常见致病菌的检测

常见致病菌的检测摘要：近年来食品药品安全的问题屡见不鲜，做好致病菌的检测，是防范于未然的措施，因而显得尤为的重要，也越来越受到人们的重视。

这就要求我们对一些常见的致病菌检测技术的要有一定的了解。

关键词：致病菌，肠球菌，霉菌和酵母菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌。

一.肠球菌（1）、形态与染色【1】肠球菌为革兰阳性（G+）球菌,广泛分布于自然环境及人和动物消化道内。

20世纪80年代以来，肠球菌严重感染的发生率和病死率明显升高，并且由于肠球菌的固有耐药和获得性耐药，使许多常用抗菌药物在治疗肠球菌感染时失败。

因此，从分子水平对肠球菌致病因子、肠球菌引起的感染机制与治疗的研究显得尤为重要。

肠球菌为圆形或椭圆形、呈链状排列的革兰阳性球菌，无芽胞，无鞭毛，为需氧或兼性厌氧菌。

本菌对营养要求较高，在含有血清的培养基上生长良好。

（3）致病性【1】一般而言，肠球菌的毒力不高。

与金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌相比，肠球菌对大多数动物的半数致死量（LD50）值相当高，而且肠球菌很少引起蜂窝织炎和呼吸道感染。

肠球菌只有在宿主组织寄殖，耐机体非特异及免疫防御机制，并引起病理改变，才能导致感染。

粘附测定显示肠球菌可通过细菌表面表达的为粘附素，吸附至肠道、尿路上皮细胞及心脏细胞。

这些粘附素的表达亦受细菌生长环境的影响。

另外，肠球菌可产生一种聚合物质（系一种蛋白表面物质，可聚集供体与受体菌，以利质粒转移），在体外增强其对肾小管上皮细胞的粘附。

细菌生长环境亦影响肠球菌与多形核白细胞反应。

血清中生长的肠球菌与多形核白细胞反应较弱，而肉汤中生长的细菌反应较强。

体外多形核白细胞对肠球菌的有效杀灭作用需血清补体蛋白参与，而抗肠球菌抗体可增强该作用。

（4）、肠球菌属主要检测步骤如下：【2】方法一：肠球菌平板计数法检验程序25g (mL) + 225 mL 缓冲蛋白胨水↓10 倍梯度稀释↓选择2 个~3 个适宜连续稀释度，各取1 mL 分别加入灭菌培养皿↙↘KF琼脂36℃士1℃ 48h 士2h肠球菌琼脂35℃士2℃ 24h士2h↘↙确证实验↓肠球菌阳性↓菌落计数及计算↓报告结果方法二：肠球菌最近似值（MPN ）测定法检验程序25g（mL ) + 225 mL 缓冲蛋白胨水↓10 倍梯度稀释↓选择3 个适宜连续稀释度，各取1 ml 分别加入肉汤中↙↘叠氮化钠葡萄糖肉汤管肠球菌肉汤管37℃士1℃ ,24h~48h 35C 士2 ℃ 24h 士2h↓↓↓↓无混浊混浊变黑不变黑↓↓↓↓肠球菌阴性确证实验确证实验肠球菌阴性↓↓肠球菌阳性肠球菌阳性↘↙MPN 值法报告肠球菌数／g(mI)二．霉菌和酵母菌（1）、形态【1】酵母菌是单细胞真核微生物。

酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。

比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1-5微米×5-30微米。

酵母菌无鞭毛，不能游动。

其具有典型的真核细胞结构，有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等，有的还具有微体。

霉菌是丝状真菌的俗称，意即“发霉的真菌”，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。

在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。

霉菌的菌丝。

构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。

菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很像一根透明胶管，它的直径一般为3-10微米，比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。

