猪繁殖与呼吸综合征病毒E基因的克隆及其腺病毒表达载体的构建

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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆、表达与免疫印迹

ｗａ８ｃｍｐｒｄｗｉｈｔａｆｓａｄｒｔａｎ．ＩｓｒｅｎｐＴ一８（）ａｄｔａｓｏｍｅｎＥｓｈｒｃｉｓ９ｏａｅｔｈｔｏｔｎａｄｓｒｉｓｎｅｔｄｉＥ２ａ＋，ｎｒｎｆｒｄｉｃｅｉｈａ
ｔｖｅａｆｏｉｓ，ｏｔｅａｉｅｓｒ．Ｔｈｅｅｒｓｌｓｅｏｍｅｔｅｂａｅｏｅｅｒｈｉｇａｄｐｒｄｕｉｖｌｉｅｓｒｒｍｐｇｎｎｇｔｖｅａｓｅｕｔｂｃｈｓｆｒｓａｃｎｎｏｃｎｇｎｏｅｖｃｉｎｖｅｏｐｎｆｅｔｖｉｇｎｓｉｅｈｏａｃｎｅａｄｄｅｌｉｇｅｆｃｉｅｄａｏｔｃｍｔｄ．Ｋｅｒｓ：ＰＲＲＳＶ；ＯＲＦ５；ｃｏｎｎｇ；ｅｐｒｓｉｙｗｏｄｌｉｘｅｓｏｎ
ｃｄｅｆＡｇｒｃｌｕａｉｎｅ，Ｈａｚｏｕ３０ａｍｙｏｉｕｔｒｌＳｃｅｃｓｎｇｈ２０２１）
Ａｂｔａｔｓｒｃ：ＴｈＲＦ５ｇｅｅＯｎｅｏｆＰＲＲＳａｍｐｌｉｄｂｙＰＣＲｔｉｅｏｆ３７ｂｐＶｗｓａｉｅｆｗｉｈａｓｚ５．ＴｈｍｐｌｆｅｅａｉｉｄＤＮＡｆａｅｔｗａｌｎｅｎｏｐＭＤ１一，ａｎｅｕｅｅｒｇｍｎｓｃｏｄｉｔＴ８ｄｓｑｎｃｄ．Ｔｈｅｕｔｏｅｅｃｎｈｏｅｈａｈｅｃｎｓｓｅｃｅｙ

猪支原体肺炎疫苗研究进展

猪支原体肺炎（Mycoplasmal pneumonia of swine ，MPS ）是由猪肺炎支原体（Mycoplasmahyopneumoniae ，Mhp ）引起的一种慢性、接触性呼吸道传染病，临床上有独特的咳嗽和喘气症状，又称猪喘气病或猪气喘病［1］。

该病可通过空气传播，不同日龄的猪均易感，但仔猪超过6周龄时才表现明显症状。

感染后导致日增重降低，死亡率的增加、饲养利用率的下降及给药治疗导致的成本增加等，当与引起呼吸道疾病综合征（Porcine Respiratory Disease Complex ，PRDC ）的部分病毒性病原体结合时，猪肺炎支原体也能够导致由特定病毒性病原包括猪繁殖与呼吸综合征（PRRSV ）和猪2型圆环病毒（PCV2）感染引起疾病的发生［2］。

疫苗免疫是猪支原体肺炎的主要防制措施，目前商品化疫苗应用广泛，对防控MPS 起到了积极的作用。

本文将对国内外近年来研发及使用的猪支原体肺炎疫苗进行概述，为将来MPS 疫苗的研究开发提供参考。

1常规疫苗目前使用非常广泛的疫苗主要是灭活疫苗和减毒活疫苗，详见表1。

国内上市的进口猪支原体肺炎灭活苗菌株主要是J 株、P 株、BQ14株、P⁃5722⁃3Ⅰ株和P⁃5722⁃3Ⅱ株。

近年来，国产猪支原体肺炎灭活疫苗的开发迅速，新增了5个不同菌株的灭活疫苗，该类疫苗在我国市场占有率较高，生产企业也较多，主要是DJ⁃166株、HN0613株、NJ 株、CJ 株和SY 株。

除上述猪支原体肺炎灭活疫苗外，目前仍有4个菌株的灭活疫苗处在新兽药注册阶段，分别是广东大华农动物保健品股份有限公司的M1203株，北京中海生物科技有限公司的S 株，广东永顺生物制药股份有限公司的GD0503株和辽宁益康生物股份有限公司的ZY 株。

猪支原体肺炎活疫苗国外无商品化猪支原体肺炎疫苗研究进展穆光慧，刘欢欢，胡美容*（广东永顺生物制药股份有限公司，广东广州511356）摘要：猪肺炎支原体是引起猪支原体肺炎的病原，该病呈世界性流行，死亡率虽然不高，但由于长期性和消耗性的流行，使饲料转化率降低，并引起猪的多种并发病，是造成养猪业经济损失最重要的疾病之一。

