体液蛋白质检验
医学课件体液蛋白质检验
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检验学部属于蛋白质的实验项目
生化室：总蛋白，白蛋白，球蛋白，载脂蛋白A1，载脂蛋
白B，前白蛋白，脂蛋白（a），高密度脂蛋白，低密度脂蛋 白，极低密度脂蛋白，血清蛋白电泳（白蛋白，α1、α2 、 β 、γ球蛋白），血尿β2微球蛋白，糖化血红蛋白，肌钙 蛋白-T，24小时尿蛋白定量，尿微量白蛋白，酶类。
心
血浆蛋白质的分类
3、血浆蛋白质的分类
• 根据分离方法： ①盐析法：白蛋白和球蛋白两大类（各种蛋白 质的亲水性和所带的电荷均有差别。） ②电泳法（醋酸纤维素薄膜）：白蛋白、α1－ 球蛋白 、 α2 － 球蛋白、 β －球蛋白、纤维 蛋白原、γ－球蛋白。
电泳法分类
白蛋白（40－60％）
α1-球蛋白（α1-抗胰蛋白酶、血清 类粘蛋白、α1-酸性糖蛋白、甲胎 蛋白）
尿中蛋白超过以上数值则称蛋白尿。
2、前白蛋白（prealbumin, PA）
肝细胞合成，分子量54 000，半衰期12小时。 在pH8.6电泳中移速比白蛋白快而得名。 • ⑴功能：①营养 半衰期12小时； • ②运载 结合T3、T4、结合维生素A。
参考范围 PA 0.18~0.45g/ L
生理功能
α2-球蛋白（α-脂蛋白、触珠蛋白、 铜蓝蛋白、α2-巨球蛋白）
β-球蛋白（转铁蛋白、血红素结合 蛋白、 β微球蛋白、纤维蛋白原、 β脂蛋白、补体） γ-球蛋白（各种免疫球蛋白主要位 置及C-反应蛋白）
根据生理功能分类：
பைடு நூலகம்
二、一些临床常检测血浆蛋白质
1、白蛋白（albumin , Alb) 肝实质细胞合成，分子量66 458， 半衰期15～19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占40～60％。 在肝细胞中没有贮存。 • 分子结构1975年阐明，含585个氨基酸残基的单链多肽， 分子量66458，含17个二硫键（—S—S—），不含糖的组分。
生化检验 体液蛋白质检测 知识点
第八章体液蛋白质检测1、何为急性时相反应蛋白？有哪些？答：发生急性疾病时，血浆中许多蛋白质浓度会发生明显变化，有些蛋白质浓度升高，有些蛋白质浓度降低，随着病情好转，这些蛋白质有逐渐恢复正常。
这种现象称为急性时相反应，而这些浓度会发生改变的蛋白质则成为急性时相反应蛋白。
包括α1-AG，α1-AT，Hp，CER,C3，C4，Fib，CRP,PA,Alb,TRF等。
2、双缩脲法为什么不能用于测定二肽或氨基酸？答：双缩脲法至少需要2个甲酰氨基才能与Cu2+络合，所以氨基酸和二肽无此反应。
3、MM（多发性骨髓瘤）时，血清蛋白质电泳图谱有何特征性表现？答：出现典型的M蛋白峰，是由于多发性骨髓瘤患者浆细胞浸润引起的，M蛋白出现在γ区，称为“γ型”，出现在β区，称为“β型”，是多发性骨髓瘤的一项重要诊断标准。
章节词汇：1、血浆蛋白质：血浆蛋白是指血浆中的蛋白部分，血浆蛋白是多种蛋白质的总称。
2、前清蛋白（前白蛋白PA）：前清蛋白是一种载体蛋白，由肝细胞合成，一种能与甲状腺素结合，称为甲状腺素结合蛋白，一种能运输维生素A，称为维生素A结合蛋白。
3、清蛋白（白蛋白Alb）：由肝合成，是血浆中含量最多的蛋白质，占40%~60%，维持血浆渗透压，缓冲作用，运输作用，调节激素或药物活性。
4、铜蓝蛋白（CER）：主要由肝脏合成，因含铜呈蓝色，具有氧化酶活性，是血液中Fe2+氧化成Fe3+。
5、转铁蛋白（TRF）：血浆中主要含铁蛋白质，由肝及网状皮系统合成，主要运载由消化道吸收的铁和RBC降解释放的铁。
6、结合珠蛋白（Hp）：又称触珠蛋白，是一种糖蛋白，由肝合成，电泳位于ɑ2区带，能与血红蛋白进行不可逆结合，是一种急性时相反应蛋白。
7、AAT（ɑ1-抗胰蛋白酶）：又称ɑ1-AT，电泳时位于ɑ1区带，占90%左右，由肝细胞合成，能抑制多种酶活性。
8、AAG（ɑ1-酸性糖蛋白）：又称ɑ1-AG，由肝细胞合成，是主要的急性时相反应蛋白，急性炎症时上升。
