离子液体-超声辅助-固相萃取法提取富集急性子药材中的4种凤仙萜四醇皂苷
固相微萃取与超临界流体萃取艾叶挥发油的GC-MS谱对比分析
固相微萃取与超临界流体萃取艾叶挥发油的GC-MS谱对比分析郝鹏飞，张瓅方，张超云，黄显章*（南阳理工学院张仲景国医学院，河南南阳473000）【摘要】目的：探讨固相微萃取（SPME）与超临界流体萃取（SFE）所得南阳艾叶挥发油成分的不同，确定其主含成分及含量，并对其进行分析。
方法：分别以SPME与SFE提取艾叶挥发油并以GC-MS进行对比分析。
结果：分别以SPME法得到了38种化合物，SFE 得到了26种化合物，GC-MS分析分别占其总量的95.17%和95.26%；通过对比质谱数据库（NIST，NBS）进行鉴别，前者鉴别出35个组分，后者鉴别出25个；各组分含量均不相同，但最高者均为1,8-桉树脑（分别为18.26%，15.35%），其他在SPME中依次为2-莰醇（11.58%）、异蒿属（甲）酮（7.15%）及对称二甲基脲（5.12%）；在SFE中依次为异蒿属（甲）酮（12.15%）、2-莰醇（11.38%）及反-罗勒烯（7.03%）。
结论：SPME萃取与SFE萃取所得的艾叶挥发油成分差异较大，相较而言SPME具有较明显的优越性。
【关键词】固相微萃取；超临界流体；艾叶；气相色谱-质谱联用Comparative analysis GC-MS of Artemisa argyi volatile oilextracted by SPME and SFEHao Peng-fei,Zhang Li-fang, Zhang Chao-yun, Huang Xian-zhang（Nanyang Institute of Technology，Nanyang 473000，China）Abstract Objective：To analyze the different ingredients and identify the main ingredients and content of the volatile oil，which extracted from Nanyang Artemisa argyi volatile oil by two different methods: solid-phase microextraction (SPME) and supercritical fluid extraction ( SFE), and analyse them. Method：The volatile oil was extracted separately from Artemisa argyi leaves by SPME and SFE. Then GG-MS was used to analyze it. Result：38components was identified by SPEM,accounting about 95.17% ，26 components was identified by SFE,accounting about95.26%. 35kinds of compoments was identified by comparing with the Mass spectrometry data base from the former, and 25 from the latter. The content of each component was different, but most contents of which was Eucaylptole (18.26% and 15.35% respectively). There are other components from SPME, include borneol(11.58%)、isoartemisia ketone(7.15%) andesym-dimethylurea(5.12%); the same as from SFE include isoartemisia ketone(12.15%)、borneol(7.15%) and trans-ocimene(7.03%).Conclusion：The result verify the superiority of the way of SPME,though the components of the volatile oil eatracted by two different ways are obviously different .Keywords: SPME; SFE;A rtemisia argyi Levl. et Vant.; GC-MS艾叶气清香味苦；辛温有小毒[1]，主产于河南、湖北、湖南、山东等省。
天然药物化学各章复习题及参考答案
2022年8月复习思考题第一章复习思考题（一）一、名词解释1、高速逆流色谱技术2、超临界流体萃取技术3、超声波提取技术4二次代谢过程二、以下每一道考题下面有A、B、C、D、四个备选答案。
请从中选择一个最佳答案。
1、纸层析属于分配层析,固定相为：（）A.纤维素B.展开剂中极性较小的溶液C.展开剂中极性较大的溶液D.水2、硅胶色谱一般不适合于分离（）A、香豆素类化合物B、生物碱类化合物C、酸性化合物D、酯类化合物3、比水重的亲脂性有机溶剂有：A.CHC13B.苯C.Et20D.石油醚4、利用溶剂较少提取有效成分较完全的方法是：A、连续回流法B、加热回流法C、渗漉法D、浸渍法5、由甲戊二羟酸演变而成的化合物类型是A.糖类B.萜类C.黄酮类D.木脂素类6、调节溶液的pH改变分子的存在状态影响溶解度而实现分离的方法有A.醇提水沉法B.铅盐沉淀法C•碱提酸沉法D.醇提丙酮沉法7、与水不分层的有机溶剂有：A.CHC13B.丙酮C.Et20D.正丁醇8、聚酰胺层析原理是A物理吸附B氢键吸附C分子筛效应D、化学吸附9、葡聚糖凝胶层析法属于排阻层析，在化合物分离过程中，先被洗脱下来的为：A.杂质B.小分子化合物C.大分子化合物D.两者同时下来三、判断对错1、某结晶物质经硅胶薄层层析，用一种展开剂展开，呈单一斑点，所以该晶体为一单体。
（）2、糖、蛋白质、脂质、核酸等为植物机体生命活动不可缺少的物质，因此称之为一次代谢产物。
（）3、二氧化碳超临界流体萃取方法提取挥发油，具有防止氧化、热解及提高品质的突出优点。
（）4、色谱法是分离中药成分单体最有效的方法（）5、铅盐沉淀法常用于中药生产中除去杂质。
（）6、植物成分的生物转化，可为一些化合物的结构修饰提供思路，提供新颖的先导化合物。
（）9、凝胶色谱的原理是根据被分离分子含有羟基数目的不同达到分离，而不是根据分子量的差别（）10、中草药中某些化学成分毒性很大。
（）四、填空题1、脂肪酸、酚类、蒽酮等类化合物由（1）途径生成。
咪唑类离子液体在中药有效成分提取中的应用
Pharmacy Information 药物资讯, 2019, 8(3), 43-48Published Online May 2019 in Hans. /journal/pihttps:///10.12677/pi.2019.83005Application of Imidazole Ionic Liquidsin Extracting Active Ingredients inTraditional Chinese MedicineYalan Wang1, Suya Gao1,2*, Miaojie Yang1, Tian Cao1, Yuze Mao1, Dali Tao1, Tangna Zhao1, Jiawen Li1,Rui Wang1, Jiaojiao Wang11College of Pharmacy, Xi’an Medical University, Xi’an Shaanxi2Institute of Medicine, Xi’an Medical University, Xi’an ShaanxiReceived: Mar. 29th, 2019; accepted: Apr. 10th, 2019; published: Apr. 17th, 2019AbstractIonic liquid is new type of green organic solvent. Compared with traditional volatile organic sol-vents, it has many advantages such as good solubility, non-combustible and non-explosive, good controllability, good stability, good safety and environmental protection, and so on. In particular, imidazoles are easy to be synthesized and convenient to be used. In recent years, they have been widely used in chemical industry and medicine. In this paper, the application and advantage of imidazoles ionic liquids are reviewed in extracting effective ingredients from traditional Chinese medicine to provide reference for expanding the application scope of imidazole ionic liquids and optimizing the extraction process of effective components in traditional Chinese medicine.KeywordsImidazole Ionic Liquids, Extraction Method, Active Ingredients, Application咪唑类离子液体在中药有效成分提取中的应用汪亚兰1，高苏亚1,2*，杨妙洁1，曹甜1，毛宇泽1，陶大利1，赵瑭娜1，李佳雯1，王睿1，王皎皎11西安医学院药学院，陕西西安2西安医学院药物研究所，陕西西安收稿日期：2019年3月29日；录用日期：2019年4月10日；发布日期：2019年4月17日*通讯作者。
