不同抗原修复法对视网膜石蜡切片相关功能蛋白表达检测的影响
不同抗原修复液对免疫组化结果的影响
盒 均为 Ｄａ ｏ公司产 品 。 ｋ
３ ．修复液
Ｈ Ｌ缓冲液 （Ｈ７６ 、Ｅ Ｔ Ｃ ｐ ．） Ｄ Ａ缓冲液 （Ｈ８Ｏ 。 ｐ ．）
４ 免疫 组 织 化 学 染 色采 用 Ｓ ． Ｐ法 切 片脱 蜡 人水 ，３ Ｈ。 抑制 内 源性 过 氧化 物 酶 １ｍｉ，水 ｏ２ ０ ｎ
目前 在免 疫组 化实 验 中 ，抗 原修 复是影 响染 色 结果 最关键 的因素 。通 常 ，抗 原修 复效 果 的好坏 取
结果 的影 响 。
材料 和方 法
１ ．Ｔｒ － Ｌ修 复 液 阳性 强 度 较 差 ，非 特 异 ｉ ＨＣ ｓ
性着色明显 ，脱 片率较高 ，抗体 Ｅ Ｒ、Ｐ Ｒ细胞浆
有非 特异 性着 色 ，阳性 细胞 数量 及强度 （ 一卅） 抖 。
２ Ｈ ． 的柠檬酸修复液对显示 细胞膜及细 ．ｐ ６ ０ 胞浆的抗体敏感 ，对显示细胞核的抗体较弱，阳性 细胞数量及强度 （ ＋一抖）（ １ ，抗体 Ｂ Ｃ 图 ） Ｒ Ａ 无
所 需要 最佳 ｐ 值是 不相 同的 ，应 根 据 条件 选 择 最 Ｈ 佳 的 ｐ 值 ，这 一点 应 引起重 视 。选 用 不 同修 复 液 Ｈ 对 同一 实验 结果 影 响很大 ，尤其 是对 一些 弱表 达 的 抗 原 ，很难 显示 出来 ，延 长显 色 时 间易造 成背 景显 色过 深 。Ｅ ＴＡ 适 合 大 多 数 抗 原 修 复 ，特 别 对 一 Ｄ 些 显示 细胞 核 的抗体 如 Ｐ ３ Ｒ、Ｐ ５ 、Ｅ Ｒ及 较 难 表达 的抗体 如 Ｂ Ａ－ ＲＣ ，效 果 更 明 显 ，但 其 染 色 背 景 同 时 加深 ，如 使用 不 当易造 成假 阳性 结果 的判断 。我 们 尝试 在经 Ｅ ＴＡ 修 复后 取 消 某 些 特 殊 抗 体 需 要 Ｄ 作 消化 酶处 理 的步骤 ，同样 取 得 了很好 的效果 ，这
石蜡切片免疫组化中抗原修复方法的选择和注意事项
石蜡切片免疫组化中抗原修复方法的选择和注意事项免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过抗原抗体特异性反应来检测并定位蛋白的方法，目前广泛应用于组织病理学诊断。
其中，抗原修复（Antigen repair，AR）是免疫组化过程中不可忽略的关键步骤。
原因是组织经福尔马林等固定液固定和石蜡包埋后，抗原决定簇与核酸易发生交联，引起蛋白质空间结构的改变，导致抗原决定簇被封闭，使抗原与抗体的结合点减少，从而令抗原的阳性检测率及着色强度相对减弱。
这种交联在高温加热或是蛋白酶水解的作用下会发生可逆反应，恢复蛋白的原有构象，这一过程就是抗原修复。
一AR常用的方法是否进行AR、采用什么方法进行AR 要按抗体说明书的要求决定，不同的抗体选择适合该抗体的AR方法，有的要求高温修复，有的要求酶消化。
➤微波法方法：切片于抗原修复液中经微波炉内微波辐射5-20min。
它是利用微波每秒以24亿5千万次的快速运动产生瞬间热。
微波辐射可以使各物质分子作极性运动，促进形成的醛键断裂开。
分子间运动所产生的瞬间热可导致甲醛固定后的蛋白的变性。
该法的特点是：产热迅速，容易操作，但也容易引起抗原修复液的沸腾，使得修复液温度不稳定。
➤高温高压法方法：切片于抗原修复液中在高压锅中加热至沸腾，盖上压力阀至喷汽后持续1-5min。
该法利用高压和高热来促进醛键的断裂，当加热至开锅，加上高压阀后，汽体喷出，此时的温度在100℃-120℃之间，而高压也易使蛋白变性。
➤真空负压法方法：切片于抗原修复液中在预先调至95℃的真空负压干燥箱中真空负压处理5-10min。
这是一种操作简单，效果特佳，温度恒定，能一次性处理大量切片的方法。
该法特点是分子在失重的情况下四处飘游，可以增加各分子间的碰撞机会，而且恒定的温度能保证使甲醛固定的蛋白发生变性又不会使抗原修复液达到沸点。
➤酶修复法方法：0.10%胰蛋白酶或0.40%胃蛋白酶在室温或37℃消化切片15-30min。
不同抗原修复液对ki67蛋白表达的影响
28生物技术世界 BIOTECHWORLDKi67为核增殖蛋白抗原,是临床用来评价细胞核增殖情况的常用指标。
免疫组织化学染色是辅助病理诊断的重要手段,抗原修复在免疫组织化学染色中起关键作用,修复的质量好坏影响病理切片的准确性[1]。
因此本研究采用不同修复液对肝癌小鼠的肿瘤切片进行抗原修复,比较不同抗原修复液对Ki67免疫组织化学染色结果的影响。
1 材料与方法1.1 试剂肝癌组织来源于荷瘤肝癌小鼠。
抗鼠K i 67抗体购于美国eBioscience公司。
辣根酶标记的山羊抗大鼠二抗购于武汉博士德公司。
1moL/EDTA (pH9.0)、0.01moL/L柠檬酸钠缓冲液(pH6.0)、1moL/L Tris-EDTA(PH8.0)修复液由本实验室配制。
1.2 相关仪器设备石蜡切片机、家用美的微波炉、恒温干燥箱 旋转切片机、高压锅 恒温培养箱2 方法2.1 石蜡切片的制备处死荷瘤小鼠后立即切取肿瘤组织块,放入4%多聚甲醛固定液不同抗原修复液对ki67蛋白表达的影响陈娇娇 赵菁*(广西医科大学 广西南宁 530021)摘要:目的:探讨不同抗原修复液对肿瘤组织内ki67蛋白表达的影响。
方法 取来源于小鼠的肝癌组织标本制成石蜡切片,用免疫组织化学方法检测肿瘤组织内KI67蛋白的表达情况。
修复方法为1moL/EDTA (pH9.0)微波修复、0.01moL/L柠檬酸钠缓冲液(pH6.0) 微波修复、1moL/L Tris-EDTA(PH8.0)微波修复。
结果:用1moL/L Tris-EDTA(PH8.0)微波抗原修复,修复效果比其它修复液要好,ki67蛋白表达量高,差别有统计学意义(P＜0.05)。
结论 在肿瘤组织内ki67蛋白免疫组化检测中,使用1moL/L Tris-EDTA(PH8.0)抗原修复液微波修复,效果比其它修复液好。
关键词:免疫组织化学 抗原修复 ki67中图分类号:R73文献标识码:A文章编号:1674-2060(2015)11-0029-02Abstract:Purpose To investigate the effect of different antigens on the tumor tissue repair solution ki67 protein expression. Method Taken from mouse liver tissue specimens made of paraffin, with expression detected by immunohistochemistry within tumor tissue KI67 proteins. Repair method 1moL / EDTA (pH9.0) microwave repair, 0.01moL / L sodium citrate buffer (pH6.0) microwave repair, 1moL / L Tris-EDTA (PH8.0) microwave repair. Result With 1moL / L Tris-EDTA (PH8.0) microwave antigen retrieval, repair effect is better than other repair solution, ki67 high protein expression levels, the difference was statistically significant (P <0.05). in conclusion Ki67 protein in tumor tissue immunohistochemistry using 1moL / L Tris-EDTA (PH8.0) microwave antigen retrieval solution repair, the effect is better than other repair solution.Key Words:Immunohistochemistry; Antigen retrieval; ki67作者简介:陈娇娇(1989-)女,汉族,河南省,硕士,就读于广西医科大学,学生,研究方向肿瘤免疫。
