实验二 细菌分离培养与培养性状观察3.28
实验2 菌种分离培养与繁殖
四、作业 1．总结菌种分离技术中的关键技术环节。
无菌操作要点接种环境消毒灭菌酒精棉球消毒双手操作器具消毒灭菌开启的管口瓶口靠近灯焰拔出的棉塞勿触及任何地方动作快准稳要点四菌种分离的方法将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法简单易行保持原菌种性状适用于大型肉质子实体重复多易退化种菇选择种菇消毒切取组织块移接组织块至斜面中央培养特点概念操作过程以伞菌为例操作示范选种菇消毒用75的酒精棉球擦拭子实体培养外观典型大小适中无病虫害八成熟第12茬的子实体盖交界处取黄豆粒大的组织移接至斜面中部25培养箱经常检查及时剔除污染管控制菌龄即将长满斜面外观检查
实验2
菌种分离培养与繁殖
一、目的 学习食用菌组织分离的培养方法,掌握菌种 繁育的基本技术。 二、仪器、用具与药品 超净工作台、解剖刀、大镊子、75%酒精、 脱脂棉、灯用酒精、酒精灯、火柴、培养皿等。
三、实验方法：
（一）菌种分离的概念 菌种分离：用无菌操作的方法将所需要的食用菌 从混杂的微生物群体中单独分离出来的过程。 通过菌种分离得到的纯菌丝体即为一级菌种。 （二）菌种分离的关键——无菌操作 无菌操作：任何一个操作过程都要注意避免把其 它任何无关的菌体带入到培养基中。 注意二点：1．严格树立无菌观念； 2．严格遵循无菌操作规程。
操作示范
选种菇 种菇 消毒
外观典型、大小适中、无病虫害、 八成熟、第1~2茬的子实体 用75%的酒精棉球擦拭子实体
取组 织块 接组 织块
培养
取组织块：纵剖（撕）菇体，在柄 盖交界处取黄豆粒大的组织
移接至斜面中部 25℃培养箱
母种培养注意事项
经常检查，及时剔除污染管 控制菌龄（即将长满斜面） 外观检查：菌丝白、整齐、粗壮、 有弹性、萌发快则质量好，否则质 量差
细菌分离培养实训报告
一、实验目的1. 掌握细菌分离培养的基本原理和操作方法。
2. 了解不同细菌的生长特性和菌落形态。
3. 培养实际操作能力，为后续的微生物学学习和研究打下基础。
二、实验原理细菌分离培养是微生物学实验中的一项基本操作，通过将混合菌液中的细菌进行分离、纯化，得到单一菌种。
常用的分离方法有平板划线法和稀释涂布平板法。
本实验采用平板划线法进行细菌分离培养。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌菌种、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、接种环、酒精灯、无菌水、试管、试管架、培养皿等。
2. 仪器：恒温培养箱、电子天平、生物安全柜、无菌操作台等。
四、实验步骤1. 培养基制备：称取牛肉膏蛋白胨琼脂干粉，加入适量无菌水，混匀后煮沸溶解，待冷却至50℃左右，倒入培养皿中，待凝固。
2. 接种：将大肠杆菌菌种接种于牛肉膏蛋白胨琼脂平板培养基上，用接种环在平板表面进行划线。
3. 恒温培养：将划线平板倒置放入恒温培养箱中，培养24小时。
4. 观察菌落：观察菌落形态，记录菌落特征，如大小、形状、颜色、边缘等。
5. 纯化菌种：根据菌落特征，挑选单个菌落进行纯化。
将纯化后的菌落接种于新的牛肉膏蛋白胨琼脂平板培养基上，培养24小时，再次观察菌落形态，确认纯化成功。
五、实验结果与分析1. 菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润、边缘整齐，直径约为2-3mm，白色。
2. 纯化菌种：通过观察菌落特征，挑选出单个菌落进行纯化，成功得到纯化的大肠杆菌。
六、实验总结本次细菌分离培养实训，使我掌握了细菌分离培养的基本原理和操作方法。
通过实验，我了解到不同细菌的生长特性和菌落形态，提高了实际操作能力。
在实验过程中，我学会了无菌操作、接种、观察和记录等技能，为后续的微生物学学习和研究打下了基础。
七、注意事项1. 操作过程中要严格遵循无菌操作原则，避免污染。
2. 接种环要灼烧灭菌，待冷却后再进行划线操作。
3. 观察菌落时，要仔细观察菌落形态，准确记录。
4. 培养过程中，要注意培养箱温度和湿度，保证菌落正常生长。
细菌的分离培养与培养性状观察
冷至约 ５ ０ ￣ Ｃ， 用接 种 环取 一环 培 养物 于 第 一管 内 ， 随
即用两手掌心搓转振荡 ， 由第一管取入第二管 ， 搓匀 又从第二管取出一环至第三管振荡后 ，分别倒入 ３ 个 灭 菌 空平 板 内 ， 摇 匀待 凝 固后 ， 倒 置于 ３ ７ ℃温箱 内 ‘ 培养 ， ２ ４小时后观察结果 。第一个平板菌落最多 ， 第 二个 、 第三个递减 ， 可得到单个菌落 。
约５ ０克置于密封容器内与接种的厌氧菌共 同培养。 焦 性 没食 子 酸 法是 利 用 焦 性 没食 子 酸与 碱作 用