检验蛋白质的方法
检验蛋白质的方法
第一种方法是生物素标记法。
生物素标记法是通过将生物素与蛋白质结合，然后用生物素与酶的结合作用来检测蛋白质的存在。
这种方法具有灵敏度高、特异性强的特点，适用于检测蛋白质的存在和纯度。
第二种方法是免疫沉淀法。
免疫沉淀法是通过将抗体与蛋白质结合，然后用沉淀剂将蛋白质沉淀下来，最后通过洗涤和电泳等步骤来检测蛋白质的存在。
这种方法适用于检测蛋白质的结构和相互作用。
第三种方法是质谱法。
质谱法是通过将蛋白质进行分子质量的测定，然后通过质谱仪来检测蛋白质的存在和结构。
这种方法具有高灵敏度、高分辨率的特点，适用于检测蛋白质的组成和修饰。
除了以上介绍的方法，还有许多其他的方法可以用来检验蛋白质，比如酶联免疫吸附试验、免疫荧光染色法等。
这些方法各有特点，可以根据实际需要选择合适的方法来进行蛋白质的检验。
总的来说，检验蛋白质的方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在进行蛋白质检验时，我们可以根据需要选择合适的方法来进行检验，以确保检验结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的方法对大家有所帮助，谢谢阅读！。
蛋白质组学标本要求
蛋白质组学标本要求蛋白质组学是研究蛋白质在生物系统中的表达、组成、功能和相互作用的一门学科。
在进行蛋白质组学研究时，选择合适的标本对于结果的准确性和可靠性至关重要。
本文将介绍蛋白质组学研究中常用的标本要求。
一、组织和细胞标本组织和细胞是蛋白质组学研究的常见标本。
在选择组织和细胞标本时，需要考虑以下要求：1. 样本来源：标本应根据研究目的选择合适的来源，如人体组织、动物模型或细胞系。
2. 样本数量：样本数量应根据研究的统计学要求确定，通常需要多个重复样本来获得可靠的结果。
3. 样本质量：样本质量对于蛋白质组学研究至关重要。
标本应避免受到污染或降解，如冷冻保存、离心分离、快速冻结等可以保证样本质量。
4. 样本处理：样本处理应尽量避免蛋白质的降解和修饰。
常见的处理方法包括冷冻研磨、离心分离、蛋白质提取等。
二、体液标本体液标本是蛋白质组学研究的重要标本之一。
在选择体液标本时，需要考虑以下要求：1. 样本类型：常见的体液标本包括血浆、血清、尿液、唾液等。
选择合适的体液标本应根据研究目的和样本获取的便利性综合考虑。
2. 样本收集：样本的收集应遵循规范的操作流程，避免污染和样本失活。
例如，血液标本应采用抗凝剂进行处理，避免血液凝固。
3. 样本保存：体液标本在采集后需及时处理或冷冻保存，以保证蛋白质的稳定性和完整性。
4. 样本预处理：体液标本中存在大量的蛋白质，为了提高检测的灵敏度和准确性，常需要进行样本预处理，如蛋白质浓缩、清除高丰度蛋白等。
三、细胞外液标本细胞外液标本是研究细胞外蛋白质组的重要手段。
在选择细胞外液标本时，需要考虑以下要求：1. 样本类型：常见的细胞外液标本包括细胞培养上清液、胶原水解液、脑脊液等。
选择合适的细胞外液标本应根据研究目的和样本获取的便利性综合考虑。
2. 样本收集：样本的收集应遵循规范的操作流程，避免污染和样本失活。
例如，细胞培养上清液应在细胞生长状态良好时收集，避免细胞死亡。
3. 样本保存：细胞外液标本在采集后需及时处理或冷冻保存，以保证蛋白质的稳定性和完整性。
体液蛋白质检验(生物化学检验课件)
（一）血浆蛋白质的分类 1. 根据分离方法分类
盐析法：（pH7.0半饱和的硫酸铵溶液） 分为清蛋白和球蛋白(最简单)
醋酸纤维素薄膜电泳：6种
分
电泳法 (实用)
琼脂糖凝胶电泳：13种 聚丙烯酰胺凝胶电泳：30种
第七章
体液蛋白质检验
教学目标 OBJECTIVES
知识目标
✓ 简述血浆蛋白质的组成、功能及分类。 ✓ 认识血清总蛋白和、白蛋白、纤维蛋白原的测定方法和原理。 ✓ 归纳急性时相反应蛋白的概念、种类和临床意义。
能力目标
✓ 描述血浆中主要蛋白质的来源、功能和临床意义。 ✓ 描述常见相关疾病蛋白质水平的典型变化特征。