提高免疫组织化学反应的抗原修复技术
提高免疫组织化学反应的抗原修复技术宋容;肖觉;刘佳;李光新;林一民【摘要】目的探讨不同抗原修复方法对免疫组织化学反应结果的影响,以提高免疫组织化学染色阳性率.方法分别采用3种不同抗原修复方法作预处理后,进行Envision免疫组织化学二步法检测10种常用抗体的免疫组织化学染色效果.结果石蜡组织切片,免疫组织化学反应的抗原修复方法预处理,采用高温高压抗原修复法,与微波抗原修复法及煮沸抗原修复法染色强度有明显差异,高温高压抗原修复法明显优于微波法及煮沸法.结论预处理采用高温高压抗原修复法,既可提高免疫组织化学反应阳性表达率,又能提高制片质量,可以一次性用于大量组织切片,是一种理想的免疫组织化学反应的抗原修复预处理方法.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2016(045)004【总页数】3页(P540-542)【关键词】抗原修复法;组织预处理;免疫组织化学【作者】宋容;肖觉;刘佳;李光新;林一民【作者单位】重庆市肿瘤研究所病理科,重庆400030;重庆市肿瘤研究所病理科,重庆400030;重庆市肿瘤研究所病理科,重庆400030;重庆市肿瘤研究所病理科,重庆400030;重庆市肿瘤研究所检验科,重庆400030【正文语种】中文【中图分类】R446.8免疫组织化学技术已成为病理科实验室的常规工作及科研工作中不可缺少的重要手段，广泛应用于临床病理诊断[1]，帮助评价肿瘤的增生程度和分期，对患者预后、治疗等方面起到了指导作用。
但在日常工作中病理标本都用10%中性福尔马林液固定，经过10%中性福尔马林液固定的石蜡组织，会产生蛋白交联反应遮蔽了组织内某些蛋白抗原，阻碍了抗原与抗体的结合。
为了打开蛋白间的交联，使被封闭的抗原充分暴露[2]，抗原修复技术在免疫组织化学染色过程中成为一个极其重要的环节[3]。
不同抗原修复方法直接影响免疫组织化学反应结果的表达，正确应用抗原修复技术在免疫组织化学反应实验中有着重要作用，常用的抗原修复技术有高温高压抗原修复法、微波抗原修复法、煮沸抗原修复法3种方法[4]，作者将3种方法进行比较，探讨高温高压抗原修复法对提高免疫组织化学反应结果的影响，现报道如下。
抗原修复技术方法的应用比较
Applied compareing of antigen reparing technigue s methods S U N Qi , L I Yong - hong , ZHA N G M iao. (Ningxia Peope’s Hosp . , Yinchuan 750021 ,China ) [ Abstract] Objectives To study t he seclection of tissue antigen reparing technigues in use. Methods Antigen reparing tech2 nigues were done by use of Microwave oven ; Pressure cooker and pepsin met hods using too kinds of buffer fluids , The effect of immune tissue chernical dye of 40 antibodies was compared. Results Among t he 40 antibodies 25 antibodies were changed from ( + ) or ( - ) into ( 6 ) . There were 6 antibodies changed ( 7 ) . There were 26 antibodies which remained unchanged. The use of buffer fluids is verg important . Conclusion In practical use ,t he use of different antigen repairing technigwas can improve t he ressgt results of immune tis2 sue chewical dye greatlyand elevate t he detection rate of t he intra cell lar and intrarenclius antigens. [ Key words] A ntigen repari ng ; I m m unity tissue chernical ; B uf f er f l ui ds
不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响
不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响目的探讨了不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响。
方法选取该院30例肾活检标本作为研究对象，随机分成对照组与研究组，对照组采用冰冻切片方法，研究组采用石蜡切片方法，其中分成应用无抗原修复组、胰酶抗原修复组、高压加热抗原修复组，均进行免疫荧光染色。
分析和对比研究组与对照组标本的免疫荧光染色结果。
结果研究组中的胰酶抗原修复组与对照组的免疫荧光染色结果基本相同（P＜0.05）；研究组中高压加热抗原修复组的假阴性明显高于对照组（P＜0.05），研究组中无抗原修复组的染色效果比对照组较差（P＜0.05）；两组所观察的有效肾小球数均≥3个，两组数据差异无统计学意义（P>0.05）。
结论冰冻切片的免疫荧光染色标本无肾小球的时候，可以采用胰酶抗原修复作为补救措施。
标签：抗原修复方法；肾活检；石蜡切片；免疫荧光染色免疫荧光技术又被称为荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种，具有特异性强、敏感性高、速度快等特点，在肾穿刺活检的病理诊断中具有很大的意义。