板盖使 之 成 １ 条狭 缝 ， 并靠 近火 焰 旁 。右 手持 接种 环
克， １ ０ ％氢氧化钠或氢氧化钾 １ ０ 毫升。 常用方法有试 管培 养 法 ， 干 板 培养 法 ， 干燥器 培养 法 。 二 氧 化 碳 培 养 法 利 用 少 数 细 菌 如 牛 型 布 氏 杆
菌 ，在含 有 ５ ％～ １ ０ ％的二 氧化碳 环境 下生 长 良好 ， 常 用 的方 法 为 烛缸 法 。取 干燥 器 （ 盖 口抹 上 凡上 林 ） ， 将 接种 好 的平板 或 斜 面放 入 器 内 ，点 燃 燃烛 直 立 于 缸 的隔 板 上 ， 盖上盖子 ， 因器 内氧 气 耗 尽 蜡 烛 自灭 ，
１ ～ ２ 毫米者为小菌落 ； ２ ～ ４ 毫米者为 中等大菌落 ； ４ 毫 米或 更 大者 为大 菌 落或 巨大 菌落 。菌落外 形 有 圆形 、 不 规则 形 、 卷毛状 、 根 状 等 。隆 起 度呈 扩 散 、 台状 、 凸
起、 乳头 状 、 突脐 状 、 覆轮 状 等 。边缘 如整 齐 、 缺刻 状 、 圆锯齿 形 、 波 状 裂 片状 、 镀 边 等 。观察 菌 落 表 面是 否 光滑 、 皱褶 、 颗 粒状 、 同心环 状 、 龟 裂状 等 。表 面光 泽
实验二 细菌分离培养与培养性状观察3.28
目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得 纯菌。
一、目的要求 一、常用的细菌培养方法
1、需氧菌分离培养法
（1） 平板划线分离法
方法： 分区划线法：适用于含菌量较多的标本。 连续划线法：适用于含菌量较少的标本。
一、目的要求 1、常用的细菌培养方法
（1）需氧菌分离培养法
1. 平板划线分离法
方法： 分区划线法：适用于含菌量较多的标本。
分区划线法
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
连续划线法
一、目的要求 （一）常用的细菌培养方法
2、厌氧菌分离培养法
（1）肝片肉汤培养法 ） （2）焦性没食子酸法 ）
一、目的要求 （一）常用的细菌培养方法
3、兼性厌氧菌分离培养法
• 有鞭毛细菌： 有鞭毛细菌： – 在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘 在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长， 模糊。 模糊。 • 无鞭毛细菌： 无鞭毛细菌： – 只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。 只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。
无动力 现象
有动力 现象
思 考？
1、细菌分离培养的目的是什么？何谓纯培养？ 2、培养皿培养时为什么要倒置？ 3、描述接种细菌在液体培养基、固体培养基中 的生长表现。
接种环境
VS-1300VS-1300-U型洁净工作台环沾染的细菌， 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本
接种
灭菌接种环
杀灭接种环沾染的细菌， 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境
一、目的要求 （一）常用的细菌培养方法
1、需氧菌分离培养法
（1）平板划线分离法
菌落
菌苔
菌落与菌苔
、目的要求 一（三）细菌在培养基上的生长表现
细菌分离与鉴定实验报告
细菌分离与鉴定实验报告引言细菌分离与鉴定是微生物学领域中的一项重要实验技术。
通过该实验，我们可以将复杂的细菌群体分离出单一细菌菌株，并对其进行鉴定和分类。
本实验报告将详细介绍实验步骤和结果分析。
实验材料和方法1.实验材料：–细菌培养基–细菌样本–灭菌培养皿–恒温培养箱–微量移液器–菌液均匀涂布器–培养皿铺平仪2.实验步骤：1.从细菌样本中取一小滴，用微量移液器滴入灭菌培养皿中。
2.使用菌液均匀涂布器将细菌样本涂布在含有细菌培养基的培养皿上。
3.使用培养皿铺平仪将培养皿铺平，确保细菌样本均匀分布。
4.将培养皿放入恒温培养箱中，设置适当的温度和时间。
5.取出培养皿，观察并记录细菌菌落的形态特征。
实验结果在所使用的细菌样本中，我们成功地分离出了多个细菌菌株。
根据观察，我们将这些菌株分为三类，分别是A、B和C。
•类别A：这类菌株呈现出圆形和平坦的菌落形态，表面光滑，边缘清晰。
在培养基上呈现出浅黄色。
•类别B：这类菌株的菌落形态较类别A更为凹凸不平，表面稍显粗糙。
在培养基上呈现出乳白色。
•类别C：这类菌株的菌落形态与类别A和B有较大差异，呈现出不规则形状。
