整性。

4.器皿和器械检测：在无菌操作中，实验器皿和器械都需要经过灭菌处理，然后进行使用。

可以使用平板法或搅拌法将器皿和器械表面刮取样品，然后进行培养和生长，通过菌落计数或形态学鉴定来检测器皿和器械的无菌状态。

5.人员手部检测：人员的手部是微生物传播的重要渠道。

可以使用手部采样器或手部印迹板进行采样，然后在琼脂培养基上培养，通过菌落计数或形态学鉴定来检测手部的微生物污染情况。

培养基及一般操作技术

氯化钠等。
成分定量检测
02
通过滴定、分光光度计等方法测定培养基中成分的含量，如使
用酚酞滴定法测定氢氧化钠含量等。
成分调整
03
根据微生物生长需求和培养基成分的检测结果，调整培养基的
配方和浓度，以满足微生物生长的需要。
05
培养基操作技术的注意事项
防止污染和交叉污染
1 2
严格清洁和消毒工作
在操作前，确保工作区域和使用的工具都经过严格的清洁和消毒，以减少污染的风险。
培养基及一般操作技术
目录 Contents
• 培养基的种类与特性 • 培养基的制备与保存 • 微生物接种与培养 • 培养基的观察与检测 • 培养基操作技术的注意事项
01
培养基的种类与特
天然培养基是指利用天然物质制成的培养基，如肉汤、血清等。
特点
天然培养基的营养成分较为丰富，能够满足大部分微生物的生长需求。
3. 调节pH值至适宜范围。
4. 进行高温灭菌处理。
培养基的灭菌与保存
01
02
03
04
高压蒸汽灭菌
将培养基置于高压蒸汽灭菌锅中，在121℃下灭菌20-30分
钟。
干热灭菌
将培养基置于烘箱中，在160170℃下加热2小时。
过滤除菌
将培养基通过细菌过滤器，以除去微生物。
保存方法
灭菌后的培养基应保存在干燥、阴凉处，避免直接阳光照射，并在规定的有效期内使用。
微生物接种数量与密度
接种数量
根据微生物的种类和培养基的营养需求，确定适宜的接种数量。
接种密度
在液体培养基中，通过调整微生物的浓度来控制接种密度。
微生物培养温度与时间

2、第1章第2节第1课时微生物的基本培养技术讲义

第2节微生物的培养技术及应用第1课时微生物的基本培养技术一、培养基的配制1．培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

2．培养基的种类3．培养基的营养组成各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质，此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。

二、无菌技术1．获得纯净的微生物培养物的关键：防止杂菌污染。

2．消毒和灭菌消毒灭菌概念使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子常用方法煮沸消毒法、巴氏消毒法、酒精消毒法、紫外线消毒法湿热灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌适用对象操作空间、双手等接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。

(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。

(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。

(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。

三、微生物的纯培养1．纯培养：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。

由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。

2．微生物纯培养的步骤：微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。

3．酵母菌的纯培养(1)菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。

(2)获得单菌落的方法：平板划线法和稀释涂布平板法。

判断对错(正确的打“√”，错误的打“×”)1．液体培养基含有水，而固体培养基不含水。

( ) 2．获得纯净微生物培养物的关键是防止杂菌污染。

() 3．用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基都要进行消毒。

() 4．培养基分装到培养皿后进行灭菌。

() 5．平板冷凝后应将平板倒置，防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染。

高中生物课件21微生物的实验室培养

高压蒸汽灭菌法
紫外线消毒化学药物消毒
主要方法
高压蒸汽灭菌锅内 ,100 kPa,121 ℃ 下持续加热 15~30 min
30 W 紫外线灯照射 30 min
用体积分数为 70%~75%的乙醇、碘酒涂抹等
应用范围
续表
培养基等
接种室空气等
用于皮肤、伤口、动植物组织表面消毒,手术器械、玻璃器皿等消毒
专题 2 微生物的培养与应用
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课题 1 微生物的实验室培养
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课前预习导学
目标导航
学习目标
1.了解有关培养基的基础知识。 2.进行无菌技术的操作。 3.进行微生物的培养。
重点难点重点:
1.进行无菌技术的操作。 2.进行微生物的培养。难点:正确进行无菌技术的操作。
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预习导引
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3.学习教材第 18 页平板划线操作,思考下列问题。 (1)为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗? 提示:操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物;以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到单菌落。划线结束后需要灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免菌种污染环境和感染操作者。
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3.培养基灭菌后,需要冷却至 50 ℃左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度?
提示:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。