固相萃取-超高效液相色谱法测定水体中4种硝基呋喃类药物
固相萃取-超高效液相色谱法测定水体中4种硝基呋喃类药物严忠雍;张小军;李佩佩;喻亮;龙举;祝银;王建【摘要】UHPLC was applied to the determination of 4 nitrofurans, i.e. furacilin, furaltadone, nitrofurantoin and furazolidone in water with solid phase extraction.The sample was purified by passing through HLB solid phase extraction column and eluted with a mixture of ammonia and methanol (5 + 95 ).BEH C18 chromatographic column was used as stationary phase,and a mixture of acetonitile and 2 mmol·L-1 ammonium acetate solution (containing 0.1% formic acid)(23+77)was used as mobile phase.UV-detection at 360 nm was adopted in the determination.Linear relationships between values of peak area and mass concentration of the 4 nitrofurans were kept in the same range of 5.0-200 μg·L-1 ,with detection limit (3S/N)of 0.02 μg·L-1 .On the base of blank sample,test for recovery was made by standard addition method;values of recovery found were in the range of 84.5%-97.2%,with RSD′s (n=6)in the range of 1.5%-4.5%.%采用固相萃取-超高效液相色谱法测定水体中呋喃西林、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃唑酮等4种硝基呋喃类药物的含量。
中草药中各类化学成分提取分离方法
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水－是一种强极性溶剂。无机盐、糖类、 分子不太大的多糖、鞣质、氨基酸、蛋 白质、有机酸盐、生物碱盐和极性苷类 等都能被水溶出。以水作为提取溶剂的 缺点是：提出的杂质多。
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被溶解物质也有亲水性及亲脂性之 分。溶质在溶剂当中的溶解遵循相 似相溶的原理，亲水性的化学成分 易溶于水或亲水性的有机溶剂中， 亲脂性的成分易溶于亲脂性的有机 溶剂中。
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石油醚→油脂、蜡、叶绿素、挥发 油、游离甾体及三萜类化合物
氯仿或醋酸乙酯→游离生物碱、有 机酸及黄酮、香豆素的苷元
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中草药有效成分的分离与精制
根据物质的溶解度差别进行分离
根据物质在两相溶剂中的配比不同 进行分离
根据物质的吸附性能差别进行分离 根据物质分子大小差别进行分离 根据物质离解程度不同进行分离
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一、根据物质的溶解度差别进行分离
1.结晶及重结晶法：利用温度变化引 起溶解度的改变使物质得以分离。
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二、水蒸汽蒸馏法
适用于具有挥发性、能随水蒸汽蒸 馏而不被破坏、难溶或不溶于水的 成分的提取，如挥发油、小分子的 香豆素类、小分子的醌类成分。
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三、升华法
固体物质受热不经过熔融，直接汽 化，遇冷后又凝固为固体化合物， 称为升华。中草药中有一些成分具 有升华的性质，可以利用升华法直 接自中草药中提取出来。如樟脑、 咖啡因。
2.溶剂分离法：
固相萃取结合HPLC-MSMS法测定动物源食品中庆大霉素的四种组分-public
作者上清液转入另一塑料离心管中，再用4ml 磷酸盐缓冲液重复提取一次，合并提取液并定容至15 mL ，混匀备用，取一半备用液经PCX 小柱净化。
如图1所示为固相萃取净化流程。
图1.固相萃取操作流程仪器条件色谱条件系统：Agilent 1290 Infinitiy II色谱柱：Agilent Poroshell HPH-C8（3.0x100mm,2.7µm,P.N. 695975-506） 柱温：35℃ 进样量：5µL流动相A ：水相（乙酸铵甲酸水溶液） 流动相B ：乙腈 流速：0.4mL/min梯度洗脱程序如表1所示。
活化：5mL 甲醇、5mL 水 上样：取7.5mL 备用液 淋洗：5mL 水、 5mL 甲醇 洗脱：5mL 氨化甲醇 40℃下氮吹至近干，醋酸水定容至2mL 过0.2µmPES 膜于聚丙烯进样小瓶中，待测 表1.梯度洗脱程序时间min A% B% 0.0 92.0 8.0 3.0 92.0 8.0 6.0 60.0 40.0 6.1 2.0 98.0 8.0 2.0 98.0 8.1 92.0 8.0质谱条件系统：Agilent 6470 三重四级杆 LC/MS/MS 离子源：ESI +干燥气温度：350℃ 干燥气流速：7L/min 雾化器：40psi鞘气流速：12L/min 鞘气温度：350℃ 毛细管电压：3500 V 喷嘴电压：0 V表2多反应监测模式监测的离子对 目标物 前级 离子 子离子 裂解 电压(V) 碰撞 能量(eV)庆大霉素C1a 450.2 322.1 90 12 159.9 90 24庆大霉素C2 464.2 322.1 100 12 160.1 100 20 庆大霉素C2a 464.2 322.1 95 12 160.1 95 20 庆大霉素C1 478.2322.1 105 12 160.110524结果与讨论本文所示方法适合动物源食品中残留物庆大霉素的检测。
固相萃取_气相色谱法测定大豆粉中的有机磷
食品科技FOOD SCIENCE＆TECHNOLOGY1前言大豆是一种优质蛋白质，深受世人喜爱，豆制品已成为大众每日餐桌上的营养美味食品。
有机磷农药是一种广谱杀虫剂，因其药效高而被广泛使用，常用于防治大豆等作物的虫害，但由于其在环境中容易造成残留而进入食物链，从而影响人体健康。
因而，近年来，人们也开始关注大豆中的农药残留等问题。
我国的食品标准中规定了大豆中有机磷农药残留的限量标准，国外也对大豆中有机磷农药残留做出了相应的规定。
目前，有机磷农药残留的检测主要采用气相色谱法，但多用于检测水果、蔬菜等样品中的农药残留，而有关大豆等富含油脂类农产品中的有机磷类农药残留分析方法的报道较少。
本文采取用乙腈提取后，浓缩至近干，有机磷类农药先经过C18柱再过Envi-Carb+NH2串联柱净化，以V（乙腈）∶V（甲苯）=3∶1洗脱的手段，有效地去除了大豆中的油脂，降低了干扰，提高了检测灵敏度，添加回收好，检出限可达0.005mg/kg.2实验部分2．1仪器与试剂Agilent7890气相色谱仪，配有火焰光度检测器（美国Agilent公司）；Buchi旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器）；XW280A旋涡混合器（上海精科实业有限公司）；固相萃取装置：乙腈、正已烷、甲苯、乙酸乙酯（均为色谱纯）。
Supelco Envi-Carb固相小柱（500mg,6mL）,Supelco NH2固相小柱（500mg,6mL）,Supelco C18柱（500mg, 6mL）。
有机磷农药标准：乙嘧硫磷、二嗪磷、三唑磷、毒死蜱，购自国家农业环境保护科研监测所（北京）。
2．2色谱条件：DB———1701毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25um）。
