【CN109971686A】一种己酸菌增殖培养基、己酸发酵和己酸菌筛选方法【专利】
已酸菌筛选新途径及工艺参数正交试验
（ｈｎ ｏｇ Ｌ ｒｉｇ Ｍｅｊ ｏ ｔ． ｈｎ ｓａ ， Ｓａ ｄ ｎ ７ ７ １ Ｃ ｉａ Ｓ ａ ｄｎ ａｄｎ ｉｕ Ｃ ．Ｌｄ，Ｃ ａｇｈｎ ｈ ｎ ｏｇ ２ ７ ３ ， ｈｎ ） ｉ
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｓｒ ｃ ： Ｔ ｅ ｏ ｉ ｌ ｎ ｕ ｔ ｒ ｄ ｕ ， ｐ ｅ ａ ｅ ｙ ｎ ｒ ａ ｉ ｇ ｔ ｅ ｕ ｅ ｌ ｖ ｌ ｏ ｇ ｒ ｈ ｓ ｌ ｓａ ｔ ｃ ｌ ｅ ｍｅ ｉ ｍ ｄ ｕ ｒ ｐ ｒ ｄ ｂ ｉｃ ｅ ｓ ｈ ｓ ｅ ｅ ｆ ａ ａ ； ｎ ｈ ｓ ｐ ｒ ｔ ｎ ｎ ｕ ｉ ａ ｏ ｆ ｃ ｐ ｏ ｃ ｔ ｅ ｅ ａ ａ ｏ ａ ｄ ｐ ｒ ｃ ｔ ｎ ｏ ａ ｒ ｉ ｉ ｉ ｆ ｉ
ａ ｄ ｃ ｔｒ ｉ ｓ ６ ｄ ｙ．Ｔ ａ ．ｂ ｎ ｕ ｕｅ ｔ ｌ ｍｅ ｗａ ａ ｓ（ ｒｎ ｙ ＹＵＥ Ｙａ ｇ ｎ）
Ｋｅ ｒ ｓ ｃ ｐ ｉ ｃ ｄ ｐ ｏ ｃ ｎ ａ ｔ ｒ ｙ ｗｏ ｄ ： ａ ｒ ｃ ａ ｉ — ｒｄｕ ｉ ｇ ｂ ｃ ｅ ａ；ｓ ｐ ｒ ｔ ｎ ａ ｄ ｐ ｒ ｃ ｔ ｎ； ｓ ｎ ｕ ｅ； ｖ ｃ ｕ ｃ ｌ ｒ ； ｏ ｔ ｏ ｏ ａ ｅ ｔ ｏ ｉ ｅ ａａ ｏ ｎ ｕ ｆ ａｉ ｉ ｉ ｉ ｏ ｌ ｔｔｂ ａ ａ ｕ ｍ ｕ ｔ ｅ ｕ ｒ ｇ ｎ ｔｓ ｈ ｌ ｓ
李 泉 ， 开 成 ， 学玲 徐 胡
苍山 ２７３ ） ７ ７ １ （ 东兰陵美酒股份有限公 司， 东 山 山
摘 要 ： 采 用加 大 琼 脂 用 量 制 成 固体 斜 面培 养 基 ， 稀 释 分 离 、 空 培 养 的 方 法进 行 己酸 茵 分 离 纯化 ， 采 用 正 交 试 以 真 并 验 法对 己 酸 茵 的 生 长 繁 殖条 件 进 行 了探 讨 ， 影 响 因素 依 次 为 酒 度 、 Ｈ 、 养 时 间 、 养 温 度 及 热 处 理 温 度 ， 化 因 其 ｐ值 培 培 优 子 为ｐ ６ 酒 度２％ ， 处 理 温 度 ８ ， 养 温 度３ Ｈ ， 热 Ｏ℃ 培 Ｏ℃ ， 养 时 间６ｄ 培 。 关 键 词 ： 己酸 茵 ； 分 离 纯化 ； 斜 面试 管 ； 真 空 培 养 ； 正 交试 验 中 图分 类 号 ： Ｔ ２ １１ Ｑ ３ ３ Ｓ ６ ．； ９ — ３ 文 献 标 识 码 ：Ｂ 文 章 编 号 ：０ １ ９ ８ （０ ２ ０ —０ ４ ０ １０ — ２ ６ ２ ０ ）６ ０ ３ － ２
己酸菌复壮培养技术试验与研究
己酸菌复壮培养技术试验与研究来源：录入时间：06-05-14 11:22:34摘要针对己酸菌实际生产，探讨采用更换培养基的方式进行菌种复壮，并在培养过程中进行种子热处理试验、己酸菌的生长曲线测定、接种量对己酸菌生长的影响试验、己酸菌种子染菌后的处理试验等等。
通过大量试验分析，得出较优的培养和检测方案，并将优良种子直接用于大生产。
实践证明，具有很强的实用性和较大的技术参考价值。
关键词：己酸菌复壮培养己酸菌培养是各大白酒企业近年来重要的科研项目，是窖池养护和人工窖泥培养的基础，也是提高白酒质量的重要环节。
但在其生产及应用过程中，工艺还不是非常成熟，存在很多需要探讨研究的问题，需要寻找更佳的培养方案，以提高质量，降低成本。
在实际生产过程中，我们对己酸菌培养前期的各个环节进行了认真、多次的反复的研究，总结出了一套经济有效的己酸菌菌种复壮方法，通过种子热处理试验、接种量对己酸菌生长影响试验、进行己酸菌生长曲线测定，得出了最佳方案，并探讨出较好的检测记录方法。
