超高效液相色谱-串联质谱法测定中成药中非法添加枸橼酸西地那非的探究

35 Journal of China Prescription Drug Vol.16 No.2·实验研究·枸橼酸西地那非（Sildenafil Citrate Tablets），通常又可称为万艾可（伟哥），主要适用于患有男性勃起功能障碍的患者，就目前中成药市场情况来看，部分补肾壮阳药品和保健品中存在非法添加枸橼酸西地那非的情况，极大地影响了患者的用药安全[1]。

因此，为加强对补肾壮阳等中成药的监管，减少非法制假掺伪等情况发生，建立快速、准确和可靠的中成药非法添加枸橼酸西地那非检测方法极为重要。

超高效液相色谱是一种的新型的色谱检测技术，能够极大地提升检测和分析速度，为了解超高效液相色谱-串联质谱法在中成药制剂中非法添加枸橼酸西地那非的检测效果，本研究对其展开分析与探讨。

1材料与方法1.1仪器与试药本研究主要使用的仪器为美国WATERS公司生产的超高效液相色谱—串联质谱仪，并配备有电喷雾离子化源（ESI）、Quity二极管阵列检测器以及后处理工作站等。

本研究使用的枸橼酸西地那非对照品由中国药品生物制品检定所提供，乙腈为色谱纯，其他试剂均属于分析纯；本研究采用样品为市场上抽检，水为重蒸馏水。

1.2方法1.2.1 超高效液相色谱（UPLC）色谱条件和质谱条件超高效液相色谱柱为：BEHC18柱（50 mm×2.1 mm，1.7μm），检测波长在200～400 nm之间，流动相为：乙腈-0.01mol/L乙酸铵缓冲溶液（65∶35）[2]，柱温设置为35℃，流速为每分钟0.25 mL，进样量为10μL。

采用电喷雾离子化正离子（ESI＋）、负离子（ESI-）检测方式，设置扫描范围为m/z 90～1 000，脱溶剂气温度为300℃，毛细管电压设置为±3.5 kV，离子源温度为110℃，椎孔气流量为50L/h，脱溶剂气流量为600 L/h，碰撞能量35 eV，设置氩气流量为0.18 mL/min，椎孔电压55 V[3]。

1.2.2 配置对照品溶液使用仪器精密称取5 mg枸橼酸西地那非对照品，加入甲醇，并将其溶解配置成每毫升含1μg枸橼酸西地那非的对照品溶液，然后将其应用于检测分析。

1.2.3 制备供试品溶液抽取不同批号、不同生产厂家的补肾壮阳中药制剂，根据供试品溶液制备方法进行供试品溶液制备，首先将供试品研细，然后用50 mL量瓶称取0.3 g供试品，加入40 mL流动相，经超声提取10 min后将其放冷至室温[4]。

完成上述处理后，加入流动相至相应刻度，将其混合均匀后，取上清液进行高速离心处理，转速为10 000 r/min，离心时间为10 min，并根据实验情况使用流动相进行相应的稀释，使用0.2μm滤膜过滤后进行相应检测分析[5]。

2 结果2.1枸橼酸西地那非的色谱及质谱分析首先通过对枸橼酸西地那非对照品溶液应用正离子检测方式进行MS、UPLC和MS-MS分析，并将保留时间设置为1.15 min，其相应谱图见图1，其中A为枸橼酸西地那非样品，B为枸橼酸西地那非对照品，从图中可以看出，对照品的准分子离子[M＋H]＋峰为m/z 475，通过对其进行子离子扫描，可见其产生的主要碎片有三种，分别为m/z 99、m/z 283和m/z 311。

图1：枸橼酸西地那非一级和二级质谱图（ESI＋）在对枸橼酸西地那非对照品溶液采用负离子检测后，对其进行MS、UPLC和MS-MS分析，保留时间同样为1.15 min，结果显示见图2，其中A和B分别表示枸橼酸西地那非样品和对照品。

枸橼酸西地那非对照品的准分子离子[M-H]-峰为m/z473，通过对该峰值实施子离子扫描，主要有两种碎片产生，分别为m/z 282和m/z 445。

282和m/z445。

图2：枸橼酸西地那非一级和二级质谱图（ESI-）2.2 供试品定性检测为了解供试品中是否存在非法添加枸橼酸西地那非的情况，在相同的质谱和色谱条件下，对三种中药制剂的提取溶液进行了MS-MS、UPLC和MS分析，通过对这些检测结果进行分析发现，这些样品中均有检测到枸橼酸西地那非的准分子离子m/z 475和m/z 473，且通过对这些准分子离子分别进行二级全扫描质谱分析，结果证实其产生的碎片离子与对照组完全相同，且在保留时间、紫外光谱等方面均与对照组一致，其具体情况详见图3和图4，其中A均表示枸橼酸西地那非样品，B表示枸橼酸西地那非对照品。

通过结合供试品的液相色谱保留时间、二级质谱裂解碎片以及准分子离子等情况，对其进行综合分析，可以确定这三种中超高效液相色谱-串联质谱法测定中成药中非法添加枸橼酸西地那非的探究向鹏宇，陈健，吕紫璇（重庆市涪陵食品药品检验所，重庆408000）【摘要】目的 应用超高效液相色谱-串联质谱法对中成药中非法添加的枸橼酸西地那非进行检测，从而建立快速、准确的测定方法。