柱温升温程序：于45℃下保持1分钟后，以30℃/min的速率升温至250℃，保持20分钟；载气：氮气（纯度不低于99.999%）,流速为1.5mL/min,进样口温度230℃；进样方式：不分流进样；检测器温度：250℃；检测器气体：空气，100mL/min；氢气：75mL/min，进样量为1.0uL。
固相萃取-液相色谱法测定水环境中4种非甾体抗炎药物
固相萃取-液相色谱法测定水环境中4种非甾体抗炎药物陈新;张聪璐;陈海红;吴宜曼;侯晓虹【摘要】目的建立专属、灵敏的固相萃取-液相色谱分析方法,测定水环境中4种非甾体抗炎药(酮洛芬、美洛昔康、双氯芬酸、布洛芬)的质量浓度.方法采用固相萃取技术进行样品前处理,用HPLC法测定.色谱柱:C18(200 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈-20 mmol·L-1乙酸铵(60∶40),冰乙酸调pH至3.5;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:263 nm.结果各目标分析物在0.5～50.0 mg·L-1范围内线性关系良好,定量下限均为0.5 mg·L-1.精密度(RSD)范围为0.6%～2.0%,萃取回收率大于78.0%,样品溶液在12 h内稳定性良好.结论该法简单、灵敏、准确,可用于水环境中多种非甾体抗炎药的分析.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2010(025)005【总页数】3页(P323-325)【关键词】非甾体抗炎药;固相萃取;水环境;高效液相色谱法【作者】陈新;张聪璐;陈海红;吴宜曼;侯晓虹【作者单位】沈阳药科大学制药工程学院,辽宁,沈阳,110016;沈阳药科大学制药工程学院,辽宁,沈阳,110016;沈阳药科大学制药工程学院,辽宁,沈阳,110016;沈阳药科大学制药工程学院,辽宁,沈阳,110016;沈阳药科大学制药工程学院,辽宁,沈阳,110016【正文语种】中文【中图分类】R927.2药品和个人护理用品(Pharmaceuticals and Personal Care Products,PPCPs)的环境污染问题是由Daughton和Ternes于1999年提出的[1]。
这类污染物质主要有两大类,一是各类处方和非处方药物,如抗生素、非甾体抗炎药、β-受体阻滞剂、调血脂药、精神病治疗用药、降压药、避孕药、减肥药、抗癌药、抗癫痫药、利尿剂等;二是各种个人护理用品,如肥皂、香波、牙膏、香水、护肤品、防晒霜、发胶、染发剂等。
固相萃取-高效液相色谱法测定中药制剂及保健食品中芍药苷
固相萃取-高效液相色谱法测定中药制剂及保健食品中芍药苷高广慧;田金苗;赵飞;孙晓娟【摘要】应用固相萃取-高效液相色谱法测定中药制剂及保健食品中芍药苷的含量.样品经30％(体积分数)乙醇溶液提取,酸性氧化铝固相萃取柱净化.以C18色谱柱为分离柱,用乙腈和0.1％(体积分数)磷酸溶液以不同比例混合的溶液为流动相进行梯度洗脱,在检测波长230 nm处进行测定.芍药苷的质量浓度在2.00～200mg·L-1范围内与其峰面积呈线性关系,方法的检出限(3S/N)为0.5 mg· L-1.加标回收率在99.5％～101％之间,测定值的相对标准偏差(n=6)在均小于2％.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2015(051)002【总页数】3页(P228-230)【关键词】高效液相色谱法;固相萃取;中药制剂;保健食品;芍药苷【作者】高广慧;田金苗;赵飞;孙晓娟【作者单位】辽宁省食品检验检测院,沈阳110015;辽宁省药品检验检测院,沈阳110023;辽宁省食品检验检测院,沈阳110015;辽宁省食品检验检测院,沈阳110015【正文语种】中文【中图分类】O652.63芍药苷主要来源于毛茛科植物芍药、川赤芍的干燥根和毛茛科植物牡丹的干燥根皮,含量以赤芍最高,具有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗、清热凉血、散瘀止痛和活血化瘀等功效。
用于头痛眩晕、胁痛、腹痛、四肢挛痛、血虚萎黄、月经不调、自汗、盗汗、跌打损伤和痈肿疮疡等的治疗[1-4]。
芍药苷属双环单萜类,极性很大,水溶性好,脂溶性差。
目前,测定中药材白芍、赤芍中的芍药苷,中成药中的芍药苷及保健食品中的芍药苷的含量多采用高效液相色谱法,其提取方法不统一,且没有对提取液进行净化,即直接进样分析[2-5]。
本工作选取了6种不同剂型的9种含白芍、赤芍或牡丹皮中药材成分的中成药、保健食品和中药饮片,将中性氧化铝制备成固相萃取小柱,对芍药苷的提取溶液进行净化后测定,方法准确、可靠,能较好地控制中药材、中成药和保健食品中芍药苷的质量。
中药化学成分提取分离和鉴定的方法
中药化学成分提取分离和鉴定的方法一、提取方法中药的有效成分一般分布在天然产物中，通过提取可以将其集中起来，常用的提取方法有：1.水浸提取：将中药粉末与适量的水混合，使用热水或冷水浸泡一定时间后，过滤、浓缩，得到中药水提取液。
2.醇提取：将中药粉末与乙醇或其他有机溶剂混合，浸泡一段时间，过滤、浓缩，得到中药醇提取液。
3.超声波提取：通过超声波的机械作用，使溶剂渗入叶片和组织细胞中，加速物质的扩散和溶解，提高提取效率。
二、分离方法提取液中含有多种成分，需要进行分离，常用的分离方法有：1.疏水色谱法：利用不同成分在非极性固定相上的亲疏水性差异进行分离，如硅胶柱色谱、C18柱色谱等。
2.离子交换色谱法：利用各种带电的成分与离子交换树脂之间的相互作用进行分离，如阴离子交换色谱、阳离子交换色谱等。
3.层析法：利用固定相的颗粒特性进行分离，如薄层色谱、高效液相色谱等。
三、鉴定方法分离后的化合物需要进行鉴定，常用的鉴定方法有：1.紫外-可见吸收光谱：通过测量物质在紫外或可见光区域的吸收特性，判断物质的化学结构和含量。
2.红外光谱：利用物质对红外辐射的吸收和散射特性，推断化学结构。
3.质谱：通过分子的分解产物质谱图，确定分子的相对分子量、结构和化学式。
4.核磁共振波谱：通过核磁共振信号的强度、位置和形状，测定化合物的结构和相对分子量。
综上所述，中药化学成分的提取、分离和鉴定方法涵盖了水浸提取、醇提取、超声波提取、疏水色谱、离子交换色谱、层析法、紫外-可见吸收光谱、红外光谱、质谱和核磁共振波谱等一系列实验技术。
这些方法的选用需要根据具体的中药材和目标成分的特点来决定，以获得准确、可靠的结果。
同时，为了提高方法的效率和可重复性，对仪器设备和实验条件的选择与控制也是非常重要的。
超声辅助-固相分散溶液提取离子色谱法测定染发剂中的9种染料中间体
染 料 中间体 的方 法 。样 品基 质 经分 散 后 ， 定 组分 进 入 溶 液 ， 脂 溶 解 在 正 己烷 中 ， 测 油 干扰 化 合 物 被 分 散 剂 吸 附 。在振 荡 、 声 和 加热 的协 同作 用 下 ， ｍｎ内 快速 完 成 提取 ， 有 高 的样 品处 理 效 率 。用 离 子 色 谱 法 超 ９ ｉ 具 测定 商 业 染 发剂 中的 中 间体 以确 定方 法 的提取 效 率 。方法 的线 性 范 围为 ０ ２ １０ｍｇ Ｌ 检 出 限 ０Ｏ ９ ． ～ ０ ／ ， ．１～
Ａｂ ｔａ ｔ Ａｎ ｕ ｔａ ｏ ｎ ａ ｓｓｅ ａｒｘ ｓ ｌ － ｈ ｓ ｉｐ ｒ ｉｅ ｌ ｕ ｄ ｅ ｔ ａ ｔｏ ａ ｓｒ ｃ ｌｒ ｓ ｕ ＆ ｓ ｉｔ ｓ ｍｐｌ ｒ ｐ ｒ ｔ ｎ ｍ ｅｈｏ ｔ ｄ ｑ ｅ ｐ ｅ ａ ａ ｉ ｔ ｄ ｗｉｈ ｏ
中 图分 类号 ： ６ ７ ７ ； Ｈ８ ３ ０ ５ ． ５ Ｔ ３
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固相萃取-气相色谱法测定三七中38种农药残留
CHINA PORT SCIENCE AND TECHNOLOGY固相萃取-气相色谱法测定三七中38种农药残留张飞*摘 要 三七中药材产品经乙睛提取，盐析，采用C18和硅胶固相萃取柱净化后，用气相色谱仪检测38种有机氯、 拟除虫菊酯农药残留含量「结果表明：C18和硅胶固相萃取柱净化能够有效除去三七药材中挥发油、有机酸、皂昔等大 部分共萃物和干扰组分，获得较好的净化效果；3个不同浓度水平添加回收率在78.6% ~ 120.3%之间，相对标准偏差为0.1% - 12.5%；校准曲线线性相关系数均大于0.999。