(六) α2-巨球蛋白(α2-MG，AMG)
合成部位：肝细胞和单核吞噬细胞系统合成 理化性质：分子量最大的蛋白质，625-800KD 生理功能：是血浆中主要的蛋白酶抑制剂，能与蛋白水解酶 （如纤维蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶及组织蛋 白酶）结合而抑制这些酶的活性
临床意义 ①低蛋白血症（如肾病综合症）时升高，可能是一种代偿机制以 保持血浆胶体渗透压 ②妊娠及口服避孕药时升高 ③新生儿及儿童比成人高2-3倍，是保护作用，抗衡较高浓度的 蛋白酶
生理功能 ①急性时相反应主要蛋白：急性炎症时升高，与免疫防御功能 有关 ②可结合利多卡因和普萘洛尔（心得安），急性心肌梗死时 AAG作为急性时相反应升高，可干扰药物剂量的有效浓度
临床意义 ①作为急性时相反应指标：风湿病，恶性肿瘤，心肌梗死和组 织坏死时增高；一般增加3-4倍 ②随糖皮质激素而增加，包括内源性的Cushing综合征和外源 性强的松、地塞米松等药物治疗时；雌激素使其降低。 ③营养不良，肝严重损伤、肾病综合征、胃肠道疾病致蛋白严 重丢失等情况下AAG降低 ④AAG升高是活动性溃疡性结肠炎最可靠的诊断指标之一 参考范围：0.25-2.0g/L
第8章 体液蛋白质检验(4课时+2课时病例分析)
血浆蛋白质功能
1.直接在血液中发挥作用
在血浆中运载弱水溶性物质 维持血浆胶体渗透压(清蛋白) 组成血液pH缓冲系统
因在急性炎症病人血清中出现的可以结合 肺炎球菌细胞壁C-多糖的蛋白质而命名 是第一个被认定的急性时相蛋白 由肝细胞所合成，115kD 电泳分布在慢γ区带，有时可延伸到β区带
广泛存在于体液中，具有类似抗体的功能，能 激活补体，促进粒细胞、白细胞的运动和吞噬， 有免疫调理作用和吞噬作用，表现炎症反应
血浆蛋白质有多种功能，PA即TTR能转运甲状 腺激素，并结合携带视黄醇的RBP；ALB是最 重要的血浆营养蛋白和血浆载体蛋白；AAG是 主要的APP；AAT是最重要的蛋白酶抑制物； Hp结合Hb并防止Hb从肾脏丢失；血浆铜95％ 存在于Cp中；TRF携带铁在血液中运输；α2MG也是主要的蛋白酶抑制剂；CRP能结合异 物并激活补体；CEA是非器官特异性肿瘤相关 抗原；AFP是用于诊断肝癌的肿瘤标志物。
C-反应蛋白首先升高 12小时内α1-酸性糖蛋白也升高 然后触珠蛋白 、α1抗胰蛋白酶升高 最后是铜蓝蛋白升，早期C反应蛋白、α1抗胰蛋白 酶、α1酸性糖蛋白、触珠蛋白上升很快，然后相 继在3周内逐步降低至正常。
组织损伤后24小时血中触珠蛋白和α1抗胰蛋 白酶开始升高，同时可有血中纤维蛋白原水平的 上升，使血栓形成的可能性升高。
对血小板凝集和血块收缩有抑制作用。
是炎症、感染及疗效的良好指标。
临床意义
急性时相反应的一个极灵敏的指标。 浓度升高：急性心肌梗死、创伤、感染、炎 症、外科手术、肿瘤浸润、风湿病时血浆CRP浓 度迅速显著升高，可达正常浓度的数千倍。 结合临床病史，有助于随访病程。
《体液蛋白质检验》课件
汇报人：
目录
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01
体液蛋白质检验概述
02
体液蛋白质的分类和 特点
03
体液蛋白质的检测指 标和临床意义
04
体液蛋白质检测的方 法和技术
05
体液蛋白质检验的质 量控制和标准化
06
添加章节标题
体液蛋白质检验 概述
定义和意义
体液蛋白质检验：通过检测体液中的蛋白质含量和种类，了解人体健康状况和疾病诊断的一种方 法。
检验方法
生化检验：通过 酶联免疫吸附试 验（ELISA）、 免疫荧光法等方 法检测蛋白质含 量
免疫学检验：通 过免疫电泳、免 疫印迹法等方法 检测蛋白质种类 和含量
质谱分析：通过 质谱分析法检测 蛋白质的种类和 含量
基因测序：通过 基因测序法检测 蛋白质的基因序 列和表达水平
体液蛋白质的分 类和特点
白蛋白：反映肝脏合成功能，降低可能 与肝病、营养不良有关
球蛋白：反映机体免疫功能，升高可能 与感染、炎症有关