在培养基上呈现出淡红色。
结果分析通过观察细菌菌落的形态特征，我们可以初步推测出这些菌株属于不同的细菌属。
进一步的鉴定和分类需要进行生化试验和分子生物学分析。
通过这些分析，我们可以确定这些细菌的种属、毒力和抗生素抗性等特性。
结论细菌分离与鉴定实验是一项基础而重要的技术，它为研究细菌的特性和功能奠定了基础。
通过本实验，我们成功地分离和初步鉴定了多个细菌菌株。
进一步的实验将有助于更深入地了解这些菌株的特性，并为相关领域的研究提供重要的支持。
细菌分离与鉴定实验的结果对医学领域、环境科学和食品安全等方面具有重要的应用价值。
在未来的研究中，我们将进一步挖掘这些菌株的潜力，探索更多关于细菌的奥秘，并为人类的健康和环境保护做出贡献。
细菌的分离培养实验报告
分离培养实验是一种常见的微生物学实验，旨在从样品中分离出单独的细菌株并在培养基中培养它们。
这种实验通常在医学、食品安全和环境监测等领域中使用。
要进行分离培养实验，首先需要准备样品和培养基。
样品可以是液体、固体或气体，通常是从环境中收集的。
培养基是一种特殊的基质，其中添加了必要的营养物质，可以满足细菌生长的需要。
分离培养实验的步骤如下：
1 准备样品：从样品中收集尽量多的微生物，通常是通过悬浮、切
片或气液分离方法来获得。
2 分离细菌：通常使用分离培养基，其中含有一种叫做营养不全的
培养基，可以限制细菌的生长。
通过在分离培养基中制备细菌悬浮液或细菌膜，可以分离出单独的细菌株。
3 在培养基中培养细菌：将分离出的细菌接种到适当的培养基中，
然后在适当的条件下培养。
4 识别细菌：通过对细菌的形态、生长和代谢特征进行分析，可以
确定细菌的种类和特性。
常用的方法包括显微镜观察、生理生化测试、免疫学方法和分子生物学方法。
分离培养实验在微生物学中非常重要，因为它可以为进一步研究细菌的生理、生化和遗传特性提供基础。
此外，分离培养实验也可以用来鉴定病原体、检测食品中的有害微生物、监测环境中的细菌污染等。
在实验报告中，应该详细记录分离培养实验的全部过程，包括样
品的来源、分离方法、培养条件、识别方法等。
同时，还应该记录实验结果，包括分离出的细菌株数量、识别结果等。
最后，应当对实验进行总结，并在可能的情况下提出建议或改进建议。
细菌的分离培养及培养性状的观察
实验四 细菌的分离培养及培养性状的观察在细菌学检验中，细菌的分离培养是重要的基本技术之一。
从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的方法称为分离；纯培养是指一株菌种或一个培养物中所有的细菌都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代。
分离培养的目的在于从被检材料中，或者从污染的众多杂菌中分离出纯的病原菌。
细菌分离培养应先从被检材料或病料中分离培养单个菌落，然后钓取可疑菌落进行纯培养，再将纯培养物移植培养。
目的要求1．学习、掌握需氧菌和厌氧菌分离培养的基本要领和技术。
2．了解细菌的菌落形态及其在各种培养基上的培养性状。
3．了解培养性状对细菌鉴别的重要意义。
4．掌握钓菌、纯培养及移植技术。
操作步骤一．需氧性细菌分离培养法1. 平板划线分离法菌种被其他杂菌污染时或混合菌悬液常用平板划线法进行纯种分离，此法是借助将蘸有混合菌悬液的接种环在平板表面多方向连续划线，使混杂的微生物细胞在平板表面分散，经培养得到分散的由单个微生物细胞繁殖而成的菌落，从而达到纯化目的。
但划线分离的培养基必须事先倾倒好，需充分冷凝待平板稍干后才可使用；为便于划线，一般培养基不宜太薄，每皿约倾倒20 ml 培养基，培养基应厚薄均匀，平板表面光滑。
划线分离主要有连续划线法（图4-1）和分区划线法（图4-2）两种。
划线法示意图见图4-3。
（1）连续划线法以无菌操作用接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。
将菌种点种在平板边缘一处，取出接种环，烧去多余菌体。
将接种环再次通过稍打开皿盖的缝隙伸入平板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却，然后从接种细菌的部位在平板上自左向右轻轻划线，划线时平板面与接种环面成30～40度角，以手腕力量在平板表面轻巧滑动划线，接种环不要嵌入培养基内划破培养基，线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠。
划线完毕，关上皿盖。
灼烧接种环，待冷却后放置接种架上。
培 养皿倒置于适宜的恒温箱内培养。
培养后在划线平板上观察沿划线处长出的菌落形态，涂片镜检为纯种后再接种斜面。
细菌的分离培养实验报告
一、实验目的1. 掌握细菌分离培养的基本原理和方法。