选取该院2013年2月—2013年9月间确诊为肾小球疾病的患者为研究对象，主要探讨了不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响，现报道如下。
1 资料与方法1.1 一般资料该院共接收30例经确诊为肾小球疾病的患者，男性14例，女性16例，年龄在19～64周岁之间，平均年龄为（41.5±13.4）周岁。
其中有9例患者属于IgA 肾病，8例患者属于局灶节段硬化性肾小球肾炎，6例患者属于轻度系膜增生性肾小球肾炎，4例患者属于膜性肾病，3例患者属于系统性红斑狼疮。
将每例患者的肾活检标本分别制成采用10%福尔马林固定的2 μm厚石蜡切片，和2 μm 厚的冰冻切片，冰冻切片为对照组，石蜡切片为研究组，并将研究组的标本随机分为胰酶抗原修复组、无抗原修复组、高压加热抗原修复组，分析和对比两组的免疫荧光染色结果，两组患者的年龄、性别、病程、病史等一般资料，数据差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用
不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用郭丽;祁荣;吴鹏【摘要】目的:选择最适宜的抗原修复法.方法:在免疫组织化学染色中,选用鼠抗人5种单克隆抗体,用不同的抗原修复法,对不同染毒剂量、正常对照暴露大脑皮质及海马,石蜡组织切片,依阳性颗粒表达的情况,确定适宜的抗原修复.结果:抗原修复的方法直接影响到组织中抗原的暴露,高压加热法能把被掩盖或交联变性的抗原暴露或修复,使免疫组化的结果更准确可靠,特别是核阳性组织,适用于高压加热法；电炉煮沸法,阳性结果不佳；酶消化抗原修复法,与高压锅加热抗原修复法的阳性结果无区别.结论:核阳性表达的抗体应选用高压锅抗原修复法,推测核阳性表达的抗体也适用于酶消化抗原修复法.【期刊名称】《沈阳医学院学报》【年(卷),期】2012(014)003【总页数】2页(P152-153)【关键词】免疫组化染色;抗原修复;核阳性表达【作者】郭丽;祁荣;吴鹏【作者单位】沈阳医学院科学实验中心,辽宁沈阳110034;沈阳医学院科学实验中心,辽宁沈阳110034;沈阳医学院科学实验中心,辽宁沈阳110034【正文语种】中文【中图分类】R392-33目前，免疫组化染色技术已成为病理学诊断的重要手段。
几年来抗原修复广泛应用于免疫组化检测，抗原修复使抗原决定簇充分暴露是免疫组化染色成功的关键。
在热修复法中，压力锅加热法又较微波炉加热法更有效，酶消化法修复的抗原免疫组化的染色效果不如热修复法[1] 。
有少数抗原酶消化后染色的结果优于热修复法[2]。
电炉煮沸抗原修复法也被许多人所采用。
为了选择适宜的抗原修复法，我们先后采用压力锅抗原修复、电炉煮沸抗原修复、复合酶抗原修复法，对五种抗体的免疫组化染色结果进行筛选，选择最适宜的抗原修复法，以获得最佳的免疫组化的阳性结果。
1 材料与方法1.1 实验动物与染毒 Wistar大鼠120只(沈阳药科大学实验动物中心提供)体质量230～250 g，按雌∶雄为2∶1于每晚6时合笼，次晨7～9时阴道涂片检查精子，查到精子定为妊娠0 d。
免疫组化染色中不同抗原修复方法的应用探讨
免疫组化染色中不同抗原修复方法的应用探讨魏素姣【期刊名称】《国际医药卫生导报》【年(卷),期】2018(024)013【摘要】Objective To discuss the application effect of different antigen retrieval methods with autoclave and microwave oven in immunohistochemical staining.Methods 12 cases of esophageal cancer tissue specimens in our hospital from August 2016 to June 2017 were collected for the study,four different antigens (CD4,CD8,Ki67,IL17) located in the cell membrane,nucleus,cytoplasm were selected to do staining,two antigen retrieval methods with autoclave and microwave oven were performed.The immunohistochemical staining results of the two antigen retrieval methods were analyzed.Results The antibody positive rate of CD4 of the antigen retrieval method with autoclave was as high as 100％,which was higher than that of the antigen retrieval method with microwave oven (45.5％) (P＜0.05);there were no statistically significant differences in the antibody positive rates of CD8,Ki67,and IL17 (P＞0.05).Conclusion In the case of non-shedding tissue,the antigen retrieval method with autoclave has the advantages such as simple operation,light background coloring,clear positioning,stable result;in the case of no significant difference in the positive rate of retrieval cases,the microwave antigen retrieval method is proposed.%目的主要探讨高压锅与微波炉抗原修复方式在免疫组化染色中的应用效果.方法以本院2016年8月至2017年6月收集的12例食管癌组织标本作研究对象,选用定位于细胞膜、细胞核、细胞浆的CD4、CD8、Ki67、IL17四种不同抗原做染色标记,并应用高压锅与微波炉两种抗原修复方式,对两种抗原修复法应用免疫组化染色结果进行分析.结果在高压锅抗原修复方式下,CD4抗体阻性率高达100％,而在微波炉抗原修复方式下,CD4抗体阳性率仅达45.5％,两组相较而言,高压锅抗原修复法CD4抗体阳性率较高(P＜0.05);CD8、Ki67、IL17抗体阳性率对比差异无统计学意义(P＞0.05).结论在组织不脱片情况下,选用高压锅抗原修复方式,操作简单,背景着色浅,定位清晰,结果稳定;在修复方式阳性率比较无明显差异情况下,建议选用微波抗原修复方式.【总页数】4页(P2000-2003)【作者】魏素姣【作者单位】471003 郑州大学附属洛阳中心医院病理科【正文语种】中文【相关文献】1.不同抗原修复方法在免疫组化染色的应用比较 [J], 余杏娟;王博;许静2.不同抗原修复方法对层粘连蛋白免疫组化染色结果的影响 [J], 刘鲜艳;郝斌威;马爱玲;何进喜;陈娟3.不同的抗原修复方法在Ⅳ型胶原免疫组化染色中的应用 [J], 陈余朋;张声;王行富;李国平;王鹏程;王密4.不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用 [J], 郭丽;祁荣;吴鹏5.不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用 [J], 鞠学萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