1培养方案1.1培养基的制备1.1.1蛋白胨培养基1.1.1.1蛋白胨1.5%，乙酸钠0.5%，葡萄糖0.5%，牛肉膏0.2%，磷酸氢二钾0.05%，硫酸铵0.03%，硫酸镁0.01%，调节PH7.0~7.2，于0.12MPa高压灭菌30分钟。
1.1.1.2称1%碳酸钙单独灭菌，接种前连同2%乙醇一并加入。
1.1.2乙酸钠培养基1.1.2.1乙酸钠1%，酵母膏0.1%，硫酸铵0.05%，磷酸氢二钾0.04%，硫酸镁0.02%，调节PH6.9~7.2，于0.12MPa高压灭菌30分钟。
1.1.2.2称1%碳酸钙单独灭菌，接种前一并加入2%乙醇。
1.2己酸菌种子培养方式1.2.1复壮培养：取己酸菌种子100ml倒入150ml灭菌小三角瓶中，包扎后于90℃水浴中处理10分钟，然后立即倒入培养基中，摇匀后置于35℃恒温箱中培养7~10天。
1.2.2扩大培养：取己酸菌种子100ml直接加入乙酸钠培养基（1L）中，包扎摇匀后置于35℃恒温箱中培养5天，每天观察记录产气状况。
微生物发酵菌种选育与培养基优化报技术
微生物发酵菌种选育与培养基优化报技术随着生物技术的快速发展，微生物发酵技术在食品、医药、生物能源等领域得到了广泛的应用。
微生物发酵菌种选育与培养基优化是进行高效发酵生产的关键步骤。
本文将介绍微生物菌种选育与培养基优化的技术原理和方法。
一、微生物菌种选育技术微生物菌种选育是指通过筛选和改良微生物菌种，使其具备较高的产酶或产代谢产物的能力。
菌种选育的关键是要选择具有较高产酶或代谢产物能力的菌株，并通过遗传改造或人工诱变等手段进行改良。
1.1 传统选育方法传统的微生物菌种选育方法主要包括筛选、鉴定和改良三个步骤。
筛选阶段，通过对自然环境或已有菌种中的微生物进行分离培养，通过对菌株进行形态学、生理学和生化学特性的鉴定，筛选出具有较高产酶或代谢产物能力的菌株。
鉴定阶段，通过对菌株进行分子生物学鉴定和系统进化分析，确定菌株的物种和亲缘关系，为后续的改良工作提供基础。
改良阶段，通过遗传改造、人工诱变等手段对菌株进行改良，提高其产酶或代谢产物能力。
1.2 高通量筛选技术高通量筛选技术是近年来发展起来的一种快速筛选菌株的方法。
它通过利用自动化设备和高通量平台，可以同时对大量微生物菌株进行筛选和评价。
高通量筛选技术主要包括微孔板筛选法、流式细胞仪筛选法和基因工程筛选法等。
微孔板筛选法是利用微孔板将大量菌株分装进不同的孔中，通过对孔中菌株的生长、产酶活性或代谢产物含量进行测定，筛选出具有较高活性的菌株。
流式细胞仪筛选法是通过利用流式细胞仪对菌株进行快速评价和分析。
流式细胞仪可以实时检测菌株的生物学特性，如细胞大小、形态、荧光强度等，从而筛选出具有较高产酶或代谢产物能力的菌株。
基因工程筛选法是通过利用基因工程技术将产酶基因或代谢途径相关基因导入到微生物菌株中，使其具备较高的产酶或代谢产物能力。
二、培养基优化技术培养基优化是指通过调整培养基成分和培养条件，提高微生物发酵产酶或代谢产物的产量和质量。
2.1 培养基成分优化培养基成分优化是通过调整培养基中碳源、氮源、无机盐等成分的比例和浓度，提供微生物生长和代谢所需的营养物质，从而提高产酶或代谢产物的产量和质量。
己酸菌