猪繁殖与呼吸综合征病毒GS株结构蛋白基因的克隆及结构特征分析

马友记柳纪省，利。，张
（．肃农业大学动物科技学院，１甘甘肃兰州７０７；．国农业科学院兰州兽医研究所，肃兰州７０４；３００２中甘３０６
３中农威特生物科技股份有限公司，．甘肃兰州７０４）３０６
摘要：根据Ｇｎａｋ中猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＲＳＶＲ２３ｅＢｎＰＲＶ）－３２毒株基因序列设计合成了６对引物，用应
Ｒ —ＣＴＰＲ方法对ＰＲＳＲＶＧＳ株部分片段进行基因的扩增、隆和测序，测序结果应用ＢａｔＤＳａ软件进克将ｌｓ和ＮＡｔｒ
行拼接，与国内外分离毒株进行核甘酸以及推导氨基酸序列同源性比较．果发现ＰＳＳ毒株结构蛋白基并结ＲＲＶＧ
因全长３８９ｂ，括ＯＲ２ＯＲ３Ｏ４Ｏ５ＯＲ６和Ｏ７共６阅读框，别编码Ｇ２Ｇ３ＧＰ、５１ｐ包Ｆ、Ｆ、ＲＦ、ＲＦ、ＦＲＦ个分Ｐ、Ｐ、４ＧＰ、
ｓｎｄｏｅｖｒｔａｎｙｒｍｉｕｓＧＳｓｒｉ
ＭＡｕｊＬＩＪ— ｉｇＹｏ —ｉ，Ｕｉｘｎ，ＺＨＡＮＧ。Ｌｉ
（．１ＣｏｌｅｆＡｎｉａｉｎｅａｅｈｌｇｙ，ｎｓｌｇｅｏｍｌＳｃｅｃｎｄＴｃｎｏｏＧａｕＡｇｒｃｔａｎｉｅｓｔＬａｚｕ７３０７Ｃｈｉ２．ｎｚｉｕｌｕｒｌＵｖｒｉｙ，ｎｈｏ００，ｎａ；ＬａｈｏｕＶｅｅｉａｒｅｅｒｈＩｔｔｔＣｈｎｅＡｃｄｅｙｏｆＡｇｒｃｌｕｒｌＳｃｅｃｔｒｎｙＲｓａｃｎｓｉｕｅ，ｉｅｓａｍｉｕｔａｉｎｅ，Ｌａｈ３４６，ｉａ；ｎｚｏｕ７００Ｃｈｎ

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M基因重组腺病毒的构建及表达

猪繁殖与呼吸综合征（ｏｃｅｒｐｏｕｔｅａｄＰｒｉｅｒｄｃｉｎｎｖｒｓｉｔｒｙｄｏ，Ｒ）由猪繁殖与呼吸综ｅｐｒｏｙｓｎｒｍｅＰＲＳ是ａ
经常存在于腺体，第１次就是从腺体组织中分离且
病毒载体。以腺病毒为载体构建重组疫苗，达主表
蛋白为核蛋白，蛋白为基质蛋白［６。由ＯＦＭ４￣－Ｒ５编码的ＧＰ蛋白可以诱导机体产生中和抗体，最主５是要的保护性抗原；由Ｏ６编码的Ｍ蛋白是ＲＦ
２ｈＰＳ洗涤３次；，Ｂ以荧光标记的羊抗鼠的ＩＧ为二ｇ抗，７℃作用３ｎＰＳ洗涤３，３０ｍｉ，Ｂ次吹干，加入缓冲甘油，荧光显微镜下观察。
ｇｎ购自Ｒｏｈｅｔｃｅ公司；光素ＦＴＣ标记羊抗鼠荧ＩＩＧ、根标记羊抗鼠ＩＧ购自Ｇｅｅｅｇ辣ｇｎＴｘ公司；伊文思蓝购自Ｓｇ公司产品；ｉｍａ甲醇、吐温－０购自北京８北化精细化学品有限责任公司。
１２５Ｗｅｔｎｂｔ分析将接种重组腺病毒．．ｓｒｌｅｏ
ｒｄ－Ｐ一的２３ＡｖＧ５Ｍ９ＡＤ细胞培养２，４ｈ用细胞裂解液裂解后，心取上清进行ＳＳＰＧＥ离Ｄ－Ａ。之后转印到硝
摘要：为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＲＳ重组腺病毒活载体疫苗，ＰＲＶ）本研究将ＰＲＳＧＰＲｖ５和

猪繁殖与呼吸综合征病毒新疆株ORF3基因的克隆与测序

Ｄｉｅｓｗａｄｓｇｎｄ０ｍｐｌｆＯＲＦ３ｒｍｒｓｅｉｅｔａｉｙｏｆｔｕｔｒｌｅ．ＴｈａｐｉｉｄｒｇｅｔｗｅｅｌｅｉｏｓｒｃｕａｇｎｅｅｍｌｆｅｆａｍｎｓｒｃｏｎｄｎｔＤＭＤ１－Ｉｅｔ）ｏｃｎｉｕｔｈｅｒｃ８＇、ｖｃ（ｔｏｔｔｅｔｅｏｍｂｉａａｍｉＭＤ１一ｒｎｎｔｐｌｓｄｐ８ＯＲＦ３，ａｄｔｃｅｎｄｐｏｉｉｅｒｃｍｂｉｎｈｅｓｒｅｅｓｔｖｅｏ — ｎｎｔ）ａｍｉｓａＩｓｄｗｅｅｅｔｎｅＩｒ（ｕｅｃｄ．Ｔｈｓｑｕｅｃｎｇｎｌｉｗｉｈｈｈｅｐｆｅｅｉａｌｓｓｏｆｗａｅｅｅｎｉａａｙｓｓｔｔｅｌｏｓｑｕｎｃｎｇｎａｙｉｓｔｒ
ｃｍｐａｉｏａｏｎｏｒｓｎｗｓｃｄｕｃｅｅｗｅｎ（ＲＦ３ｇｅｅｎｌｏｔｄｅｓｑｎｅｄｔｃｅＮＡｍａｎｏｏｌｇｏｔｄｂｔｅ）ｎｕｃｅｉｅｕｅｃｅｅｔｄｂｙＤｎａｄｈｍｏｕｓＰＲＲＳＶｉｏｌｔｓａｈｏｅａｄａｂｏｄｉｌｄｄｉＧｅＢａｓａｅｔｍｎｒａｎｃｕｅｎｎｎｋ．Ｓｅｕｅｃｎｇａａｙｓｓｓｏｗｅｔａｔｔｑｎｉｎｌｉｈｄｈｈｅ
猪繁殖与呼吸综合征病毒新疆株
ＯＲＦ３基因的克隆与测序

猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究的进展

较好。据报道，用ＰＲＲＳＶＣＨ一１Ｒ变异毒株灭活疫苗
和弱毒疫苗分别接种４０ — ４５日龄的仔猪，４星期后
ＨＰ — ＰＲＲＳＶＨｕＮ４高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒强度变异株攻击，攻毒后２ｌ天免疫病理结果表
明，ＣＨ一１Ｒ弱毒疫苗比变异株灭活疫苗对强毒株ＨｕＮ４具有更好的免疫保护效果。
病毒进行载体表达，结果在昆虫细胞中ＯＲＦ２、
ＯＲＦ３、ＯＲＦ５及ＯＲＦ７基因中得到了表达。据报道，怀孕母猪的免疫保护试验用纯化的ＧＰ２、ＧＰ３￣ＧＰ５及Ｎ蛋白进行，结果表明重组ＧＰ３和ＧＰ５免疫组对强
兽药锄
猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究的进展
赵刚、２毛春玲２李睿王君伟
（１．东北农业大学动物医学院哈尔滨１５００３０，２．哈药集团生物疫苗有限公司哈尔滨１５００６９）猪繁殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）由猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）引起的一种传染性极强的疾病，其症状主要是各年龄猪均易发生的呼吸道症状，母猪怀孕早期流产、死胎、木乃伊胎及生殖能力降低，仔猪死亡率高。因发病过程中会出现短暂性的两耳皮肤紫绀，故又称为蓝耳病。目前，在世界各地的几乎所有地区都有猪蓝耳病的流行，给世界养猪业造成巨大的经济损失，引起了国内外学者的广泛关注。本病的病原又名莱利斯塔病毒为套式病毒目、动脉炎病毒科、动脉炎病毒属的繁殖与呼吸综合征病毒，呈卵圆形，有囊膜，直径在４０～６０纳米之间，表面有约５纳米大小的突起。无血凝活性，不凝集哺乳动物、禽类和人类红细胞。为了预防和控制猪蓝耳病，要给猪接种疫苗。目前疫苗市场主要分为灭活疫苗和弱毒活疫苗。国内外学者对新型疫苗进行研究，主要包括基因疫苗、亚单位疫苗及重组病毒疫苗等３种疫苗。

共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因和猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒的构建及其在小鼠模型上的免疫原性

ＡｓａｔＣａｓａｓｉｅｆｅＣＦｎｏｃｅｒｒｄｃｉｎａｄｒｓｉｔｒｙｄｏ（Ｒ）ａｅｂｔｃｎｍｉｌｂｔｃ：ｌｓｉｌｗｎｅｒ（Ｓ）ａｄｐｒｉｅｏｕｔｎｅｐｒｏｓｎｒｍｅＰＲＳｒｏｈｅｏｏｃｌｒｃｖｎｐｏａｙａｙ
ｐｏｅｎａｄｃａｓｃｌｗｉｅｆｖｒｖｒｓＥ２ｐｏｅｎｉｉｅｒｔｉｎｌｓｉａｓｎｅｅｉｒｔｉｎｍｃｕ
ＬｏｇｙＳＮＹｕｎ，ＨＡｉｎｍｉｇ，ａ，ＡＮＧＪｎｈａ，ＵＨｕ－Ｉｎ —ｕ，ＵａＣＮＧＴａ－ｎＨＥＦｎ一ＨＵＨｕ —ｕＱＩａｉｊ
ＩｍｎｇｉｆａｒｃｍｉａｔａｅｏｉｓＣ — ｘｒｓｉｇｍｕｏｅｎｃｔｏｅｏｂｎｄｎｖＯｅｐｅｓｉｙｎｒｕｎｐｃｎｅｒｄｃｉｎａｄｒｓｉｔｒｙｄｏｅｖｒｓＧＰ５ｏｒｉｅｒｐｏｕｔｎｅｐｒｏｙｓｎｒｍｉｏａｕ
ＰＲＳ和ＣＦ的新型载体疫苗。ＲＳ
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；猪瘟病毒；重组腺病毒；免疫原性
中图分类号：￥５．５８２６文献标识码：Ａ文章编号：１０．５９２１）３０６ —６０８０８（０００ —１１０
过口蹄疫病毒（ＭＤ）Ａ序列连接，形成一个完整的ＯＦＦＶ２Ｒ，并将其克隆到腺病毒穿梭栽体中，通过细菌内同源