3种抗原修复方法对免疫组化染色效果的影响
3种抗原修复方法对免疫组化染色效果的影响郑秋桦;李钰湘;柯野;张海明【摘要】为了确定5种抗体在免疫组织化学染色效果中的最佳修复方法,本文分别采用水煮法、微波法和高压法对抗原进行修复后,按常规免疫组化方法进行染色、镜检.结果表明5个抗体在高压修复下都是强表达,P53、P63在微波修复20 min 下也是强表达.因此,从修复效果、时间及稳定性等角度综合考虑,高压0.1Mpa(121℃)修复2 min是对P53、P63、Ki67、CK5/6、CK7的较佳修复方式.【期刊名称】《韶关学院学报》【年(卷),期】2017(038)012【总页数】4页(P51-54)【关键词】免疫组织化学;抗原修复;染色【作者】郑秋桦;李钰湘;柯野;张海明【作者单位】韶关学院英东生命科学学院,广东韶关512005;韶关学院英东生命科学学院,广东韶关512005;韶关学院英东生命科学学院,广东韶关512005;广州安必平医药科技股份有限公司,广东广州510663【正文语种】中文【中图分类】R446.61免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究.在免疫组织化学的试验过程中，常采用固定石蜡包埋组织，然而组织在使用甲醛固定过程中，形成的醛键会封闭抗原的决定簇，影响抗体和抗原的结合，从而影响染色观察结果；因此，对抗原的修复在免疫组织化学中就尤为重要［1］.不同的抗原修复方法对免疫组化染色结果产生不同的影响［2-3］.如加热抗原修复技术既能保留福尔马林固定石蜡包埋技术良好的组织学形态，又明显提高抗原的检出率，提供良好的IHC染色结果［4-5］；影响加热抗原修复的因素主要包括修复的温度、加热的时间、热源、抗原修复液的pH值等方面［1］.本文采用控制变量法，探究在改良Tris-EDTA(PH9.0)修复试剂中，采用水煮、微波和高压3种不同的热修复方法对P53、P63、Ki67、CK5/6、CK7这5个抗体的免疫组化染色效果的影响.1 材料与方法1.1 试验组织与试剂1.1.1 试验组织由广州安必平（LBP）医药科技股份有限公司提供的阳性组织材料.1.1.2 试验试剂抗体试剂均由LBP公司提供的即用型产品（见表1）；环保透明脱蜡剂；无水乙醇；过氧化物酶封闭液（3%过氧化氢）；二抗试剂：LBP-VBrightI二抗HRP鼠兔通用型（一步法）；DAB显色液（加强型）：1 mL DAB色原/20 mL DAB缓冲液；改良Tris-EDTA(PH9.0)浓缩液（50×）；Mayer’s苏木素染液；PBS 缓冲粉：2 000 mL/包；Tween-20.1.1.3 试剂的配制DAB显色液（加强型）：一滴DAB原液加入至1 mL DAB缓冲液中，该溶液易氧化，现配现用.Tris-EDTA(pH9.0)修复液：改良Tris-EDTA(pH9.0)浓缩液（50×）40 mL加入1 960 mL的蒸馏水搅拌均匀.表1 试验所用抗体信息抗体名称CK5/6 CK7 Ki67 P53 P63克隆号D5、16B4OV-TL12/30 MIB-1 DO7 4A4阳性组织肺鳞癌肺腺癌扁桃体/乳腺癌结肠癌前列腺PBS缓冲液：一包PBS缓冲粉加入蒸馏水2 000 mL搅拌至粉末全部溶解加入4 mL Tween20继续搅拌至完全融合即可.1.2 试验设备Thermoscientific切片机、武汉俊杰电子有限公司生物组织摊烤片机、微波炉、Leica DM500显微镜、Leica ICC50 HD Camera、苏泊尔YS20ED 20 cm高压锅.1.3 方法1.3.1 组织蜡块的切片与前期处理将五种组织蜡块-20℃冷冻，2～3 min后取出，打开空气加湿器减少静电作用，在切片机上连续切片（2μm），放入20%的酒精中展片，再使用防脱载玻片进行捞片，保证每张片捞的方向及位置一样且尽可能在载玻片的中央处，以便阅片及效果对比.每个组织块捞9片，在44℃热水中进行摊片使组织与载玻片平整粘附，无褶皱，60℃的烤片机上进行烤片至组织与载玻片较牢固结合，不会由于重力作用而出现移位，将载玻片转至耐高温塑料切片架后，放入烘片机进行55℃烘片2 h.1.3.2 片子的脱蜡与水化将已完成初步处理的片子放进通风橱中的环保脱蜡剂（代替二甲苯）中进行脱蜡处理3次，每次10 min，确保脱蜡干净后进行梯度水化，梯度水化为无水乙醇→95%乙醇→90%乙醇，每个梯度水化5 min.1.3.3抗原修复1.3.3.1 水煮修复法取2 000 mL修复液于不锈钢锅中，置于电磁炉上加热至沸腾后，放入组织片进行修复，修复时间分别为10 min和20 min.1.3.3.2 微波修复法将组织切片放入2 000 mL修复液中置于微波炉中，微波炉高火（功率750 W）加热至沸腾后，调至中火（功率375 W）开始修复，修复时间分别为10 min和20 min，修复后用自来水迅速降至室温.1.3.3.3 高压修复法将组织切片完全浸置于修复液中，放入高压锅内0.1 MPa（121℃）分别进行修复2 min、2.5 min、3 min和5 min，修复完后，迅速降压降温至常温常压后进行清洗.1.3.4 阻断（内源性过氧化物酶的灭活）立即将修复完后的组织切片进行多次水洗后，置于过氧化物酶封闭液中阻断10min，再进行水洗，然后置于PBS溶液中.1.3.5 抗体孵育从PBS溶液中取出组织切片，迅速甩干大量水珠，放于免疫组化湿盒中，快速滴加即用型一抗，23℃孵育30 min后，用PBS溶液冲洗后，置于PBS溶液清洗缸中取出组织切片去掉大部分水份滴加二抗，室温孵育20 min，再用PBS冲洗后浸泡.1.3.6 DAB显色与苏木素复染从PBS溶液中取出组织切片，甩干大量水分后，迅速滴加DAB显色液，显色3 min后，吸干大部分显色液后，置于DAB清洗液中多次水洗，然后用Mayer’s 苏木素溶液进行复染30 s.1.3.7 PBS返蓝将组织切片放进PBS溶液中进行返蓝1 min，返蓝后的苏木素是标记出细胞核的位置，方便观察时做目标区域的参照物，返蓝后多次水洗.1.3.8 脱水、透明、封片和镜检将片子放进95%乙醇脱水1min后，分别用无水乙醇脱水2次，每次1 min；将切片架放于环保透明脱蜡剂中脱蜡2次，每次3 min，用中性树胶滴入封片后，标记归类；利用Leica ICC50 HD Camera进行拍照保存，并对染色结果进行评分.1.4 评分标准判断评分标准参考文献［6］的方法进行评分.