己酸菌与固态发酵结合一、试验目的：确定己酸菌液态发酵的基本方法，比较己酸发酵液与固态发酵的不同结合方法二、试验目标：（1）筛选出优良菌种（2）利用选出菌种优化合成培养基配方和培养条件（3）以固态发酵酒糟为原料替代合成培养基，优化外加关键营养物质的合适添加量，并与合成培养基进行产己酸量的比较（4）利用最优液态发酵方案大量获取己酸菌液态发酵液，根据实际发酵情况调节发酵条件（5）利用已有的己酸发酵液与固态糟串蒸（6）利用已有己酸发酵液与固态糟共同发酵三、试验思路1 己酸菌液态发酵液与固态糟串蒸2 己酸菌培养液添加至固态糟共酵四、合成培养基发酵优化1 、己酸菌基础培养基配方（%）：K2HPO4 0.04 0.4g硫酸铵 0.05 0.5g乙酸钠 0.5 5g硫酸镁 0.02 0.2g酵母膏 0.1 1g碳酸钙 1（干热灭菌后加入） 10g95%乙醇 2 （接种后加 20ml水定容至1L 调节pH7.0培养规格：10ml培养基试管培养或150ml三角瓶，每瓶50ml少量培养2 确定己酸菌种子液培养时间和接种量以及培养合适天数（1）根据购买菌种的说明书进行活化，最后需要多次划板活化。
（2）扩大培养，确定己酸菌的产己酸规律，确定己酸测定时间。
Step1：接种一环至100ml的巴氏培养基中，种子液摇床培养分别培养1，2，3，4天（参考文献设定）。
Step2：分别接种5%，10% ，15%于400ml的巴氏培养基中，32℃培养7天，8天，9天，10天（根据具体安排可修改，根据文献为8-10日不定），每个天数分别取样100ml,气相色谱仪测定。
3、发酵关键条件的优化（1）乙醇与乙酸钠以及酵母膏添加量的正交试验（三因素四水平，水平待讨论）：设置梯度：乙醇 1%, 1.5%, 2%, 2.5%乙酸钠 0.3% 0.4% 0.5% 0.6%酵母膏 0.05% 0.1% 0.15% 0.2% 0.25%测定指标：气相色谱仪测定己酸，丁酸（2）发酵温度的优化根据上述实验确定种子液培养时间，接种量，以及发酵时间，优化发酵温度发酵设置温度为30,32 34 36 38测定指标：气相色谱仪测定己酸量（3）初始pH的优化上述试验时采取pH7.0，操作如2 ，设定pH范围为： 5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、、8.5测定指标：气相色谱仪测定己酸量和测定发酵后的pH值。
己酸菌的分离筛选及发酵条件优化
Ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ Ｏｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ｉ ｎ ｇ Ｃｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ Ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｗｉ ｔ ｈ Ｈｉ ｇ ｈ Ｃａ ｐ ｒ ｏ ｉ ｃ Ａｃ ｉ ｄ
Ｙｉ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｐｉ ｔ Ｍ ｕ ｄ
验的基础上 ，确定影响 己酸积 累的各因素及其相应条件 ，再利用正交试验确定各 因素的最佳水平 ，即温度为
３ ４ ￣ （ ２ ， 初始 ｐ Ｈ为７ ． ０ ， 接种量为 １ ０ ％， （ ＮＨ４ ） ２ Ｓ Ｏ 添加 量 为 ０ ． ２ ％， 此 时 己酸 产 量达 到 ６ ５ ４ ３ ｍｇ ／ Ｌ 。 关 键词 ： 己酸 茵 ； 窖泥 ； 筛选 ； 发 酵 条 件 中 图分 类 号 ： ＴＳ ２ ６ ２ ． ３ ； Ｔ Ｓ ２ ６ １ ． １ ； ＴＳ ２ ６ １ ． ４ 文 献标 识码 ： Ｂ
净、 余 味 悠 长 等特 点 而 备受 消 费 者 青 睐 。 己酸 乙酯 是 浓香 型 白酒 主体 香 气 物 质 ， 其 具有 菠 萝 及 香蕉 样 酵中 ， 己酸 乙酯 主 要 由己酸 与 乙 醇发 生 酯 化反 应 而
配使用 ， 利用微生物之间的共栖性提高己酸茵 的发