尿蛋白：反映肾脏功能，升高可能与肾 病有关
血清蛋白电泳：检测血清中各种蛋白质 的含量和比例，有助于诊断某些疾病
血清蛋白免疫固定电ห้องสมุดไป่ตู้：检测血清中各种蛋 白质的含量和比例，有助于诊断某些疾病
临床意义
自动化检测流 程：样本采集、 样本处理、检 测分析、结果
报告等
自动化检测优 势：提高检测 效率、减少人 为误差、降低
检测成本等
体液蛋白质检验 的质量控制和标 准化
质量控制
样本采集：确保样本的完整性和准确性 检测方法：选择合适的检测方法和设备 检测环境：确保检测环境的清洁和稳定
检测人员：培训和考核检测人员的专业 技能和操作规范
《体液蛋白质检验》课件
调节生理功能
调节蛋白可以调节机体的生理 功能，如激素、生长因子等， 影响生长发育和新陈代谢。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
免疫作用
免疫蛋白能够抵御外来病原微 生物的侵害，维持机体免疫平
衡。
蛋白质的结构和性质
氨基酸组成
蛋白质由20种不同的氨基酸组 成，通过肽键连接形成多肽链
。
二级结构
多肽链通过特定的折叠方式形 成二级结构，如α-螺旋、β-折 叠等。
蛋白质相互作用分析
通过分析蛋白质之间的相互作用，揭 示蛋白质在细胞内的功能和调控机制 。
蛋白质序列分析和结构预测
蛋白质一级结构分析
对蛋白质的氨基酸序列进行分析，了解蛋白质的基本组成和特性 。
蛋白质二级结构预测
利用算法和统计模型预测蛋白质的二级结构，有助于理解蛋白质的 功能和稳定性。
蛋白质三级结构预测
蛋白质提取过程中需要注意避 免蛋白质的降解和交叉污染， 以保证蛋白质的完整性。
蛋白质的分离
蛋白质分离是利用不同蛋白质在物理、化学性质上的差异，将混合蛋白质分离开的 过程。
常用的蛋白质分离方法包括：凝胶电泳、色谱技术等。
蛋白质分离过程中需要选择合适的分离介质和条件，以保证蛋白质的纯度和回收率 。
蛋白质的纯化
监测病情
蛋白质检验可以监测病情的发展和治疗效果。例如，慢性 肝炎患者可以通过蛋白质检验了解肝脏功能状况，评估治 疗效果。
指导治疗
蛋白质检验的结果可以帮助医生制定和调整治疗方案。例 如，对于肾病患者，蛋白质检验的结果可以帮助医生判断 是否需要调整饮食或药物治疗方案。
蛋白质检验的基本概念和原理
基本概念
紫外吸收法
利用蛋白质在紫外光下的吸收特 性进行定量，准确度高，但受干 扰因素较多。
双缩脲试剂检验蛋白质的步骤
双缩脲试剂检验蛋白质的步骤1. 什么是双缩脲试剂？说到双缩脲试剂，首先得明白它是一种神奇的小液体，专门用来检验咱们的食物和体液中有没有蛋白质。
这可不是简单的“查个身份证”，而是个高大上的化学反应。
听起来复杂，但其实就是让蛋白质和试剂发生反应，形成一种特殊的颜色，哇，简直就像化学界的小魔术！如果出现紫色，那就意味着你找到了蛋白质；要是不幸没变色，那可能你的食物里面就没蛋白质哦。
2. 检测步骤2.1 准备材料那么，怎么来做这个神奇的检测呢？首先，你得准备好一些材料，别担心，不需要啥实验室里的高大上设备。
你需要一个小试管，双缩脲试剂，当然，样本也得准备好，可能是牛奶、鸡蛋或者你的运动饮料，总之就是那些含蛋白质的东西。
还有一点，别忘了你的好奇心和动手能力，这可是检测的灵魂所在！2.2 进行检测接下来，咱们就进入真正的检测环节了。
首先，把准备好的样本，毫不犹豫地倒进小试管里，别一口气倒太多哦，留点空间让它们“跳舞”。
接着，优雅地加入几滴双缩脲试剂，哦，这一步就像是给样本添加魔法元素。
轻轻摇晃试管，让它们混合得更好，像在跳一场快乐的舞会。
现在，稍微耐心等一会儿，观察试管里的变化。
就像等待美食出炉的心情一样，期待又紧张。
你会发现，慢慢地，试管里的液体颜色可能会开始变成紫色，哇，这时候你就可以兴奋地大喊“我找到了蛋白质！”如果什么变化都没有，别灰心，说明你得再去找找含蛋白质的食物，或者再试一次。
3. 检测结果的解读3.1 颜色变化一旦看到那诱人的紫色，恭喜你，这可是一种成就感的体现！这说明你的样本中含有蛋白质，可能是肉类、豆类，甚至是你每天喝的牛奶。
