酵母表达上清液的浓缩

用TCA沉淀方法
培养基上清直接电泳跑出来的条带经常很难看，可以TCA沉淀浓缩后跑电泳，。

表达上清很少有直接考染能看得到条带的，1ml表达上清浓缩到20ul直接电泳。

一般表达量大于1mg/ml可以看到明显条带，但重复性不好。

具体步骤：1.菌液10000g,离心5分钟，收集表达上清。

2.取900ul上清于EP管中，加入100ul 2%脱氧胆酸，颠倒10次混匀
3.样品置于冰浴中大于10分钟。

4.再加入100ul 10%的TCA.上下颠倒混匀，至于冰上10分钟。

5.12000转离心10分钟，倒去上清液，加入冰预冷的丙酮1ml，涡旋使其棕色沉淀溶解其中。

至于-20°冰箱中沉淀20分钟以上，过夜沉淀最好。

6.12000g,离心10分钟,倒去液体。

用20ul的去离子水溶解沉淀。

7.加入5ul Loading buffer，95度加热10min.则样品就可以用于电泳了。

G418是一种氨基糖苷类抗生素,在分子遗传试验中,是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。

它通过抑制转座子Tn601，Tn5 的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生毒素,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞,也包括原生动物和蠕虫。

当neo基因被整合进真核细胞DNA后,则能启动neo基因编码的序列转录为ｍＲＮＡ,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达,使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。

Ｇ418的这一选择特性,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面
得以广泛应用。