评分方法1：在判断中只考虑阳性细胞所占的百分比，按不同的百分比分级；将阳性细胞百分比分成5级，无阳性细胞为0分，阳性细胞≦25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分.评分方法2：在判断中只考虑阳性细胞的染色程度，按不同的染色强度分级；着色强度无色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分［6］.试验中，Ki67 采用方法 1 的评分方法；CK5/6、CK7、P53和P63采用方法2的评分方法.图1 CK5/6的3种修复方法比较结果图图2 CK7的3种修复方法比较结果图2 结果与分析对5种抗体的3种修复方式，结果分别见图1-5，评分结果见表2.由图1-5和表2可知：5种抗体高压修复的效果均为强表达；微波20 min修复P53和P63均为强表达.CK5/6、CK7和ki67在高压修复较其它两种修复方式有更为理想的染色效果；从节省时间，降低掉片概率及出现背景概率等方面综合考虑，故将Tris-EDTA(pH9.0)高压修复2 min作为最佳修复方式.而P53及P63的微波修复20 min染色强度与高压修复的结果一致，均为强阳性.5种抗体的水煮修复法的染色效果均不理想，主要由于修复液的大量蒸发不但浪费试剂还有可能影响修复液浓度从而导致修复效果不稳定，故不宜使用该方法.微波修复20 min对于部分组织的修复效果可以达到要求，但是微波修复也存在不足，如：长时间的浸泡和机械力容易导致掉片；修复液的大量蒸发浪费试剂，严重时导致干片，抗原失活.综上所述，较佳的修复方式为高压修复2 min.图3 ki67的3种修复方法比较结果图图4 P53的3种修复方法比较结果图3 讨论免疫组织化学的染色质量受整个试验过程多方面因素的影响，如温度、抗原修复方法、抗体浓度、孵育时间及显色时间等多种因素.抗原修复方法是关键的因素之一.由于采用不同的抗原修复方法，导致免疫组化实验结果差异极大甚至出现假阴性.因此寻找理想的抗原修复方式可提高抗原检出率，提高免疫组化结果的准确性［7］.图5 P63的3种修复方法比较结果图表1 3种抗原修复法对免疫组化染色结果的比较注：“0”为阴性；“1”为弱阳性；“2”为阳性；“3”为强阳性抗体名称高压2 min高压2.5 min高压3 min高压5 min水煮10 min水煮20 min微波10 min微波20 minCK5/6CK7Ki67P53P63 3 3 3 3 1 2 1+3 3 3 3 1 2 1 3 3 3 3 1 2 1 2+3 3 3 3 12 1 2+33 3 3 1 2 12++3+3本研究仅对5种抗体采用了3种修复方式的研究，有待一步探究其它的修复方式，以期获得更为直观和方便可行的修复方法.参考文献：［1］姚梅宏,郑智勇.免疫组化抗原修复技术新进展[J].临床与实验病理学杂志,2013,29(5):544-547.［2］陈余朋,张声,王行富,等.不同的抗原修复方法在Ⅳ型胶原免疫组化染色中的应用[J].临床与实验病理学杂志,2014,30(1):98-100.［3］宿颖,刘曼,张辛燕.不同抗原修复方法对KLF4在小鼠舌黏膜上皮中表达的比较[J].北京口腔医学，2014,14(6):344-346.［4］Jagirdar J.Immunohistochemistry:then and now[J].Arch Pathol Lab Med,2008,132(3):323-5.［5］Shi S R,Taylor C R.Extended application of antigen retrieval technique in immunohistochemistry and in situ hybridization[A].Shi S R，Taylor C R，eds.Antigen retrieval immunohistochemistry based research and diagnostics[C].Hoboken:John Wiley,2010:25-45．［6］许良中，杨文淘.免疫组织化学反应结果的判断标准[J].中国癌症杂志,1996,6(4):229-231.［7］何新明,顾霞,郭文婷,等.免疫组织化学染色存在的问题及解决方案[J].实用医技杂志,2017,24(8):871-872.。
不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响
不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响作者：谭文贾晓敏来源：《中外医疗》2014年第15期[摘要] 目的探讨了不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响。
方法选取该院30例肾活检标本作为研究对象，随机分成对照组与研究组，对照组采用冰冻切片方法，研究组采用石蜡切片方法，其中分成应用无抗原修复组、胰酶抗原修复组、高压加热抗原修复组，均进行免疫荧光染色。
分析和对比研究组与对照组标本的免疫荧光染色结果。
结果研究组中的胰酶抗原修复组与对照组的免疫荧光染色结果基本相同（P0.05）。
结论冰冻切片的免疫荧光染色标本无肾小球的时候，可以采用胰酶抗原修复作为补救措施。
[关键词] 抗原修复方法；肾活检；石蜡切片；免疫荧光染色[中图分类号] R692.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）05（c）-0190-02免疫荧光技术又被称为荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种，具有特异性强、敏感性高、速度快等特点，在肾穿刺活检的病理诊断中具有很大的意义。
选取该院2013年2月—2013年9月间确诊为肾小球疾病的患者为研究对象，主要探讨了不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响，现报道如下。
1 资料与方法1.1 一般资料该院共接收30例经确诊为肾小球疾病的患者，男性14例，女性16例，年龄在19～64周岁之间，平均年龄为（41.5±13.4）周岁。
其中有9例患者属于IgA肾病，8例患者属于局灶节段硬化性肾小球肾炎，6例患者属于轻度系膜增生性肾小球肾炎，4例患者属于膜性肾病，3例患者属于系统性红斑狼疮。
将每例患者的肾活检标本分别制成采用10%福尔马林固定的2 μm 厚石蜡切片，和2 μm厚的冰冻切片，冰冻切片为对照组，石蜡切片为研究组，并将研究组的标本随机分为胰酶抗原修复组、无抗原修复组、高压加热抗原修复组，分析和对比两组的免疫荧光染色结果，两组患者的年龄、性别、病程、病史等一般资料，数据差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
3种抗原修复法对免疫组化结果的影响