培养基的配制与灭菌技术

培养基的配制与灭菌技术⼀、培养基的配制与灭菌技术培养基是将微⽣物⽣长繁殖所需要的各种营养物质，⽤⼈⼯的⽅法配制⽽成的⽤于培养微⽣物的营养基质。

培养基种类很多，不同的微⽣物所需培养基不同。

就培养基中营养物质的来源可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。

按培养基特殊⽤途可分加富培养基，选择培养基、鉴别培养基。

按培养基制成后的物理状态可分为固体培养基，液体培养基和半固体培养基。

固体培养基是在液体培养基中加⼊1.5 %-2.0 %琼脂作凝固剂; 半固体培养基则加⼊0.5 %-0.8 %的琼脂。

⼀般培养基除含有⼤量⽔分外, 还含有碳素、氮素、⽆机盐类和维⽣素等。

此外, 由于徽⽣物⽣长繁殖必须在最适的酸碱度范围内, 才能表现出最⼤的⽣命活⼒, 因此应根据不同种类的徽⽣物. 将培养基调节到⼀定的pH值范围。

培养基配制后还必须进⾏灭菌, 灭菌是指杀死或消灭所有微⽣物, 包括营养体、孢⼦和芽孢。

灭菌的⽅法很多，可分为物理⽅法与化学⽅法两⼤类。

物理⽅法包括湿热灭菌、⼲热灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等; 化学⽅法主要是利⽤化学药品对接种室空间、⽤具和其它物体表⾯进⾏灭菌与消毒。

消毒⼀般是指消灭有害微⽣物的营养体和病原菌。

(⼀) 培养基的配制⽅法⼀般培养基的配制⽅法如下 (各种天然培养基的配制⽅法略有不同)：l. 按照配⽅的组分及⽤量先分别称量并配成液体；2. 根据要求调到⼀定的酸碱度(pH值)；3. 若要制成固体则加⼊2%琼脂并加热融化；4. 根据需要的数量分装⼊试管或三⾓瓶中, 加上棉塞或盖上纱布；5. 包扎好灭菌后备⽤。

配制斜⾯培养基的⼀般操作步骤为：称量→溶解→调pH值→加琼脂→过滤→分装→加棉塞→包扎→灭菌→摆斜⾯→⽆菌检查。

(图9-7)(⼆) 培养基及常⽤器⽫的灭菌培养微⽣物常⽤的玻璃器具主要有试管、三⾓瓶、培养⽫、吸管等, 在使⽤前必须先进⾏灭菌, 使容器中不含任何杂菌；培养微⽣物⽤的营养基质(培养基), 在接⼊纯种前也必须先⾏灭菌, 使培养基呈⽆菌状态。

植物组织培养实验(1)