这种紫色变化，代表着蛋白质与双缩脲试剂之间发生了化学反应，就像老朋友重逢，欢喜得不得了。
再进一步分析的话，不同深浅的紫色也能告诉你，蛋白质的浓度高低，颜色越深，蛋白质含量就越高，简直像是在告诉你这个食物有多“营养”呢。
3.2 没有变化当然，要是试管里的液体依旧是清澈的蓝色，嗯，这就意味着你的样本中可能没有蛋白质。
体液总蛋白的测定方法和临床常用方法
体液总蛋白的测定方法和临床常用方法请注意，我将提供一些常用的体液总蛋白测定方法和临床常用方法的简要描述。
这些描述将根据提供的信息进行概述，并且可能不会提供详尽的细节。
如果您需要详细的描述，请参考相关文献或咨询专业医生或实验室专家。
1. 光比浊法：使用光比浊仪测量样品中的散射光，并根据其强度来估计总蛋白的浓度。
这种方法简便且容易自动化。
2. 比色法：使用特定试剂（如比昂司蓝B试剂）与体液中的蛋白质反应，产生特定颜色。
根据颜色的强度来估计总蛋白的浓度。
3. 分光光度法：使用分光光度计测量样品吸收的光强度。
根据样品中总蛋白的浓度，可以选择适当的波长进行测量，以提高测定的准确性。
4. 电泳法：通过电泳技术将体液中的蛋白质进行分离，根据蛋白质在凝胶中的迁移距离来估计总蛋白的浓度。
这种方法还可以提供蛋白质在体液中的分布图谱。
5. 免疫测定法：利用特定抗体与样品中的蛋白质结合来测定总蛋白的浓度。
常见的免疫测定方法包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）等。
6. 筛选法：通过筛选体液中的特定蛋白质来估计总蛋白的浓度。
这种方法通常使用特定的抗体或试剂来与目标蛋白质结合。
常见的筛选方法包括西方印迹法和免疫沉淀法。
7. 比重测定法：根据体液中总蛋白与水的比重之差来估计总蛋白的浓度。
这种方法需要准确测量样品和水的体积。
8. 透析测定法：利用透析技术将体液中的某些成分与溶剂分离，然后测定剩余液体中蛋白质的浓度。
这种方法通常用于血浆或尿液样品中总蛋白的测定。
9. 紫外吸收法：利用紫外光谱对体液样品中的蛋白质进行测量。
不同氨基酸和蛋白质在紫外区域的吸收特性可以用来估计总蛋白的浓度。
10. 球蛋白比例测定法：利用球蛋白总量和总蛋白浓度的比例来估计总蛋白的浓度。
这种方法常用于鉴别肝功能异常。
11. 溶液浓缩法：通过将体液样品浓缩以增加蛋白质的浓度，然后利用其他方法测定浓缩液中蛋白质的浓度。
12. 酸碱滴定法：利用酸碱滴定法测定体液中总蛋白的浓度。
体液蛋白质检验方法介绍
体液蛋白质检验方法介绍一、背景介绍体液蛋白质检验是临床常用的检查方法之一，用于评估机体健康和诊断疾病。
蛋白质是生命体中最重要的有机物之一，对维持机体正常功能起着重要作用。
通过体液蛋白质检验，可以了解体内蛋白质的含量和特性，判断机体的代谢状态和发生疾病的可能性。
二、体液蛋白质检验的常用方法1. 琼脂凝胶电泳法琼脂凝胶电泳法是一种常用的体液蛋白质分析方法，通过使用特定的电荷和孔隙大小，蛋白质可以在电场作用下分离成不同的带状条带。
这些条带可以用染色剂或特定的抗体进行检测和定量分析。
琼脂凝胶电泳法可以用于分析血清、尿液和其他体液中的蛋白质，可以对蛋白质的组成和浓度进行评估。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种高效的蛋白质分析方法，通过液相色谱柱将混合的蛋白质样品分离。
这种方法具有高分辨率和高灵敏度，可以用于测定体液中特定蛋白质的含量和活性。
HPLC可以用于分析血清、尿液和其他体液中的蛋白质，是一种常用的蛋白质定量和定性分析方法。
3. 免疫测定法免疫测定法是一种常用的体液蛋白质检验方法，通过免疫反应来确定体液中特定蛋白质的含量。
常用的免疫测定方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定和免疫印迹等。
这些方法利用特异性抗体和标记物（如酶、放射性同位素或荧光物质）来检测目标蛋白质。
免疫测定法具有高灵敏度和高特异性，可以用于快速、准确地定量和定性检测体液中的蛋白质。