稳定高效表达猪CD163的Marc-145细胞系的构建与鉴定

稳定高效表达猪CD163的Marc-145细胞系的构建与鉴定吴香菊;李芳韬;陈蕾;丛晓燕;孙文博;于江;陈智;郭立辉;吴家强【摘要】试验旨在构建一株高效表达猪CD163(pCD163)的Marc-145细胞系,为猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的临床分离和疫苗生产奠定基础.根据GenBank中序列设计引物从猪肺泡巨噬细胞(PAM)中扩增pCD163基因,将其插入真核表达载体pCI-neo构建真核表达质粒pCI-pCD163,将该重组质粒转染Marc-145细胞,通过G418筛选、单克隆化并扩大培养筛选获得表达pCD163的Marc145细胞系,IFA、Western blotting鉴定其表达情况.IFA结果显示,构建的pCD163-Marc细胞系中荧光明显亮于普通Marc-145细胞;Western blotting结果显示,pCD163-Marc细胞系中CD163蛋白表达量约为对照Marc-145细胞中CD163蛋白表达量的8.7倍.且该细胞系可稳定传至20代,各代次之间表达量无差异.证明高效表达猪CD163的Marc-145细胞系构建成功.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2015(042)008【总页数】7页(P2074-2080)【关键词】Marc-145;CD163;稳定细胞系【作者】吴香菊;李芳韬;陈蕾;丛晓燕;孙文博;于江;陈智;郭立辉;吴家强【作者单位】山东农业大学动物科技学院,山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室,泰安271000;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东农业大学动物科技学院,山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室,泰安271000;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100【正文语种】中文【中图分类】Q813猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)，俗称“猪蓝耳病”，由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)引起，病毒感染后可以导致母猪流产、返情、产死胎或弱仔、仔猪死亡及各种年龄的猪不同程度的呼吸道症状，并且能破坏猪的免疫系统，引起混合感染或继发感染[1-2]。

猪繁殖与呼吸综合征类NADC30与HP-PRRSV毒株RT-PCR鉴别方法的建立与应用

猪繁殖与呼吸综合征类NADC30与HP-PRRSV毒株RT-PCR鉴别方法的建立与应用作者：徐雷赵军杨晓宇殷鑫欢张继宗朱玲来源：《江苏农业学报》2019年第01期摘要：猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRsv）是一种能够引起大面积呼吸道疾病并快速传播，导致母猪流产和仔猪死亡的RNA病毒，其特性为变异快，存在毒株间的重组。

因此，病原的快速检测和鉴定对于该病的防控十分重要。

本试验建立了一种能够区分类高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADc30与HP-PRRsv毒株的检测方法，根据nsp2基因的高变区的比对结果，选择其保守序列，设计一对检测引物，类NADc30扩增片段大小为334 bp，HP-PRRsv毒株扩增片段大小为514bp，通过优化反应条件，最终建立了一种一对引物就可以区分检测类NADc30与HP-PRRsv毒株的RT-PcR检测方法。

应用本试验所建立的RT-PcR方法对2017年12月至2018年2月采至四川多地区的疑似PRRsv感染发病的46份肺脏进行检测。

结果显示，类NADc30检出率为32.6%，高于HP-PRRsv毒株的检出率（10.9%）。

该方法的建立，为类NADc30和HP-PRRsv毒株的快速鉴别诊断提供了方法，具有重要意义。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征;类NADc30;HP-PRRsv;鉴别诊断;RT-PcR中图分类号：s828 文献标识码：A 文章编号：1000-4440（2019）01-0109-05猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductiveand respiratory syndrome virus，PRRSV）属于动脉炎病毒科，有囊膜，是单股正链RNA病毒，基因组约长13～15kb。

自1987年被首次报道时就一直是影响养猪业健康发展的呼吸道疾病和繁殖障碍的传染性疾病，1996年郭宝清等首次从流产胎儿中分离出PRRSV，证实中国成为了PRRSV流行区域，随后暴发猪繁殖与呼吸综合征，然后发展成为高致病猪繁殖与呼吸综合征（Highly pathogenic porcine repro-ductive and respiratory svn&ome.HP-PRRS）.并且逐步向全国蔓延。

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因的克隆和原核表达

综合征病毒基因组ＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，ＰＣＲ扩增获得ＧＰ５基因，片段大小为６００ｂｐ。将ＧＰ５基因亚克隆到原核表达载体ｐＧＥＸ－６Ｐ一１上，茵落ＰＣＲ和限制性内切酶双酶切鉴定，重组质粒ＰＧＥＸ一６Ｐ一１一ＧＰ５构
引发了空前的“ 流产风暴 ” ，给世界养猪业造成巨大的经济损失。２００６年在我国和东南亚地区，该病的暴发导致约２００万的猪死亡，给我国及全世界养猪
业造成了巨大的损失［１。
毒的作用，与病毒激发机体免疫保护作用有关［５］。
白分子质量约为２５ｋｕ。ＧＰ５蛋白具有一段３１个氨基酸的信号肽及３个跨膜区，该蛋白包含６个抗原决定簇，其中１个线性决定簇，能在体外起到中和病
猪业发达国家的一种病毒性疾病，随后在世界各国
建成功，重组质粒转化犬肠埃希菌ＢＬ２１（ＤＥ３），ＩＰＴＧ诱导表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析重组蛋白的表达，Ｗｅｓｔｅｒｎ
ｂｌｏｔ分析重组蛋白的反应原性。结果表明，重组融合蛋白Ｈｉｓ — ＧＰ５分子质量约为４１ｋｕ，主要以包涵体的形
式存在，表达量占菌体总蛋白的３５以上，纯化后的重组蛋白占总蛋白的７５以上；并且该重组蛋白能与猪的阳性血清反应，说明其具有较好的免疫原性。研究结果为基因工程疫苗的研发和ＧＰ５的抗体制备奠定了

猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组结构及疫苗研究进展

１７Ｎ蛋白．
点，Ｃ一末端有引起病毒粘附的跨膜区域，Ｎ端和且ｃ端是高度的疏水区。此外，４蛋白氨基端有一ＧＰ信号肽序列，胞外区第４～７其Ｏ９位氨基酸之间有一个能与单抗发生中和反应的抗原决定簇，且这一区
病，其病原猪繁殖与呼吸综合征病毒是ＲＮＡ病毒，国相继发生流行性感染，养猪业造成严重各给
的经济损失。本文旨对猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组结构及疫苗研究进展予以综述，为进一步
研究提供材料。关键词：；殖；因；苗猪繁基疫
１９９１年荷兰人Ｗｅｓｏｔ首次从发病仔猪和母猪ｎｖｏ等
基因组的各读码框都和其相邻的读码框有部分
重叠。
１１ＰＳ的结构蛋白．ＲＲＶ
体内分离到了该病毒，时称为Ｌｌｓａ当ｅｙｔｄ病毒（Ｖ）Ｌ。随后德国、国、国等也分离到了该病毒，美英
目前，该病已遍及北美洲及欧洲，全球范围内传在播，亚太地区也呈蔓延之势，日本、国、律宾及我韩菲
Ｏ２７编码ＰＲＳ的结构蛋白，些蛋白ＲＦＰＶ这
都含有糖基化位点及Ｃ端和Ｎ端疏水序列。其中Ｏ２ＲＦ～ＯＲ４别编码Ｇ２ＧＰ、４三种糖基Ｆ分Ｐ、３ＧＰ化蛋白，ＯＲＦＯＲ７分别编码囊膜蛋白ＧＰ（５Ｆ５也称Ｅ蛋白）基质蛋白Ｍ和核衣壳蛋白Ｎ。、

猪繁殖与呼吸综合征诊断与疫苗研究进展

ＥＩＡＮ蛋白的替代抗原。ＬＳ
１２间接免疫荧光试验．
２０年，国发生了大规模的猪蓝耳病，全国造０６我对
成了巨大的经济损失。目前，些猪群虽然没有临某床症状，存在隐性感染，对养猪业存有潜在的威却这胁，因此对猪蓝耳病的研究势在必行。国内外学者
１４环介导逆转录等温检测．
环介导逆转录等温检测（ＴＬＲ — ＡＭＰ是一种较）
新的检测ＰＲＳ技术。该技术对靶基因的６个特ＲＶ
异部位设计４种引物，在反转录酶和ＢｔＮＡ聚并ｓＤ
合酶的作用下对靶基因进行等温核酸扩增反应。ＲＴＬ－ＡＭＰ方法简单高效，并且具有较高的敏感性和特异性，测结果肉眼可判定，ｈ内获得检测结检１果。赵彦宗等Ｌ］据ＰＲＶＭ基因保守序列６１根１ＲＳ个特异性部位设计了２对引物，立了ＰＲＳ的建ＲＶ
反转录一合酶链反应（聚ＲＴ－ＣＲ）术是近年来Ｐ技
（ＬＳ方法，此方法与ＩＥＲＲＶ试剂盒ＥＩＡ）用ＤＸＸＰＳ
对来源不同的１０份血清进行检测，对检测结果０并
进行比较。结果表明，建立的ＥＩＡ方法的特异性ＬＳ为９．，感度为９．，者的符合率达到８１敏１５两

猪繁殖与呼吸综合征病毒TS株结构蛋白基因的克隆与变异分析

一
２８一
中国动物检疫
２１第２卷第５期００年７
猪繁殖与呼吸综合征病毒ＴＳ株结构蛋白基因的克隆与变异分析
王娇，赵泽坤，坤，继国王孙
（河北农业大学动物科技学院，河北保定
０１０）７０１
摘要：河北唐山分离到一株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＲＳ）接种Ｍｒ一４从ＰＲＶ，ａｃ１５细胞，２经代盲传后出现细胞病变，经鉴定为ＰＲＶ命名为Ｔ株。利用Ｒ－Ｃ扩增出Ｔ株各基因的ｅＮＲＳ，ｓＴＰＲｓＤＡ片段，然后克隆入ｐＤ９Ｔ载体ＭＩ－并测序。应用ＤＡｔｒＮＳａ软件，结合其它河北毒株与多株Ｇｎａｋ中已发表的ＰＲＶｅＢｎＲＳ毒株相应基因进行序列比较结果表明：ＲＳＳ与Ｖ－２同源性为８．％９．％与河北省２０年以来发现的８ＰＲＶＴ株Ｒ２３３８９－４７，０７个毒株同源性很强，９．％为８Ｏ９．％与Ｌ株的亲缘关系较远，９７；Ｖ同源性为６．％６．％属于美洲型。１２－９０，遗传进化树表明国内美洲型分离株明显分为
Ｐ
ＶＳｓａｈｒｄ８．９．ｏｕｌｔｅｈｍｏｇｔＮｒｍｅｉｎｇｎｔｅＶ－３２ｎｉ一Ｔｔｉｓａ８％一４７ｒｎｅ９％ｆｎｃｏｉｏｌＹｗｉｏｔＡｒａｅｏｐ（Ｒ２３）ａｄｈｅｄｏｈｈｃｙ

猪繁殖与呼吸综合征病毒

鼻黏膜或上呼吸道系统 (巨噬细胞)
初级复制部位
血液循环
其他器官（单核巨噬细胞系统）
病毒增殖的特点：
增殖的特点
有严格的宿主专一性
对巨噬细胞有专嗜性。
抗体依赖性增强作用
即在亚中和抗体水平存在的情况下，在细胞上的复制能力反而得到增强。
2、病毒的变异
PRRSV分为两个型：（1）以Lelystad virus(LV株)为代表的欧洲型（简称A亚群）。（2）以ATCC VR-2332毒株为代表的美洲型（简称B亚群）。两者在抗原上有显著差异，只有很少的交叉反应。 A亚群：广泛的基因组变异。 B亚群：呈较为保守性。不同毒株之间在毒力和致病力上有明显的差异。我国的PRRSV均属美洲型，迄今还没有发现欧洲型株，同
上。病毒在-70℃可保存18个月，4℃保存1个月，
37℃ 48h，56℃ 45min完全失去感染力。 2、干燥可很快使病毒失活。 3、对有机溶剂十分敏感，经氯仿处理后，其感染性
可下降99.99％。 4、对常用的化学消毒剂的抵抗力不强。
五、PRRSV的流行病学
1、易感动物 PRRSV只感染猪。各种品种、不同年龄和用途的猪均可感染，
解该病在猪场的活动状况。
(6)对发病猪场要严密封锁，对发病猪场周围的猪场也要采取一定的防范措施，避免疫源扩散。
(7)关于免疫接种，目前尚无十分有效的免疫防制措施。
部分资料从网络收集整理而来，供大家参考，
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采用血清学抗体检测技术是应用最为广泛的实验室诊断方法。
目前有4种不同的方法用于检测血清中的 PRRSV抗体，包括：
方法
优点
缺点
间接免疫荧光抗特异性高早期诊断抗原变异会影响结果

猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异分析及DNA疫苗的初步研究

猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异分析及DNA疫苗的初步研究猪繁殖与呼吸综合症(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)感染引起的以怀孕母猪繁殖障碍及各年龄段猪呼吸道疾病为主要特征的猪传染病。

2006年,我国爆发了高致病性PRRS,给我国养猪业造成巨大的经济损失。

PRRSV具有高度变异性,研究发现：高致病性PRRSV和传统PRRSV毒株存在很大差异。

其中高致病性PRRSV在Nsp2上普遍存在不连续的30个氨基酸的缺失,ORF5也是变异最大的基因之一,ORF7是较为保守的基因。

本研究设计了三对PRRSV特异性引物,分别扩增4株PRRSV毒株的ORF5, ORF7和Nsp2基因,并克隆至pMD-18T载体上,测序得到基因序列。

利用分子生物学软件对测得的序列及一些国内外分离株序列进行比较,分析病毒分子遗传变异规律。

序列分析表明：4个分离株ORF5基因核苷酸序列同源性为89.4%～99.5%;ORF7基因的核苷酸序列同源性为94.1%-100%；Nsp2基因核苷酸序列同源性83.3%～99.7%。

遗传进化树分析表明：HB毒株与国内疫苗株CH-1a高度同源；DL-US毒株与美洲型代表毒株VR-2332高度同源；JX毒株Nsp2缺失30个氨基酸,与国内报道的高致病性PRRSV毒株JXA1毒株高度同源,与传统毒株VR-2332差异较大。

DL-TB毒株Nsp2基因与传统毒株CH-1a同源性最高,但ORF5以及ORF7基因却与高致病毒株具有很高的同源性,由此推测DL-TB毒株可能是高致病性PRRSV 毒株和传统毒株发生重组后的变异株。

PRRSV分子流行病学研究表明：与传统毒株相比,高致病性的PRRSV毒株,在基因水平上发生了较大的变异,在临床症状上具有更高的致病性和死亡率,能够产生更大的危害。

类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒FJZ03株感染性克隆的构建及鉴定

中国预防兽医学报Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine第42卷第11期2020年11月V ol.42No.11Nov.2020doi ：10.3969/j.issn.1008-0589.201911018类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒FJZ03株感染性克隆的构建及鉴定勾明郗1,2，林志锋3，邓小莺1,2，黄晓紫1,2，毛婉1,2，徐叶3，李娜1,2，杨小燕1,2，魏春华1,2*，刘建奎1,2*（1.龙岩学院生命科学学院，福建龙岩364000；2.福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室，福建龙岩364000；3.福建农林大学动物科技学院，福建福州350002）摘要：为构建类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV ）FJZ03株的感染性克隆，本研究将该株病毒全基因组分成6段，通过同义突变将其中的A 14378G ，引入了Mlu I 酶切位点为分子标记。

经RT-PCR 分别扩增后，克隆至改造后的载体pSK 中构建中间质粒。

经测序鉴定各质粒正确后，分段连接至pSK 中构建全长cDNA 克隆质粒pSK-FJZ03。

将鉴定正确的pSK-FJZ03转染Marc-145细胞并传代，收集出现CPE 后的病毒液，经RT-PCR 扩增后的产物经Mlu I 酶切和测序鉴定；同时采用激光共聚焦试验鉴定，获得的拯救病毒命名为RvFJZ03。

分别测定RvFJZ03在Marc-145细胞与潴肺泡巨噬细胞（PAMs ）中的生长曲线，比较拯救病毒与亲本病毒的生长特性。

将获得的拯救病毒RvFJZ03在Marc-145细胞中连续传代，对不同代次的重组病毒分别测定病毒效价，并经RT-PCR 扩增后通过Mlu I 酶切和测序鉴定。

测序鉴定结果表明，正确构建了感染性克隆质粒pSK-FJZ03；将其转染Marc-145细胞后并传至第3代出现典型CPE ，经激光共聚焦试验、RT-PCR 及测序鉴定表明拯救了重组病毒RvFJZ03。