该方法操作简单、快速稳定、除杂效果明显，适用于三七中药材产品中多种农药残留的日常检测工作「关键词C1&硅胶；固相萃取；气相色谱；农药残留；三七；中药材Determi n ation of 38 Pesticide Residues in Panax Notoginseng with Solid Phase Extraction ColumnPurification and Gas ChromatographyZHANG Fei *1第一作者：张飞(1986—),男，汉族，助理工程师，从事食品及农产品检验工作，E-mail ： ****************1.天保海关云南文山6630991. TianBao Customs, Wenshan Yunnan 663099Abstract The Chinese herbal medicinal product of Wenshan panax notoginseng was extracted with acetonitrile, salted out,and purified with C18 and silica gel solid phase extraction column. The residual con t ent of 38 kinds of organochlorine and pyrethroidpesticides was detected by gas chromatography. Purification can effectively remove most co-extracted substances and interferingcomp o n e nts such as volatile oils, orga n ic acids, sap o n i ns, etc., and achieve a better purification effect ； the recovery rate of high and low concentration levels is 78.6%-120.3%, the relative standard deviation is 0.1%-12.5%； The linear correlation coefficients of thecalibration are all greater than 0.999. The method is simple to operate, fast and stable, and has obvious impurity removal effects. It is suitable for daily detection of multiple pesticide residues in Chinese medicinal products Wenshan panax notoginseng.Keywords C18； silica gel ； solid phase extraction ； gas chromatography ； pesticide residues ； panax notoginseng ； Chinese herbalmedicinal三七是我国三大名贵中药材之一，享有“北人参 南三七”的美誉，是血塞通、云南白药等多种药品的 重要原料来源。
全自动固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中4种吡咯里西啶类生物碱
分析检测全自动固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法 测定蜂蜜中4种吡咯里西啶类生物碱朱秀焕1，郝胜玉2，玄红专3，常晨阳1，赵成新4，李爱峰5（1.聊城海关，山东聊城 252000；2.聊城大学物理科学与信息工程学院，山东聊城 252000；3.聊城大学生命科学学院，山东聊城 252000；4.泰安海关，山东泰安 271000；5.聊城大学化学化工学院，山东聊城 252000）摘 要：建立了全自动固相萃取-高效液相色谱-串联质谱测定蜂蜜中4种吡咯里西啶类生物碱（野百合碱、倒千里光碱、千里光宁、千里光菲啉）含量的方法。
样品用50%甲醇水溶液提取，采用SCX固相萃取柱进行在线净化，以Agilent Eclipse Plus C18色谱柱为分析柱，含0.1%甲酸、10 mmol/L乙酸铵的水溶液和乙腈的流动相等度洗脱，在电喷雾电离源正离子模式和多反应监测模式下进行检测。
结果表明，4种生物碱均在0.1～20 μg/kg范围内与其对应的峰面积呈现良好的线性关系，相关系数均大于0.999，方法的检出限（S/N=3）和定量限（S/N=10）分别为0.1μg/kg和0.2 μg/kg。
以空白蜂蜜样品为基质，在1 μg/kg、2.5 μg/kg、5 μg/kg加标水平下做回收实验，回收率在83.98%～94.75%，相对标准偏差（RSD，n=6）均低于5%，该方法准确度高、灵敏度高、稳定性好、操作简便，适用于蜂蜜中吡咯里西啶类生物碱的测定。
对国产20个不同产地、不同种类的蜂蜜样品进行测定，结果发现3个样品检出了倒千里光碱，1个样品检出了千里光菲啉，野百合碱和千里光宁均未检出。
关键词：全自动固相萃取；高效液相色谱-串联质谱法；吡咯里西啶类生物碱；蜂蜜蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经充分酿造而成的天然物质[1]，是营养丰富的天然滋养食品。
随着蜂蜜市场需求量的不断提高，蜂蜜的安全问题也日益严重，农药、兽药残留、掺杂、掺假等问题不断出现[2]，严重影响了我国蜂蜜产品的市场秩序和出口贸易。
固相萃取与超高效液相色谱联用测定沼液中的四种植物激素
固相萃取与UPLC联用测定沼液中的四种植物激素文先红1宋成芳2张妙仙2单胜道﹡21（浙江农林大学理学院，临安）2（浙江农林大学环境科技学院，临安）摘要：沼液中含有丰富的有机酸，植物激素等有机质，因而被广泛用作植物生长促进剂。
本实验建立了一套可靠的在沼液中提取，纯化和测定四种重要的植物激素(GA3,IAA,ABA and ZT)的方法。
经过液液萃取后，通过SPE固相萃取纯化和浓缩样品, 进入ACQUITY UPLC BEH C18 colum (2.1mm x 50mm ,1.7µm )进行色谱分离, 流动相采用甲醇和0.1%的甲酸水溶液（pH=3.2），流速0.22ml/min, 进行梯度洗脱，PDA检测。
实验中对影响色谱分离的几种重要因素进行了讨论，样品中四种激素的回收率可达91.3% 到101.2%，结果证明SPE-UPLC方法能对沼液中的四种激素进行高效率的分离，测定。
关键词：沼液，激素，超高液相色谱，固相萃取1 引言沼液是沼气厌氧发酵后的产物, 含有丰富的氮、磷、钾等营养元素，还含有蛋白质，有机酸和多种植物激素，其速效营养能力强, 成分可利用率高, 而且具有防病抗逆作用, 是一种优质的具有生物肥料和生物农药双重功效液体肥料，特别其提取物可用作促进植物花果生长的叶面肥。
植物激素中的细胞分裂素(ZT)能促进细胞分裂, 对种子和芽有促使萌发的作用, 含有的3-吲哚乙酸(IAA)能促进种子发芽, 提高发芽率，赤霉素(GA)可以刺激农作物茎、叶快速生长, 而脱落酸(ABA)则具有抑制生长、促进衰老的作用。
因而作为叶面肥使用的沼液必须测定其中这四种重要的植物激素含量。
近几十年来, GC 法,GC-MS法及电分析法, 液相色谱法(HPLC)，液质连用(LC-MS)等被广泛地应用于植物激素的分离和定量测定。
其中高效液相色谱是植物内源激素分析的有效手段, 但在同时测定植物组织提取液中的多种内源激素时, 经常出现到分离度差、存在干扰峰及严重拖尾现象。
固相萃取-气相色谱法检测三七中有机磷农药残留
固相萃取-气相色谱法检测三七中有机磷农药残留谭福能;何媛媛【摘要】文章采用固相萃取—气相色谱的方法检测三七样品中的有机磷类农药残留。
采用超声法提取，并用弗罗里硅土固相萃取柱净化，用氮磷检测器进行检测，最后用外标法定量。
5种有机磷杀虫剂的回收率范围为73.66%～112.22%，相对标准偏差（RSD）范围为2.94%～4.31%，在5个三七样品中检出了乐果和敌敌畏，没有检测到甲胺磷、对硫磷、辛硫磷。
该方法快速、准确，可用于三七中有机磷农药残留的分析。
%The paper detects organophosphorus pesticide residue in Panax notoginseng using solid-phase extraction and gas chromatography methods. Panax notoginseng samples are extracted with ultrasonic method, puriifed with Florida silica solid-phase extraction column, detected with nitrogen-phosphorus detector and quantiifed with external standard method. The recovery range of ifve kinds of organophosphorus pesticide is 73.66%~112.22%with relative standard deviation of 2. 94%~4.31%. Dimethoate and DDVP are detected, but methamidophos, parathion and phoxim are not detected in five samples. This method is fast and accurate and can be used in the analysis of organophosphorus pesticide residue in Panax notoginseng.【期刊名称】《文山学院学报》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】3页(P1-3)【关键词】三七;固相萃取;气相色谱;有机磷农药残留【作者】谭福能;何媛媛【作者单位】文山学院化学与工程学院，云南文山663000;文山市农业环境保护监测站，云南文山663000【正文语种】中文【中图分类】S567.236三七（Panax notoginseng）为五加科人参属植物，与人参同科同属，三七作为云南特有的名贵中药材，以其活血化瘀、消肿定痛的功效为世人所公认[1-2]。
超声辅助深共熔溶剂提取两种烟草多酚的方法研究
