毒理学——4

配气系统 动式吸入染毒方式分类 动式吸入接触（动式染毒）； 面罩接触（面罩吸入染毒）。 动式吸入染毒的优、缺点
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3．经皮肤染毒 脱毛：化学法脱毛或机械法脱毛 （体表面积的10%）。 染毒：局部涂敷受试物或大鼠、 小鼠浸尾法染毒。
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4．经注射途径染毒
静脉注射或滴注；
腹腔注射； 肌肉注射； 皮下注射； 皮内注射； 椎管内注射
究和将研究结果外推到人提供依据。
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（三）亚慢性毒性试验方法的要点
1. 实验动物的选择
(1) 物种和品系 实验动物对受试物的生物转化、生理生 化、毒性反应与人类相当或相似。
两种实验动物，啮齿类和非啮齿类。
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(2) 性别、年龄和动物数 两种性别，每组雌雄各半；
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适宜容积染毒
① 经口：20ml/kg(空腹动物)； ② 经皮：2ml/kg； ③ 静脉：1ml/kg(5min以上)； ④ 肌肉注射：0.5ml/kg(一个部位)； ⑤ 眼睛：0.01ml/每眼； ⑥ 直肠：0.5ml/kg； ⑦ 阴道：大鼠0.2ml，兔lml； ⑧ 吸入：2mg/L； ⑨ 鼻：猴或犬每鼻孔0.1ml。
吞咽胶囊：将受试物装入胶囊中，放至舌 后部，迫使动物咽下。 喂饲：将受试物掺入动物饲料或饮水中供 实验动物自行摄入。
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2．经呼吸道染毒 吸入染毒 静式吸入染毒；
动式吸入染毒。
气管内注入
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静式吸入染毒 方法：将实验动物置于有一定体积的密 闭容器中，加入液态或气态受试物，形成 一定浓度的受试物空气环境进行染毒。 优点：简单、方便、受试物消耗少，适 合于小鼠。 缺点：氧气减少；浓度不稳定；经皮吸 收；不适合稍大动物；挥发性。
40只（或更多）实验动物，随机分为两组，
一为染毒试验组，一为对照组，每组至少 20只，雌雄各半。
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在1/20-1/5 LD50的范围内选定一个剂量， 每日以固定剂量，定时和相同途径对试验组 进行染毒，观察记录动物死亡数。 试验组累积发生一半动物死亡即终止试 验。计算累积总接触剂量[LD50(n)]，根据公 式计算K值，然后进行评价。 接触剂量累积达5个LD50，可终止试验， K>5。固定剂量法试验期为25-100天。
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1．中毒体征及发生过程 详细观察和记录动物出现的中毒体 征、发生时间和体征发展的经过。 机体对毒物作用的反应可以表现出 各个系统的特征。不同系统的毒性表现 可不一样；或某一中毒体征和行为的改 变反映多个系统的毒性。
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续表6-1 啮齿类动物急性中毒表现
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2．死亡情况和时间分布 实验动物的死亡数对LD50值产生明 显影响。 分析中毒死亡时间的分布规律可以 提供重要信息。
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1．实验动物的物种和品系 啮齿类（rodent species） 小鼠：昆明种、NIH、ICR
大鼠：Sprague-Dawley（SD）、 Wistar 非啮齿类（nonrodent species）
犬或猴
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根据接触途径选择实验动物
急性经口和吸入毒性试验 大鼠、小鼠； 急性经皮毒性试验
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（四）剂量选择 参考新化学物的理化性质 参考相关资料
先用少量动物，以较大的剂量间隔染 毒，找出10%-90%（或0%-100%）的 致死剂量范围。 根据试验所选的LD50计算方法确定剂量 组数。一般设5-8个剂量组；霍恩氏法设4 个剂量组。
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各组剂量的计算 i =（lgLD90-lgLD10）/（n-1） 或 i=（lgLD100- lgLD0）/（n-1） 以最低剂量值（LD0或LD10）的对数 剂量加上一个i值，即是第二个剂量组的对 数剂量，依次类推直至最高剂量组。
比较毒物的急性毒性大小。
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第二节
蓄积毒性作用
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一、蓄积毒性的基本概念
外源化学物连续地进入机体，且吸收 速度或总量超过代谢转化排出的速度或总 量，化学物质可能在体内逐渐增加并贮留，
这种现象称为化学物质的蓄积作用
(accumulation)。
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储存库（depot） 化学物质易蓄积的组织部位 机体常见的储存库有血浆蛋白、脂 肪组织、肝脏、肾脏、骨骼等。
杂种犬：8-15kg。
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3．实验动物的性别 雌雄各半； 如雌、雄动物毒效应有明显差异，应 分别并求出雌性和雄性动物的LD50值；
特殊的试验研究可仅作单一性别的急 性毒性试验。
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4．实验动物分组与数量 根据组数和每组数量来决定数量。 不同的LD50计算方法对动物组数的要求 有所不同，一般为4-6组。 动物分组时应严格遵循随机化的原 则，提高组间均衡性，减少非处理因素 对试验结果的影响。
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物质蓄积（material accumulation）