酵能力 。 因此 ， 本实 验从优 质窖泥 中 ， 通过反 复多次 热处 理 ， 得 到 己酸菌 富集 菌 液 ， 并 对 富集 菌液 的 发酵 富集 菌液 可用 于养 窖液 的制备及人 工老 窖泥 的制 作 。
Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ： ｅ ａ ｐ ｒ ｏ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ；ｐ ｉ ｔ ｍｕ ｄ ；ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ；ｆ ｅ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ
一种浓香型白酒窖泥己酸菌增殖培养基及其制备方法[发明专利]
![一种浓香型白酒窖泥己酸菌增殖培养基及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/c2236792f46527d3250ce0b2.png)
专利名称：一种浓香型白酒窖泥己酸菌增殖培养基及其制备方法
专利类型：发明专利
发明人：赵辉,王葳,敞颜,凌宏志,平文祥,刘翠花
申请号：CN201310146250.1
申请日：20130424
公开号：CN103194416A
公开日：
20130710
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种浓香型白酒窖泥己酸菌增殖培养基及其制备方法，涉及一种培养基及其制备方法。
本发明是要解决窖泥使用一段时间后老化导致己酸菌数量大量减少，以及新窖窖泥中己酸菌数量严重不足的技术问题。
本发明的培养基由无水乙醇、乙酸钠、硫酸镁、磷酸氢二钾、四川黄土、酒糟浸出液、高粱粉、大曲粉、NaCl、蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖和水制成。
方法如下：一、称取原料；二、制备浓香型白酒窖泥己酸菌增殖培养基。
利用本发明的培养基不仅可以促进新窖老熟，而且还可以迅速恢复老化窖泥的生香功能，改善窖内微生态环境；且己酸菌的数量与不使用该培养基相比增加3倍以上，大幅度提高窖泥中己酸菌的数量。
本发明的培养基应用于窖泥品质的改善领域。
申请人：黑龙江大学
地址：150080 黑龙江省哈尔滨市南岗区学府路74号
国籍：CN
代理机构：哈尔滨市松花江专利商标事务所
代理人：高会会
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【CN109971882A】老陈醋发酵过程中产酯酵母的筛选实验方法【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910291933.3(22)申请日 2019.04.02(71)申请人 山西农业大学地址 030800 山西省晋中市太谷县铭贤南路1号(72)发明人 王如福 陈嘉 李振 李玉萍 (51)Int.Cl.C12Q 1/6895(2018.01)C12Q 1/04(2006.01)C12J 1/04(2006.01)C12R 1/84(2006.01)(54)发明名称老陈醋发酵过程中产酯酵母的筛选实验方法(57)摘要本发明公开了老陈醋发酵过程中产酯酵母的筛选实验方法，老陈醋酒醅取自老陈醋传统固态发酵生产过程中的酒醪，实验包括如下步骤：发酵第3d、4d、5d和6d的酒醅样品中分别筛选出3株、8株、5株和3株酵母菌，依次编号为Y1-Y19；菌株的筛选；菌株产酯分析；酵母基因组DNA提取；引物设计与合成；常规RT -PCR检测；老陈醋小规模发酵；食醋中常规理化指标分析；挥发性香气成分测定；数据处理。