菌丝可伸长并产生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。

根据菌丝中是否存在隔膜，可把霉菌菌丝分成两种类型：无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。

（2）霉菌和酵母菌主要检测步骤如下【3】检样↓21ml样品＋225ml无菌蒸馏水，均质↓10倍系列稀释↓选择2 个~3 个适宜连续稀释度，各取1 mL 分别加入灭菌培养皿↓每皿中加入15~20mlm马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基↓28℃士1℃ 5d菌落计数及计算↓报告结果三．金黄色葡萄球菌（1）.生物学特性【4】典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。

金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。

金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。

平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。

血平板菌落周围形成透明的溶血环。

金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。

可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。

甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。

许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。

金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。

（2）致病性【2】a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。

葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关；d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌；e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F五种血清型。

（3）.金黄色葡萄球菌主要检测步骤如下【5】25g（mL ) + 225 mL 生理盐水或磷酸盐缓冲液↓10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤↓37℃士1℃ 18h~24hBaird-Parker平板，血平板↓37℃士1℃血平板18h~24h，Baird-Parker平板或15h~48h↓↓↓涂片染色观察溶血 BHI肉汤和营养琼脂小斜面↓血浆凝固酶试验↓报告四．沙门氏菌检验（1）.生物学特性【6】沙门氏菌属(Salmonella)是肠杆菌科的一个大属，有2000多个血清型，我国发现的约有100个。

沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中。

1880年Eberth首先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较大，遂定名为沙门氏菌属Salmonella。

（2）.沙门氏菌的致病性本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性，能引起人和动物的败血症与胃肠炎，甚至流产，并能引起人类食物中毒，是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一。

【2】沙门氏菌经口进入人体以后，在肠道内大量繁殖，经淋巴系统进入血液，造成一过性菌血症，即感染过程。

随后，沙门氏菌在肠道和血液中受到机体的抵抗而被裂解、破坏，释放大量内毒素，使人体中毒，出现中毒症状。

（3）. 沙门氏菌主要检测步骤如下【7】检样↓25 g（mL）样品+225 mLBPW36 ℃±1 ℃，8 h～18 h ↓↓↓1 mL+TTB 10 mL 1 mL+SC 10 mL↓↓↓42 ℃±1 ℃，18 h～24 h36 ℃±1 ℃，18 h～24 h↓↓BS XLD（或HE、显色培养基）↓↓36 ℃±1 ℃，40 h～48 h36 ℃±1 ℃，18 h～24 h↓挑取可疑菌落↓TSI，赖氨酸，NA，靛基质，尿素 (pH 7.2)，KCN↓↓↓↓↓生化鉴定试剂盒或全 H2S+ 靛基质- H2S+ 靛基质+ H2S-靛基质-尿反应结果与左自动微生物生鉴定尿素-KCN- 尿素- KC 素-KCN- 侧描述不符系统赖氨酸 + 赖氨酸 + 赖氨酸 +↓↓↓↓↓甘露醇+、山梨醇+ ONPG-↓↓↓↓↓沙门氏菌，血清学试验非沙门氏菌↓报告五.常见致病菌的检测的意义随着生活水平的提高，食品药品安全的概念在国人的意识中也有了一定的变化。

过去的食品药品安全，主要集中表现为食品与药品量的安全，就是吃饱能治病的问题，所以有“深挖洞，广积粮”的说法。

而现代社会基本上已经解决了温饱问题，国人对食品与药品安全的理解，更多地关注食品与药品“质”的安全。

这是一个大的飞跃。

而食源性致病菌的危害是食品与药品安全的一个重要方面，在食品卫生控制中有重要的意义。

因此提前做好致病菌的检测具有非常大的意义。

六．参考文献【1】百度百科。

【2】食品伙伴网。

【3】GB 4789.28-2010 食品卫生微生物学霉菌和酵母菌的检验。

【4】百度文库。

【5】GB 4789.10-2010 食品卫生微生物学金黄色葡萄球菌的检验。

【6】百度知道。

【7】NY/T 550-2002 动物和动物产品沙门氏菌检测方法。