3种抗原修复法对免疫组化结果的影响刘宙;杨伟明;刘华庆;王超宇;赵洪远;邬江华;黄琴【期刊名称】《贵州医药》【年(卷),期】2009(33)11【摘要】目的采用微波加热、高温加热和酶消化进行组织抗原修复的免疫组织化学技术,比较三种抗原修复方法暴露抗原之间的区别,寻求最佳的免疫组化方法.方法微波修复组、高压加热组和酶消化组,各组用Envision试剂盒.检测Ki-67、CDla、CD 83、CD 3、CD 4、CD 8、CD 45 RO染色结果.结果三种抗原修复方法有明显差异,高压加热最佳,微波加热其次,酶消化效果最差.结论高压加热组织抗原修复方法经济、操作简单,适合大量标本使用.【总页数】3页(P970-972)【作者】刘宙;杨伟明;刘华庆;王超宇;赵洪远;邬江华;黄琴【作者单位】遵义医学院附属医院甲乳科,563003;遵义医学院附属医院甲乳科,563003;遵义医学院附属医院病理科,563003;遵义医学院附属医院甲乳科,563003;遵义医学院附属医院甲乳科,563003;遵义医学院附属医院甲乳科,563003;遵义医学院附属医院甲乳科,563003【正文语种】中文【中图分类】R392.11【相关文献】1.抗原修复法和固定液pH值对切创皮肤免疫组化染色的影响 [J], 杜宇;官大威;赵锐;吴旭;胡更奕2.胰酶修复法、高压修复法和微波修复法对免疫组化结果的影响分析 [J], 韦翠容;3.不同抗原修复法对免疫组化HBcAg染色结果的影响 [J], 黄建平;杨映红;吴雪晶4.三种不同抗原修复法对二种免疫组化染色法的影响 [J], 刘俊;陈宣世;龙汉安5.两种抗原修复法对牙-牙周免疫组化切片的影响 [J], 史金娜;李永恒;马肃;赵尔扬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
不同方式的抗原修复对免疫组化结果的影响
不同方式的抗原修复对免疫组化结果的影响目的：探讨免疫组织化学中不同抗原修复方式对染色结果的影响。
方法：采用高温高压修复法、微波修复法和酶消化法对病理科采用的四项免疫组织化学标记（p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1）进行染色，在显微镜下对染色阳性率进行比较。
结果p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1四项标记在三种修复方法下均具有较高的阳性率。
高温高压修复法、微波修复法的染色结果阳性率较高，与酶消化法相比，有统计学意义（P＜0.05）。
结论：三种修复方法均有实用性，三者相比，高温高压修复法、微波修复法修复效果更好，对病理诊断指导意义较大。
标签：免疫组化；抗原修复；方法对比免疫组化技术是病理科常见鉴别技术，在病理诊断中发挥显著作用。
石蜡切片由于在制作过程中使用大量有机溶剂（酒精、二甲苯）和包埋过程中加热处理使抗原活性丧失，所以通常采用抗原修复方法来提高石蜡切片免疫组化反应的敏感性。
抗原修复的质量在一定程度上决定了染色结果的好坏，从而影响诊断结果的判定[1]。
目前，抗原修复的方法有酶修复法、高温高压修复法、微波修复法等。
本科室采用不同抗原修复法对p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1进行比较获取最佳抗原修复方法。
1 材料1.1 材料：选用新疆医科大学第二附属医院病理科2010年3月-2016年6月期间手术切除的经病理证实为食管鳞癌的石蜡包埋组织共150例。
经两位病理医师诊断确诊，组织直径在3cm以上，苏木精-伊红染色法（HE）染色切片细胞清晰，对比度明显、颜色鲜艳。
1.2 主要试剂：即用型p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1一抗，二抗，DAB 试剂，高压锅、微波炉。
2 方法2.1 染色方法：组织经4%甲醛固定，常规石蜡包埋，3～5μm连续切片，60℃烤箱烤片过夜备用。
抗原修复法分三组：①将切片置于盛有柠檬酸盐缓冲液的高压锅内高压修复3min；②用柠檬酸盐缓冲液微波加热10min；③或用胰酶或胃酶消化15min。
不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用
不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用目的探讨不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用。
方法通过不处理，电炉煮沸法、高压法和胰酶法抗原修复法比较5种抗体的免疫组化染色在不同技术条件下的应用效果。
结果抗原修复的方法直接影响到组织中抗原的暴露，高压加热法能把被掩盖或交联变性的抗原暴露或修复，使免疫组化的结果更准确可靠，特别是核阳性组织，适用于高压热修复法，阳性结果更佳。
结论在实际工作中运用不同的抗原修复技术能极大地改善免疫组化结果，提高难以检测的细胞内、细胞核的抗原檢出率。
标签：抗原修复方法；免疫组化染色；微波炉加热；电炉煮沸；胰酶法引言：免疫组织化学是利用抗体与抗原的特异性结合反应来鉴定组织或细胞中特定化学物质的一种组织化学方法，是免疫学和传统的组织化学的结合。
免疫组织化学染色技术是一种从分子水平辅助诊断的技术，具有较高的敏感性和特异性，可在组织切片、细胞涂片或培养细胞爬片上进行蛋白质或多肽类物质的定位，免疫电镜技术甚至可在亚细胞结构水平进行蛋白质或多肽类物质的定位。
常用的抗原修复方法可分为化学方法和物理方法。
目前常用的抗原修复技术有：酶消化法、微波处理法、高压锅煮沸法、蒸馏水煮沸法、蒸汽法及水浴法。
抗原修复液有：柠檬酸盐缓冲液、tris缓冲液和edta缓冲液。
我们选择了5种常用抗体，比较真空负压抗原修复法、高压抗原修复法、电炉加热抗原修复法的免疫组化染色的应用效果，现将结果总结如下。
材料与方法1.1 材料1.组织材料选取66例我院外科手术切除的乳腺癌组织，分别行：⑴丙酮简单处理法：新鲜标本室温下处理10min后置入4℃冰箱中过夜，再经4℃丙酮30min，室温丙酮30min脱水，苯甲酸甲酯30min，二甲苯30min的透明，58℃～60℃石蜡中浸蜡3h后作石蜡包埋。
将丙酮固定的组织石蜡块按常规连续切片，厚3μm；⑵余4种方法：新鲜标本经10%中性福尔马林缓冲液固定，常规脱水、浸蜡，石蜡包埋，连续切片，3μm厚。
抗原修复注意事项
抗原修复是一种用于提高免疫组织化学（IHC）或免疫荧光（IF）染色效果的技术。
以下是一些抗原修复的注意事项：
1. 选择合适的修复方法：不同的抗原需要不同的修复方法。
例如，一些抗原需要使用蛋白酶消化来暴露抗原表位，而另一些抗原则需要使用热修复或化学修复。
因此，在进行抗原修复之前，需要了解待检测抗原的性质，并选择适当的修复方法。
2. 控制修复时间和温度：抗原修复的时间和温度是影响修复效果的重要因素。
通常，修复时间和温度需要根据不同的修复方法和抗原进行调整。
如果修复时间过长或温度过高，可能会导致抗原的过度修复，从而影响染色效果。
3. 避免抗原丢失：在进行抗原修复时，需要注意避免抗原的丢失。
例如，在蛋白酶消化过程中，需要控制消化时间和浓度，以避免过度消化导致抗原丢失。
4. 控制修复液的 pH 值：抗原修复液的 pH 值也会影响修复效果。
通常，修复液的 pH 值需要根据不同的修复方法和抗原进行调整。
如果 pH 值过高或过低，可能会导致抗原的变性或丢失。
5. 避免交叉污染：在进行抗原修复时，需要注意避免交叉污染。
例如，使用不同的修复液和器具处理不同的样本，以避免交叉污染。