2. 学会使用平板划线法分离纯种细菌。
3. 了解细菌在固体培养基上的生长特征。
二、实验原理细菌分离培养是指从含有多种细菌的混合物中，通过特定的方法将所需细菌分离出来，形成纯培养的过程。
常用的分离方法有平板划线法、稀释涂布平板法等。
平板划线法是一种简便、常用的分离方法，其原理是通过接种环在琼脂平板上划线，使菌液逐渐稀释，从而使单个细菌生长成单个菌落，便于分离纯种细菌。
三、实验材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、普通琼脂平板、肉汤培养基、半固体培养基、斜面培养基。
3. 工具：接种环、接种针、酒精灯、无菌镊子、无菌移液器、无菌吸管、无菌培养皿、恒温培养箱等。
四、实验方法1. 平板划线法分离纯种细菌（1）将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板上，用接种环在平板上划线。
（2）将划线平板倒置，放入恒温培养箱中培养。
（3）观察菌落生长情况，挑取单个菌落，接种于新的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板上，重复划线分离。
2. 细菌在固体培养基上的生长特征观察（1）将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板上，用接种环在平板上划线。
（2）将划线平板倒置，放入恒温培养箱中培养。
（3）观察菌落生长情况，记录菌落特征，如菌落大小、形状、颜色、边缘等。
五、实验结果与分析1. 平板划线法分离纯种细菌经过平板划线分离，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均成功分离出纯种细菌。
2. 细菌在固体培养基上的生长特征观察金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，边缘整齐，表面光滑；大肠杆菌菌落呈无色或淡黄色，边缘整齐，表面光滑；枯草芽孢杆菌菌落呈白色，边缘不整齐，表面有皱纹。
六、实验讨论1. 平板划线法是一种常用的分离纯种细菌的方法，其原理是利用接种环在琼脂平板上划线，使菌液逐渐稀释，从而使单个细菌生长成单个菌落。
分离培养细菌的实验报告
一、实验目的1. 学习分离培养细菌的基本原理和方法。
2. 掌握平板划线法和稀释涂布平板法两种分离细菌的方法。
3. 熟悉显微镜的使用，观察细菌的形态。
二、实验原理细菌是一种微小的单细胞生物，具有高度的自我复制能力。
分离培养细菌是微生物学研究中的一项基本技术，通过分离培养，可以纯化细菌，便于对其生物学特性进行研究。
分离培养细菌的方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法。
平板划线法：将细菌涂布在琼脂平板上，用接种环划线，使细菌在琼脂上逐渐稀释，最终形成单个菌落。
稀释涂布平板法：将细菌进行系列稀释，取一定量的稀释液涂布在琼脂平板上，培养后观察菌落形成。
三、实验材料1. 细菌样品：土壤、水体、食品等。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、营养琼脂培养基等。
3. 实验器材：接种环、无菌操作台、酒精灯、镊子、培养皿、显微镜等。
四、实验步骤1. 分离培养细菌（1）取适量细菌样品，加入适量的无菌水，进行系列稀释。
（2）将稀释后的样品涂布在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上。
（3）将平板倒置，放入37℃恒温培养箱中培养。
2. 观察菌落形态（1）用接种环挑取单个菌落，进行平板划线。
（2）将平板倒置，放入37℃恒温培养箱中培养。
（3）观察菌落形态，记录菌落颜色、大小、形状等特征。
3. 镜检细菌形态（1）取适量菌落，加入适量的无菌水，制成悬液。
（2）取一滴悬液，滴在载玻片上，盖上盖玻片。
（3）用显微镜观察细菌的形态，记录细菌的大小、形状、排列等特征。
五、实验结果与分析1. 分离培养细菌在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，观察到多个菌落形成，颜色、大小、形状各异。
2. 观察菌落形态通过平板划线法，观察到单个菌落，菌落形态各异，部分为革兰氏阳性菌，部分为革兰氏阴性菌。
3. 镜检细菌形态在显微镜下观察到细菌的形态，部分为球状，部分为杆状，部分为螺旋状。
六、实验结论1. 成功分离培养出多种细菌。
2. 掌握了平板划线法和稀释涂布平板法两种分离细菌的方法。
3. 熟悉了显微镜的使用，观察到了细菌的形态。
任务三病料中细菌的分离培养及培养性状观察教案.