反复多次接触化学毒，可以用分析方 法测出体内物质的原型或其代谢产物。
功能蓄积（functional accumulation） 长期接触某些化学毒物后，机体内虽 不能测出其原型或代谢产物，却出现了慢 性毒性作用。
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二、蓄积作用的研究方法
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染毒途径影响受试物急性毒性
静脉注射>吸入>肌肉注射>腹腔注射>
皮下注射>经口>皮内注射>经皮。
同一受试物不同染毒途径LD50的大小
通常符合上述规律。
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1. 经口（胃肠道）染毒 通常以经口途径的LD50值来比较不同化学 物急性毒性大小。
灌胃：溶液或混悬液，以注射器经导管注 入胃内，等容量灌胃法；
K=ED50(n) / ED50(1) K=LD50(n) / LD50(1)
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化学毒物在动物体内全部蓄积或每次 染毒后毒效应是叠加时，LD50(n)等于 LD50(1)，即K=1；
反复染毒时实验动物对化学毒物发生 过敏现象，可能出现K<1。
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蓄积系数法常用的实验方案
1．固定剂量法 动物：大、小鼠； 染毒途径：经口灌胃、腹腔注射； 方法：先求LD50，然后选取相同条件的
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（六）观察时间和周期 染毒以后应即刻开始观察动物中毒 表现和死亡情况。 给药当天应连续或多次观察，以后可根 据情况，每天2次或多次观察直至试验周 期结束。
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四、急性毒性分级和评价
急性毒性试验求出LD50(LC50)值，通 过LD50值进行急性毒性分级(acute toxicity classification)，评价毒物的急性毒性强弱，
（一）蓄积系数法 以生物效应为指标，用经验系数（K） 评价蓄积作用的方法，即将多次染毒与一次
染毒所产生的毒性效应进行比较。 简便，但不能区分化学毒物的蓄积性
是物质蓄积还是功能蓄积。
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蓄积系数（accumulation coefficient）
多次染毒使半数动物出现效应的蓄积 剂量[ED50(n)]与一次染毒使半数动物出现 相同效应（或死亡）的蓄积剂量[ED50(1)] 的比值。
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3．体重
实验动物体重变化可以反映动物中毒 后综合性整体变化。
应定期多次称量动物的体重变化，一 般为每周1次或2次。
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体重变化的原因
影响食欲或消化系统的功能；
影响食物的吸收和利用； 影响水的摄取； 肾功能急性损伤
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4．病理检查
死亡动物：大体病理变化，如脏器外 观、大小、色泽的变化，有无充血、出 血、水肿或其他改变； 存活动物：观察期结束时亦应进行解 剖检查，必要时做组织病理学检查。
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（二）亚慢性毒性实验的目的
研究亚慢性毒性剂量-反应(效应)关系，确定NOAEL和 LOAEL，提出安全限量参考值； 观察亚慢性毒性效应谱、毒作用特点和毒作用靶器官； 观察亚慢性毒性作用的可逆性；
为慢性毒理试验的剂量设计和观察指标选择提供依据；
为其他试验中发现的或未发现的毒作用提供新的信息， 比较不同动物物种毒效应的差异，为受试物毒性机制研
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化学物LD50大于2g/kg 或5g/kg，表 明毒性不大。 我国药品的毒理研究指导原则规定 要以最大容积最高浓度给予动物后未见 死亡，方可不进一步试验求出LD50值。
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（五）毒性作用观察 全面观察动物的各种反应和变化，仔细 分析实验动物在染毒后出现的中毒表现。 中毒体征及发生过程； 死亡情况和时间分布； 体重； 病理形态学变化。
成年大鼠、豚鼠、家兔。
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2．实验动物的年龄和体重

刚成年、健康、未曾交配和受孕的动物
同一次试验同一批实验动物体重变异范 围不应超过平均体重的20%。 大鼠：180-240g； 豚鼠：200-250g； 小鼠：18-25g； Beagle犬：4-6kg；
家兔：2-2.5kg；
第六章
一般毒性作用
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一般毒性作用分为急性毒性、亚慢性 毒性和慢性毒性。
防治急慢性中毒； 安全性评价和危险度评定；
制订卫生标准；
管理毒理学的决策
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第一节
急性毒性作用
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一、急性毒性的概念
急性毒性（acute toxicity） 机体一次或24h内多次接触外源化 学物后在短期内所产生的毒性效应，包 括一般行为和外观改变、大体形态变化 以及死亡效应。 注意：次数；时间；强度
机体内的蓄积作用。
t1/2较短的化学毒物达到蓄积极限所 需的时间也短，t1/2长者达到蓄积极限的 时间也长。
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第三节
亚慢性和慢性毒性作用
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一、亚慢性毒性作用
（一）亚慢性毒性 (subchronic toxicity) 实验动物或人连续较长期接触外源 化学物所产生的中毒效应。实验时间通