超声辅助深共熔溶剂提取两种烟草多酚的方法研究尚宪超;谭家能;杜咏梅;刘新民;张忠锋【摘要】为拓展新型绿色溶剂——深共熔溶剂应用,以烟叶为原料,比较11种深共熔溶剂对烟草中两种多酚类化合物的提取效果,通过单因素试验和正交试验确定最佳提取条件,采用固相萃取柱分离深共熔溶剂提取液中的多酚类化合物.结果表明,当氯化胆碱-苹果酸组成的深共熔溶剂体系作为提取溶剂,质量分数为40%的水/DES(体积比)为辅助溶剂,超声波为辅助提取手段,提取温度为50℃,提取时间为30 min时,绿原酸、芸香苷提取量分别为(16.95±0.69)、(8.53±0.52)mg/g,回收率分别为91.67%和99.81%.与常用有机溶剂提取烟草中多酚类化合物相比,深共熔溶剂是一种合适的绿色提取溶剂,它可以成功地应用于生物活性物质提取及分析.%In order to expand the application of the emerging green solvent called deep eutectic solvents (DES), eleven different DES were used as extraction solvents for two phenolic compounds in tobacco leaves and then the best extraction conditions were determined through single factor test and orthogonal test. Finally, solid phase extraction columns were used to separate phenolic compounds from deep eutectic solvents. The results showed that under the condition of microwave at 50℃, using choline chloride/malic acid as solvents, 40% (V/V) of water as co-solvents, within 30 minutes, a total of (16.95±0.69), (8.53±0.52) mg/g chlorogenic acid, rutin were extracted respectively. Finally, the recovery of phenolic compounds from DES by macroporous adsorption resins was also investigated. Recovery rates of chlorogenic acid, rutin reached 91.67% and 99.81%, respectively. By comparing with convertional extraction solventsfor phenolic compounds, DESs were shown to have great potential as green extraction and composition analysis solvents for bio-active ingredients.【期刊名称】《中国烟草科学》【年(卷),期】2017(038)006【总页数】6页(P55-60)【关键词】绿色提取;深共熔溶剂;烟草;多酚【作者】尚宪超;谭家能;杜咏梅;刘新民;张忠锋【作者单位】中国农业科学院烟草研究所,青岛 266101;中国农业科学院研究生院,北京 100081;中国农业科学院烟草研究所,青岛 266101;中国农业科学院烟草研究所,青岛 266101;中国农业科学院烟草研究所,青岛 266101;中国农业科学院烟草研究所,青岛 266101【正文语种】中文【中图分类】TS41+1绿色化学是指在制造和应用化学产品时应有效利用（最好可再生）原料，消除废物和避免使用有毒和危险的试剂和溶剂[1]。
中药有效成分的提取(黛凝归纳
适用：热稳定性好成分
优点：效率高
特点：煎煮法：只能水做溶剂
回流提取法：溶剂消耗量较大
连续回流提取法：溶剂消耗量稍少
但受热提取时间长
浸渍法
渗漉法
煎煮法
回流提取法
连续回流提取法
处理过的药材，
用适当溶剂，
常温下（也可于60-80℃）
浸渍出成分
中药粗粉
不断添加浸出溶剂
从渗漉筒下端出口流出
中药粗粉
水
加热煮沸（可明火）
兼具液体（高密度，良好溶解性，传质）、气体（高扩散系数，低黏度）优点
二氧化碳NO2，一氧化二氮N2O
六氟化硫SF6
乙烷、庚烷
氨，二氯二氟甲烷
夹带剂
作为亚临界组分（挥发度介于超临界流体与被萃取溶液之间）
以液体形式、相对较小量加入超临界流体中
二氧化碳超临界流体萃取法
1萃取能力强，提取率高——速度快，周期短
2设备昂贵，折旧比例大
3更换产品清洗设备难
超声波提取法
方法
超声波（高速强烈空化效应、搅拌作用）破坏细胞膜，
辅助溶剂渗入细胞，加速，提高提出率
优点
速度快
提取率高
无需加热
不改变有效成分结构
2流程简单，操作方便——易于控制，质量稳定
3温度低，惰性环境——热不稳定物质提取
4萃取介质可循环利用——成本低，无溶剂残留（低污染，无公害，无爆炸危险）
5极性选择范围较广——在一定温度下改变压力/加入合适夹带剂，提取不同极性
6技术联用——色谱技术（GC、HPLC），IR、MS——高效分析
1脂溶性溶解力强，水溶性弱
中药有效成分的提取（黛凝归纳）
一溶剂法
1、常用溶剂及其性质
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DOI :10.11895/j.issn.0253⁃3820.181062离子液体⁃超声辅助⁃固相萃取法提取富集急性子药材中的4种凤仙萜四醇皂苷吴谦1 林花2 刘迎1 金永日1 黎鹏1 刘伟杰1 李绪文*1(吉林大学化学学院1,吉林大学第一医院检验科2,长春130012)摘 要 建立了一种绿色㊁快速㊁高效萃取和富集中药急性子中4种凤仙萜四醇皂苷的方法㊂采用离子液体并结合超声辅助萃取急性子中的化学成分,利用固相萃取小柱富集提取液中的凤仙萜四醇皂苷㊂通过考察离子液体种类及用量㊁pH 值㊁超声时间㊁固相萃取剂和洗脱剂等实验条件对提取率的影响,确立了最优萃取剂为[C 6mim]Br,最优萃取条件:萃取剂用量为0.9mL,提取液pH=7.0,超声为30min,最优富集条件:固相萃取小柱填料为0.9g CHP20/P120,上样流速为1.5mL /min,洗脱剂为1.5mL 甲醇㊂在最优条件下,4种凤仙萜四醇苷加标回收率在92.1%~108.2%之间,相关系数范围为0.9945~0.9975,检出限范围为1.8~4.5μg /mL,RSD<3.9%㊂本方法与传统回流提取方法提取效果接近,可准确测定急性子中4种凤仙萜四醇苷含量㊂关键词 离子液体;固相萃取;急性子;凤仙萜四醇皂苷;超声辅助 2018⁃01⁃26收稿;2018⁃03⁃07接受*E⁃mail:xwli@1 引言急性子为凤仙花属植物凤仙花Impatiens balsamina L.的干燥成熟种子㊂在临床上可用于避孕[1]㊁终止早孕及治疗梗阻[2]㊁癌症及骨质增生[3]㊂研究表明,急性子中主要活性成分包括皂苷[4]㊁黄酮[5]㊁萘醌[6]㊁挥发油[7]和多糖[8]等㊂其中,2015版‘中国药典“以凤仙萜四醇苷A 与凤仙萜四醇苷K 的含量之和大于0.2%作为急性子药材的质量标准[9]㊂凤仙萜四醇皂苷属于Baccharane 型皂苷,具有抗肿瘤及抗风湿作用[10,11]㊂由于凤仙萜四醇皂苷无紫外吸收,因此现有的皂苷含量测定以高效液相色谱⁃蒸发光检测器(HPLC⁃ELSD)法为主要测量手段㊂谭丽娜等[12]利用HPLC⁃ELSD 法测定了急性子中凤仙萜四醇苷A 和凤仙萜四醇苷K 的含量,Li 等[13]通过HPLC⁃ESI⁃MSD 及HPLC⁃ELSD 法测定了急性子中8种凤仙萜四醇苷㊂而这些含量测定中所使用的提取方法均为回流法㊂尽管该方法提取过程操作较为简单,但存在着提取周期长㊁有机试剂用量大㊁皂苷提取与富集率低等缺点㊂因此,亟待研发一种快速㊁高效㊁绿色的凤仙萜四醇皂苷提取方法㊂离子液体是指在室温下完全由离子组成的有机液体物质㊂由于其呈液态的温度范围宽,对有机物具有较好的溶解性能,在天然产物提取中有着广泛应用㊂文献已报道过利用离子液体萃取萜类[14]㊁黄酮类[15]㊁生物碱类[16]㊁类脂类[17]等天然产物中的有效成分㊂近年来,于秀培等[18]建立了分散液⁃液微萃取测定藿香正气口服液中厚朴酚及和厚朴酚含量的方法,Xu 等[19]建立了离子液体⁃超声辅助⁃分散固相微萃取测定了天然色素类化合物的方法㊂此类离子液体与固相萃取㊁液⁃液萃取[20]㊁液相微萃取[21]㊁离子液体/超临界萃取[22]等多种富集手段的联用,进一步拓展其在天然产物成分含量分析中的应用[23]㊂与传统的提取方法相比,离子液体联用技术不仅能够有效富集天然产物中活性成分,更简化了实验步骤,减少了有机试剂使用量及环境污染㊂采用离子液体超声辅助提取及固相萃取联用作为提取方法,结合HPLC⁃ELSD 法测定了急性子药材中4种主要的凤仙萜四醇苷A㊁B㊁K㊁M 的含量,通过考察影响提取率的主要因素,确立了最佳提取条件㊂本方法具有简单㊁分析速度快的优点,为急性子乃至其它中药材中活性成分的分析提供了新思路㊂2 实验部分2.1 仪器与试剂第46卷2018年6月分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告Chinese Journal of Analytical Chemistry第6期910~916KQ⁃250型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);HYQ⁃2121A 