国家高等职业教育畜牧兽医专业教学资源库 《动物微生物与免疫技术》
任务三 病料中细菌的分离培养及培养特性观察教案
注：标记★的内容为重点，标记◎的内容为难点。
授课内容
病料中细菌的分离培养及培养性状观察 授课时数 2 授课教师
授课班级 授课类型
技能课 授课场地 教学做一体化实验室 教学材料 PPT 及各种试验器材 教学方法 讲授、示教、操作
教学重点 细菌分离培养的方法及大肠杆菌在不同培养基上的菌落特征
教学难点 分区划线法及结果判定
教学目标 能对病料中细菌进行分离培养并会进行结果观察和分析
教学内容
及
过
程
任务三 病料中细菌的分离培养及培养性状观察（约2学时）
一、说明病料中细菌分离培养的目的及方法：
获得单个菌落、分区划线法
二、讲授实验方法并示教
病料中细菌的分离培养步骤
无菌操作：从病料中取菌 平板分区划线 培养 三、学生操作该试验 四、试验结论分析及记录 ➢ 第二天观察并分析分离培养结果，根据菌落特征进一步判断病料中细菌是否为大肠杆菌 习题作业 1. 试述大肠杆菌在伊红美蓝、麦康凯、SS 琼脂平板上的菌落特征？
2. 说出病料中细菌分离培养的目的及方法？
课后反思 1.强调好无菌操作应注意的问题2.让学生结合实验结果写出初步诊断结论。
实验二 球菌的分离培养及微生物学鉴定
实验二球菌的分离培养及微生物学鉴定病原性球菌主要指葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎球菌及淋球菌。
这些细菌经常引起人类的化脓性疾病，故又称化脓性球菌。
在临床进行微生物学检查时，根据这些细菌各不相同的形态、染色、培养等特点，即可做出初步诊断。
当难以确定它们的致病性或耐药性时，则需作进一步的实验来鉴定。
几种病原性球菌的主要形态、培养特点见表2-1。
表2-1 病原性球菌的主要形态及培养1、葡萄球菌属（一）目的要求1．掌握葡萄球菌的鉴定方法。
2．熟悉葡萄球菌的生物学性状。
（二）器材和试剂1．菌种金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌。
2．培养基普通琼脂平板、血琼脂平板、甘露醇发酵管、甲苯胺蓝核酸琼脂、10g ／L盐水琼脂，液体培养基。
3．试剂双氧水（H202）、革兰染色液。
4．其他新鲜兔血浆（或人血浆）、新生霉素纸片、标准肠毒素、幼猫、抗肠毒素血清。
（三）步骤和方法1．形态观察取普通琼脂平板上葡萄球菌培养物少许与载玻片上生理盐水磨匀，革兰染色后镜检可见革兰阳性葡萄状排列的球菌。
2．菌落观察取三种葡萄球菌分别划线分离接种普通琼脂平板和血琼脂平板，35°C 孵育18～24h后观察菌落。
三种葡萄球菌在普通琼脂平板上形成中等大小、圆形、表面光滑、边缘整齐、不透明菌落，并可产生不同的脂溶性色素，如金黄色葡萄球菌呈现金黄色色素、表皮葡萄球菌大多呈白色色素、腐生葡萄球菌大多呈柠檬色素。
三种葡萄球菌在血琼脂平板上出现的菌落类似它们在普通琼脂平板上的菌落，但金黄色葡萄球菌菌落周围有明显溶血环，而表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌菌落周围无溶血环。
3．生化反应（1）血浆凝固酶试验：①原理：金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白，附着于细菌表面，在玻片上形成凝块；也可使试管中血浆发生凝固。
②方法：玻片法：取未稀释的兔血浆和生理盐水各－－滴分别滴于载玻片上，挑取金黄色葡萄球菌菌落少许分别与它们混合，立即观察结果。
细菌的分离培养与纯培养实验报告
细菌的分离培养与纯培养实验报告一、实验目的本实验旨在掌握细菌的分离培养方法，了解纯培养的原理及方法，以及熟悉细菌培养基的制备和使用。
二、实验原理1. 细菌分离培养方法细菌分离培养是指将混合菌落中的单一细菌分离出来，使其在无竞争的环境中独立生长。
常用的方法有均匀涂布法、斜坡涂布法和点式涂布法。
2. 纯培养原理及方法纯培养是指将混合菌落中同一种细菌分离出来并进行单独培养。
常用的方法有挑选法和稀释法。
3. 细菌培养基制备与使用细菌培养基是供给微生物生长发育所需营养物质和条件的一种人工环境。
根据不同需求可制备不同类型的细菌培养基，如寒偏好性、厭氧性、选择性、差异性等。
常用的细菌培养基有普通营养琼脂平板、LB 平板等。
三、实验步骤1. 细菌分离培养（1）取一支无菌的铂丝，将其消毒并冷却。
（2）取一份混合菌落，将铂丝在其表面轻轻刮几下，使细菌附着在铂丝上。
（3）将铂丝均匀涂布于琼脂平板上。
（4）重复以上步骤，涂布多个琼脂平板。
（5）将琼脂平板放置于恒温箱中，在适宜的温度下培养。
2. 纯培养（1）取一份混合菌落，在显微镜下观察并挑选出同一种细菌。
（2）取一支无菌的铂丝，在混合菌落表面轻轻刮几下，使细菌附着在铂丝上。
（3）将铂丝均匀涂布于琼脂平板上，并进行单独培养。
3. 细菌培养基制备与使用（1）按照需要制备不同类型的细菌培养基，并进行消毒灭菌处理。
（2）将需要进行分离或纯化的混合菌落均匀涂布于培养基上，进行培养。