方法 以电喷雾离子化源（ESI）为离子源，应用超高效液相色谱-串联质谱法同时进行正、负离子检测，并根据二级质谱碎片信息、相对分子质量以及液相色谱保留时间等测定中草药中的枸橼酸西地那非。

结果 通过对三种试剂进行检测，只有1种未检测到枸橼酸西地那非，另外两种均检测中含有枸橼酸西地那非。

结论 超高效液相色谱-串联质谱法操作简便，选择性强，且具有较高灵敏度和专属性，可作为检测中成药中非法添加枸橼酸西地那非的重要手段。

【关键词】中成药；超高效液相色谱法-串联质谱；枸橼酸西地那非；测定方法36中国处方药 第16卷 第2期·实验研究·药品微生物计数方法适用于可以生长在有氧条件下嗜温细菌和真菌的计数工作，这一方法的检验结果不仅受到药品自身因素的影响，例如原料辅料、生产工艺、生产环境等，又受检验因素的影响，如检验环境、检验方法、操作过程、试验菌种、检验用培养基等。

在诸多因素中，检验方法的选择对检验结果的准确性有着直接影响，所以，对药品微生物计数法进行适用性试验是非常有必要的。

2015年版《中国药典》[1]与前版药典相比，在微生物限度检查法上做了较大修订，特别是对于微生物计数法的方法适用性试验做了根本性改变，其中几乎涉及到了检验的全过程，例如培养基、菌种、加菌方式、检验方法、判断标准等，使之在新的高度上达到了统一，使检验结果更具可比性。

1药品微生物限度检查法的变迁1995年版《中国药典》第一次提出药品微生物限度检查法，2005年版《中国药典》第一次提出要对所有用于检查药品微生物的方法进行方法学验证，以防因检验方法不科学造成漏检或误判[2]；2010年版《中国药典》中则又一次强调了进行微生物检验方法学验证的重要性，强调方法确认过程；2015年版《中国药典》将方法学验证修订为方法适用性试验，更加重视对于检验全过程的控制，达到试验条件、检验方法和判定标准三者的统一，使检验结果更具可比性，真正做到与国际标准接轨。

2药品微生物计数方法的建立和确认2.1 检验方法的选择药品微生物计数方法及方法适用性试验探讨刘素如（巴彦淖尔市食品药品检验所，内蒙古巴彦淖尔 015000）【摘要】目的 探讨药品微生物计数方法及方法适用性试验，加强对方法适用性试验的理解。

方法 分别从检验方法的选择，检验方法的建立和检验结果的有效性确认这几个方面来进行计数方法适用性试验这一工作。

结果 药品微生物计数方法的适用性试验将直接影响检验结果。

结论 药品检验部门应重视药品微生物计数的方法适用性试验，加强对检验过程的质量控制和检验人员的专业培训。

【关键词】微生物检查；计数方法；方法适用性试验药制剂中有两种存在非法添加枸橼酸西地那非的情况。

通过称取一定的对照品溶液，按照不同比例稀释后对其进行测定，结果显示枸橼酸西地那非的最低检测限为：ESI -为0.3 ng/mL ，ESI ＋为0.1 ng/mL （S/N ＝3）。

3 讨论在中成药中非法添加枸橼酸西地那非会直接影响患者的用图3：UPLC 色谱图 论 论图4：紫外光谱图药安全，如何快速、准确检测中成药中枸橼酸西地那非的非法添加情况，也是当前研究的重点问题[6]。

随着检测技术的不断进步，超高效液相色谱-串联质谱法测定也受到了越来越多的关注，该方法操作简便，且具有较高的准确性和灵敏性[7-8]，本研究通过对三种试剂进行检测，有两种检测出存在非法添加枸橼酸西地那非的情况，在中成药成分检测中具有较高应用价值。

总而言之，超高效液相色谱-串联质谱法检测时间短，样品制备简单，能够较为准确地检测出中成药中是否有非法添加枸橼酸西地那非，可加强应用。

参考文献[1]李绍辉，吴寒秋，许秀丽，等.超高效液相色谱串联质谱法检测玛咖产品中非法添加西地那非.食品工业科技，2016，37（11）:310-313.[2]农军，吕仕军，段玉林，等.超高效液相色谱法测定露酒中的枸橼酸西地那非.广西科学院学报，2010，26（3）:252-254.[3]周宜斌.高效液相色谱法测定中成药中非法添加枸橼酸西地那非与格列本脲.全国医药学术交流会暨临床药理学研究进展培训班资料汇编，2006:241-242.[4]曲斌，陆桂萍，蒋天梅，等.超高效液相色谱-串联质谱同时快速检测生鲜牛乳中的磺胺类和氟喹诺酮类药物.江苏农业科学，2013，41（6）:276-282.[5]张健，丁涛，刘芸，等.超高效液相色谱-串联质谱法测定保健品中9种非法添加的壮阳类化学药物.环境化学，2016，35（2）:415-418.[6]黄芳，吴惠勤，黄晓兰，等.高效液相色谱-串联质谱法同时测定保健品及中成药中非法添加的17种壮阳类化学药.色谱，2016，34（3）:270-278.[7]蔡振世，林东波，徐端琼，等.高效液相色谱-串联质谱法同时测定保健食品中3种违禁药物.海峡药学，2016，28（8）:70-72.[8]张书文，王锟，韩圣谦，等.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定露酒中伐地那非、西地那非和他达拉非含量.化学分析计量，2016，25（1）:44-46.。