型涡旋混匀器(上海睿玥实验器材有限公司);Aglient 1200型高效液相色谱仪(HPLC,Aglient 公司);Alltech ELSD⁃2000蒸发光检测器(美国奥泰科技(中国)有限公司)㊂溴化1⁃丁基⁃3⁃甲基咪唑([C 4mim]Br)㊁溴化1⁃己基⁃3⁃甲基咪唑([C 6mim]Br)㊁溴化1⁃辛基⁃3⁃甲基咪唑([C 8mim]Br)(纯度99%,上海成捷化学有限公司);甲醇(色谱纯,Sigma⁃Aldrich 公司);CleanertC 18⁃SPE 小柱(1000mg /6mL,天津博纳艾尔杰科技有限公司);AB⁃8,D101型大孔树脂(南开大学化工厂);CHP20/P120大孔吸附树脂树脂(日本三菱化学公司);实验用水为超纯水;其它试剂均为分析纯,均购自北京化学试剂厂㊂4种凤仙萜四醇苷凤仙萜四醇苷A㊁B㊁K㊁M(Hosenkoside A,B,K,M)均为本实验室自制(结构见图1),利用液相色谱质谱联用仪㊁红外光谱以及核磁共振仪确定其化学结构,经高效液相法检测,确定纯度均大于98.0%㊂4批次急性子药材购自吉林大药房,经吉林大学药学院张静敏教授鉴定为急性子㊂对4批次急性子药材样品进行编号,其中1号样品用于条件优化和方法学考察,其它3个批次样品用于提取方法对比和实样分析㊂28O 鄄R 2R 1鄄O31720OH S21O S O 鄄R 3H S24*25*H28OHR 1鄄O31720OH S21OR O 鄄R 224*25*HR Hosenkoside A:R 1:Glc 鄄Glc;R 2:Glc;R 3:H Hosenkoside K:R 1:Glc 鄄Glc;R 2:Glc;R 3:Glc Hosenkoside M:R 1:Glc 鄄Xyl;R 2:Glc;R 3:GlcHosenkoside B:R 1:Glc 鄄Glc;R 2:Glc图1 凤仙萜四醇苷A㊁B㊁K 和M 的化学结构式Fig.1 Chemical structures of hosenkoside A,B,K and M2.2 实验方法2.2.1 离子液体⁃超声辅助⁃固相萃取法 准确称取急性子干燥药材粉末(过60目筛)0.1g,加入2.5mL 水和0.9mL [C 6min]Br,涡旋振荡提取30s,放入超声清洗器中,在250W 功率下超声30min,提取液以1.5mL /min 流速吸附于填有0.9g CHP20/P120大孔树脂固相萃取小柱,用1.5mL 甲醇洗脱,减压蒸馏回收提取液,并以甲醇准确定容至1mL,经0.22μm 滤膜过滤后,吸取20μL 续滤液注入高效液相色谱测定,平行测定3次㊂2.2.2 回流提取法 准确称取急性子干燥药材粉末(过60目筛)0.1g,80%乙醇溶液回流提取2次,减压蒸馏回收洗脱液并以甲醇准确定容至1mL,经0.22μm 滤膜过滤后,吸取20μL 续滤液注入高效液相色谱测定,平行测定3次㊂2.2.3 标准溶液的配制 分别准确称取凤仙萜四醇苷A㊁B㊁K㊁M 各1.0mg,用2.5mL 水溶解,加入0.9mL [C 6mim]Br 离子液体,涡旋30s,超声30min 后,以1.5mL /min 上样流速经0.9g CHP20/P120型大孔树脂SPE 柱吸附㊂以1.5mL 甲醇洗脱,减压蒸馏回收洗脱液,并以甲醇准确定容至1mL,再逐级稀释成系列标准溶液㊂2.2.4 色谱条件 色谱柱:Tnature C 18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm,华谱新创科技有限公司);流动相:甲醇(A)⁃水(B)㊂梯度洗脱条件:0~16min,50%A;16~20min,45%A,20~23min,50%A;23~27min,55%A;27~35min,60%A;35~40min,55%A;40~50min,70%A;50~60min,80%A;60~70min,90%A㊂柱温:30℃;流速:1.0mL /min;进样体积:20.0μL㊂2.2.5 ELSD 检测条件 载气:空气;载气压力:2.6bar;漂移管温度:102℃㊂119第6期吴谦等:离子液体⁃超声辅助⁃固相萃取法提取富集急性子药材中的4种凤仙萜四醇皂苷 3 结果与讨论3.1 萃取条件的优化3.1.1 离子液体种类的影响 由于不同碳链长度的离子液体对凤仙萜四醇皂苷的溶解度不同,碳链增长将不同程度改变溶液的粘度,从而影响提取及富集效率,因此,需要根据凤仙萜四醇苷的结构特点,优[C 4mim]BrP e a k a r e a (×105)[C 6mim]Br[C 8mim]Br图2 离子液体种类对提取效果影响Fig.2 Effects of different ionic liquids on extractionefficiencyConditions:0.9mL ionic liquid,2.5mL water,0.1g sample,1.5mL /min load flow rate,pH =7.0,30min ultrasonic time,0.9g adsorbent,1.5mL eluent.(A)hosenkoside A;(B)hosenkoside B;(C)hosenkoside K;(D)hosenkoside M 先选择合适的离子液体㊂本实验通过单因素变量法考察了3种不同烷基链长度的亲水离子液体([C 4mim]Br㊁[C 6mim]Br㊁[C 8mim]Br)对凤仙萜四醇苷的提取效率㊂如图2所示,离子液体碳链长度直接影响提取效果,当碳链长度为4时,由于离子液体极性小,对4种凤仙萜四醇苷萃取效率低;随着碳链长度的增加,离子液体极性增强,因此对4种仙萜四醇苷的提取率也逐渐提高,凤仙萜四醇苷A㊁B㊁M 的峰面积急剧增加㊂但当碳链长度为8时,4种凤仙萜四醇皂苷的峰面积都不同程度地降低㊂这是由于离子液体水溶液对SPE 柱的洗脱能力增加,表现为提取率下降[24]㊂当碳链长度为6时,凤仙萜四醇苷的萃取率达到最高,故选择[C 6mim]Br 为萃取剂㊂3.1.2 离子液体用量的影响 离子液体用量是影响提取效率的最重要因素㊂考察了0.3~1.0mL 离子液体对4种目标物提取效率的影响㊂如图3所示,3P e a k a r e a (×105)4210A B C 0.40.50.60.30.70.80.9 1.0V (mL)图3 离子液体加入量对提取效果的影响Fig.3 Effects of different amount of ionic liquids onextraction efficiency[C 6mim]Br,2.5mL water,0.1g sample,pH =7.0,1.5mL /min load flow rate,30min ultrasonication time,0.9g adsorbent,1.5mL eluent.(A )hosenkoside A;(B )hosenkoside B;(C)hosenkoside K;(D)hosenkoside M凤仙萜四醇苷M 对离子液体加入量较其余3种凤仙萜四醇苷更加敏感㊂在离子液体加入量范围为0.3~0.9mL 时,随着离子液体加入量的增多,4种凤仙萜四醇皂苷的峰面积急剧增大;当离子液体加入量大于0.9mL 时,峰面积呈明显下降趋势,表明离子液体加入量过大时,溶液黏度增加,溶剂无法的渗入急性子药材中,反而使得凤仙萜四醇皂苷萃取率下降㊂因此,选择加入0.9mL 离子液体㊂3.1.3 溶液pH 值的影响 凤仙萜四醇皂苷属于有机醇类化合物,溶液pH 值会改变其存在形式,从而影响离子液体的提取效率㊂由于其水溶液呈弱酸性,在碱性条件下,皂苷上的OH 以阴离子⁃O -形式存在,无法与离子液体的阴离子产生氢键㊂而强酸条件下,糖键易发生断裂,发生水解㊂实验考察了提取液pH 值在5.0~9.0时的提取效果,,结果表明,在pH =7.0时,凤仙萜四醇皂苷的萃取率较高,因此选择pH =7.0为最优条件㊂3.1.4 超声时间的影响 考察了60min 内超声提取时间对目标物峰面积的影响㊂结果表明,超声时间对凤仙萜四醇苷B 和M 的峰面积影响不大,但可提高凤仙苷A 和K 的峰面积㊂超声时间为30min 时,4种凤仙萜四醇苷的峰面积最高,说明萃取率也基本达到最高,故选择30min 作为最佳超声提取时间㊂3.1.5 固相萃取剂的影响 大孔吸附树脂拥有多孔状结构及较大的比表面积,其表面的极性基团能通过吸附或氢键作用有效地分离目标物,因此常被用于皂苷类化学成分的提取和富集[25]㊂本实验分别以219 分析化学第46卷AB⁃8(0.9g)㊁D101(0.9g)㊁CHP20/P120(0.9g)3种大孔树脂作为固定相,制备了3种固相萃取小柱㊂D 鄄101P e a k a r e a (×105)AB 鄄8CHP 80C 18鄄SPE图4 固相填料对提取效果的影响Fig.4 Effects of different adsorbent on extractionefficiency0.9mL [C 6mim]Br,2.5mL water,0.1g sample,pH =7.0,1.5mL /min load flow rate,30min ultrasonication time,0.9g adsorbent,1.5mL eluent.