实验报告内容
实验名称实验目的实验原理实验材料和用具实验步骤实验结果与分析
2. 分装。将培养基分装到8个50ml三角瓶中，培养三角瓶中，分装。将培养基分装到8 50ml三角瓶中基厚度约为5mm。做好标记。基厚度约为5mm。做好标记。 3. 灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在121℃、 0.1MPa条件灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在121℃ 0.1MPa条件下灭菌15～20min。操作按仪器操作步骤进行。下灭菌15～20min。操作按仪器操作步骤进行。灭菌后待压力下降到0Pa时取出凝固后待用。时取出，灭菌后待压力下降到0Pa时取出，凝固后待用。
（三）实验材料和用具
实验材料：实验材料：黄瓜种子实验药品：灯用酒精、 70％酒精、 95％酒精、实验药品：灯用酒精、 70％酒精、 95％酒精、 0.1％氯化汞，吐温-80，无菌水。 0.1％氯化汞，吐温-80，无菌水。灭菌培养基：灭菌培养基：MS 实验用具：无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、实验用具：无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。
当植株的其他部位难以消毒时，可以选用当植株的其他部位难以消毒时，种子，种子，消毒后的种子在无菌条件下播种到含有水－琼脂培养基上或1/10 MS培养基上含有水－琼脂培养基上或1/10 MS培养基上使其发芽。将无菌培养的幼苗切成小片，使其发芽。将无菌培养的幼苗切成小片，作为外植体。作为外植体。
作业
1. 1 周后观察灭菌培养基有无污染，计算污周后观察灭菌培养基有无污染，染率（染菌瓶数/总瓶数×100％染率（染菌瓶数 /总瓶数 ×100％），分析染菌原因。染菌原因。 2. 1 周后观察初代培养体系有无污染，计算周后观察初代培养体系有无污染，每一瓶内染菌外植体数和外植体外的菌落分析染菌原因。数，分析染菌原因。 3. 1 周后观察种子发芽情况，计算发芽率（发芽种子数/种子总数×100％）。发芽种子数/种子总数×100％

