第四组氢化可的松、黄体酮、雌二醇的鉴别和区分

铁酚试剂比色法
❖铁－酚试剂替代硫酸－乙醇 ❖Fe 3+的作用： ❖①促进黄色的呈色速度和强度 ❖②促进黄色变成红色 ❖③加强红色的稳定性 ❖苯酚的作用： ❖①消除反应过程中产生的荧光 ❖②加速红色的生成
➢4、TLC法
➢主要用于甾体激素类药物制剂的鉴
别 ➢
方法：对照品法
要求供试品溶液所显主斑点的颜 色和位置与对照品溶液的主斑点相同 。
➢2. A环为苯环, C3位上有酚羟基 ➢3.C17位上有β-羟基
➢雌激素
主要活性基团
性质
A环为3–OH 苯环
UV、与重氮苯 磺酸盐反应
C17 –乙炔基 C17 –羟基
与AgNO3反应 可成酯
➢ 酚羟基
➢ ➢雌激素类药物
重氮苯磺
酸
➢红色偶 氮染料
❖ 小结
➢甾体激素
➢肾 上 腺 皮
质激素
➢雄性激素
氢化可的松、黄体酮、雌二醇 药物的鉴别与区分
O CH2OH
H
HO
OH
HH
O
O
CH3 CO
H
HH
HO
氢化可的松、黄体酮、雌二醇
18 OH
17
➢三种药物同属于甾体激素类药
物
C21
➢2 ➢3
➢➢➢41A➢9➢➢015➢11➢➢➢1 69B➢2➢➢➢1C➢4➢878➢3111➢➢5CD➢7120➢61 1
➢（缩合
）
OH
CONHN N
➢异烟腙（黄色）
➢3、区分氢化可的松和黄体酮 ➢亚硝基铁氰化钠是黄体酮专属而灵敏的反应
➢黄体酮
➢亚硝基铁氰化纳
➢蓝紫色
➢其他甾体
➢亚硝基铁氰化纳
➢淡橙色 ➢不显色
➢Kober反应比色法
➢1. 原理 雌激素（如雌二醇）与硫
酸乙醇反应呈色 ➢△ ➢△ 雌激素 H SO乙 醇 黄色 H O 桃红
➢Ag↓黑色
➢碱性
➢酒石酸
➢铜斐林试
➢Cu2O↓橙红色
➢2. C3–酮基和C20–酮基
➢甾酮类激素药物
➢羰基试
剂
➢呈色
➢＃常用的羰基试剂： ➢2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼
➢孕激素
CH3 CO
H
HH
O
➢黄体酮
➢1.母核有21个碳原子
➢2. A环△4-3-酮基
➢3.C17位上有甲酮基
➢孕激素
、 黄体酮
➢规定最大吸收波长
➢最大吸收波长处的吸收度
➢某两个吸收波长处吸收度的比值
CCCO
➢△４-3-酮 约
240nm
CCCCCC
➢苯环 约280nm
➢2、用异烟肼比色法区分雌二醇和
氢化可的松、黄体酮
➢原理 ：C3－酮基及某些其他位置
上的酮基能在酸性条件下与羰基试 剂异烟肼缩合，形成黄色的异烟棕 ➢，C在3－一酮定基波长处➢异具➢烟H有Cl肼最大吸➢收异烟棕（黄色）
➢碳原
子数
➢21
➢19
➢A环 ➢4-3-酮 ➢4-3-酮
➢孕激素
➢21
➢4-3-酮
➢17位取代
基
➢-醇酮基
➢-OH ➢-CH3 ➢甲酮基
➢雌激素
➢18
➢苯环C3-酚 ➢-OH
OH
➢-C≡CH
➢共同点
➢与强酸的呈色反应
➢甾体激素类药物
➢H2SO4
➢呈色
H3PO4 HClO4
HCl
➢ 与硫酸呈色操作简便，依颜色与荧光可区别，反应灵敏，为各
➢基本结构：环戊烷骈多氢菲
➢知识点回顾
❖ 环上双键的表示方法：
❖ 用“”表示 ,双键的位置写在的右上角。 双键位置
5 4
1 2
5 4
➢
4
➢1,
4
5 6
10
5
➢5
➢5(
10)
❖环上取代基构型表示方法： ＊构型：