四、实验结果1. 细菌分离培养经过适当时间的培养后，可看到琼脂平板上出现单一的细菌菌落。
2. 纯培养经过适当时间的培养后，可看到琼脂平板上只有挑选出的同一种细菌菌落。
3. 细菌培养基制备与使用制备好的细菌培养基可用于分离、纯化和大量繁殖特定细菌。
五、实验注意事项1. 实验器材需消毒并严格无菌操作。
2. 均匀涂布法需注意铂丝在琼脂平板上均匀涂布。
3. 液体培养基需注意摇晃均匀以使细菌均匀分布。
4. 实验结束后要彻底清洗和消毒实验器材和工作台面。
细菌的分离培养实验报告
细菌的分离培养实验报告细菌的分离培养实验报告细菌是微生物中的一类重要生物体，它们广泛存在于自然界的各个环境中，包括土壤、水体、空气以及人体等。
研究细菌的分离培养对于了解其生态特征、代谢能力以及与人类健康相关的病原性等方面具有重要意义。
本次实验旨在通过分离培养的方法，获取和鉴定不同细菌菌株，从而深入了解细菌的多样性和功能。
实验材料和方法：1. 实验材料：含有营养成分的琼脂平板、离心管、移液器、无菌培养皿等。
2. 实验方法：将待分离的样品（如土壤、水样等）加入到含有营养成分的琼脂平板中，用无菌棉签均匀涂抹在平板表面，然后在恒温培养箱中进行培养。
实验结果与讨论：经过一段时间的培养后，我们观察到了琼脂平板上的细菌生长。
细菌形态的多样性令人惊叹，有的细菌呈圆形，有的呈椭圆形，还有的呈链状、菌丝状等。
这种多样性反映了细菌在适应各种环境中的进化和适应能力。
为了更好地了解这些细菌的特性，我们进行了进一步的分离培养。
首先，我们选择了一些形态和颜色不同的菌落进行分离。
通过无菌棉签的转接，我们将这些菌落分别接种到新的琼脂平板上。
经过培养，我们得到了一系列纯培养的细菌菌落。
接下来，我们对这些纯培养的细菌进行了形态观察和生理生化试验。
形态观察包括细菌的大小、形状、颜色等特征，而生理生化试验则包括对细菌的代谢能力、酶活性等方面的测试。
通过这些试验，我们可以初步了解细菌的分类和功能。
在形态观察中，我们发现了一些细菌呈现出独特的特征。
比如，某些细菌呈现出亮黄色的菌落，这可能与其代谢产物有关。
而另一些细菌则呈现出粘稠的菌落，这可能与其产生胶原蛋白等粘附物质有关。
这些特征为我们进一步研究细菌的功能和应用提供了线索。
在生理生化试验中，我们使用了一系列常见的试剂和培养基，如甲基红试剂、氧化酶试剂、柠檬酸盐培养基等。
通过对细菌的反应观察，我们可以初步判断其代谢能力和酶活性。
例如，某些细菌在柠檬酸盐培养基上呈现出黄色，这可能是由于其产生了柠檬酸酶。
细菌分离培养实验报告
一、实验目的1. 了解细菌的生长特性。
2. 掌握细菌分离培养的方法。
3. 培养出单一菌株，为后续的鉴定和研究提供基础。
二、实验原理细菌分离培养是指将混合菌落中的单一细菌分离出来，使其在无竞争的环境中独立生长。
常用的方法有均匀涂布法、斜坡涂布法和点式涂布法。
本实验采用均匀涂布法进行细菌分离培养。
三、实验材料1. 培养基：营养琼脂平板2. 细菌样本：土壤样本3. 仪器：无菌操作台、无菌镊子、无菌移液器、无菌接种环、酒精灯、培养箱等四、实验步骤1. 无菌操作：在无菌操作台中，将培养基平板倒置放置，待平板凝固。
2. 取样：用无菌镊子取少量土壤样本，放入无菌试管中。
3. 制备土壤悬液：向试管中加入适量无菌生理盐水，用无菌移液器充分振荡，使土壤样本充分悬浮。
4. 稀释：取适量土壤悬液，加入无菌生理盐水进行稀释，制备不同浓度的土壤悬液。
5. 接种：用无菌接种环蘸取稀释后的土壤悬液，均匀涂布在营养琼脂平板表面。
6. 培养：将涂布好的平板倒置放入培养箱，在适宜的温度下培养。
7. 观察结果：定期观察平板上的菌落生长情况，记录菌落特征。
五、实验结果与分析1. 观察到平板上有不同形态的菌落生长，说明土壤样本中存在多种细菌。
2. 通过观察菌落特征，如菌落大小、形状、颜色、边缘等，初步判断部分菌落可能为同一种细菌。
3. 对疑似同种细菌的菌落进行挑取，进行纯培养。
六、实验讨论1. 本实验采用均匀涂布法进行细菌分离培养，操作简单，易于观察菌落特征。
2. 在实验过程中，无菌操作至关重要，以免污染样本和培养基。
3. 细菌分离培养结果受多种因素影响，如培养基成分、培养条件等，需严格控制实验条件。
4. 通过本实验，掌握了细菌分离培养的基本方法，为后续的细菌鉴定和研究奠定了基础。
七、实验总结通过本次实验，我们了解了细菌的生长特性，掌握了细菌分离培养的方法，为后续的细菌鉴定和研究提供了基础。
在实验过程中，我们认识到无菌操作的重要性，以及实验条件对实验结果的影响。
实验二 细菌的分离培养及移植
[目的要求]
1、掌握细菌分离培养的基本要领和方法。
2、掌握厌氧菌培养的原理及其方法。
[细菌分离培养和移植的一般原则]
分离培养的目的是在含多种细菌的病料或培养 物中挑选出某种细菌。在分离培养时应注意以下 事项： 1、选择适合于所分离细菌生长的培养基。 2、确定合适的培养温度。 3、根据细菌的生长要求决定培养的气体条件。 4、要严格地进行无菌操作。 5、做好标记。
（1）厌氧罐法