(A )hosenkoside A;(B )hosenkoside B;(C)hosenkoside K;(D)hosenkoside M同时,选取Cleanert C 18⁃S 小柱作为对比㊂如图4所示,在相同条件下对目标皂苷富集作用最好的为CHP20/P120型大孔树脂固相萃取小柱㊂这是由于凤仙萜四醇皂苷拥有相近分子量,分子尺寸相差很小,大孔吸附树脂孔径的大小直接影响不同大小的分子自由进入,只有当孔径对于被分离成分足够大时,比表面积才能充分发挥作用㊂AB⁃8㊁D101㊁CHP20/P120平均孔径分别为13㊁25和45nm,说明CHP20/P120能让更多的皂苷类成分进入孔道中,而且CHP20/P120的比表面积与孔容分别为560m 2/g㊁1.67mL /g,远高于D101及AB⁃8比表面积及孔容(520m 2/g㊁1.24mL /g 及0.77mL /g )㊂故选择CHP20/P120大孔树脂为固相萃取小柱填料㊂3.1.6 上样流速的影响 考察了不同上样流速对富集效率的影响结果㊂在考察的流速范围内(0.5~2.0mL /min),上样流速对凤仙萜四醇苷M 的富集效70%MeOH P e a k a r e a (×105)MeOHEtOH AcctonitrilcAcetone 图5 不同洗脱剂对提取效果的影响Fig.5 Effects of different eluent on extraction efficiency0.9mL [C 6mim]Br,2.5mL water,0.1g samples,pH =7.0,30min ultrasonication time,0.9g adsorbent,1.5mL eluent.(A)hosenkoside A;(B)hosenkoside B;(K)hosenkoside K;(M)hosenkoside M率影响不大,随上样流速增加,凤仙萜四醇苷A㊁B㊁K 的峰面积呈先增高后降低的趋势,在上样流速为1.5mL /min 时,3种皂苷的峰面积达到最高,表明此时富集效率最高㊂因此上样流速选择1.5mL /min㊂3.1.7 洗脱剂种类与用量的影响 考察了SPE 小柱洗脱剂的种类对萃取效果的影响㊂分别选取了70%甲醇㊁甲醇㊁乙醇㊁丙酮㊁乙腈对凤仙萜四醇苷进行洗脱㊂如图5所示,甲醇能将目标物完全洗脱出来,其余试剂洗脱效果较差,因此选择甲醇作为洗脱溶剂㊂本实验还对洗脱剂甲醇用量(0.5~2.5mL)进行了考察,结果表明,当甲醇用量达到1.5mL 以上时,峰面积基本不变,说明1.5mL 即可洗脱完全,因此洗脱剂甲醇的用量选择1.5mL㊂3.2 方法学考察按照2.2.3节的方法制备系列标准溶液㊂在最优HPLC 测定条件下,考察了方法分析性能,结果见表1㊂凤仙萜四醇苷A 和B 在50~1000μg /mL 内,其峰面积与浓度线性关系良好,凤仙萜四醇苷K 和表1 4种凤仙萜四醇皂苷的线性方程㊁线性范围㊁相关系数㊁日内精密度㊁日间精密度㊁检出限和定量限Table 1 Regression equations,linear range,correlation coefficients,precision,LODs and LOQs of four hosenkosides凤仙萜四醇皂苷Hosenkoside 线性方程Linear regression 线性范围Linear range (μg /mL)线性相关系数Corelation coefficient (r 2)日内精密度Intra⁃day precision(%)日间精密度Inter⁃day precision (%)检出限LOD (μg /mL)定量限LOQ (μg /mL)凤仙萜四醇苷A Hosenkoside A Y =1.19×107X -6.68×10550~10000.9963 3.2 3.3 1.8 5.0凤仙萜四醇苷B Hosenkoside BY =1.44×106X -1.48×10550~10000.9945 3.5 4.1 2.1 6.1凤仙萜四醇苷K Hosenkoside K Y =3.41×106X -3.77×105100~10000.9975 2.6 3.1 2.57.6凤仙萜四醇苷M Hosenkoside MY =8.21×107X -1.41×105100~10000.99533.63.84.513.3319第6期吴谦等:离子液体⁃超声辅助⁃固相萃取法提取富集急性子药材中的4种凤仙萜四醇皂苷 M 在100~1000μg /mL 内,其峰面积与浓度线性关系良好,检出限范围为1.8~4.5μg /mL,RSD 值均小于3.9%,表明本方法精密度良好,能满足急性子中凤仙萜四醇皂苷含量的测定要求㊂3.3 加标回收率按照2.2.1节的方法处理样品,平行测定3次,考察方法的加标回收率,结果见表2㊂结果表明,4种凤仙萜四醇苷的加标回收率在92.1%~108.6%之间,RSD 值均小于4.0%,表明本方法的回收率良好,测定结果准确㊂表2 4种凤仙萜四醇皂苷加标回收率Table 2 Recoveries of standard addition of fourhosenkosides凤仙萜四醇皂苷Hosenkoside含量Background (μg /g)加入量Added (μg /g)回收率Recovery (%)RSD (%,n =3)凤仙萜四醇苷A Hosenkoside A 680.0700.0108.6 3.9凤仙萜四醇苷B Hosenkoside B 900.01000105.5 3.2凤仙萜四醇苷K Hosenkoside K 2160250095.4 2.6凤仙萜四醇苷M Hosenkoside M1220150092.13.0405t （min ）I n t e n s i t y （m A u ）1015202530cba 4321080120160200图6 实际样品溶液与标准溶液色谱图Fig.6 Chromatograms of sample and standard solution(a)Sample solution by this method;(b)Sample solution byethanolreflux;(c )Standard solution.(1)hosenkoside B;(2)hosenkoside M;(3)hosenkoside K;(4)hosenkoside A3.4 急性子药材中4种凤仙萜四醇苷含量的测定分别利用本研究建立的提取方法与乙醇回流提取方法制备了样品溶液,并测定了4份市售急性子中4种凤仙萜四醇苷的含量,标准溶液与样品溶液色谱图见图6,实验结果列于表3㊂结果表明,本实验方法与乙醇回流提取的含量测定的结果差异较小,说明本方法与传统提取方法的提取效果相差较小,可准确测定急性子中4种凤仙萜四醇皂苷的含量㊂4 结论建立了一种超声辅助⁃离子液体⁃固相萃取法萃取并富集急性子药材中凤仙萜四醇苷类成分的新方法㊂本样品前处理方法减小了萃取剂用量,并具有较好回收率㊂本方法具有快速㊁高效㊁环保㊁准确等优点,为急性子药材质量控制提供了新的样品前处理方法,也为中药材及其制剂中功效成分的提取与富集新方法的探究提供了有价值的参考㊂表3 样品分析结果Table 3 Results of sample analysis批号Batch lot 凤仙萜四醇苷A Hosenkoside A (μg /g)凤仙萜四醇苷B Hosenkoside B (μg /g)凤仙萜四醇苷K Hosenkoside K (μg /g)凤仙萜四醇苷M Hosenkoside M (μg /g)样品1Sample 1样品2Sample 2样品3Sample 3样品4Sample 4本方法This method 701.6881.321601220回流提取Reflux extraction 689.8907.622001211本方法This method 790.6950.425931803回流提取Reflux extraction 802.1952.727081830本方法This method 667.0909.330691660回流提取Reflux extraction 701.6894.731011670本方法This method689.6930.723031691回流提取Reflux extraction715.3955.023331689419 分析化学第46卷References1 WANG Yu⁃Sheng.Chinese Pharmacological and Application .Beijing:People's Health Publishing House,1983:799王浴生.中药药理与应用.北京:人民卫生出版社,1983:7992 ZHAO Liang⁃Qian.Jiangsu J.Tradit.Chin.Med.,2002,23(9):25赵良倩.江苏中医药,2002,23(9):253 MA You⁃Yun.Shanghai J.Tradit.Chin.Med.,2007,41(1):78马有运.上海中医药杂志,2007,41(1):784 Fu Y,Gao W,Yu J J,Chen J,Li H J,Li P.J.Pharmaceut.Biomed.,2012,64⁃65(4):64-715 WANG Wei,JU Cheng⁃Guo,ZHU Xu,ZHAO Huan⁃Jun.Chin.Tradit.Pat.Med .,2011,33(2):199-202王巍,鞠成国,朱旭,赵焕君.中成药,2011,33(2):199-2026 Wang Y C,Lin Y H.Fitoterapia .2012,83(8):1336-13447 CHEN Ming⁃Xia,WANG Xiang⁃Li,ZHANG Yu⁃Jie.Chin.J.Chin.Mater.Med.,2006,31(11):928-929陈明霞,王相立,张玉杰.