第四组氢化可的松、黄体酮、雌二醇的鉴别和区分

按药理作用分类：
肾上腺皮质激素- 氢化可的松 甾体激素
雄性激素及蛋 白同化激素
性激素 孕激素—黄体酮 雌激素-雌二醇
一、结构与性质
肾上腺皮质激素
O HO H OH CH2OH
H O
H
氢化可的松 1.有21个碳原子
2. A环△4-3-酮基, UV、与羰基试剂反应
3.C17位上有a-醇酮基,具还原性
Kober反应适用于哪一药物的 含量测定 A. 黄体酮 B. 雌二醇 C. 甲基睾丸素 D. 甲基炔诺酮 E. 氢化可的松
用四氮唑比色法测定皮质激素 类药物，是利用 C17 –α醇酮基 的何种性质 A．氧化性 B．还原性 C．可加成性 D．酸性 E．碱性
可与重氮苯磺酸作用生成红色 偶氮染料的甾体激素类药物是 A. 醋酸可的松 B. 睾酮 C. 黄体酮 D. 雌二醇 E. 炔诺酮
共同点
与强酸的呈色反应
甾体激素 H2SO4 H3PO4 呈色 HClO4 HCl 类药物
与硫酸呈色操作简便，依 颜色与荧光可区别，反应灵敏， 为各国药典所用。 如中国药典：氢化可的松， 取本品2 mg，加硫酸2 ml溶解， 放置5分钟，显棕黄至红，并显 绿色荧光，将此溶液倾入10ml 水中，即变黄色至红色，同时 有少量絮状沉淀生成。
雄性激素及蛋白同化激素
主要活性基团 △4 – 3–酮 性 质
UV、与羰基 试剂反应
可成酯
C17 – β – 羟基
官能团的反应
1 C17 – α – 醇酮基还原性
A. 呈色反应
肾上腺皮质 激素药物
四氮唑盐
OHˉ
呈色
B. 沉淀反应
肾上 腺皮 质激 素药 物
氨制硝酸银
多伦试剂
Ag↓黑色
碱性
酒石酸铜
斐林试剂
Cu2O↓橙红色
2. C3–酮基和C20–酮基
甾酮类激 素药物
羰基试剂
呈色
＃常用的羰基试剂：
2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼
孕激素
CH3 C O H H H
O
黄体酮
1.母核有21个碳原子
2. A环△4-3-酮基
3.C17位上有甲酮基
孕激素
主要活性基团 △4 – 3–酮 性 质
UV、与羰基试 剂反应
与硫酸显色反应 显 色 荧光 醋酸可的松 黄或微 无 带橙色 加水稀释 褪色并澄 清
鉴别方法
1、用UV法区分雌二醇和氢化可的松、 黄体酮 规定最大吸收波长
最大吸收波长处的吸收度
某两个吸收波长处吸收度的比值
C CC O
△４-3-酮 约240nm
C CC CC C
苯环 约280nm
2、用异烟肼比色法区分雌二醇和氢 化可的松、黄体酮 原理 ：C3－酮基及某些其他位置上 的酮基能在酸性条件下与羰基试剂 异烟肼缩合，形成黄色的异烟棕， 在一定波长处具有最大吸收
能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰 紫色的药物是 A．雌二醇 B．黄体酮 C．醋酸可的松 D．苯丙酸诺龙 E．以上都不对
各国药典对甾体激素类药物常用 HPLC 或 GC 法 测定其含量，主要原因是 A. 它们没有特征紫外吸收，不能用 紫外分光光度法 B. 不能用滴定分析法进行测定 C. 由于“其它甾体”的存在，色谱法 可消除它们的干扰 D. 色谱法比较简单，精密度好 E. 色谱法准确度优于滴定分析法
Kober反应是 A. 雌性激素与硫酸乙醇共热呈色 B. 皮质激素与硫酸一乙醇共热呈色 C. 雌性激素与硫酸－乙醇共热呈色， 用水或稀硫酸稀释后加热颜色改变 D. 维生素A与无水三氯化锑的无醇氯 仿溶液呈色 E. 异丙嗪于酸性条件下与钯离子呈色
黄体酮在酸性溶液中可与下 列哪些试剂反应呈色 A. 2,4-二硝基苯肼 B. 三氯化铁 C. 硫酸苯肼 D. 异烟肼 E. 四氮唑盐
知识点回顾
环上双键的表示方法： 用“”表示 ,双键的位置写在的右 上角。双键位置