总之，抗原修复是 IHC 和 IF 染色过程中的重要步骤，需要仔细控制修复时间、温度、修复液的 pH 值等因素，以确保获得最佳的染色效果。
不同抗原修复法对视网膜石蜡切片相关功能蛋白表达检测的影响
实验研究 不同抗原修复法对视网膜石蜡切片相关功能蛋白表达检测的影响李 颖 胡运韬 马 汀 马志中The effects of varied antigen retrieval m ethods on i m m unohistoche m istry of functional protei ns in reti nal paraffi n sectionL i Ying,H u Yuntao,M a T ing,M a Zh izhong.P ek ing Un i v ersit y Thir d H osp ital,P eking University Eye Center,B eijing100191,ChinaA bstrac t Background A nti gen retr i eva l m ethod i s the key o f i m prov i ng t he successf u l rate of i m m unoh istoche m i ca lassay i n para ffi n secti ons.T o study an ava ilab l e m et hod o f anti g en retr i eva l is a go al to ach ieve bo t h good i m m unoche m istry result and preserv ing re ti na l protei ns. O b jective The a i m o f present st udy is to i nvesti gate tyrosi n d i gesti on,h i gh temperature heat pressure,w ater ba t h hea ti ng and m icro w ave repa i r i n anti gen re trieval f o r re ti na l tissues. M e thods Re ti nal tissue was i so lated and obta i ned from clean Ch i nch ill a rabb its.F our hundreds re ti na l pa raffi n sections were prepared.Four kinds o f anti gen retr i eva l m ethods for reti na l ti ssue i nc l udi ng ty rosin d i gesti on,hi gh te mperature heat pressure,w ate r bath heati ng and m i crowave repa ir w ere used respec ti ve l y.The dep i g m entated reti nal para ffi n secti on w it hout an tigen retrieva lw as used as contro.l T he po siti ve rates o f express i on o f CRALBP,Rhodopsi n and ops i n prote i ns w ere eva l uated and compared among f our ki nds o f anti gen retr i eva l m ethods by i m muno che m i stry. Resu lts CRALBP,R hodops i n and opsi n pro tein was positi ve l y expressed i n cy top las m of reti na l p i gment epithelial ce lls and the outer segm en t o f photo receptor respecti ve ly.N o si gn ificant d ifference w as f ound in t he positi v e expressi on rates of t hese t h ree pro te i ns a m ong four k i nds o f anti gen retr i eva l me t hods(P>0 05),but t he d ifferences i n ti ssue integ rity and backg round sta i n i ng w ere stati stica lly sign ificant(P<0 01).T he structura l damage of re ti na inc l uded loss and pucke r o f sca lera,crack of nuc leus and abnor m a l background sta i n i n high te m pe rature hea t press u re m ethod,w ate r bath hea ti ng m ethod and m icro w ave retr i eva l m ethod.H o w ever,stable CRALBP,R hodops i n and opsi n pro tein expression and straine ffectiveness,clear background w ithout unspecific staini ng and i ntegrated ti ssue w ere seen i n t y rosin d i gesti on m ethod.Conc l u sion D uring t he c linical pa t ho l ogy ana lysis of re tina l tissue,t he app lica ti on o f ty rosin d i gesti on in anti gen retr i eva l could obta i n a be tter e ffecti veness.K ey word s antigen retriev a;l i m m unoh istochem istry;CRALBP;Rhodopsi n;opsin;re ti na摘要 目的 比较4种抗原修复法对视网膜组织抗原修复的效果。
抗原修复间接法不同修复时间的效果比较探讨
抗原修复间接法不同修复时间的效果比较探讨甲醛固定的标本，因抗原决定簇和醛的交联作用而使抗原被封闭，在进行抗体标记前，要通过修复的方法尽量把抗原暴露出来。
抗原修复的直接法是指将修复液直接放入高压锅内对切片进行加热修复，而间接法是指把修复液先放入容器内再放入高压锅中，然后对容器里的切片进行加热修复。
本文通过不同修复时间的间接法和直接法对比实验，探讨合适修复时间的间接法在免疫组化中的应用。