中国中药杂志,2006,31(11):928-9298 TONG Miao⁃Miao,ZHAI Yan⁃Jun,WANG Tian⁃Min,LI Na.Chin.Tradit.Pat.Med.2011,33(7):1171-1174佟苗苗,翟延君,王添敏,李娜.中成药,2011,33(7):1171-11749 Chinese Pharmacopoeia Commission,Chinese Pharmacopoeia ,vol.I ,Beijing :The Medicine Science and Technology,2015:263中华人民共和国药典(一部).国家药典委员会.北京:中国医药科技出版社,2015:26310 Wu Q,Jin Y R,Yao H,Liu Y,Li P,Li X W.Chem.Res.Chinese U.,2017,(5):1-511 LI Hui⁃Jun,YU Jun⁃Jie,LI Ping.China Patent,201010126336.4,2012李会军,于俊杰,李萍.中国专利,201010126336.4,201212 TAN Li⁃Na,LU Juan,ZHU Na,MENG Lei,ZHU Hong⁃Wei,LIU Yu⁃Wei,JIN Yong⁃Ri,LI Xu⁃Wen.Chin.J.Pharm.Anal.,2009,29(5):717-720谭丽娜,陆娟,朱娜,孟磊,朱红微,刘玉玮,金永日,李绪文.药物分析杂志,2009,29(5):717-72013 Li H J,Yu J J,Li P.J.Pharmaceut.Biomed .,2011,54(4):674-68014 Sara L,Héctor R,Alberto A,Ana S.Fluid Phase Equilibr.,2014,361(2):37-4415 Xu W,Chu K D,Li H,Zhang Y Q,Zheng H Y,Chen R L,Chen L D.Molecules ,2012,17(12):14323-1433516 Ana F MCláudio,Ana M F,Mara G F,João A P C.Green Chem.,2013,15(7):2002-201017 Choi S A,Lee J S,Oh Y K,Jeong M J,Kim S W,Park J Y.Algal Res.,2014,3(1):44-4818 YU Xiu⁃Pei,FENG Fang,TENG Bao⁃Qi,CHEN Yu⁃Yu.Pharm.Clin.Res.,2012,20(3):264-266于秀培,冯芳,滕宝褀,陈玉宇.药学与临床研究,2012,20(3):264-26619 Xu J J,Li Q,Cao J,Warner E,An M R,Tan Z J,Wang S L,Peng L Q,Liu X G.J.Chromatogr.A ,2016,1463(9):32-4120 Yan H Y,Sun N,Han Y H,Yang C,Wang M Y,Wu R J.J.Chromatogr.A ,2013,1307(17):21-2621 Visser A E,Swatloski R P,Reichert W M,Griffin S T,Rogers R D.Ind.Eng.Chem.Res.,2000,39(10):3596-360422 Wang X Z,Li X W,Li L J,Li M,Wu Q,Liu Y,Yang J,Jin Y R.Anal.Methods ,2016,8(35):6566-657223 Yang C,Sun Y Y,Kyung H R,Yan H Y.J.Chromatogr.A ,2014,1361(26):5324 CHEN Yi⁃Xin,FENG Qing⁃Sheng,WANG Xiao⁃Zhong,LI Lan⁃Jie,LI Xu⁃Wen,JIN Yong⁃Ri.Chinese J.Anal.Chem.,2016,44(7):1106-1111陈一鑫,冯清胜,王晓中,李兰杰,李绪文,金永日.分析化学,2016,44(7):1106-111125 Li H J,Liu Y,Yi Y T,Miao Q,Liu S J,Zhao F,Cong W,Wang C H,Xia C H.J.Chromatogr.B ,2017,1048:56-63519第6期吴谦等:离子液体⁃超声辅助⁃固相萃取法提取富集急性子药材中的4种凤仙萜四醇皂苷 619 分析化学第46卷Ionic Liquid Ultrasonic⁃assisted Solid Phase Extraction of FourKinds of Hosenkosides from Seeds of Impatiens balsamina L.WU Qian1,LIN Hua2,LIU Ying1,JIN Yong⁃Ri1,LI Peng1,LIU Wei⁃Jie1,LI Xu⁃Wen*1 (College of Chemistry1,Clinical Laboratory of First Hospital2,Jilin University,Changchun130021,China) Abstract A green,rapid and efficient method was developed for the extraction of4kinds of hosenkosides from the seeds of Impatiens balsamina L.The hosenkosides were extracted by ionic liquid,and then enriched by solid phase extraction.The effects of the kinds and volume of ionic liquid,pH value,ultrasonic time,solid phase extractant and eluent on the extraction fields were investigated and optimized.Under the optimum conditions,the recoveries of4kinds of hosenkosides were between92.1%and108.2%,the correlation coefficients were0.9945-0.9975,and the detection limits were1.8-4.5μg/mL.The RSD values were all less than3.9%.The experimental results showed that this method was fast,efficient,environmental protection.This study provided a reference for the extraction and enrichment of trace components in Chinese medicinal herbs.Keywords Ionic liquid;Solid phase extraction;Seeds of Impatiens balsamina L;Hosenkosides;Ultrasonic⁃assisted(Received26January2018;accepted7March2018) Phenomenex推出生物治疗药物界定方法bioZen TM系列色谱柱 (2018年4月)加利福尼亚托兰斯 作为分离科学领域拥有先进研发技术和生产能力的全球知名企业 美国Phenomenex公司,推出了可以应用在药物领域㊁生物制药领域以及学术研究领域为生物分离提供液相色谱解决方案的新产品bioZen系列色谱柱㊂该系列兼具久经考验以及全新研发的填料,拥有两种颗粒平台 核⁃壳技术和热改性全多孔,并配有全新钛金属生物兼容硬件㊂bioZen产品线有七种固定相,用于UHPLC和HPLC生物治疗药物界定方法检测,如:单克隆抗体类,抗体药物复合体和生物类似药㊂该系列产品的特定LC化学性质适用于聚集体和总mAb分析㊁完整质量数和片段分析㊁肽谱分析和肽定量以及多糖分析㊂bioZen系列的另一优势是,所有bioZen填料㊁颗粒以及固定相均采用Phenomenex的全新生物兼容钛金属硬件,从而可以减少次级相互作用㊁残留以及其他重现性问题,相比于不锈钢硬件能提供更好的总体重现性㊂生物兼容钛柱体还能大大缩短预充时间,而又不会影响蛋白或多肽的完整性㊂bioZen热改性全多孔填料是通过Phenomenex专有的合成后热处理工艺生产,从而增强颗粒的机械强度和惰性,与传统的LC填料相比,可以提供更出色的峰形,并减少了不必要的次级相互作用㊂热改性填料还可以与高效的bioZen核壳技术填料的搭配使用,与之Not sure if we are allowed to use完美from legal perspective.互补㊂该核⁃壳技术可以在相对较短的保留时间内产生更高的分离度和敏感度㊂两种颗粒平台都经过严苛的质控检测以保证持续的高质量表现,与此同时,每一根bioZen系列色谱柱都有特定的生物应用质控标准以确保产品的性能和重现性㊂bioZen系列源于我们想客户所想,与我们密切合作的客户需要一款解决其所有生物分离需求的综合性产品”, Phenomenex全球产品营销高级经理Simon Lomas解释说㊂ 这是一个令人激动的产品组合,其颗粒,化学物质和生物兼容硬件都会不断扩展,此产品组合配合我们行业专家的支持,能够帮助客户克服众多生物制剂界定方法的挑战㊂”。