本发明从老陈醋传统发酵过程中分离纯化得到产酯酵母菌菌株，采用顶空固相微萃取法结合气质联用技术对成品醋中的酯类物质进行分析，使用Y2和Y18可以增加香气化合物的形成，有助于老陈醋香气复杂性的产生，以期达到提高老陈醋含酯量，提高产品品质的目的。
权利要求书2页 说明书6页 附图5页CN 109971882 A 2019.07.05C N 109971882A权 利 要 求 书1/2页CN 109971882 A1.老陈醋发酵过程中产酯酵母的筛选实验方法，其特征在于，老陈醋酒醅取自老陈醋传统固态发酵生产过程中的酒醪，实验包括如下步骤：S1：发酵第3d、4d、5d和6d的酒醅样品中分别筛选出3株、8株、5株和3株酵母菌，依次编号为Y1-Y19；S2：菌株的筛选准确称取10g酒醪置于90mL生理盐水中，28℃振荡培养30min，依次稀释至10-5、10-6，取100μL稀释液涂布于孟加拉红培养基，28℃培养48h。
己酸菌培养条件和不同微生物对己酸菌生长代谢影响的研究
己酸菌培养条件和不同微生物对己酸菌生长代谢影响的研究刘英杰;张志伟;韩墨;杨平平;王燕【期刊名称】《中国调味品》【年(卷),期】2018(043)002【摘要】文章综述了己酸菌的形态特征和不同培养条件、不同微生物与已酸菌共栖发酵对己酸菌菌数及其产酸的影响,找出己酸菌适合的生长条件和生态环境,对培养优质的己酸菌及其对己酸乙酯的生成具有重要作用.在温度35℃,CaCO3含量15 g/L,乙醇浓度2％,pH 4～6.5条件下己酸菌生长最好;培养基中已酸菌适宜的碳源是乙醇,添加适量的腐殖质、底锅水、Vc、含氮物质可以有效促进己酸菌的生长代谢;放线菌为己酸菌提供氮源,乙酸菌生成乙酸供合成已酸.因此,白酒酿造过程中可以合理添加外源物质和其他微生物,以期更进一步提高酒质及出酒率.【总页数】4页(P8-11)【作者】刘英杰;张志伟;韩墨;杨平平;王燕【作者单位】齐鲁工业大学生物工程学院,济南250353;齐鲁工业大学生物工程学院,济南250353;齐鲁工业大学生物工程学院,济南250353;齐鲁工业大学生物工程学院,济南250353;齐鲁工业大学生物工程学院,济南250353【正文语种】中文【中图分类】TS201.3【相关文献】1.放线菌促己酸菌产己酸的促进因子探究 [J], 郭威;管健;陈茂彬;谢逾群;张玉;方尚玲2.促己酸菌产己酸的优良放线菌的筛选 [J], 郭威;黄宇;谢逾群;方尚玲;陈茂彬3.放线菌的产酶能力与其促己酸菌产己酸的关系探究 [J], 郭威;管健;陈茂彬;方尚玲4.己酸菌发酵条件优化及重金属Pb对己酸菌繁殖代谢的影响 [J], 景万星;商美;魏萍;翟欢;肖启荣;姚继承5.固定化己酸菌的研究——第一报己酸菌发酵的研究 [J], 孙志敏;鲁格;俞耀庭因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
己酸菌的分离纯化及生长规律的研究
己酸菌的分离纯化及生长规律的研究
黄芳
【期刊名称】《酿酒》
【年(卷),期】2008(35)4
【摘要】浓香型大曲酒的窖池中栖息着己酸菌、乳酸菌、丁酸菌、甲烷菌、硫酸
盐还原菌、硝酸盐还原菌等大量的微生物,这种独特的微生物环境对形成窖香浓郁、绵甜悠长的浓香型典型风格起着举足轻重的作用.其中,己酸菌是浓香型白酒生产中
非常重要的产酸微生物,由它代谢产生的己酸与大曲发酵产生的酒精生成己酸乙酯,
是浓香型大曲酒的主体香成分.本试验通过对老窖泥富集培养、多次分离纯化等一
系列菌种培养工作,并经过产己酸鉴定,筛选出一株高产酸己酸菌,然后,着重研究该己酸菌的生长规律,为科研和生产提供理论指导,促进了己酸菌的科学应用.