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因重组腺病毒的构建及特性研究

维普资讯
２００８年２月
甘
肃
农
业
大
学
学
报
第４３卷
双月刊
第１Ｉ６期～
ＪＯＵＲＮＡＬ０ＦＧＡＮＳＡＧＲＩＵＣＵＬＴＵＲＡＬＵＮＩＶＥＲＳＴＹＩ
猪繁殖与呼吸综合征病毒ＧＰ５因重组腺基病毒的构建及特性研究
录水平检测证实，Ｐ蛋白基因得到了转录；光检测发现，源蛋白已得到表达．Ｇ荧外关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；Ｐ；组腺病毒；Ｇ５重同源重组中圈分类号：Ｑ７４８文献标识码：Ａ文章编号：１０—３５２０）１００—６０３４１（０８０—０１０
Ｃｏｓｒｃｉｎａｄｃａａｔｒｚｔｏｆｒｃｍｂｎｎｄｎｖｒｓｗｉｈｎｔｕｔｏｎｈｒｃｅｉａｉｎｏｅｏｉａｔａｅｏｉｕｔ
ｐｒቤተ መጻሕፍቲ ባይዱｉｅｏｕｃｉｅａｄｒｓｉａｏｒｙｄｒｍｅｖｒｏｃｎｅｒｐｒｄｔｖｎｅｐｒｔｙｓｎｏｉｕｓＧＰ５
马友记ｈ，兴绪。黄连清李发弟。程小磊。柳纪省。赵，，，，
（．中国农业科学院兰州兽医研究所，畜疫病病原生物学国家重点实验室，业部畜禽病毒学重点１家农开放实验室，肃兰州７０４；２甘３０６．甘肃农业大学动物科学技术学院，肃兰州７０７；甘３００３．中农威特生物科学技术股份有限公司，肃兰州７０４）甘３０６

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因对猪的DNA免疫

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因对猪的DNA免疫任慧英;郭鑫;杨汉春;王芳;赵东升;杜希珍【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2006(039)008【摘要】[目的]检测PRRSV GP5 DNA重组质粒在猪体诱导的免疫反应以及细胞因子的佐剂效应.[方法]将表达PRRSV GP5的DNA重组质粒与表达3种细胞因子的重组质粒联合免疫SPF猪,经3次免疫后人工感染PRRSV,检测体液免疫、细胞免疫以及攻毒保护性反应.[结果]重组质粒pCI-GP5可诱导免疫猪产生中和抗体,效价达1:19.2,并可诱导机体产生较强的细胞免疫,攻毒后组织中PRRSV核酸的检出率下降39%,表明表达PRRSV GP5的DNA重组质粒pCI-GP5可诱导一定的免疫效力.pcDNA-IL-4与pCI-GP5共免可将中和抗体效价提高到1:35.5,且可增强细胞免疫反应,与对照组相比,病毒血症的出现频率减少17%,PRRSV阳性组织检出率下降64%;pcDNA-IL-2与pCI-GP5共免也可增强猪的细胞免疫,与对照组相比,病毒血症的出现频率下降50%,PRRSV阳性组织检出率减少59%; pcDNA-IFN-(与pCI-GP5共免对病毒血症的出现及病毒在组织中的分布均没有抑制作用.[结论]动物试验结果表明IL-4及IL-2可作为PRRSV GP5 DNA重组质粒的免疫佐剂.【总页数】8页(P1651-1658)【作者】任慧英;郭鑫;杨汉春;王芳;赵东升;杜希珍【作者单位】中国农业大学动物医学院/农业部预防兽医学重点实验室,北京,100094;中国农业大学动物医学院/农业部预防兽医学重点实验室,北京,100094;中国农业大学动物医学院/农业部预防兽医学重点实验室,北京,100094;中国农业大学动物医学院/农业部预防兽医学重点实验室,北京,100094;中国农业大学动物医学院/农业部预防兽医学重点实验室,北京,100094;中国农业大学动物医学院/农业部预防兽医学重点实验室,北京,100094【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.猪IL-15与PRRS病毒GP5基因核酸疫苗免疫效力 [J], 石娜;尹杰超;Dante Zarlenga;李广兴;任晓峰2.猪流产胎儿中猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测及GP5抗原分析 [J], 蒋增海;赵攀登;邓同炜;陈益;徐耀辉3.共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因及猪γ-干扰素基因的腺病毒载体的构建与鉴定 [J], 牛明福;李翔;曹瑞兵;郑其升;魏建超;姬向波;李鹏;周斌;陈溥言4.猪生殖与呼吸综合征病毒△Gp5/M/N串联基因的克隆及原核表达 [J], 邵磊;冉旭华;闻晓波;倪宏波;王密;朴范泽5.猪生殖与呼吸综合征病毒GP5基因对小鼠的DNA免疫 [J], 任慧英;杨汉春;郭鑫;陈艳红;查振林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

猪繁殖与呼吸综合征荧光定量PCR检测方法建立及其应用的开题报告

猪繁殖与呼吸综合征荧光定量PCR检测方法建立及其应用
的开题报告
题目：猪繁殖与呼吸综合征荧光定量PCR检测方法建立及其应用
背景：猪繁殖与呼吸综合征是由猪冠状病毒引起的病毒性疾病，能够导致猪的生长发育迟缓、呼吸急促、发热等症状，给养殖业带来很大的经济损失。

荧光定量PCR 技术是一种高效、灵敏的检测方法，已广泛应用于猪繁殖与呼吸综合征的诊断和病原学研究。

目的：本研究旨在建立一种灵敏、高效的猪繁殖与呼吸综合征荧光定量PCR检测方法，并应用于临床样本检测。

方法：首先，设计并合成猪繁殖与呼吸综合征的引物与探针，优化PCR反应体系和条件，确定荧光定量PCR检测方法的最佳参数；然后，收集猪繁殖与呼吸综合征阳性和阴性样本进行检测，并对检测结果进行分析和验证；最后，应用该方法对实际临床样本进行检测，并进行分析和统计。

预期结果：建立一种经过验证的猪繁殖与呼吸综合征荧光定量PCR检测方法，具有高敏感性、高特异性和重复性，可以应用于大规模的病原监测和临床诊断，有助于及时诊断和控制猪繁殖与呼吸综合征的流行。