将接种好的厌氧菌培养皿依次放于厌氧罐中，先抽
去部分空气，代以氢气至大气压。
通电，使罐中残存的氧与氢经铂或钯的催化而化合
成水，使罐内氧气全部消失。
将整个厌氧罐放入温箱培养。本法适用大量的厌氧 菌培养。
（2）真空干燥器法
将欲培养的平皿或试管放入真空干燥器中 ，开动抽气机，抽至高度真空后，替代以 氢、氮或二氧化碳气体。将整个干燥器放 进温箱培养。
2、稀释涂布分离法（自学）
首先将待分离的材料做10×的连续稀释，如
10-1、10-2、10-3…等； 选择几个合适的稀释度，分别从中吸取一 定量的稀释液（0.1ml），加到不同的平板 培养基表面，再用灭菌玻璃推棒将液体推 匀，做好标记， 置37℃培养。经培养后即可出现单个菌落。
3、纯培养
①取一个干燥器，用水量出其体积。 ②按体积计算并称量出焦性没食子酸和10％氢氧化钠的用 量。 ③将氢氧化钠溶液倒入干燥皿的底部，将焦性没食子酸用 纸包好，用青霉素小瓶将焦性没食子酸支撑于氢氧化钠溶 液上方，两种药品勿接触。 ④放上隔板，将接种好的培养皿放在隔板上。 ⑤放入一支美蓝指示剂管。 ⑥将干燥皿边缘涂一层凡士林油，并盖盖密封，轻轻摇动 干燥皿，使焦性没食子酸落入氢氧化钠溶液中，将干燥皿 放入温箱培养，经2～3d，即可看到细菌生长。 美蓝指示剂可显示干燥器中的厌氧程度，美蓝在有氧时呈 氧化型（蓝色），无氧时呈还原型（无色）。
实验2 细菌的分离培养与鉴定
吲哚（靛基质）试验(Production of indole)
有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨 中的色氨酸而产生靛基质，靛基质无色，不 能直接查见，此时滴加数滴吲哚试剂于培养 基的液面上，上层呈玫瑰红色者为阳性，仍 呈黄色者为阴性。
甲基红（methyl red）试验
将细菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，37℃ 培养48h后，再向其中加入甲基红试剂3滴。
1、3：有动力： 呈云雾状 2：无动力：
沿穿刺线生长， 并变粗
四、细菌的生化反应
1 糖发酵试验(Fermentation of sugars) 2 IMViC 试验 ➢ 靛基质产生试验（吲哚试验） ➢ 甲基红试验 ➢ V-P试验 ➢ 枸橼酸盐利用试验 3 硫化氢产生试验 4 尿素分解试验
糖发酵试验
大肠埃希菌枯草芽孢杆菌送培养24小时2支组一组37温箱一组60温箱一组菌种任选一种大肠埃希菌枯草芽孢杆菌葡萄球菌接种每一菌种分别接种ph5090的营养肉汤各一支琼脂半固体接种法1人一份菌种大肠埃希菌枯草芽孢杆菌葡萄球菌接种用接种针穿刺接种送37温箱培养24小时3
实验2 细菌的分离培养与鉴定
一 培养基的制备 二 消毒与灭菌 三 细菌的接种和培养 四 细菌的生化反应
一 培养基的制备
步骤： 1 称量药品 2 溶解 3 调节PH 5 过滤分装 6 包扎标记 7 灭菌
二 消毒灭菌法
物理灭菌法：
干热灭菌法：150-170 ℃ 维持 1-2h； 高压蒸汽灭菌法121℃（101.53kPa）15-30min； 其他：过滤除菌法、紫外线灭菌法。
化学灭菌法：主要使用一些化学消毒剂进行，
pH5.0 / 7.2 / 9.0的营 养肉汤各一支 3. 送37℃温箱培养24小 时
液体培养基
细菌分离培养及培养特性观察
四、实验方法与步骤
2.平板划线分离 最常用的平板接种法是划线法。先将 接种环用火焰灭菌，待冷却后挑取检查 材料，涂于平板的上端，随即向下连续 平行划线至平板的底部，划线时接种环 与平板表面所成的角度要小，以免划破 琼脂。划线要密而不重复，充分利用平 板的表面。划线完毕，先盖好平板，再 将接种环上残留的细菌用火焰灭菌。
菌落形态
五、注意事项
观察菌落时，不要将空气中落入培养基 而生长的杂菌误认为目的细菌。 杂菌一般生长于划线痕迹外，或为个别 的形状异常的孤立菌落。 保护好平板，勿使再落入杂菌。
六、实验作业
1、细菌分离培养的原理？ 2、细菌分离培养及移植应注意哪些事项？ 3、将细菌菌落观察结果绘图记录。 4、完成实验报告。
微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常 是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取 单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可 通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。 将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养 基上的操作技术称之为接种。接种的关键是要严格 的进行无菌操作。 细菌的培养特性包括细菌的生长条件和生长表现， 单个细菌或单种细菌在固体培养基表面生长繁殖， 形成肉眼可见的菌落，各种细菌所形成的菌落特征 是不同的，按照各种细菌所形成的菌落特征，可以 在鉴别细菌中作为依据。
三、实验器材