三、体液蛋白质检验的应用体液蛋白质检验广泛应用于临床诊断和疾病监测中。
以下是一些常见的应用场景：1. 诊断疾病体液蛋白质检验可以帮助医生诊断各种疾病，如肾脏疾病、免疫系统疾病和代谢性疾病等。
通过检测体液中的蛋白质含量和组成，可以判断机体的代谢状态、炎症程度和疾病的类型。
2. 监测疾病进展体液蛋白质检验也可以用于监测疾病的进展和治疗效果。
通过定期检测体液中特定蛋白质的含量和活性，可以评估疾病的严重程度和治疗效果，指导后续治疗方案的制定。
蛋白质检测步骤
蛋白质检测步骤
蛋白质检测通常包括以下几个步骤：
1. 样品制备：将待检测的样品（如细胞、组织或液体）进行样品制备处理，以提取出其中的蛋白质。
这可以通过细胞破碎、离心、溶解等方法完成。
2. 蛋白质定量：使用合适的方法（如BCA、Bradford或Lowry 法）对提取的蛋白质进行定量，以确定样品中蛋白质的浓度。
3. SDS-PAGE电泳：将蛋白质样品按照分子量大小进行分离。
通常使用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法，将蛋白质在电场作用下经过凝胶，在凝胶中移动，使得不同分子量的蛋白质分离开来。
4. 转膜：将分离好的蛋白质从凝胶转移到膜上，一般是使用半导电转膜方法，例如使用尼龙膜或聚偏氟乙烯（PVDF）膜。
5. 免疫检测：将蛋白质膜进行免疫检测，以检测特定的蛋白质。
这可以通过Western blotting方法实现，即将膜与特异性抗体结合，形成免疫复合物，再利用染色或化学发光等方法进行检测。
6. 数据分析：根据实验结果进行数据分析和解释，确定目标蛋白质的表达水平、分子量等信息。
需要注意的是，蛋白质检测的具体步骤会因不同的实验目的和方法而有所差异，上述步骤仅是一般的流程，具体操作应根据实验需求进行调整。
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体对内的多糖。 ★能激活补体，引发调理作用，增强 细胞的吞噬功能，对血小板凝聚和血块收缩 有抑制作用。
γ-球蛋白（各种免疫球蛋白主要位置及C-反应蛋白）：电泳分布在慢γ
区带，有时可以延伸到β区带 •【参考范围】＜8.0mg/L
临床意义
1、组织修补 降低具有意义： 2、运载功能 营养不良、急性炎 症、恶性肿瘤、肝 硬化、肾炎时血清 浓度降低。 1、营养 2、胶体渗透 压 3、维持PH 4、运输作用 增高：严重失水、 输入过多 减少：丢失、肝脏 疾病、消耗性疾病、 腹水形成、肾病、 ★ 严重感染、胶原病。
Alb
36~46g/L
由淋巴细胞合成，存在于所有有核细胞的表 面，特别是淋巴细胞和肿瘤细胞。可自由通 过肾小球滤过膜，但在肾小管几乎全部重吸 收，被重吸收的β2－微球蛋白在肾小管细胞 完全降解。
4、β2－微球蛋白（ β2－microgluobin ,BMG 或β2－m）
【参考范围】1.0-2.5mg微球蛋白含量升高见于 炎症、肿瘤、各种类型白血病及肾功能衰竭， 尿毒症患者血清β2－微球蛋白可达40mg/L。
•
•
正常参考值：＜10
㎎╱L
6、 1酸性糖蛋白（1-AG）
0.25-2.0g/L,是电泳1- 球蛋白含量最高 部分, 但着色很浅。 •AAG是主要的急性时相反应蛋白， •在急性炎症时增高，显然与免疫防御功能有关明。 •早期工作认为肝是合成α1-糖蛋白的唯一器官， •近年有证据认为某些肿瘤组织亦可以合成。 升高：急、慢性感染，AMI，肾炎，结缔组织病， 自身免疫，过敏，恶性肿瘤。
7、 1抗胰蛋白酶（1-AT）
• 是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反应蛋白，分子量 为5.5万，P1值4.8，含有10%-12%糖。在醋酸纤维薄膜 或琼脂糖电泳中泳动于α1区带，是这一区带的主要组分。 区带中的另2个主要组分；α1-酸性糖蛋白含糖量特别高， α1-脂蛋白含脂类特别高，因此蛋白质的染色都很浅。 • 作为蛋白酶的抑制物，它不仅作用于胰蛋白酶，同时也作 用于糜蛋白酶、尿激酶、肾素、胶原酶、弹性蛋白酶、纤 溶酶和凝血酶等。AAT占血清中抑制蛋白酶活力的90%左 右。AAT的抑制作用有明显的pH依赖性，最大活力处于 中性和弱碱性，当pH4.5时活性基本丧失，这一特点具有 重要的生理意义。