医学实验中细胞培养的基本操作教程

医学实验中细胞培养的基本操作教程细胞培养是医学实验中常用的技术手段，可以通过培养细胞体外研究细胞结构、功能、代谢以及疾病的发病机制。

本文将介绍医学实验中细胞培养的基本操作教程，包括无菌操作、细胞传代和细胞培养基的制备。

一、无菌操作1. 器具准备：将工作区域和培养器具用70%乙醇喷雾消毒，将所需器具放入无菌工作台，待干燥后再进行后续操作。

2. 细胞培养基准备：将所需的细胞培养基放入无菌环境中，根据实验需求添加适量的血清、抗生素等。

3. 细胞取样：取出培养物中所需的细胞，使用吸管或移液器将细胞转移到无菌的培养基中。

4. 细胞传播：将细胞和培养基混合均匀后，转移到培养皿或培养瓶中，注意避免皿壁的污染。

5. 无菌操作结束：将使用过的培养器具进行无菌处理，清理工作区域并进行必要的消毒。

二、细胞传代1. 始代细胞收获：当细胞在培养器中达到一定密度后，使用细胞解离液将细胞从底物上解离下来。

2. 离心：将解离的细胞转移到离心管中，以适当的转速离心沉淀细胞。

3. 上清液去除：倒掉离心管中上清液，注意尽量不要干扰到细胞沉淀。

4. 细胞悬浮液制备：使用无菌PBS洗涤离心沉淀的细胞，再添加适量的细胞培养基将其悬浮均匀。

5. 细胞传代操作：将悬浮细胞转移到新的培养器具中，注意避免气泡的产生，并将培养基置于CO2孵化箱中培养。

三、细胞培养基的制备1. 培养基组成：根据实验需求，制备含有特定成分的培养基，如DMEM、RPMI 1640等。

2. 液体消毒：将容器进行高温高压灭菌，确保培养基的无菌。

3. 配方调整：按照实验需求向培养基中添加适量的血清、抗生素、谷氨酸等。

4. 混合均匀：使用无菌器具将添加好成分的培养基搅拌均匀，确保各成分充分溶解。

5. 培养基保存：将制备好的培养基用无菌器具装入培养瓶中，标明日期和成分，存放于4℃的冰箱中，避免阳光直射。

以上就是医学实验中细胞培养的基本操作教程，从无菌操作、细胞传代到培养基的制备，这些基本技术对于医学实验中的细胞研究至关重要。

《微生物的分离和培养》导学案

《微生物的分离和培养》导学案一、学习目标1、了解微生物分离和培养的基本原理和方法。

2、学会制备培养基，掌握无菌操作技术。

3、能够从混杂的微生物群体中分离出特定的微生物。

4、培养观察、分析和解决问题的能力。

二、学习重点1、培养基的制备和无菌操作技术。

2、微生物分离和培养的方法。

三、学习难点1、无菌操作技术的规范操作。

2、选择合适的方法从混杂微生物中分离特定微生物。

四、知识链接1、微生物的定义和种类微生物是指肉眼难以看清，需要借助显微镜才能观察到的微小生物。

包括细菌、真菌、病毒、原生生物等。

2、微生物的生活环境微生物广泛分布于自然界的各种环境中，如土壤、水体、空气、动植物体内等。

五、学习过程（一）培养基的制备1、培养基的概念培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。

2、培养基的类型（1）按物理性质可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。

（2）按化学成分可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。

（3）按用途可分为选择培养基和鉴别培养基。

3、培养基的成分一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质。

此外，还可能需要添加生长因子等特殊物质。

4、制备培养基的步骤（1）计算：根据所需培养基的配方，计算各种成分的用量。

（2）称量：准确称取各种成分。

（3）溶化：将称好的成分加入适量的水，加热溶化。

（4）调 pH：用 pH 试纸或 pH 计调节培养基的 pH 至适宜范围。

（5）灭菌：将配制好的培养基进行高压蒸汽灭菌。

（6）倒平板：待培养基冷却至 50℃左右时，在无菌操作台上将培养基倒入已灭菌的培养皿中。

（二）无菌操作技术1、无菌操作的重要性防止杂菌污染，保证实验结果的准确性和可靠性。

2、消毒和灭菌（1）消毒：使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。

常用的消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法等。

（2）灭菌：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

实验一 MS培养基的配制和灭菌

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（七）倒出、沥去最后一次清洗用水，开始进行植物材料的切割及接种。
逐一取出经上述灭菌处理的植物材料，置于下面垫有经灭菌处理的培养皿（或小白瓷碟）的无菌纱布或滤纸上，左手拿小镊子，右手拿解剖刀，切除各切段或切块上被灭菌剂毒坏的部分。如有必要，也可再行切分。在完成切割后，将解剖刀和小镊子在95%乙醇中浸蘸一下，在酒精灯焰上灼烧灭菌之后放回原处，以便待冷却后下一切割再用。
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一、实验目的：熟悉外植体材料的预处理，掌
握其消毒和接种方法。
二、方法步骤：预处理 →酒精消毒→消毒剂消毒
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（一）对采来的植物材料进行适当的预处理。除去不需要的部分，将所需部分切割至适当大小，置自来水龙头下流水冲洗几分钟至几小时，主要视植物材料清洁程度而定。这在污染严重时特别有用。
（二）用洗衣粉水（1~2角匙洗衣粉/100 ml水）等浸洗上述植物材料约5 min，再用自来水冲净洗衣粉水。这是进一步减少污染的处理。
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（八）接着，左手拿培养瓶，将培养容器口外壁在靠近酒精灯外焰处转燎数秒，以将其可能带有的微生物等固定于原处；在酒精灯焰附近处，用右手拇指与食指配合将瓶塞打开，并将其夹于左手无名指与最小指之间；再将培养瓶口在酒精灯焰上轻转灼烧灭菌；以右手拇指与食指配合，用大镊子夹紧一外植体准确送入培养容器，并将其轻轻地半插入固体培养基；将大镊子在95%乙醇中浸蘸一下，在酒精灯焰上灼烧灭菌之后放回原处，以便待冷却后下一操作再用；将培养瓶口及瓶塞分别在酒精灯焰上小心地轻转灼燎数秒；盖好瓶塞，旋紧，将其置于超净工作台的适当位置。
混合：分别加入一定量的贮备液I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和生长调节物质及其它特殊补加物，再加蒸馏水直至需配培养基的终体积。
调pH值：充分混合后，0.1mol/L的NaOH调节培养基的pH值至5.8。

大学实验报告,细菌的培养

大学实验报告，细菌的培养（文章一）：培养基的制备与灭菌实验报告xx师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌（一）、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。

2. 掌握培养基的配置原则和方法。

3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。

（二）、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。

高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。

将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。

待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。

此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。

（三）、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。

2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。

3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。

（四）、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。

将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。

移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。

洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。

2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。

包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。

（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。