【总页数】3页(P41-43)
【作者】黄芳
【作者单位】安徽皖酒制造集团有限公司,蚌埠,233010
【正文语种】中文
【中图分类】TS261.1;TS261.4
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己酸菌纯种培养与混合培养技术在窖泥生产中的应用
己酸菌纯种培养与混合培养技术在窖泥生产中的应用
陈翔;王亚庆;邵海燕
【期刊名称】《酿酒》
【年(卷),期】2009(036)003
【摘要】采用己酸菌纯种培养与混合培养相结合的技术培养己酸菌,己酸菌种子培养与一级培养采用无氧罐厌氧培养,并将一级厌氧培养的己酸菌液以30%的接种量应用于二级混合培养中,培养好的混合己酸菌液应用于窖泥制作中,发酵成熟的窖泥中己酸菌数经检测能达到克泥每106个以上,将窖泥运用于生产实践中,我公司在生产第一排即能产优级酒,平均优级酒率达15.21%,解决了以往改造后的窖池第一排无优级酒的状况,另外出酒率达35%,产质量均达到了理想的试验目标.
【总页数】3页(P35-37)
【作者】陈翔;王亚庆;邵海燕
【作者单位】江苏洋河酒厂股份有限公司技术中心,江苏,宿迁,223800;江苏洋河酒厂股份有限公司技术中心,江苏,宿迁,223800;江苏洋河酒厂股份有限公司技术中心,江苏,宿迁,223800
【正文语种】中文
【中图分类】TS262.3;TS261.1;TS261.4
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己酸菌的分离筛选及发酵条件的研究
己酸菌的分离筛选及发酵条件的研究
高素洁;曹亚彬;郭丽姝
【期刊名称】《生物技术》
【年(卷),期】1997(7)1
【摘要】己酸菌所生成的己酸是生产浓香型白酒主体香气己酸乙酯的主要成分，将其应用于白酒的生产，可提高白酒的香气和质量．从我省富裕酒厂的窖泥中分离到一株高产己酸的菌株，通过发酵条件的研究，该菌株己酸最高产量可达540mg ／100ml。
【总页数】3页(P35-37)
【关键词】酿酒微生物;己酸菌;分离;筛选;发酵条件
【作者】高素洁;曹亚彬;郭丽姝
【作者单位】黑龙江省科学院应用微生物研究所
【正文语种】中文
【中图分类】TS261.13
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己酸菌的选育及其应用于生产的研究
己酸菌的选育及其应用于生产的研究
陈翔;范文来;戴群;赵光鳌
【期刊名称】《酿酒》
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【摘要】@@ 洋河大曲素以"入口甜、落口绵、酒体软、尾爽净、回味香”的独特风格,著称于世,连续三届被评为国家八大名酒.洋河系列产品深受消费者的喜爱,产品畅销海内外.
【总页数】3页(P44-46)
【作者】陈翔;范文来;戴群;赵光鳌
【作者单位】江苏洋河集团有限公司;江苏洋河集团有限公司;无锡轻工大学生物工程学院;无锡轻工大学生物工程学院
【正文语种】中文
【中图分类】TS262.3+1;TS261.1
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910352595.X
(22)申请日 2019.04.29
(71)申请人 四川轻化工大学
地址 643000 四川省自贡市汇兴路学苑街
180号
(72)发明人 魏丕伟 胡告 许德富 王凌云
邬雪莲 钱宇 熊俐
(74)专利代理机构 重庆市信立达专利代理事务
所(普通合伙) 50230
代理人 包晓静
(51)Int.Cl.