4
5 4
5 6
5
1 2
1,4
5 4
10
5(10)
5
环上取代基构型表示方法：
＊构型： 与母核连接的取代基,指向环平面的前 面时,为构型.用实线表示“———” ＊构型： 与母核连接的取代基,指向环平面的背 面时,为构型.用虚线表示“”
雌激素
主要活性基团 性 质
UV、与重氮苯 A环为3–OH 苯环 磺酸盐反应 C17 –乙炔基 C17 –羟基 与AgNO3反应 可成酯
酚羟基 雌激素 重氮苯磺酸 类药物 红色偶 氮染料

小结
甾体激素 肾上腺皮质 激素 雄性激素 孕激素 雌激素 碳原子 数 21 19 21 18 A环 4-3-酮 4-3-酮 4-3-酮 苯 环 C3- 酚 OH 17位取代基 -醇酮基 -OH -CH3 甲酮基 -OH -C≡CH
蓝紫色
亚硝基铁氰化纳
其他甾体
淡橙色
不显色
CH 3 C O

O
[Fe CN NO ]

OH
CH

黄体酮
NO CN 5 Fe
4 -
C O
+ 2 H 2O
O
蓝紫色
雌性激素
18
OH
17
HO
雌二醇
1.母核有18个碳原子,C10无角甲基
2. A环为苯环, C3位上有酚羟基
3.C17位上有β-羟基
异烟肼比色法测定甾体激素类药物时， 药物的呈色基团是 A. 酮基 B. 酚羟基 C. 活泼次甲基 D. 炔基 E. 甾体母核
可适用的药物： A. 可的松 B. 雌二醇 C. 两者均可 D. 两者均不可 亚硝酸钠滴定法 D 高效液相色谱法 C 能与羰基试剂缩合 A 可用铁酚试剂比色法测定 B 可用四氮唑比色法测定 A
氢化可的松、黄体酮、雌二醇 药物的鉴别与区分
CH3
O HO H OH CH2OH
C O H H H
HO
18
OH
17
H O
H
O
氢化可的松、黄体酮、雌二醇
三种药物同属于甾体激素类药物
C21
11
1
2
19
18 C20 12 17 13 16
C
D
3
A
4
10 9 5
B
6
8 7
14
15
基本结构：环戊烷骈多氢菲
用异烟肼比色法测定甾体激素药 物含量时，其溶液的环境是
A．强酸性 B．中性 C．强碱性 D．弱碱性 E．以上都不对
可用于氢化可的松鉴别的试剂有 A．氨制硝酸银 B．异烟肼 C．红四氮唑 D．硫酸 E．重氮苯磺酸
可用于甾体激体类药物的测定方法有 A．高效液相色谱法 B．四氮唑盐法 C．紫外分光光度法 D．异烟肼比色法 E．Kober反应比色法
铁酚试剂比色法
铁－酚试剂替代硫酸－乙醇
Fe 3+的作用：
①促进黄色的呈色速度和强度
②促进黄色变成红色
③加强红色的稳定性
苯酚的作用：
①消除反应过程中产生的荧光 ②加速红色的生成
4、TLC法
主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别
方法：对照品法
要求供试品溶液所显主斑点的颜 色和位置与对照品溶液的主斑点相同。
C3－酮基 异烟肼
HCl （缩合）
异烟棕（黄色）
OH
CONHN
N
异烟腙（黄色）
3、区分氢化可的松和黄体酮ຫໍສະໝຸດ Baidu
亚硝基铁氰化钠是黄体酮专属而灵敏的反应
黄体酮
其他甾体
亚硝基铁氰化纳
蓝紫色
亚硝基铁氰化纳
淡橙色
不显色
Kober反应比色法
1. 原理 雌激素（如雌二醇）与硫酸 乙醇反应呈色
雌激素 黄色 桃红 H SO 乙醇 H O
C17 –甲酮基
与亚硝基铁氰 化钠反应
黄体酮
CH 3 C O
2
CONHNH 2
N HCl
CH 3
O
C NHNOC
N CONHN
异烟双腙（黄色）
N
含有 甲酮基
具有甲酮基 亚硝基铁氰化纳 或活泼亚甲 间二硝基酚 基的甾体激 芳香醛 素类药物
呈色
亚硝基铁氰化钠是黄体酮专属而灵敏的反应
黄体酮
亚硝基铁氰化纳
△
△
λmax=465
λmax=515
反应条件
A环是芳环，在C2或C3有含氧取代 D环的C17有含氧取代（－OH,-C=O） C13必须有角甲基
存在的问题
双变色，测定结果重现性不好 杂质干扰（赋型剂、稳定剂有干扰）
解决方法
用该法测定雌激素类药物制剂的
含量时比色测定前采用分离提取 严格控制反应条件 消除背景干扰