尿中蛋白超过以上数值则称蛋白尿。
2、前白蛋白（prealbumin, PA）
肝细胞合成，分子量54 000，半衰期12小时。 在pH8.6电泳中移速比白蛋白快而得名。 • ⑴功能：①营养 半衰期12小时； • ②运载 结合T3、T4、结合维生素A。
参考范围 PA 0.18~0.45g/ L
生理功能
HBCAb-IgM, HBCAg-IgG, 丙肝抗体，戊肝抗体
肿瘤标志物：细胞角质素抗原211，铁蛋白，甲胎 蛋白， 激素类: 催乳素(PRL)，促黄体生成素(LH)，促卵泡生成素(FSH)，
促甲状腺激素(TSH),胰岛素，
补体类：C3,C4
一、血浆蛋白质的组成、功能及分类
1、血浆蛋白质的组成：
2、血浆蛋白质的功能：
2）脑脊液中的白蛋白
• CSF中白蛋白全部来自血液。 CSF中白蛋白增高与血脑屏障通透性增高有关。 可见于多发性硬化症、病毒性脑炎或脑膜炎、 细菌性脑膜炎等颅内和椎管内炎症性疾病和某 些神经系统疾病。
• 参考范围：CSF白蛋白134～237mg／L
3）、微量白蛋白尿（MA）
尿ALB 正常成人尿ALB 大约3.90～24.4mg/24h 儿童 尿ALB 0～ 13.3mg/24h 尿Alb／Cr(肌酐)<2.5mg／mmol
① 营养作用 ②维持胶体渗透压③维持正常PH ④运输作用⑤免疫与防御功能⑥催化作用⑦抑 制组织蛋白酶⑧代谢调节⑨凝血、抗凝血及纤 溶作用。
蛋白质性质
• 氨基酸性质：两性电离及等电点、紫外吸 收、呈色反应。 • 生物大分子：胶体性质、变性、沉淀和凝 固等特点。
蛋白质的分离
透析、沉淀、盐析、电泳、层析、超速离
3、转铁蛋白（transferrin , TRF 或 Tf）
单链糖蛋白由肝及单核吞噬细胞系统合成，分子量 76500，位于β－球蛋白区带，负责运载消化管吸收 的及 红细胞降解释放的铁，以转铁－Fe3+复合物的 形式进入骨髓，用于合成血红蛋白。半衰期7天。 血浆中TRF的浓度受铁供应的调节，在缺铁状态时， 血浆TRF浓度上升，经铁有效治疗后恢复到正常水 平
心
血浆蛋白质的分类
3、血浆蛋白质的分类
• 根据分离方法： ①盐析法：白蛋白和球蛋白两大类（各种蛋白 质的亲水性和所带的电荷均有差别。） ②电泳法（醋酸纤维素薄膜）：白蛋白、α1－ 球蛋白 、 α2 － 球蛋白、 β －球蛋白、纤维 蛋白原、γ－球蛋白。
电泳法分类
白蛋白（40－60％）
α1-球蛋白（α1-抗胰蛋白酶、血清 类粘蛋白、α1-酸性糖蛋白、甲胎 蛋白）
临床意义
升高：感染，肿瘤，胶原病， 妊娠，术后药物服用 （口服避孕药，激素……）
降低：遗传性： 1-AT缺乏症 后天性：ARDS， 重症肝炎，肾炎， 肺损伤，蛋白丢 失，营养不良， 早产儿，肾移植 早期排异。
8、 铜兰蛋白（ceruloplasmin, CP） 肝合成，参考区间：0.21-0.53g/L • 是一种含铜的α2糖蛋白，分子量约为12万16万，不易纯化。目前所知为一个单链多 肽，每分子含6-7个铜原子，由于含铜而呈 蓝色，含糖约10%，末端唾液酸与多肽链 连接，具有遗传上的基因多形性。 • CER具有铁氧化酶的活性，对多酚及多胺 类底物有催化其氧化的能力。最近研究认 为CER可催化Fe2+ 氧化为Fe3+ 。
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• 临床意义：
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5、C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)
⒈ CRP作为急性时相蛋白在各种急性炎症、组织损伤、 心肌梗塞、手术创伤、放射性损伤等疾病发作后数小时迅速 升高，并有成倍增长之势。病变好转时，又迅速降至正常， 其升高幅度与感染的程度呈正相关。