牛肉膏蛋白胨培养基、接种环、酒精 灯、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、接种 环、无菌培养皿、涂布器、恒温培养箱 等。
四、实验方法与步骤
倒平板 划线 培养 挑单菌落 接种移植 保存
四、实验方法与步骤
1.倒平板
右手持盛培养基的三角瓶置火焰 旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地 拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然 后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近 打开一缝，迅速倒人培养基约15ml， 加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均 匀分布在培养皿底部，然后平置于桌 面上，待凝后即为平板。
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纯培养物
移植培养
。。。。。。
一、目的要求
1、掌握细菌（需氧菌、厌氧菌）分离培养的基本要领
2、掌握钓菌、纯培养及移植技术
3、了解细菌在固体、液体培养基中的生长表现
4、了解培养性状对细菌鉴别的重要意义
接种工具
接种针和接种环：由三部分组组成，即环（针）、金
属柄和绝缘柄。接种前后都要过火灭菌。接种针用于
纯菌。
一、目的要求 一、常用的细菌培养方法
1、需氧菌分离培养法
（1） 平板划线分离法
方法： 分区划线法：适用于含菌量较多的标本。 连续划线法：适用于含菌量较少的标本。
一、目的要求 1、常用的细菌培养方法
（1）需氧菌分离培养法
1. 平板划线分离法
方法： 分区划线法：适用于含菌量较多的标本。
分区划线法
1、细菌在固体培养基中的生长现象
• 菌落 – 定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单 一肉眼可见的细菌集团。 – 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、
湿润度、黏度、溶血性。
• 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。
菌落
菌苔
菌落与菌苔
一、目的要求 （三）细菌在培养基上的生长表现
无动力 现象
有动力 现象
思 考？
1、细菌分离培养的目的是什么？何谓纯培养？
2、培养皿培养时为什么要倒置？ 3、描述接种细菌在液体培养基、固体培养基中
的生长表现。
斜面培养基接种法：用于培养，保存菌种及其它实验用。 液体培养基接种法：用于增菌及鉴定细菌生长特点，如表面 生长，沉淀生长，均匀混浊生长等。
二、材料
1. 器材：接种环、酒精灯、打火机。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基及其培
养液，试管斜面培养基。
3. 菌种：未知混合菌种。
一、目的要求 （三）细菌在培养基上的生长表现
穿刺接种细菌，接种环用于固体、液体培养基的细菌
接种。
接种环境
VS-1300-U型洁净工作台
接种的基本程序
灭菌接种环 沾取标本 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本
接种
灭菌接种环
杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境
一、目的要求 （一）常用的细菌培养方法
1、需氧菌分离培养法
（1）平板划线分离法
目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得
实验二 细菌分离培养与培养性状观察
一、目的要求 从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的方法成为分离；
纯培养是指一株菌种或一个培养物中所有的细菌都是由 一个细菌分裂、繁殖而产生的后代； 分离培养的目的在于从被检材料中、或者从污染的众 多杂菌中分离出纯的病原菌。
一、目的要求被检材料或病料
分离
单个菌落
2、细菌在液体培养基中的生长现象
• 混浊 • 沉淀：多见于链状排列的细菌。 • 菌膜：多见于厌氧菌。
菌膜
对照
菌沉淀
均匀浑浊
一、目的要求 （三）细菌在培养基上的生长表现
3、细菌在半固体培养基中的生长现象
• 有鞭毛细菌： – 在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘 模糊。 • 无鞭毛细菌：
– 只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
连续划线法
一、目的要求 （一）常用的细菌培养方法
2、厌氧菌分离培养法
（1）肝片肉汤培养法
（2）焦性没食子酸法
一、目的要求 （一）常一、目的要求 （二）钓菌、纯培养及细菌移植技术
细菌移植