C12N 1/20(2006.01)
G01N 21/78(2006.01)
G01N 30/02(2006.01)
C12R 1/01(2006.01)
(54)发明名称
一种己酸菌增殖培养基、己酸发酵和己酸菌
筛选方法
(57)摘要
本发明属于细菌发酵、功能菌筛选技术领
域，公开了一种己酸菌增殖培养基、己酸发酵和
己酸菌筛选方法，所述增殖培养基由蛋白胨
10.0g/L、牛肉粉10.0g/L、酵母粉3.0g/L、葡萄糖
1.0～5.0g/L、可溶性淀粉1.0g/L、氯化钠5.0g/
L、醋酸钠3.0～6.0g/L、半胱氨酸盐酸盐0.5g/L、
抗坏血酸0.3～1.0g/L、琼脂0.5～2.0g/L和蒸馏
水组成。
选择性地添加氯化血红素0.005～
0.01g/L等营养物质，帮助某些极端细菌的生长
分裂，提高细胞密度，扩大了己酸菌的筛选范围。
中途添加乙醇和丁酸钠，促进了己酸合成。
发酵
容器透明，根据发酵液中产气、产酸的情况来初
筛，
提高了筛选效率。
权利要求书1页 说明书10页 附图4页CN 109971686 A 2019.07.05
C N 109971686
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109971686 A
1.一种己酸菌增殖培养基，其特征在于，所述己酸菌增殖培养基由蛋白胨10.0g/L、牛肉粉10.0g/L、酵母粉3.0g/L、葡萄糖1.0～5.0g/L、可溶性淀粉1.0g/L、氯化钠5.0g/L、醋酸钠3.0～6.0g/L、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L、抗坏血酸0.3～1.0g/L、琼脂或卡拉胶0.5～
2.0g/L和蒸馏水1000mL组成。
2.如权利要求1所述的己酸菌增殖培养基，其特征在于，所述己酸菌增殖培养基pH值6.8±0.1。
3.一种使用权利要求1所述己酸菌增殖培养基的己酸菌的发酵方法，其特征在于，所述己酸菌的发酵方法包括：
第一步，将液体培养基分装至100mL容积的厌氧瓶；选择性地添加维生素B10.5g/L，维生素K10.0005g/L或氯化血红素0.005～0.01g/L；
第二步，高压灭菌121℃，20min，冷却到50～70℃，添加预先灭菌好的液封油以隔绝空气；
第三步，接种0.5～5.0％己酸菌液或者使用接种环挑入单菌落；在瓶盖和封口膜之间，插入灭菌好的针头；
第四步，置于30～37℃恒温培养，静置培养6～10天，观察培养液的浑浊程度及产气情况；
第五步，补添0.2～1.0g/L生物素，0.01％～0.09％m/Vol的偏重亚硫酸钾或钠，1.0％～3.0％v/v乙醇，以及柠檬酸铁铵或硫酸亚铁0.5～1.0g/L；制备成FRCM液体发酵培养基(进入己酸发酵)；
第六步，观察厌氧瓶中发酵液是否出现变黑，记录变黑的时间和变黑程度(初筛)；至培养时间为14～20天，发酵液的变化趋于平稳后，结束发酵。
4.如权利要求3所述的己酸菌的发酵方法，其特征在于，所述己酸菌的发酵方法液封油的组分是：液体石蜡和凡士林的混合物；液体石蜡和凡士林比例3:1～6:1。
5.一种由权利要求3～4任意一项所述己酸菌的发酵方法得到的己酸菌发酵液。
6.一种如权利要求5所述己酸菌发酵液中的己酸菌检测方法，其特征在于，所述己酸菌检测方法包括：
第一步，取1.5mL发酵液，离心；取3～5滴上清液，滴加若干滴1mL的1.6～2.0％的酸度指示剂刃天青或者溴甲酚紫，检查变色情况(初筛)；
第二步，取1mL上清液，加入0.4～0.6比例的无水乙醇，混匀；加入二乙基丁酸，使用极性柱的气相色谱-质谱联用法测定己酸的含量(复筛)。
7.如权利要求6所述的己酸菌检测方法，其特征在于，所述第二步使用极性柱的气相色谱-质谱联用法测定己酸的含量：安捷伦气相色谱TG-WAXMS A柱长60m，内径0.25mm，膜厚0.25μm；分流比20:1，载气高纯氦气，流速1ml/min；程序升温条件：开始温度为40℃，以40℃/min升高至245℃，保持4.8min。
2。