⒉ CRP与其它炎症因子的相关性： CRP与其它炎 症因子如白细胞总数、红细胞沉降率和多形核白细胞等具有 密切相关性。CRP与WBC存在正相关。在炎症反应中起着 积极作用，使人体具有非特异性抵抗力。在患者疾病发作时， CRP可早于WBC而上升，回复正常也很快。故具有极高的 敏感性。
了解血浆蛋白质组成、功能及分类。 • 熟悉一些重要血浆蛋白质。 • 掌握疾病时血浆蛋白质变化 • 掌握体液蛋白质测定
涵盖最广泛的临床检测指标
• • 免疫功能: IgA、IgG、IgM、C3、C4、Kap、Lam、IgG subclasses 1-4、IgE、C1抑制物 肾脏功能: 白蛋白、转铁蛋白、IgG 、 a1-微球蛋白、 B2-微球蛋白、a2-巨球蛋白、 Kap-轻链、Lam-轻链、Cystatin C 炎症: CRP、a1-酸性糖蛋白、 触珠蛋白、a1-抗胰蛋白酶、铜兰蛋白、纤维蛋白原、SAA 类风湿性疾病: RF、ASL、CRP、ADNaseB 心血管疾病: ApoA-I、ApoB、ApoA II、ApoE、Lp(a)、肌红蛋白、纤维蛋白原、hsCRP 营养监测: 前白蛋白、白蛋白、视黄醇结合蛋白、转铁蛋白、铁蛋白 出 / 凝血疾病: 纤维蛋白原、AT3、纤溶酶原 贫血: 触珠蛋白、转铁蛋白、铁蛋白、可溶性转铁蛋白受体
3、转铁蛋白（transferrin , TRF 或 Tf）
【参考范围】2.5-4.3g/L 【临床意义】①属急性时相反应蛋白 ②并用 于贫血的诊断,缺铁性低色素贫血血浆转铁蛋 白含量增高,但铁的饱和度很低；红细胞对铁 利用障碍引起贫血时，血浆转铁蛋白正常或 降低，但铁的饱和度增加。
4、β2－微球蛋白（ β2－microgluobin ,BMG 或β2－m）
α2-球蛋白（α-脂蛋白、触珠蛋白、 铜蓝蛋白、α2-巨球蛋白）
β-球蛋白（转铁蛋白、血红素结合 蛋白、 β微球蛋白、纤维蛋白原、 β脂蛋白、补体） γ-球蛋白（各种免疫球蛋白主要位 置及C-反应蛋白）
根据生理功能分类：
二、一些临床常检测血浆蛋白质
1、白蛋白（albumin , Alb) 肝实质细胞合成，分子量66 458， 半衰期15～19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占40～60％。 在肝细胞中没有贮存。 • 分子结构1975年阐明，含585个氨基酸残基的单链多肽， 分子量66458，含17个二硫键（—S—S—），不含糖的组分。
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检验学部属于蛋白质的实验项目
生化室：总蛋白，白蛋白，球蛋白，载脂蛋白A1，载脂蛋
白B，前白蛋白，脂蛋白（a），高密度脂蛋白，低密度脂蛋 白，极低密度脂蛋白，血清蛋白电泳（白蛋白，α1、α2 、 β 、γ球蛋白），血尿β2微球蛋白，糖化血红蛋白，肌钙 蛋白-T，24小时尿蛋白定量，尿微量白蛋白，酶类。
参考范围：血清白蛋白35～55g／L
• ⑵临床意义 • ①可以作为个体营养状态的评价指标 • ②血浆白蛋白明显减少时，可以影响许多 配体在循环血液中的存在形式； • ③白蛋白增高较少见，在严重失水时，对 监测血浓缩有诊断意义；
• ④白蛋白减少在不少疾病时常见：白蛋白的合成减少—— 急性或慢性肝炎；营养不连或吸收不良；遗传性缺陷—— 无白蛋白血症是一种极少见的代谢性缺损，血浆白蛋白含 量常低于1g/L，但可以没有症状（如水肿等），可能部分 由于血浆中球蛋白含量代偿性升高；组织损伤（外科手术 或创伤）或炎症（感染性疾病）引起的白蛋白分解代谢增 加；白蛋白的异常丢失——肾病综合症、慢性肾小球肾炎、 糖尿病、SLE等尿中白蛋白损失，烧伤及渗出性皮炎可以 从皮肤丧失大量蛋白质；白蛋白的分布异常——门静脉高 压引起腹水中有大量蛋白质。是从血管内渗漏入腹腔。 • ⑤白蛋白的遗传变异：已发现20多中种。
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