1材料与方法1.1材料1.1.1标本选取我院病理科2022年6月12月已证实抗原表达呈阳性的肿瘤标本15例，标本经10%中性福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋切片，厚4m。
63、CD56、SY、ER、l放入高压锅中，加热至沸腾，将置于耐高温塑料架上的切片放入，盖上锅盖扣上压力阀，继续加热2min，打开排气阀，冷却至室温备用。
煮沸法：取EDTA抗原修复液1500mL放入高压锅中，加热至沸腾，将切片放入，盖上锅盖（不拧紧不扣压力阀），继续加热20min，冷却至室温备用。
122间接法高压锅法：取一定量250mL柠檬酸抗原修复液于耐高温塑料容器中，将容器放入盛水的高压锅中，加热至沸腾，将切片放入容器内，盖上锅盖扣上压力阀，继续加热，分别在2、3、5min后，打开排气阀，测量容器内外温度，取出容器，冷却至室温备用。
煮沸法：取EDTA抗原修复液250ml于耐高温塑料容器中，将容器放入盛水的高压锅中，加热至沸腾，将切片放入，盖上锅盖（不拧紧不扣压力阀），继续加热，分别在5、10、20、25、30min 后，测量容器内外温度，取出容器，冷却至室温备用。
123免疫组化染色检测步骤参照试剂盒操作说明进行，用in后，容器内外温度接近（95~96℃）；在煮沸间接法中，刚沸腾时容器内外温差相差14℃，时间增加至10min后，容器内外温度接近（95~96℃）。
随着时间增加，染色效果逐渐增强，在高压锅间接法中加热5min后以及在煮沸间接法中加热30min后，修复所经历的单位时间温度（95℃2min、95℃20min）与直接法相当，染色效果接近。
不同抗原修复方法对免疫组化试验结果的影响
不同抗原修复方法对免疫组化试验结果的影响
马建梅;陈承;张彦
【期刊名称】《承德医学院学报》
【年(卷),期】2008(25)2
【摘要】免疫组织化学技术是用已知抗体或抗原检测组织细胞中的未知抗原或抗体的技术，能将形态、代谢和功能密切结合起来，具有操作简单、敏感性高、特异性强等优点，已广泛用于病理诊断。
但在常规福尔马林固定、石蜡包埋的组织中抗原显示存在一定的问题，这主要是由于组织在福尔马林或其他固定液中会引起蛋白内和蛋白间亚甲基桥的桥连，导致许多抗原簇被封闭，因此表达反应微弱，染色效果不佳，影响到诊断的准确性，
【总页数】3页(P179-181)
【作者】马建梅;陈承;张彦
【作者单位】西安医学院附属医院,陕西,西安,710077;西安医学院附属医院,陕西,西安,710077;西安医学院附属医院,陕西,西安,710077
【正文语种】中文
【中图分类】R446.6
【相关文献】
1.高原地区不同抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响 [J], 杨举伦;宋蜀伶;李霞;赵玺龙;蔡琳
2.不同抗原修复方法对大鼠嗅黏膜低亲和力p75NTR免疫组化的影响 [J], 马秀利;
杨枭雄;周立新
3.不同抗原修复方法对层粘连蛋白免疫组化染色结果的影响 [J], 刘鲜艳;郝斌威;马爱玲;何进喜;陈娟
4.不同抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响 [J], 毕晓芳;陈利萍;方虹
5.不同的抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响 [J], 廖德贵;黄世章
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
不同的抗原修复方法和染色条件对P53蛋白免疫组织化学方法结果的影响
不同的抗原修复方法和染色条件对P53蛋白免疫组织化学方
法结果的影响
张威;梁英杰
【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》
【年(卷),期】2002(011)002
【摘要】@@ 用免疫组织化学技术检测肿瘤组织中P53基因蛋白产物的表达,是探讨P53基因与多种肿瘤的相关性研究的主要手段之一.在免疫组织化学检测中,不同的抗原修复方法对P53蛋白检测结果的阳性率和染色强度有不同的影响. 本文在免疫组织化学检测P53 蛋白时对不同的抗原修复方法和染色条件进行了探讨,摸索出能较佳地显示P53蛋白的免疫组织化学方法条件.介绍如下:
【总页数】2页(P124,177)
【作者】张威;梁英杰
【作者单位】广东省人民医院病理科,广州,510080;中山大学中山医学院病理教研室,广州,510080
【正文语种】中文
【中图分类】R299-33
【相关文献】
1.不同抗原修复方法对层粘连蛋白免疫组化染色结果的影响 [J], 刘鲜艳;郝斌威;马爱玲;何进喜;陈娟
2.核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择 [J], 张富军;任娟;王飞苗;吕社
民;李冬民
3.不同抗原修复方法对食管鳞癌组织中ANO1蛋白染色的影响 [J], 闫红娟;马晓平;李曼;赵瑾;李锋
4.不同抗原修复方法在免疫组织化学染色中的应用效果比较 [J], 段会娟
5.不同抗原修复条件对肠癌MMR蛋白免疫组织化学染色效果的影响 [J], 李梅;龙卫国;钟安菁
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
抗原修复最合适的温度
抗原修复最合适的温度抗原修复是一种常见的免疫学实验技术，它用于恢复失活或变性的抗原的生物活性。
通常，这个过程需要在特定的温度下进行，以确保最大化修复效果。
下面将讨论抗原修复的最合适温度。
首先，需要明确的是，不同类型的抗原可能对温度的响应不同。
因此，针对不同抗原建议的最佳修复温度也有所不同。
一般来说，一个好的实验设计应该先进行一些预试，以确定最适宜的温度条件。
目前，大多数抗原修复实验的最佳修复温度在 60 -80°C 之间，这样的温度区间在恢复抗原的同时还不会对其他试剂产生不良影响。
这些温度条件可以在热浴、烘箱或微波炉中实现。
1. Thermo Scientific 抗体应用技术手册：对于磷酸化的蛋白质，推荐的修复温度为80°C，对于其他抗原，推荐的修复温度为60°C。
在修复蛋白质的同时，该文献提醒实验者注意不要过度修复，以免影响抗体的结合能力。
2. Molecular Cell Biology 杂志：对于几种特定的组蛋白抗体，该文献中建议的修复温度为70°C。
3. 美国生物制品公司 (Bio-Rad) 技术手册：对于细胞表面抗原，该文献中建议的修复温度为37°C，对于核心细胞抗原，建议温度为80°C。
需要注意的是，在确定最佳修复温度时，还应考虑以下因素：1. 不同的实验要求不同的修复温度。
例如，在ELISA实验中，可能需要使用较低的修复温度来保持标签的亲和力，而在Western blot实验中，可能需要使用更高的温度以确保完整的细胞膜抗原。
2. 不同的抗原可能需要不同的修复时间。
因此，在确定修复温度时，还需要考虑修复时间的因素。
综上所述，抗原修复最合适的温度并没有一个固定的答案，需要根据具体实验的要求和抗原类型进行确定。
初学者可以参考已发布的文献或专业手册，然后自行进行预试，找到最适宜的修复条件。