同时，为研究猪冠状病毒的流行病学特征和病原学机制提供了有力的工具和手段。

意义：猪繁殖与呼吸综合征是一种严重的猪病，对养殖业造成了很大的损失和威胁。

建立一种灵敏、高效的荧光定量PCR检测方法，可以及时诊断和控制病情，降低疫情发生的风险和经济损失。

此外，对于研究病原学和流行病学机制，也有很重要的意义。

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ｗｏｌｅｄｎａｅ．Ｔｈｓｅｐｒｍｅｔｐａｅｏｅｆｒｔｅｒｓａｃｆｓｒｃｕａｒｔｉｕｃｉｎａｄｇｎｕｄｂｏｅｌｔｒｉｘｅｉｎｌｙｄａｒｌｏｈｅｅｒｈｏｔｕｔｒｌｐｏｅｎｆｎｔｏｎｅｅ
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猪繁殖与呼吸综合症病毒（ｏｃｎｅｒｄＰｒｉｅＲｐｏ—
ｕｃｖｅａｒｓｒａｏｓｎｒｏｅｖｉｕｓｔｉｎｄｅｐｉｔｒｙｙ中和抗体出现之后，且抗血清主要识别Ｅ蛋白［。此外，白还具有诱导４３Ｅ蛋细胞凋亡、参与病毒粒子与病毒受体结合等过程的作用跚。因此，白在ＰＲＶ的致病性、断、Ｅ蛋ＲＳ诊
ｎｉｏｉｒｓｔｎｅＰａｔｉｔｅｉａｃ，ＣＲｄｒｓｉｔｎｅｄｎｃｅｓｎｌｓｓＴｅｒｃｍｂｎｔｄｎｖｒｓｅｐｅｓｏｅｍｒｂｅｓｎａｅｔｃｉｎｏｕｌａｅａａｙｉ．ｈｅｏｉａｅｏｉｘｒｓｉｎｖｃｒｏｎａｕ
ｗａｕｃｓｆｌｏｓｒｃｅ．ｈ９ｅｌｓｔｓｅｔｄｗｉｅｔｒＳｕｔ．Ｖｎｅ￣ｒｅｘｅｉｎｓｓｃｅｓｕｌｃｎｔｔｄＴｅ２３ｅｌｗａｙｕｍｎｆｃｅｔｖｃｏｈｔｅＣＭｈｐｌａｄｔｈｔｒｐｒｈｅｍｅｔ
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２・试验研究８
广东畜牧兽医科技２１年３龟２００５
猪繁殖与呼吸综合征病毒Ｅ基因的克隆及其腺病毒表达载体的构建
邓碧亮，顾万军ｚ，黄毓茂。（１河源市动物疫病预防控制中心，广东河源５７０；２佛山科学技术学院生命科学学院，．１００．广东佛山５８３；３华南农业大学兽医学院，广东广州５０４２２１．１６２）
胞并进行了初步鉴定，进一步的研究还在继续。本研究为ＰＲＶ结构蛋白功能及其基因工程疫苗研究奠定ＲＳ
了基础。
关键词：ＰＲＶＲＳ；基因克隆；重组腺病毒
中图分类号：￥５８６文献标识码：Ａ文章编号：１０ — ５７２ｌ）２０２ — ３０５８６（０Ｏ０～０８０
摘要：本研究通过Ｒ－ＣＴＰＲ方法扩增猪繁殖与呼吸综合症病毒（ＲＳ）Ｇ株的Ｅ白基因，克隆至ＰＲＶＤ蛋穿梭质粒ｐｈｔ１－ＭｅｔｒＳｕｔｅＣＶｖｃｏ中，构建腺病毒重组表达载体。经过抗性筛、Ｃ扩增、单酶切等方法对选ＰＲ其进行鉴定，确定得到了含有目的基因的阳性克隆，成功构建了腺病毒表达载体ｐｄ。同时转染２３细Ａ —Ｅ９
Ａｂｎｏ：ＴｅＥＧｅｅｏＲＲＳｖｒｓｓｒｉａａｔｈｎｆＰｉｔｎＧＤｓａｌｅｒｕｈＲＴＰｕａｗａｍｐｉｄｔｏｇ．ＣＲｎｌｎｄｉｔｅｖｃｏｉｆｈａｄｃｏｅｏｔｅｔｒｎｈｐｈｔｅＣＭＶｏｃｎｔｃｅｏｉａｔａｅｏｉｕｘｒｓｉｎｖｃｏ．ＴｅｐｓｔｅｃｏｅｗａｄｎｉｅｙＳｕｔ．ｌｔｏｓｕｔｒｃｍｂｎｎｄｎｖｒｓｅｐｅｓｏｅｔｒｈｏｉｖｌｎｓｉｅｔｄｂｒｉｉｆ
（．ｙａｅｔｒｎｍａＤｓａｅｒｖｎｉｎｎｏｔｌＨｙａ１００Ｃｉａ．ｃｏｌｆｉｃｎｅｆｏｈｎ１ＨｅｕｎＣｎｅｆｉｌｉｓＰｅｅｔｄＣｎｏ，ｅｕｎ５７０，ｈｎ；ＳｈｏｏＬｆＳｉｃＦＳａｒｏＡｅｏａｒ２ｅｅｏＵｉｅｓｙＦＳａ２２Ｃｉａ．ｏｌｅｏＶｅｒａｙｅｉｎ，ｏｔｒｕｔｒｌｎｖｒｔ，ｕｇｈｕ５４，ｈａｎｖｒｔ，ｏｈ５８３，ｈｎ；ＣｌｇｆｔｉｒｄｃｅＳｕＡｇｉｌａＵｉｓＧａｚｏ１６２Ｃｍ）ｉｎ１３ｅｅｎＭｉｈｃｕｅｉｙｎ０