❖与 母 核 连 接 的 取 代 基 , 指 向 环 平 面 的 前面时,为构型.用实线表示“——— ”
用异烟肼比色法测定甾体激素药 物含量时，其溶液的环境是
A．强酸性 B．中性 C．强碱性 D．弱碱性 E．以上都不对
可用于氢化可的松鉴别的试剂有 A．氨制硝酸银 B．异烟肼 C．红四氮唑 D．硫酸 E．重氮苯磺酸
可用于甾体激体类药物的测定方法有 A．高效液相色谱法 B．四氮唑盐法 C．紫外分光光度法 D．异烟肼比色法 E．Kober反应比色法
＊构型：
❖与 母 核 连 接 的 取 代 基 , 指 向 环 平 面 的 背面时,为构型.用虚线表示“”
➢按药理作用分类：
➢甾体激
素
➢肾上腺皮质激素- 氢化可
的松
➢雄性激素及
蛋白同化激素
➢性激素➢孕激素—黄体
酮
➢雌激素-雌二醇
➢一、结构与性质
➢肾上腺皮质激素
O
CH2OH
H
HO
OH
HH O
➢氢化可的松 ➢1.有21个碳原子 ➢2. A环△4-3-酮基, UV、与羰基试剂反应 ➢3.C17位上有a-醇酮基,具还原性
国药典所用。
➢ 如中国药典：氢化可的松，取本品2 mg，加硫酸2 ml溶解，放置
5分钟，显棕黄至红，并显绿色荧光，将此溶液倾入10ml水中，即变 黄色至红色，同时有少量絮状沉淀生成。
➢与硫酸显色反应
显 色 荧光 加水稀释
➢醋酸可的松 黄或微 无 褪色并
澄
➢
带橙色
清
➢鉴别方法
➢ 1、用UV法区分雌二醇和氢化可的松
能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰 紫色的药物是
A．雌二醇 B．黄体酮 C．醋酸可的松 D．苯丙酸诺龙 E．以上都不对
➢λmax=465
➢λmax=515
反应条件
A环是芳环，在C2或C3有含氧取代 D环的C17有含氧取代（－OH,-C=O） C13必须有角甲基
➢存在的问题
❖双变色，测定结果重现性不好 ❖杂质干扰（赋型剂、稳定剂有干扰）
解决方法
❖用该法测定雌激素类药物制剂的含 量时比色测定前采用分离提取
❖严格控制反应条件 ❖消除背景干扰
主要活性基团 △4 – 3 – 酮 C17 –甲酮基
性质
UV、与羰基试 剂反应
与亚硝基铁氰 化钠反应
➢黄体酮
O
CH3 CO
CONHNH2
2
N HCl
CH3 C NHNOC
N CONHN
➢异烟双腙（黄色）
N
➢含有 甲酮基
➢具有甲酮
基或活泼亚 ➢亚硝基铁氰化纳
➢呈色
甲基的甾体 ➢间二硝基酚
激素类药物 ➢芳香醛
➢亚硝基铁氰化钠是黄体酮专属而灵敏的反应
➢黄体酮
➢亚硝基铁氰化纳
➢蓝紫色
➢其他甾体
➢亚硝基铁氰化纳
➢淡橙色 ➢不显色
CH3 CO
O
➢黄体酮
[FeCNNO]
OH
CH NO CN 5 Fe 4 CO
+ 2H2O
O
➢蓝紫色
➢雌性激素
18 OH
17
HO
➢雌二
➢1.母核有1醇8个碳原子,C10无角甲基
➢雄性激素及蛋白同化激素
主要活性基团
性质
△4 – 3 – 酮
UV、与羰基 试剂反应
C17 – β – 羟基
可成酯
➢ 官能团的反应 ➢1 C17 – α – 醇酮基还原性 ➢A. 呈色反应
➢肾上腺皮 ➢四氮唑 ➢呈色
质激素药物 盐
➢OHˉ
➢B. 沉淀反应
➢肾上腺皮
质激素药物
➢氨制硝酸
银➢多伦试
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